CN107505412B - 一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法。所述方法具体步骤如下：将待测烟用香料采用无水乙醇或水将其溶解后置于具塞尖底离心管中振荡均匀后迅速注入萃取剂和分散剂，再依次经过超声处理10～15min、离心处理5～10min后的沉积相，并过0.22μm滤膜，进行HPLC分析，测定样品中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素四种黄酮类成分的保留时间和峰面积，并通过与标准品的HPLC分析色谱图的保留时间对比及线性回归得到的方程式计算出待检测烟用香料中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的含量。本发明具有低毒性、易操作、有机溶剂用量少等特点，能检测量少的烟用香料待测样品，分散剂采用表面活性剂，降低毒性。
Description
技术领域
本发明涉及一种对香料的分析方法，具体地说是一种同时测定烟用香料中4种黄酮类成分的方法。
技术背景
黄酮类成分是一类存在于自然界中，具有2-苯基色原酮结构的化合物。由于分子中有一个酮式羰基，且其羟基衍生物多具黄色，故称黄酮。研究发现，黄酮类化合物具有多种生物活性，还具有一定的抗菌、抗病毒和抗氧化自由基作用。
烟用香料中很多含有黄酮类成分，初步研究发现该类物质在燃烧裂解后可产生呋喃类物质及其衍生物，有焦甜香、烤香，能够增加卷烟香气量和香气质。目前，国内外关于黄酮的提取纯化技术、生物活性功能以及天然产物中含量测定的研究较多，但关于烟用香料中黄酮类成分的分析报道较少。
常用的黄酮类成分测定方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法、比色法等，这些方法常常耗时长，在萃取过程中使用大量有机溶剂而且需要大量的样品。因此，建立一种低毒性、易操作、节约有机溶剂、减少样品量的烟用香料中黄酮类成分的测定方法是必要的。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供了一种烟用香料中四种黄酮类成分的测定方法。本发明具有低毒性、易操作、有机溶剂用量少等特点，能检测量少的烟用香料待测样品；并能应用于多种烟用香料中4种黄酮类成分的同时检测。
本发明的技术方案是这样实现的：所述一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法，其特征在于具体包括以下步骤：
(1)量取待测烟用香料，采用无水乙醇或水将其溶解后置于具塞尖底离心管中振荡均匀形成烟用香料溶液，其中所述待测烟用香料的质量与无水乙醇或水的体积比为0.5g：3mL～7mL；
(2)在步骤(1)中的待测烟用香料振荡均匀后迅速注入萃取剂和分散剂，所述待测烟用香料的质量与萃取剂的体积比为0.5g：0.4mL～1mL；所述待测烟用香料的质量与分散剂的体积比为0.5g：0.8mL～1.5mL；其中所述萃取剂为二氯甲烷、三氯甲烷和正己烷中的至少一种；所述分散剂为CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，且分散剂的溶度为0.02mmol L-1；
(3)将步骤(2)中注入萃取剂和分散剂的待测烟用香料溶液经过超声处理10～15min，之后再经过离心处理5～10min；
(4)用微量进样器吸取步骤(3)中离心处理后的沉积相，并过0.22μm滤膜，进行HPLC分析，测定样品中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素四种黄酮类成分的保留时间和峰面积，并将保留时间与标准品的保留时间进行对比，在相同的保留时间下，将四种黄酮类成分的峰面积代入通过标准品的HPLC分析色谱图线性回归得到的方程式中，计算出待检测烟用香料中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的含量。
本发明较优的技术方案：步骤(3)中所述超声处理作用功率为150W，超声处理温度为25～30℃。
本发明较优的技术方案：步骤(3)中所述离心处理的时间为5～8min，离心处理的转速为3000～5000r/min。
本发明较优的技术方案：所述步骤(4)中计算得到的待检测烟用香料中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的含量是将待检测烟用香料重复检测2-4次后得到的平均含量。
本发明较优的技术方案：色谱柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm；柱温：25℃；流量：0.8mL/min；进样量：5μL；检测波长：330nm；流动相A：0.1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈；洗脱程序：
每次结束后，用乙腈冲洗柱子至少30min。
本发明中标准品采用从成都曼斯特生物科技有限公司购买的纯度均大于98％的木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素；其标准品的线性回归方程式是将精密称取的木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的标准品溶于甲醇中，配制成1000μL/mL的混合标准品贮备液，保存在4℃冰箱中，并且避光保存；之后精密吸取贮备液，分别稀释成不同浓度的混合标准品溶液，然后从不同浓度的标准溶液中各取20μL，进行HPLC分析得到4种黄酮类成分标准品的HPLC色谱图，然后针对色谱图中的峰面积对浓度(即标准溶液中各物质的含量)进行线性回归，经过线性回归得到4种黄酮类化合物的线性关系：
本发明具有低毒性、易操作、有机溶剂用量少等特点，能检测量少的烟用香料待测样品，具体可为0.5g样品，1mL有机溶剂(萃取剂1mL)，分散剂采用表面活性剂，降低毒性。
附图说明
图1为4种黄酮类成分标准品的HPLC色谱图；
图2为经本发明分析烟用香料A的HPLC色谱图；
图3为经本发明分析烟用香料B的HPLC色谱图；
具体实施方式
为了进一步了解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。
下述实施例中所用材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中，木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的标准品均购于成都曼斯特生物科技有限公司，纯度均大于98％。二氯甲烷、三氯甲烷和正己烷均为分析纯，购于百灵威科技有限公司。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)购于北京化工试剂有限公司。实验用水均为超纯水。
下述实施例中的HPLC分析条件具体如下：
色谱柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm
柱温：25℃；流量：0.8mL/min；进样量：5μL；检测波长：330nm
流动相A：0.1％甲酸水溶液流动相B：乙腈
洗脱程序：
每次结束后，用乙腈冲洗柱子至少30min。
实施例1：本发明针对烟用香料A进行成分分析，该香料能溶于无水乙醇，采用本发明中的方法针对烟用香料A中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素4种黄酮类成分的进行检测，具体过程如下：
(1)、标准溶液的制备和工作曲线的绘制：精密称取木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的标准品溶于甲醇中，配制成1000μL/mL的混合标准品贮备液，保存在4℃冰箱中，并且避光保存；之后精密吸取贮备液，分别稀释成500μL/mL、250μL/mL、100μL/mL、50μL/mL和10μL/mL的混合标准品溶液，取上述各溶液20μL，进行HPLC分析得到4种黄酮类成分标准品的HPLC色谱图如图1所示；图1中的峰1代表橙皮苷，峰2代表儿茶素，峰3代表槲皮素，峰4代表木犀草素。针对图1中的峰面积对浓度(即标准溶液中各物质的含量)进行线性回归，经过线性回归得到4种黄酮类化合物的线性关系见下表：
(2)样品前处理过程：量取0.5g待测烟用香料A溶解于5mL无水乙醇于10mL尖底具塞离心管中，振荡均匀，然后迅速注入0.5mL二氯甲烷和1mLCTAB混合液，在功率为150W、温度为25～30℃的条件下超声10min，之后再在转速为3000r/min的条件下离心5min处理后，用微量进样器吸取沉积相过0.22μm滤膜，进行HPLC分析得到烟用香料A的HPLC色谱图如图2所示，图2中的峰1代表橙皮苷，峰2代表儿茶素，峰3代表槲皮素，峰4代表木犀草素，针对图2确定待测烟用香料A中橙皮苷、儿茶素、槲皮素和木犀草素的峰面积，然后把所得到的峰面积依次代入步骤(1)中得到的线性回归方程式中，计算出该待测烟用香料A中四种黄酮成分的浓度(即四种黄酮成分的含量)；
(3)将步骤(2)中的检测过程重复三次，并通过三次计算得到的烟用香料A中四种黄酮成分的含量，计算出烟用香料A中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的平均含量分别为292.6μg·g-1、864.7μg·g-1、247.4μg·g-1和503.4μg·g-1。
实施例二：本发明针对烟用香料B进行成分分析，该香料能溶于无水乙醇，采用本发明中的方法针对烟用香料B中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素4种黄酮类成分的进行检测，具体过程如下：
(1)标准溶液的制备和工作曲线的绘制：同实施例1。
(2)样品前处理过程：量取0.5g待测烟用香料B溶解于6mL水于10mL尖底具塞离心管中，振荡均匀，然后迅速注入0.5mL二氯甲烷和0.8mL CTAB混合液，在功率为180W、温度为30℃的条件下超声13min，之后再在转速为4000r/min的条件下离心8min处理后，用微量进样器吸取沉积相过0.22μm滤膜，进行HPLC分析，得到烟用香料B的HPLC色谱图如图3所示；从图3可以看出，该烟用香料中不含儿茶素，只含有橙皮苷、槲皮素和木犀草素三种黄酮成分，图3中的峰1代表橙皮苷，峰3代表槲皮素，峰4代表木犀草素，然后把所得到的峰面积依次代入步骤(1)中得到的线性回归方程式中，计算出该待测烟用香料B中三种黄酮成分的浓度(即四种黄酮成分的含量)；
(3)烟用香料B中，木犀草素、槲皮素和橙皮苷的平均含量分别为114.7μg·g-1、587.2μg·g-1和147.7μg·g-1。
针对实施例中线性回归得到方程式的准确性进行实验验证：
通过实施例中图1中标准品HPLC色谱图进行分析可知，橙皮苷、儿茶素、槲皮素和木犀草素的保留时间依次是4.12min、5.46min、6.78min和7.91min；其四种黄酮类化合物的线性范围均为10～1000μL/mL，并且相关系数介于0.9997～0.9999之间，以信噪比S/N＝3计，最低检出限(LOD)为1.25～2.21μL/mL，确定是可以满足常规样品的定量分析。
实验1：采用标准加入法测定橙皮苷、儿茶素、槲皮素和木犀草素四种黄酮类化合物的标准品在低、中、高3个添加水平下的加标回收率，并根据测定量、加标量和原含量计算回收率情况，具体结果见下表。结果表明，4种黄酮类化合物的平均回收率在93.5％～103.8％之间，表明本方法准确可靠。
实验2：使用日间相对标准偏差及日内标准偏差来检验方法的重复性。结果表明，日间及日内相对标准偏差均低于3.8％，本方法具有良好的重复性。
通过上述实验可以证明按照本发明中的方法计算出来烟用香料中橙皮苷、儿茶素、槲皮素和木犀草素四种黄酮成分的含量准确性高，可以用于对烟用香料中上述四种黄酮成分进行同时检测。
Claims (6)
1.一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法，其特征在于具体包括以下步骤：
(1)量取待测烟用香料，采用无水乙醇或水将其溶解后置于具塞尖底离心管中振荡均匀形成烟用香料溶液，其中所述待测烟用香料的质量与无水乙醇或水的体积比为0.5g：3mL～7mL；
(2)在步骤(1)中的待测烟用香料振荡均匀后迅速注入萃取剂和分散剂，所述待测烟用香料的质量与萃取剂的体积比为0.5g：0.4mL～1mL；所述待测烟用香料的质量与分散剂的体积比为0.5g：0.8mL～1.5mL；其中所述萃取剂为二氯甲烷、三氯甲烷和正己烷中的至少一种；所述分散剂为十六烷基三甲基溴化铵，且分散剂的溶度为0.02mmol L-1；
(3)将步骤(2)中注入萃取剂和分散剂的待测烟用香料溶液经过超声处理10～15min，再经过离心处理5～10min；
(4)用微量进样器吸取步骤(3)中离心处理后的沉积相，并过0.22μm滤膜，进行HPLC分析，测定样品中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素四种黄酮类成分的保留时间和峰面积，并将保留时间与标准品的保留时间进行对比，在相同的保留时间下，将四种黄酮类成分的峰面积代入通过标准品的HPLC分析色谱图线性回归得到的方程式中，计算出待检测烟用香料中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的含量。
2.根据权利要求1所述的一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法，其特征在于：步骤(3)中所述超声处理作用功率为150W～200W，超声处理温度为25～30℃。
3.根据权利要求1所述的一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法，其特征在于：步骤(3)中所述离心处理的时间为5-8min，离心处理的转速为3000～5000r/min。
4.根据权利要求1所述的一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法，其特征在于：所述步骤(4)中计算得到的待检测烟用香料中木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素的含量是将待检测烟用香料重复检测2-4次后得到的平均含量。
5.根据权利要求1所述的一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法，其特征在于：所述步骤(4)中HPLC分析条件具体如下：色谱柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm；柱温：25℃；流量：0.8mL/min；进样量：5μL；检测波长：330nm；流动相A：0.1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈；洗脱程序：
每次结束后，用乙腈冲洗柱子至少30min。
6.根据权利要求1所述的一种同时测定烟用香料中四种黄酮类成分的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的标准品为纯度均大于98％的木犀草素、槲皮素、橙皮苷和儿茶素。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104807932A (zh) * | 2015-04-28 | 2015-07-29 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法 |
| CN105136946A (zh) * | 2015-06-10 | 2015-12-09 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种定量分析烟叶中12种类黄酮物质的检测方法 |
| CN106290663A (zh) * | 2016-07-25 | 2017-01-04 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种烟用香料挥发性成分分析的前处理方法 |
| CN106404966A (zh) * | 2016-11-09 | 2017-02-15 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种再造烟叶致香成分分析的前处理方法 |
-
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104807932A (zh) * | 2015-04-28 | 2015-07-29 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法 |
| CN105136946A (zh) * | 2015-06-10 | 2015-12-09 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种定量分析烟叶中12种类黄酮物质的检测方法 |
| CN106290663A (zh) * | 2016-07-25 | 2017-01-04 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种烟用香料挥发性成分分析的前处理方法 |
| CN106404966A (zh) * | 2016-11-09 | 2017-02-15 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种再造烟叶致香成分分析的前处理方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Simultaneous determination of phenolic acids and flavonoids in Lycium barbarum Linnaeus by HPLC-DAD-ESI-MS;B. Stephen Inbaraj et al.;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20090911;第549-556页 * |
| 基质固相分散-高效液相色谱法测定蜂巢中７种黄酮类化合物;李超 等;《理化检验-化学分册》;20151231;第516-519页 * |
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