CN107485651A - 用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液及其制备方法及其应用 - Google Patents

用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液及其制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液及其制备方法及其应用，属于中药生产技术领域。本发明称取川乌、草乌为原料，将混合均匀的药粉加入到乙醇溶液中密封浸泡，移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤分离药液和滤渣，滤渣加入8～10倍体积的水，混合均匀后移入高压反应釜中加压提取，将2次的药液浓缩至无醇味，滤过，加入无水乙醇，使得醇含量达到75％，静置过夜后，滤过，药液浓缩至无醇味，加注射用水稀释10倍后，灌封，灭菌，得到乌头提取物注射液。对MMP‑3、ADAMTS、IL‑1β、IL‑18、TNF‑α等具有显著影响，证实乌头提取物注射液对关节炎引起的软骨细胞损伤具有保护作用。

Description

用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液及其制备方法及其 应用
技术领域
本发明属于中药生产技术领域，具体涉及用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液及其制备方法及其应用。
背景技术
骨性关节炎(osteoarthritis，OA)是由于老年、创伤、关节畸形、关节的先天性异常等诸多因素引起的关节软骨退行性变和关节边缘骨赘形成。临床上可导致关节疼痛、肿胀，甚至出现活动功能受限及关节畸形(X型腿或O型腿)等症状。据世界卫生组织统计，全世界人群在年龄超过50岁中，骨性关节炎患者的发病率有一半以上，仅中国就占了10％。曾在2011年中华风湿协会调查研究，并指出到2017年中国骨性关节炎的患者很有可能达到全国人口的13％，也成为了全球OA患者最多的国家。因此，骨性关节炎可以说是造成经济损失和影响社会发展的主要疾病之一，也是导致中老年人周身关节活动不利、疼痛不适的主要原因之一。骨性关节炎治疗药物缓解疼痛主要的3类方法：局部给药、关节腔内给药及口服类药物的治疗。
局部外用常见的有膏剂、贴剂以及擦剂，药物可局部透过皮肤进入关节，有效缓解关节轻、中度疼痛，且有不良反应轻微的作用。(1)贴剂临床上常用的有麝香追风膏、关节止痛膏、奇正消痛贴、天和骨通贴膏等。这些贴剂功效是祛风散寒、除湿散瘀、活血止痛，但是作用短暂，治标不治本，只能缓解疼痛。(2)搽剂：膝关节表面涂擦药物已使用多年，且具有明显局部镇痛效果，包括薄荷脑搽剂、酒精擦剂、右旋樟脑等。另一种擦剂辣椒素，具有抗炎、镇痛作用。这些方法只是短暂临时应用的辅助治疗，非常规止疼治疗。
关节腔内用药包括类固醇类药物及透明质酸盐等。(1)类固醇类药物，通过穿刺关节腔，抽吸走过多关节液，注入皮质激素。临床常用曲安奈德注射，其以抗炎、抗过敏作用较强而且较持久，迅速缓解症状、消除疼痛，还可以使基质金属蛋白酶激活，合成途径阻断，而利于关节软骨的代谢。糖皮质激素可造成软骨损害，需使用小剂量，高效价激素，延长两次注射间隔时间联合注射透明质酸钠来降低对软骨的损害。关节腔内皮质类固醇的应用常作为辅助治疗措施，疼痛缓解时间较短，一般在1周以内。(2)透明质酸钠在1997经过FDA批准用于治疗骨关节炎。透明质酸钠在关节内注射可以促进滑液对关节的保护，润滑和减轻震荡；抑制炎症因子，如细胞因子，前列腺素，刺激软骨基质的合成，抑制软骨的退变。从离体滑膜细胞的进一步研究揭示，外源性透明质酸可以诱导内源性透明质酸钠的产生。关节腔内透明质酸盐用于缓解膝关节骨关节炎疼痛症状，但是主要对早期较轻的患者有效。不良反应主要为红肿、疼痛渗出等与注射部位有关的类似关节炎症状，常常由于注射物进入滑膜而不是关节腔有关。美国骨科临床医师学会于2013年5月18日发布了新版的《膝关节骨关节炎循证医学指南》，指南明确反对膝关节骨关节炎进行透明质酸钠注射或关节镜下灌洗、清理。
口服药种类繁多。(1)控制疼痛药物：对乙酰氨基酚及非甾体抗炎药(NSAIDs)是美国风湿病学会(ACR)指南中推荐药物。这两种药物缓解轻到中度KOA患者的疼痛疗效显著。①对乙酰氨基酚：常作为临床治疗KOA的首选药物。本品价格低廉，具有良好的临床效果，且毒副作用小，但长期使用可导致肝肾功能异常，造成肝肾损伤。②非甾体抗炎药(NSAIDs)：该药物能够抑制前列腺素的合成，从而起到解热、镇痛、消炎的作用，是全球使用最多的药物种类之一，随之而来的不良反应也更加突出，尤其是胃肠道的不良反应。(2)软骨保护剂：该类药物可以通过保护及修复软骨，从而延缓病程，改善症状。①氨基葡萄糖：是关节软骨的基本组成成分，可以由人体自身合成。能够刺激人体软骨细胞的蛋白多糖的合成，改善软骨的代谢，提高其修复能力，防止NSAIDs引起的软骨损伤和激素对软骨细胞的损害。但氨基葡萄糖有轻微而短暂的胃肠道副作用，恶心、便秘，故建议饭后服用。②硫酸软骨素：由牛、猪、鸡、鲨鱼的软骨萃取而来，能够缓解疼痛且促进软骨再生，还可增长基质中的纤维，其通透性变大，新陈代谢得到加速，血液循环得到改善，最终促进了炎症的吸收，随着科技的进步，发现本品还具有抑制血小板生成的作用。③双醋瑞因：此药商品名安必丁，是骨关节炎IL—1的首要抑制剂。双醋瑞因可以抑制KOA中IL-1的分泌，防止滑膜炎症的出现，该药物不仅抑制软骨降解而且还促进软骨合成。轻度腹泻是应用安必丁治疗最常见的副作用(发生率约7％)，一般会在治疗后的最初几天出现，多数情况下会随着继续治疗而自动消失。④阿片类止疼药(如吗啡、可待因等)：对于长期慢性的疼痛(时间超过6个月)，阿片类药物镇痛效果强但具有成瘾性，在其他药物治疗效果不佳或重度疼痛的患者中才考虑使用。美沙酮是一种高效、价廉、半衰期长的阿片类止疼药，对OA患者也是良好的选择，美沙酮有时可以造成中枢性呼吸暂停，一般发生在剂量增加过快或服药过于频繁。饮酒也可以增加呼吸抑制。其余少见的不良反应有体质量增加和性功能下降，原因不明。⑤双膦酸盐：作用机制是一方面抑制破骨细胞溶解矿物质，另一方面促进成骨细胞的形成，不仅防止了矿物质的外流，而且还可抑制胶原酶和PGE2从而减少骨赘的形成。⑥维生素A，维生素C，维生素E，维生素D，KOA的软骨损伤与氧自由基的存在一定的关系，其作用机制很可能是通过抗氧化机制。维生素D可促进人体骨的矿化的吸收和影响细胞的分化，从而在治疗KOA上起到一定的作用。
由于NSAIDs类药物对消化道、肾功能的影响，以及双醋瑞因、氨基葡萄糖、硫酸软骨素等药物起效慢、疗程长，治疗初期常联用控制症状的药物，其疗效存在争议，有更多新的止疼或促进软骨再生类药物进入人们视野。在治疗OA的药物研究中，具有抗炎、镇痛作用或对OA疾病因子(如MMPs、IL、TNF-α等)具有抑制作用的药物处于研究中；基于关节及关节软骨的生理特点，传统药物改变给药途径也是值得研究的方向。关节软骨再生能力有限，自我修复能力差，如何让缺损的关节软骨进行修复，一直是该学科的难题。双醋瑞因、氨基葡萄糖、硫酸软骨素等改善OA病情的药物让学者们看到了攻克OA的希望，可治疗效果并没有得到一致的认可。因此，有必要进一步寻找安全高效的骨性关节炎治疗药物。
发明内容
本发明目的是提供了用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液及其制备方法及其应用，将草乌、乌头提取物作为注射液用于关节腔注射治疗骨性关节炎，改变了给药方式，扩大了药品的适应症。
本发明通过以下技术方案实现：
一种用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液，所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液是由川乌和草乌为原料制成。
本发明用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、按重量份数分别称取50～75份的川乌、25～75份的草乌作为原料，将称量好的药材粉碎成粗粉，混合均匀后待用；
步骤2、按照1kg：8～15L的药材与溶剂比，将步骤1混合均匀的药粉加入到乙醇溶液中，搅拌均匀后，常温下密闭浸泡2～5h，待用；
步骤3、将步骤2中的混合物移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤分离药液和滤渣；
步骤4、将步骤3得到的滤渣加入8～10倍体积的水，混合均匀后移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤保留药液；
步骤5、合并步骤3的药液和步骤4的药液，药液浓缩至无醇味；
步骤6、取步骤5制备好的药液1200～1500mL，加蒸馏水至1800～2000mL，调整pH值为5.5～6.5，过滤药液后，将药液浓缩至500～800mL，待用；
步骤7、将步骤6浓缩的药液加入无水乙醇，使得醇含量达到75％，静置过夜后，滤过，药液浓缩至无醇味；
步骤8、将步骤7得到的药液加注射用水至5000～8000ml，灌封，灭菌，得到乌头提取物注射液。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤1中药材粉碎成粗粉的粒径为50～200目。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤3中高压反应釜中压力条件8～20MPa，保持压力30～60min，搅拌转速100～200r/min，反应温度40～60℃。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤3中高压反应釜中压力条件15MPa，保持压力40min，搅拌转速150r/min，反应温度50℃。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤4中在10～15MPa的压力条件下保持压力30～60min，搅拌转速100～200r/min，反应温度80～100℃。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤4中在12MPa的压力条件下保持压力40min，搅拌转速150r/min，反应温度95℃。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤5中的药液浓缩用旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸馏真空度≦0.03MPa，转速60～150r/min，反应温度35～45℃。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤6中用药液膜过滤器过滤药液，过滤精度0.1～0.3μm。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤7中药液浓缩用旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸馏真空度≦0.03MPa，转速100～150r/min，反应温度40～45℃。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤8中灭菌为高压蒸汽湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间20～40min。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的应用，在治疗骨性关节炎的制剂上的应用。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，乌头分为草乌和川乌，为毛茛科植物，母根叫乌头，侧根(子根)入药，叫附子，生于在四川西部、陕西南部及湖北西部一带分布于海拔850-2150米，在湖南及江西分布于700-900米间，在沿海诸省分布于100-500米间；生山地草坡或灌丛中。草乌和川乌为散寒止痛要药，既可祛经络之寒，又可散脏腑之寒。然其有大毒，用之宜慎。《金贵要略·中风历节病》中提到“病历节，不可屈伸，疼痛，乌头汤主之”；《金匮要略·腹满寒疝宿食病》附方(一)：“《外台》乌头汤：治寒疝腹中绞痛，贼风入攻五脏，拘急不得转侧，发作有时，使人阴缩，手足厥逆。”乌头汤中君药为川乌，是乌头的干燥母根，其作用是祛风湿、温经止痛，而中药注射剂“乌头提取物注射液”中的主要成份是川乌、草乌，草乌是北乌头的干燥根，两者药性辛、热，归经心肝肾脾，具有祛风除湿、温经散寒止痛的作用。但是，到目前为止，草乌的祛风除湿、温经止痛相关的药理活性成分研究尚未报道。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，对骨性关节炎具有显著的缓解及镇痛作用。乌头提取物注射液对骨性关节炎动物模型进行检测，对MMP-3、ADAMTS、IL-1β、IL-18、TNF-α等具有显著影响，证实乌头提取物注射液对关节炎引起的软骨细胞损伤具有保护作用。本发明价格低廉、不良反应少，无药物依赖性。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，乌头提取物注射液能够显著降低兔膝关节骨性关节炎关节液中IL-1β、IL-18的含量，从而起到治疗KOA的作用，用于关节腔注射治疗膝关节骨性关节炎具有有益的效果。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液，使用方法为针管穿刺点为髌骨外侧膝眼，髌骨外侧膝眼具体为屈膝90°位，髌骨下缘、髌韧带外侧1cm凹陷处，穿刺针头及穿刺部位常规消毒后，应用用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液2ml,取10号针头与胫骨平台平行，向内呈45°角，穿刺进入关节腔，针头完全刺入即可，感觉针下有落空感，或者回抽有抽出关节液时，可注射药物注入痛点。注药完毕，拔出针头后，用干棉球于进针点处按压10分钟，并嘱患者适度活动关节，以便让药液向周围浸润。每周一次，5次为一疗程。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液，针管每次取2ml，关节腔注射，一周1～2次，连续使用五周为一疗程，2～5疗程治疗后患者疼痛缓解，病情进展得到有效控制。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液，用于治疗半月板损伤。用法：乌头提取物注射液2ml，关节腔注射，一周1～2次，连续使用五周为一疗程，1～3疗程用药后骨性关节炎的患者疼痛、功能障碍等症状显著改善，延缓关节周围组织退变过程，提高患者生活质量。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液，也可用于治疗强直性脊柱炎。乌头提取物注射液2ml，关节腔注射，一周1～2次，连续使用五周为一疗程，1～3疗程用药后骨性关节炎的患者疼痛、功能障碍等症状显著改善，延缓脊椎关节周围组织退变过程，提高患者生活质量。
附图说明
图1为空白组受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图；
图2为模型组受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图；
图3玻璃酸钠组受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图；
图4为正清风痛宁组受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图；
图5为具体实施方式一组用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图。
具体实施方式
具体实施方式一：
一种用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、按重量份数分别称取75份的川乌、75份的草乌作为原料，将称量好的药材粉碎成粗粉，混合均匀后待用；
步骤2、按照1kg：10L的药材与溶剂比，将步骤1混合均匀的药粉加入到乙醇溶液中，搅拌均匀后，常温下密闭浸泡2h，待用；
步骤3、将步骤2中的混合物移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤分离药液和滤渣；
步骤4、将步骤3得到的滤渣加入10倍体积的水，混合均匀后移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤保留药液；
步骤5、合并步骤3的药液和步骤4的药液，药液浓缩至无醇味；
步骤6、取步骤5制备好的药液1500mL，加蒸馏水至2000mL，调整pH值为6.5，过滤药液后，将药液浓缩至500mL，待用；
步骤7、将步骤6浓缩的药液加入无水乙醇，使得醇含量达到75％，静置过夜后，滤过，药液浓缩至无醇味；
步骤8、将步骤7得到的药液加注射用水至5000ml，灌封，灭菌，得到乌头提取物注射液。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤1中药材粉碎成粗粉的粒径为100目。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤3中高压反应釜中压力条件15MPa，保持压力40min，搅拌转速150r/min，反应温度50℃。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤4中在12MPa的压力条件下保持压力40min，搅拌转速150r/min，反应温度95℃。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤5中的药液浓缩用旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸馏真空度0.02MPa，转速100r/min，反应温度40℃。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤6中用药液膜过滤器过滤药液，过滤精度0.1μm。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤7中药液浓缩用旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸馏真空度0.02MPa，转速100r/min，反应温度45℃。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤8中灭菌为高压蒸汽湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间30min。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，制备的乌头提取物注射液进行生物学实验：50只雄性新西兰大耳兔适应性喂养1周，无不适反应后随机分为空白组(A组)、模型组(B组)玻璃酸钠组(C组)、正清风痛宁组(D组)、乌头注射液组(E组)，每组5只。除空白组外，将其它白兔分别在第1，3,5天用戊巴比妥钠(90mg/kg，静脉注射)麻醉后，向双后膝关节腔注射2％(w/v)木瓜蛋白酶和0.03mol/LL-半胱氨酸比例为2:1的混合溶液，注射剂量按0.1ml/kg。注射完造模试剂后正常饲养2周，膝关节出现肿胀，功能活动障碍为造模成功。给药完毕，继续正常饲养1周后，4组兔子采用空气栓塞法处死，处死后对其双后膝关节周围消毒，用1ml注射器(内置有1ml注射用水)经膝关节两侧进针，通过髌上韧带插入关节腔内，反复进行抽注，最终取出关节积液，经2000r/min离心15min，取上清液置-20℃保存，备用。将各组兔双后膝关节囊切开，充分暴露关节软骨，观察软骨情况，并摄像；取膝关节胫骨平台软骨及软骨下组织置于10％的福尔马林液中浸泡24h，备用。所得软骨组织切片，置显微镜下观察，采用Mankin评分标准，计算Mankin评分总积分。处死后对其双后膝关节周围消毒，用1ml注射器(内置有1ml注射用水)经膝关节两侧进针，通过髌上韧带插入关节腔内，反复进行抽注，最终取出关节积液，经2000r/min离心15min，取上清液置-20℃保存，备用。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法进行对兔膝骨关节炎模型关节软骨组织形态的改变的对比实验，其中A组为空白组、B组为模型组、C组为玻璃酸钠组、D组为正清风痛宁组、E组为具体实施方式一组用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液组。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，得到的受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图如附图1至附图5所示：
附图1为空白组受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图：从附图中能够看出软组织结构基本正常，软骨细胞均匀分布，关节软骨边缘光滑；附图2为模型组受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图：从附图2中能够看出软组织结构排列明显不规则甚至紊乱，软骨细胞排列紊乱，关节软骨边缘破坏；附图3玻璃酸钠组受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图：从附图3中能够看出软组织结构排列明显不规则，软骨细胞排列紊乱伴有形态改变，关节软骨边缘不光滑；附图4为正清风痛宁组受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图：从附图4中能够看出软组织结构趋于正常，软骨细胞分布偶有不均，关节软骨表面欠光滑；附图5为具体实施方式一组用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液受试兔膝关节软骨切片HE染色光镜图，从附图5中能够看出软组织结构趋于正常，软骨细胞分布偶有不均，关节软骨表面光滑。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，对兔KOA模型关节软骨Mankin评分总积分的影响如表1所示：
表1乌头提取物注射液作用下关节软骨Mankin评分总积分
▲表示与A组相比具有显著性差异P＜0.05；*表示与B组相比具有显著性差异P＜0.05；△表示与C组相比具有显著性差异。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，对KOA关节软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的影响如表2所示：
表2乌头提取物注射液作用下关节软骨MMP-1、MMP-3和MMP-13表达(IOD)的变化
▲表示与A组相比具有显著性差异P＜0.05；*表示与B组相比具有显著性差异P＜0.05；△表示与C组相比具有显著性差异。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，关节软骨ADAMTS-4、ADAMTS-5表达(IOD)的变化(x±s)如表3所示：
表3乌头提取物注射液作用下关节软骨ADAMTS-4、ADAMTS-5表达(IOD)的变化
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，对兔膝骨关节炎模型关节液中IL-1β、IL-18和NF-κb p65含量的影响如表4所示：
表4乌头提取物注射液作用下关节液中IL-1β、IL-18和NF-κb p65含量的变化
▲表示与A组相比具有显著性差异P＜0.05；*表示与B组相比具有显著性差异P＜0.05；△表示与C组相比具有显著性差异。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，关节液中TNF-α、NO、iNOS含量的变化(x±s)如表5所示：
表5乌头提取物注射液作用下关节液中TNF-α、NO、iNOS含量的变化
▲表示与A组相比具有显著性差异P＜0.05；*表示与B组相比具有显著性差异P＜0.05；△表示与C组相比具有显著性差异。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，关节液中COX-2、PGE2含量的变化(x±s)如表6所示：
表6乌头提取物注射液作用下关节液中COX-2、PGE2含量的变化
▲表示与A组相比具有显著性差异P＜0.05；*表示与B组相比具有显著性差异P＜0.05；△表示与C组相比具有显著性差异。
从表1-表6实验结果证实乌头提取物注射液能够显著降低兔膝关节骨性关节炎关节液中IL-1β、IL-18的含量，从而起到治疗KOA的作用，用于关节腔注射治疗膝关节骨性关节炎具有有益的效果。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，针管穿刺点为髌骨外侧膝眼，髌骨外侧膝眼具体为屈膝90度位，髌骨下缘、髌韧带外侧1cm凹陷处，穿刺针头及穿刺部位常规消毒后，应用用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液2ml,取10号针头与胫骨平台平行，向内呈45°角，穿刺进入关节腔，针头完全刺入即可，感觉针下有落空感，或者回抽有抽出关节液时，可注射药物注入痛点。注药完毕，拔出针头后，用干棉球于进针点处按压10分钟，并嘱患者适度活动关节，以便让药液向周围浸润。每周一次，5次为一疗程。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，对于骨性关节炎的患者共100人进行治疗，病例治疗时间最短35天,最长175天,平均80天。全部病人进行疗效标准评定，结果显效93例，有效4例，无效3例，总有效率为97％。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，针管每次取2ml，关节腔注射，一周1次，连续使用五周为一疗程，2～5疗程治疗后骨性关节炎的患者疼痛缓解，病情进展得到有效控制。
具体实施方式二：
一种用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、按重量份数分别称取75份的川乌、25份的草乌作为原料，将称量好的药材粉碎成粗粉，混合均匀后待用；
步骤2、按照1kg：8L的药材与溶剂比，将步骤1混合均匀的药粉加入到乙醇溶液中，搅拌均匀后，常温下密闭浸泡2h，待用；
步骤3、将步骤2中的混合物移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤分离药液和滤渣；
步骤4、将步骤3得到的滤渣加入10倍体积的水，混合均匀后移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤保留药液；
步骤5、合并步骤3的药液和步骤4的药液，药液浓缩至无醇味；
步骤6、取步骤5制备好的药液1200mL，加蒸馏水至1800mL，调整pH值为6.5，过滤药液后，将药液浓缩至600mL，待用；
步骤7、将步骤6浓缩的药液加入无水乙醇，使得醇含量达到75％，静置过夜后，滤过，药液浓缩至无醇味；
步骤8、将步骤7得到的药液加注射用水至6000ml，灌封，灭菌，得到乌头提取物注射液。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤1中药材粉碎成粗粉的粒径为50目。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤3中高压反应釜中压力条件20MPa，保持压力30min，搅拌转速100r/min，反应温度60℃。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤4中在10MPa的压力条件下保持压力60min，搅拌转速100r/min，反应温度100℃。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤5中的药液浓缩用旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸馏真空度≦0.03MPa，转速150r/min，反应温度45℃。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤6中用药液膜过滤器过滤药液，过滤精度0.1μm。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤7中药液浓缩用旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸馏真空度≦0.03MPa，转速100r/min，反应温度40℃。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，步骤8中灭菌为高压蒸汽湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间20min。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，针管穿刺点为损伤的半月板的前角、后角、中部或边缘部或髌骨外侧膝眼，髌骨外侧膝眼具体为屈膝90度位，髌骨下缘、髌韧带外侧1cm凹陷处，穿刺针头及穿刺部位常规消毒后，应用用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液2ml,取10号针头与胫骨平台平行，向内呈45°角，穿刺进入关节腔，针头完全刺入即可，感觉针下有落空感，或者回抽有抽出关节液时，可注射药物注入痛点。注药完毕，拔出针头后，用干棉球于进针点处按压10分钟，并嘱患者适度活动关节，以便让药液向周围浸润。每周2次，5次为一疗程。
本实施方式所述的用于治疗半月板损伤的乌头提取物注射液的制备方法，半月板是位于膝关节间隙的一层纤维软骨，对关节功能有重要的作用，半月板的形态特点能使球形的股骨髁与较平坦的胫骨平台构成一个较“匹配”的关节。半月板还包括以下重要功能：增加膝关节稳定性，缓冲、吸收、传布膝关节负荷力，促进关节内营养。在负重时，有约70％的负重区域在半月板上，这就大大降低了胫骨平台上的应力，从而保护了软骨和全身关节。另外半月板还有润滑关节等功能，半月板可将关节液均匀涂布于关节表面，使关节摩擦系数大为减小。损伤多由扭转外力引起，当一腿承重，小腿固定在半屈曲，外展位时，身体及股骨强烈内旋，内侧半月板在股骨髁与胫骨之间，受到旋转压力，而致半月板撕裂；外侧半月板损伤的机制相同，但作用力的方向相反，破裂的半月板如部分滑入关节之间，使关节活动发生机械障碍，妨碍关节伸屈活动，形成“交锁”。
本实施方式所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，对于半月板损伤的患者共100人进行治疗，病例治疗时间最短35天,最长105天,平均65天。全部病人进行疗效标准评定，结果显效96例，有效3例，无效1例，总有效率为99％。
本发明所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法制备的乌头提取物注射液，用于治疗半月板损伤。用法：乌头提取物注射液2ml，关节腔注射，一周2次，连续使用五周为一疗程，1～3疗程用药后患者疼痛、功能障碍等症状显著改善，延缓关节周围组织退变过程，提高患者生活质量。

Claims (10)

1.一种用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液，其特征在于：所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液是由川乌和草乌为原料制成。
2.一种权利要求1所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1、按重量份数分别称取50～75份的川乌、25～75份的草乌作为原料，将称量好的药材粉碎成粗粉，混合均匀后待用；
步骤2、按照1kg：8～15L的药材与溶剂比，将步骤1混合均匀的药粉加入到乙醇溶液中，搅拌均匀后，常温下密闭浸泡2～5h，待用；
步骤3、将步骤2中的混合物移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤分离药液和滤渣；
步骤4、将步骤3得到的滤渣加入8～10倍体积的水，混合均匀后移入高压反应釜中加压提取，卸压后过滤保留药液；
步骤5、合并步骤3的药液和步骤4的药液，药液浓缩至无醇味；
步骤6、取步骤5制备好的药液1200～1500mL，加蒸馏水至1800～2000mL，调整pH值为5.5～6.5，过滤药液后，将药液浓缩至500～800mL，待用；
步骤7、将步骤6浓缩的药液加入无水乙醇，使得醇含量达到75％，静置过夜后，滤过，药液浓缩至无醇味；
步骤8、将步骤7得到的药液加注射用水至5000～8000ml，灌封，灭菌，得到乌头提取物注射液。
3.根据权利要求2所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，其特征在于：步骤1中药材粉碎成粗粉的粒径为50～200目。
4.根据权利要求2所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，其特征在于：步骤3中高压反应釜中压力条件8～20MPa，保持压力30～60min，搅拌转速100～200r/min，反应温度40～60℃。
5.根据权利要求2或3所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，其特征在于：步骤3中高压反应釜中压力条件15MPa，保持压力40min，搅拌转速150r/min，反应温度50℃。
6.根据权利要求2所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，其特征在于：步骤4中在10～15MPa的压力条件下保持压力30～60min，搅拌转速100～200r/min，反应温度80～100℃。
7.根据权利要求2所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，其特征在于：步骤5中的药液浓缩用旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸馏真空度≦0.03MPa，转速60～150r/min，反应温度35～45℃。
8.根据权利要求2所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，其特征在于：步骤6中用药液膜过滤器过滤药液，过滤精度0.1～0.3μm。
9.根据权利要求2所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的制备方法，其特征在于：步骤7中药液浓缩用旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸馏真空度≦0.03MPa，转速100～150r/min，反应温度40～45℃，步骤8中灭菌为高压蒸汽湿热灭菌，灭菌温度121℃，灭菌时间20～40min。
10.一种权利要求1-9任一项所述的用于治疗骨性关节炎的乌头提取物注射液的应用，其特征在于：在治疗骨性关节炎的制剂上的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108465003A (zh) * 2018-06-01 2018-08-31 广东药科大学附属第医院 一种中药涂剂及其在治疗膝关节骨性关节疾病的应用
CN112638397A (zh) * 2018-08-27 2021-04-09 阿尔法绿洲有限责任公司 草药提取物及其用途和制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101108826A (zh) * 2006-07-17 2008-01-23 修涞贵 一种常温下超高压提取乌头原碱的方法及其制成的制剂

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101108826A (zh) * 2006-07-17 2008-01-23 修涞贵 一种常温下超高压提取乌头原碱的方法及其制成的制剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李艳芳: "川乌草乌离子穴位导入治疗增生性膝关节炎70例", 《湖南中医学院学报》 *
郭焕章: "以二乌膏为主治疗膝关节和跟骨增生的疗效观察", 《青海医药杂志》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108465003A (zh) * 2018-06-01 2018-08-31 广东药科大学附属第医院 一种中药涂剂及其在治疗膝关节骨性关节疾病的应用
CN112638397A (zh) * 2018-08-27 2021-04-09 阿尔法绿洲有限责任公司 草药提取物及其用途和制备方法
US11738062B2 (en) 2018-08-27 2023-08-29 Alpha Oasis Llc Herbal medicine extracts and uses and methods of preparation thereof

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