CN107475180A - 一种干细胞培养基制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种干细胞培养基制备方法，所述培养基包括如下配方：血清2‑8份，谷氨酰胺4‑6份，二巯基乙醇3‑7份，三羧酸循环1‑3份，生长因子2‑4份，无机盐3‑5份，蔗糖1‑5份，无离子水6‑10份，水解乳蛋白1‑3份。本发明制备工艺简单，操作方便，通过对培养基PH值调节保证干细胞的活性，在使用的时候利用二氧化碳与三羧酸循环可以保证PH值的稳定，通过一次高压灭菌减少培养基污染机会还减少工序，提高制备效率，水解蛋白可以提高培养基的营养价值，便于吸收，保证干细胞的存活率。

Description

一种干细胞培养基制备方法
技术领域
本发明属于细胞培养基制备技术领域，更具体地说，尤其涉及一种干细胞培养基制备方法。
背景技术
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞(专能干细胞)。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”,干细胞在医学领域应用广泛，但是干细胞提取麻烦，难以适应现代制药业工业化大生产的需求，为了保证干细胞满足现有社会的需求，现有技术中都利用培养液对干细胞进行培养，但是现有的培养液制备工艺复杂，功能单一，并不能保证干细胞有效的培养，不利于广泛的推广和普及。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种干细胞培养基制备方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种干细胞培养基制备方法，所述培养基包括如下配方：血清2-8份，谷氨酰胺4-6份，二巯基乙醇3-7份，三羧酸循环1-3份，生长因子2-4份，无机盐3-5份，蔗糖1-5份，无离子水6-10份，水解乳蛋白1-3份。
优选的，所述生长因子为生长素或者细胞分裂素。
一种干细胞培养基制备方法，包括如下步骤：
S1、先把血清和无离子水加入反应罐内混合搅拌，且血清和无离子水的配比为1：4-1：8，再把血清和无离子水混合液加热到40℃-60℃；
S2、然后往反应罐内倒入谷氨酰胺和二巯基乙醇继续搅拌2-10分钟，然后停止搅拌和加热静置10-15分钟；
S3、再往反应罐内加入生长因子、蔗糖和无机盐，并搅拌6-10分钟，同时反应罐内的温度保持在30℃-50℃；
S4、搅拌之后往反应罐内加人三羧酸循环，并调节反应罐内溶液的PH值为7.2-7.4，然后继续搅拌3-5分钟；
S5、再往反应罐内加入水解乳蛋白，且水解乳蛋白与反应罐内的溶液配比为1：10-1：14，搅拌5-7分钟之后把反应罐内溶液进行一次高压灭菌封装待用；
S6、最后在使用的时候往培养液内通入90％-95％的空气和5％-10％的二氧化碳，然后对干细胞进行培养。
优选的，所述反应罐内的搅拌器转速在300r/min-500r/min。
优选的，所述高压灭菌的压力为100-150KPa，且温度为100℃-120℃。
本发明的技术效果和优点：本发明提供的一种干细胞培养基制备方法，与传统的制备方法相比，本发明制备工艺简单，操作方便，通过对培养基PH值调节保证干细胞的活性，在使用的时候利用二氧化碳与三羧酸循环可以保证PH值的稳定，通过一次高压灭菌减少培养基污染机会还减少工序，提高制备效率，水解蛋白可以提高培养基的营养价值，便于吸收，保证干细胞的存活率，该发明结构设计简单合理，操作方便，工艺简单，安全稳定，培养效果好，提高干细胞培养的效果，适用范围广，有利于推广和普及。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种干细胞培养基制备方法，所述培养基包括如下配方：血清2份，谷氨酰胺4份，二巯基乙醇3份，三羧酸循环1份，生长因子2份，无机盐3份，蔗糖1份，无离子水6份，水解乳蛋白1份。
具体的，所述生长因子为生长素。
一种干细胞培养基制备方法，包括如下步骤：
S1、先把血清和无离子水加入反应罐内混合搅拌，且血清和无离子水的配比为1：4，再把血清和无离子水混合液加热到40℃；
S2、然后往反应罐内倒入谷氨酰胺和二巯基乙醇继续搅拌2分钟，然后停止搅拌和加热静置10分钟；
S3、再往反应罐内加入生长素、蔗糖和无机盐，并搅拌6分钟，同时反应罐内的温度保持在30℃；
S4、搅拌之后往反应罐内加人三羧酸循环，并调节反应罐内溶液的PH值为7.2，然后继续搅拌3分钟；
S5、再往反应罐内加入水解乳蛋白，且水解乳蛋白与反应罐内的溶液配比为1：10，搅拌5分钟之后把反应罐内溶液进行一次高压灭菌封装待用；
S6、最后在使用的时候往培养液内通入95％的空气和5％的二氧化碳，然后对干细胞进行培养。
具体的，所述反应罐内的搅拌器转速在300r/min。
具体的，所述高压灭菌的压力为100KPa，且温度为100℃。
实施例2
一种干细胞培养基制备方法，所述培养基包括如下配方：血清5份，谷氨酰胺5份，二巯基乙醇5份，三羧酸循环2份，生长因子3份，无机盐4份，蔗糖3份，无离子水8份，水解乳蛋白2份。
具体的，所述生长因子为生长素。
一种干细胞培养基制备方法，包括如下步骤：
S1、先把血清和无离子水加入反应罐内混合搅拌，且血清和无离子水的配比为1：6，再把血清和无离子水混合液加热到50℃；
S2、然后往反应罐内倒入谷氨酰胺和二巯基乙醇继续搅拌6分钟，然后停止搅拌和加热静置13分钟；
S3、再往反应罐内加入生长素、蔗糖和无机盐，并搅拌8分钟，同时反应罐内的温度保持在40℃；
S4、搅拌之后往反应罐内加人三羧酸循环，并调节反应罐内溶液的PH值为7.34，然后继续搅拌4分钟；
S5、再往反应罐内加入水解乳蛋白，且水解乳蛋白与反应罐内的溶液配比为1：12，搅拌6分钟之后把反应罐内溶液进行一次高压灭菌封装待用；
S6、最后在使用的时候往培养液内通入93％的空气和5％的二氧化碳，然后对干细胞进行培养。
具体的，所述反应罐内的搅拌器转速在400r/min。
具体的，所述高压灭菌的压力为130KPa，且温度为110℃。
实施例3
一种干细胞培养基制备方法，所述培养基包括如下配方：血清8份，谷氨酰胺6份，二巯基乙醇7份，三羧酸循环3份，生长因子4份，无机盐5份，蔗糖5份，无离子水10份，水解乳蛋白3份。
具体的，所述生长因子为细胞分裂素。
一种干细胞培养基制备方法，包括如下步骤：
S1、先把血清和无离子水加入反应罐内混合搅拌，且血清和无离子水的配比为1：8，再把血清和无离子水混合液加热到60℃；
S2、然后往反应罐内倒入谷氨酰胺和二巯基乙醇继续搅拌10分钟，然后停止搅拌和加热静置15分钟；
S3、再往反应罐内加入细胞分裂素、蔗糖和无机盐，并搅拌10分钟，同时反应罐内的温度保持在50℃；
S4、搅拌之后往反应罐内加人三羧酸循环，并调节反应罐内溶液的PH值为7.4，然后继续搅拌5分钟；
S5、再往反应罐内加入水解乳蛋白，且水解乳蛋白与反应罐内的溶液配比为1：14，搅拌7分钟之后把反应罐内溶液进行一次高压灭菌封装待用；
S6、最后在使用的时候往培养液内通入90％的空气和10％的二氧化碳，然后对干细胞进行培养。
优选的，所述反应罐内的搅拌器转速在500r/min。
优选的，所述高压灭菌的压力为150KPa，且温度为120℃。
综上所述：本发明提供的一种干细胞培养基制备方法，与传统的制备方法相比，本发明制备工艺简单，操作方便，通过对培养基PH值调节保证干细胞的活性，在使用的时候利用二氧化碳与三羧酸循环可以保证PH值的稳定，通过一次高压灭菌减少培养基污染机会还减少工序，提高制备效率，水解蛋白可以提高培养基的营养价值，便于吸收，保证干细胞的存活率，该发明结构设计简单合理，操作方便，工艺简单，安全稳定，培养效果好，提高干细胞培养的效果，适用范围广，有利于推广和普及。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种干细胞培养基制备方法，其特征在于，所述培养基包括如下配方：血清2-8份，谷氨酰胺4-6份，二巯基乙醇3-7份，三羧酸循环1-3份，生长因子2-4份，无机盐3-5份，蔗糖1-5份，无离子水6-10份，水解乳蛋白1-3份。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞培养基制备方法，其特征在于：所述生长因子为生长素或者细胞分裂素。
3.根据权利要求1所述的一种干细胞培养基制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、先把血清和无离子水加入反应罐内混合搅拌，且血清和无离子水的配比为1：4-1：8，再把血清和无离子水混合液加热到40℃-60℃；
S2、然后往反应罐内倒入谷氨酰胺和二巯基乙醇继续搅拌2-10分钟，然后停止搅拌和加热静置10-15分钟；
S3、再往反应罐内加入生长因子、蔗糖和无机盐，并搅拌6-10分钟，同时反应罐内的温度保持在30℃-50℃；
S4、搅拌之后往反应罐内加人三羧酸循环，并调节反应罐内溶液的PH值为7.2-7.4，然后继续搅拌3-5分钟；
S5、再往反应罐内加入水解乳蛋白，且水解乳蛋白与反应罐内的溶液配比为1：10-1：14，搅拌5-7分钟之后把反应罐内溶液进行一次高压灭菌封装待用；
S6、最后在使用的时候往培养液内通入90％-95％的空气和5％-10％的二氧化碳，然后对干细胞进行培养。
4.根据权利要求3所述的一种干细胞培养基制备方法，其特征在于：所述反应罐内的搅拌器转速在300r/min-500r/min。
5.根据权利要求3所述的一种干细胞培养基制备方法，其特征在于：所述高压灭菌的压力为100-150KPa，且温度为100℃-120℃。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110628695A (zh) * 2019-11-12 2019-12-31 安徽科门生物科技有限公司 一种用于干细胞扩增的培养基

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101563449A (zh) * 2006-09-22 2009-10-21 理化学研究所 干细胞培养基及干细胞培养方法
CN103060264B (zh) * 2012-12-20 2015-01-21 上海市第十人民医院 一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法
CN104540936A (zh) * 2012-04-24 2015-04-22 社会福祉三星生命公益财团 干细胞培养基和使用它培养干细胞的方法
CN106635979A (zh) * 2017-01-16 2017-05-10 广东万海细胞生物科技有限公司 脂肪间充质干细胞的无血清培养基
CN106854640A (zh) * 2017-01-16 2017-06-16 广东万海细胞生物科技有限公司 一种毛囊干细胞的无血清培养基及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101563449A (zh) * 2006-09-22 2009-10-21 理化学研究所 干细胞培养基及干细胞培养方法
CN104540936A (zh) * 2012-04-24 2015-04-22 社会福祉三星生命公益财团 干细胞培养基和使用它培养干细胞的方法
CN103060264B (zh) * 2012-12-20 2015-01-21 上海市第十人民医院 一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法
CN106635979A (zh) * 2017-01-16 2017-05-10 广东万海细胞生物科技有限公司 脂肪间充质干细胞的无血清培养基
CN106854640A (zh) * 2017-01-16 2017-06-16 广东万海细胞生物科技有限公司 一种毛囊干细胞的无血清培养基及其制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
傅歆等: "不同培养基对骨髓间充质干细胞免疫学特性的影响", 《组织工程与重建外科杂志》 *
宋超先: "《微生物与发酵基础教程》", 31 May 2007, 天津大学出版社 *
王永芬等: "《动物细胞培养技术》", 31 July 2012, 华中科技大学出版社 *
薛形影等: "不同培养基及接种密度培养脐带血间充质干细胞的比较", 《中国临床新医学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110628695A (zh) * 2019-11-12 2019-12-31 安徽科门生物科技有限公司 一种用于干细胞扩增的培养基

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