CN110628695A - 一种用于干细胞扩增的培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种用于干细胞扩增的培养基,培养基按重量份计包括：10‑12份DMEM/F12，750‑850份灭菌的轻水，3‑4份NaHCO3,3‑5份L‑谷氨酰胺，2‑4份二巯基乙醇，1‑2份三羧酸循环，1‑3份细胞生长因子，1‑3份青链霉素双抗溶液,1‑3份硫酸庆大霉素,2‑6份丝裂霉素c,2‑4份无机盐，1‑2份蔗糖,6‑8份白血病抑制因子,1‑2份氯化钾,2‑4份酚红,3‑4份丙酮酸钠,2‑5份胰高血糖素，1‑2份亚油酸。本发明培养基培养的干细胞的扩增速度快，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞；培养基组成是确定的，因此重现性、可控性、且培养的干细胞是安全的；培养基细胞增殖速率较快，得到的细胞数量较多，提高了干细胞扩增速度，大大缩短了干细胞培养的时间。
Description
技术领域
本发明涉及一种培养基，具体是一种用于干细胞扩增的培养基。
背景技术
干细胞(Stem Cel ls)是一类具有自我更新及多向分化潜能的细胞群体，即这些细胞可以通过细胞分裂维持自身细胞群的大小，同时又可以进一步分化成为各种不同的组织细胞，从而医学界称之为“万能细胞”。这种独一无二的特性使其成为再生医学和移植医学的一个不可缺少的细胞来源。也使它成为众多疾病，如血液疾病、帕金森病，糖尿病，脊髓损伤、癌症和心脏病等细胞治疗的最佳候选者，因此对于干细胞的研究在临床应用领域意义重大。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于干细胞扩增的培养基，培养基能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，干细胞的扩增速度快，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，具有很高的科研和医学应用价值；本发明培养基组成是确定的，因此重现性、可控性、且培养的干细胞是安全的；培养基细胞增殖速率较快，得到的细胞数量较多，提高了干细胞扩增速度，大大缩短了干细胞培养的时间。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种用于干细胞扩增的培养基,培养基按重量份计包括：10-12份DMEM/F12，750-850份灭菌的轻水，3-4份NaHCO3,3-5份L-谷氨酰胺，2-4份二巯基乙醇，1-2份三羧酸循环，1-3份细胞生长因子，1-3份青链霉素双抗溶液,1-3份硫酸庆大霉素,2-6份丝裂霉素c,2-4份无机盐，1-2份蔗糖,6-8份白血病抑制因子,1-2份氯化钾,2-4份酚红,3-4份丙酮酸钠,2-5份胰高血糖素，1-2份亚油酸。
进一步的，所述培养基按重量份计包括：10份DMEM/F12，750份灭菌的轻水，3份NaHCO3,3份L-谷氨酰胺，2份二巯基乙醇，1份三羧酸循环，1份细胞生长因子，1份青链霉素双抗溶液,1份硫酸庆大霉素,2份丝裂霉素c,2份无机盐，1份蔗糖,6份白血病抑制因子,1份氯化钾,2份酚红,3份丙酮酸钠,2份胰高血糖素，1份亚油酸。
进一步的，所述培养基按重量份计包括：11份DMEM/F12，800份灭菌的轻水，3份NaHCO3,4份L-谷氨酰胺，3份二巯基乙醇，1份三羧酸循环，2份细胞生长因子，2份青链霉素双抗溶液,2份硫酸庆大霉素,4份丝裂霉素c,3份无机盐，1份蔗糖,7份白血病抑制因子,1份氯化钾,3份酚红,3份丙酮酸钠,3份胰高血糖素，1份亚油酸。
进一步的，所述培养基的培养温度为36.5-37.5摄氏度，培养基的PH值为7.2-7.4。
进一步的，所述丝裂霉素c需要避光。
进一步的，所述培养基的培养温度为36.5摄氏度，培养基的PH值为7.2。
进一步的，所述培养基的培养温度为37摄氏度，培养基的PH值为7.3。
进一步的，所述培养基的培养温度为37.5摄氏度，培养基的PH值为7.4。
本发明的有益效果：
1、本发明培养基能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，干细胞的扩增速度快，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，具有很高的科研和医学应用价值；
2、本发明培养基组成是确定的，因此重现性、可控性、且培养的干细胞是安全的；
3、本发明培养基细胞增殖速率较快，得到的细胞数量较多，提高了干细胞扩增速度，大大缩短了干细胞培养的时间。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
一种用于干细胞扩增的培养基,培养基按重量份计包括：10-12份DMEM/F12，750-850份灭菌的轻水，3-4份NaHCO3,3-5份L-谷氨酰胺，2-4份二巯基乙醇，1-2份三羧酸循环，1-3份细胞生长因子，1-3份青链霉素双抗溶液,1-3份硫酸庆大霉素,2-6份丝裂霉素c,2-4份无机盐，1-2份蔗糖,6-8份白血病抑制因子,1-2份氯化钾,2-4份酚红,3-4份丙酮酸钠,2-5份胰高血糖素，1-2份亚油酸。
培养基的培养温度为36.5-37.5摄氏度，培养基的PH值为7.2-7.4，丝裂霉素c在避光条件下进行操作，避免分解。
培养基培养的环境要求：无菌，紫外灯覆盖工作区，且有空气净化系统。
实施例1
一种用于干细胞扩增的培养基,培养基按重量份计包括：10份DMEM/F12，750份灭菌的轻水，3份NaHCO3,3份L-谷氨酰胺，2份二巯基乙醇，1份三羧酸循环，1份细胞生长因子，1份青链霉素双抗溶液,1份硫酸庆大霉素,2份丝裂霉素c,2份无机盐，1份蔗糖,6份白血病抑制因子,1份氯化钾,2份酚红,3份丙酮酸钠,2份胰高血糖素，1份亚油酸。
培养基的培养温度为36.5摄氏度，培养基的PH值为7.2。
实施例2
一种用于干细胞扩增的培养基,培养基按重量份计包括：11份DMEM/F12，800份灭菌的轻水，3份NaHCO3,4份L-谷氨酰胺，3份二巯基乙醇，1份三羧酸循环，2份细胞生长因子，2份青链霉素双抗溶液,2份硫酸庆大霉素,4份丝裂霉素c,3份无机盐，1份蔗糖,7份白血病抑制因子,1份氯化钾,3份酚红,3份丙酮酸钠,3份胰高血糖素，1份亚油酸。
培养基的培养温度为37摄氏度，培养基的PH值为7.3。
实施例3
一种用于干细胞扩增的培养基,培养基按重量份计包括：12份DMEM/F12，850份灭菌的轻水，4份NaHCO3,5份L-谷氨酰胺，4份二巯基乙醇，2份三羧酸循环，3份细胞生长因子，3份青链霉素双抗溶液,3份硫酸庆大霉素,6份丝裂霉素c,4份无机盐，2份蔗糖,8份白血病抑制因子,2份氯化钾,4份酚红,4份丙酮酸钠,5份胰高血糖素，2份亚油酸。
培养基的培养温度为37.5摄氏度，培养基的PH值为7.4。
实施例4
一种用于干细胞扩增的培养基,培养基按重量份计包括：12份DMEM/F12，850份灭菌的轻水，4份NaHCO3,5份L-谷氨酰胺，4份二巯基乙醇，2份三羧酸循环，3份细胞生长因子，3份青链霉素双抗溶液,3份硫酸庆大霉素,6份丝裂霉素c,4份无机盐，2份蔗糖,8份白血病抑制因子,2份氯化钾,4份酚红,4份丙酮酸钠,5份胰高血糖素，2份亚油酸。
培养基的培养温度为37摄氏度，培养基的PH值为7.3
采用上述实施例1-4中的培养基和培养条件下分别对干细胞进行培养，分别检测上述实施例中的各项指标，如下表所示：
| 检测指标 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 |
| 真菌 | 阴性 | 阴性 | 阴性 | 阴性 |
| 细菌 | 阴性 | 阴性 | 阴性 | 阴性 |
| 支原体 | 阴性 | 阴性 | 阴性 | 阴性 |
| 内毒素 | <1EU/ml | <1EU/ml | <1EU/ml | <1EU/ml |
| PH值 | 7.2 | 7.3 | 7.4 | 7.3 |
| 细胞生长状态 | 符合标准 | 符合标准 | 符合标准 | 符合标准 |
通过检测，干细胞的的各项指标均符合检测标准。
对实施例中培养基培养的细胞位于生长期的细胞密度进行检测，检测结果如下表所示：
| 第一周 | 第二周 | 第三周 | |
| 实施例1 | 1.21×10<sup>5</sup>个/mL | 1.73×10<sup>5</sup>个/mL | 2.32×10<sup>5</sup>个/mL |
| 实施例2 | 1.13×10<sup>5</sup>个/mL | 1.69×10<sup>5</sup>个/mL | 2.31×10<sup>5</sup>个/mL |
| 实施例3 | 1.11×10<sup>5</sup>个/mL | 1.64×10<sup>5</sup>个/mL | 2.28×10<sup>5</sup>个/mL |
| 实施例4 | 1.25×10<sup>5</sup>个/mL | 1.75×10<sup>5</sup>个/mL | 2.33×10<sup>5</sup>个/mL |
通过检测细胞密度，得出以下结论培养基细胞增殖速率较快，得到的细胞数量较多，提高了干细胞扩增速度，大大缩短了干细胞培养的时间。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。
Claims (8)
1.一种用于干细胞扩增的培养基,其特征在于，培养基按重量份计包括：10-12份DMEM/F12，750-850份灭菌的轻水，3-4份NaHCO3,3-5份L-谷氨酰胺，2-4份二巯基乙醇，1-2份三羧酸循环，1-3份细胞生长因子，1-3份青链霉素双抗溶液,1-3份硫酸庆大霉素,2-6份丝裂霉素c,2-4份无机盐，1-2份蔗糖,6-8份白血病抑制因子,1-2份氯化钾,2-4份酚红,3-4份丙酮酸钠,2-5份胰高血糖素，1-2份亚油酸。
2.根据权利要求1所述的一种用于干细胞扩增的培养基,其特征在于，所述培养基按重量份计包括：10份DMEM/F12，750份灭菌的轻水，3份NaHCO3,3份L-谷氨酰胺，2份二巯基乙醇，1份三羧酸循环，1份细胞生长因子，1份青链霉素双抗溶液,1份硫酸庆大霉素,2份丝裂霉素c,2份无机盐，1份蔗糖,6份白血病抑制因子,1份氯化钾,2份酚红,3份丙酮酸钠,2份胰高血糖素，1份亚油酸。
3.根据权利要求1所述的一种用于干细胞扩增的培养基,其特征在于，所述培养基按重量份计包括：11份DMEM/F12，800份灭菌的轻水，3份NaHCO3,4份L-谷氨酰胺，3份二巯基乙醇，1份三羧酸循环，2份细胞生长因子，2份青链霉素双抗溶液,2份硫酸庆大霉素,4份丝裂霉素c,3份无机盐，1份蔗糖,7份白血病抑制因子,1份氯化钾,3份酚红,3份丙酮酸钠,3份胰高血糖素，1份亚油酸。
4.根据权利要求1所述的一种用于干细胞扩增的培养基,其特征在于，所述培养基的培养温度为36.5-37.5摄氏度，培养基的PH值为7.2-7.4。
5.根据权利要求1所述的一种用于干细胞扩增的培养基,其特征在于，所述丝裂霉素c需要避光。
6.根据权利要求4所述的一种用于干细胞扩增的培养基,其特征在于，所述培养基的培养温度为36.5摄氏度，培养基的PH值为7.2。
7.根据权利要求4所述的一种用于干细胞扩增的培养基,其特征在于，所述培养基的培养温度为37摄氏度，培养基的PH值为7.3。
8.根据权利要求4所述的一种用于干细胞扩增的培养基,其特征在于，所述培养基的培养温度为37.5摄氏度，培养基的PH值为7.4。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111150746A (zh) * | 2020-01-06 | 2020-05-15 | 湖南护宫福生物科技有限公司 | 一种用于阴道给药治疗妇科炎症的干细胞修复液 |
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- 2019-11-12 CN CN201911099201.0A patent/CN110628695A/zh active Pending
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