CN112353714A - 一种覆膜酵母发酵物的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种覆膜酵母发酵物的制备方法及其应用，本发明提供了一种覆膜酵母发酵物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：配制培养基：一级种子培养基用YPD培养基；发酵表达培养基用BSM培养基。步骤2：发酵表达。上述覆膜酵母发酵物的应用。本发明含有覆膜酵母发酵物是天然发酵酵母产品，含有丰富的维生素，必需氨基酸、酶、酵母肽。覆膜酵母菌发酵产物滤液可以增加丝聚蛋白的表达并防止丝氨酸蛋白酪氨酸介导的丝聚蛋白的减少，覆膜酵母菌发酵产物滤液可以增加表皮角质形成细胞中的caspase‑14在3D模型中的表达，能够抗菌消炎、促进创面愈合、修复皮肤屏障、提高皮肤及黏膜免疫力。

Description

一种覆膜酵母发酵物的制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及护肤品生产制造领域，特别涉及一种覆膜酵母发酵物的制备方法及其应用。

背景技术

面膜或敷料敷于面部后，能将皮肤暂时与外界隔离，面膜里的物质就会把皮肤紧紧地包裹，让皮肤与外界的空气阻隔开，一方面让水份缓缓地渗透入表皮的角质层，让角质层的细胞在湿润的环境中“喝饱水”，使深层细胞吸足水份，这样皮肤便会柔软起来，增加弹性；与此同时，皮肤表面也会暖和起来，促进毛细血管扩张，这样就有利于把毛孔里沾染的外界灰尘、化学污染物质和微生物清除，也有利于排除表皮细胞新陈代谢产生的废物和积累得过多的油脂类物质。

目前抗菌功能性面膜型一般主要功能性成分为抗菌剂及防腐剂，一般功能为抑制细菌生长，功能较为单一，治疗效果不够理想，且大量的防腐剂添加存在长期使用的安全性风险。

覆膜酵母发酵液是天然发酵酵母产品，含有丰富的维生素，必需氨基酸、酶、酵母肽。覆膜酵母菌发酵产物滤液可以增加丝聚蛋白的表达并防止丝氨酸蛋白酪氨酸介导的丝聚蛋白的减少，覆膜酵母菌发酵产物滤液可以增加表皮角质形成细胞中的caspase-14在3D模型中的表达，因为胱天蛋白酶caspase-14表达牵涉受损的皮肤屏障形成，所以覆膜酵母菌发酵产物滤液可以改善皮肤的屏障功能，具有保湿、促进创伤愈合，治疗激素依赖性皮炎，减少瘢痕的作用，功能完善，安全可靠。

十三肽是多功能生物多肽，其主要作用为抗菌消炎、促进创面愈合、修复皮肤屏障、提高皮肤及黏膜免疫力，对抑制皮肤细菌生长，治疗痤疮、皮炎、皮损等病症，减少疤痕形成，修复皮肤屏障，预防创面感染，促进创面愈合都有显著作用。

YNB为无氨基酵母氮源，相比于蛋白胨更利于控制发酵表达过程，防止菌体过分生长而导致蛋白表达量不足。

发明内容

本发明的目的是解决现有治疗痤疮、皮炎等功能性面膜的功能性成分为药物和激素类，治疗效果不够理想，且大量的长期使用容易造成药物或激素依赖，提供了一种覆膜酵母发酵物，该发酵物采用YNB代替蛋白胨进行发酵，应用其生产的产品具有抗菌作用，且具有保湿、促进创伤愈合，减少瘢痕的作用，功能完善，能够治疗激素依赖性皮炎，且不含防腐剂，可长期使用，安全可靠。

本发明提供的技术方案为：

一种覆膜酵母发酵物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：配制培养基

1)一级种子培养基用YPD培养基

YPD培养基：将10g覆膜酵母提取物，20gYNB，20g葡萄糖，溶于 1000mL去离子水中，115℃高压灭菌，备用；

2)发酵表达培养基用BSM培养基

BSM培养基:在1L去离子水中按以下顺序依次分别溶解下列物质： 26.7ml85％磷酸85％，18.2g硫酸钾，14.9g七水硫酸镁，0.93g二水硫酸钙， 4.13g氢氧化钾；使用25％的氨水调节pH至5.5，添加0.2％的YNB；

步骤2：发酵表达

1)取已鉴定活性的阳性菌落，接种于已经灭菌的200mL YPD培养基的挡板瓶中，在29℃，200rpm的条件下振荡培养24小时，使其在600nm波长处的吸光值达到4-6；

2)在种子菌发酵罐中加入YPD培养基和适量消泡剂，在115℃下，灭菌30min；

3)使用火焰接种法将挡板瓶中的种子液接入到种子菌发酵罐中，调整发酵参数，发酵12h；

4)在诱导表达发酵罐中加入改良BSM培养基和适量消泡剂，121℃， 20min灭菌；

5)转接管路高压蒸汽灭菌15min后，将种子发酵罐中的种子液按照1:30 的量转入诱导表达发酵罐中，调整发酵参数，开始发酵；

6)发酵6h后开始流加甲醇，发酵，72h后得到发酵产物即为覆膜酵母发酵物。

上述覆膜酵母发酵物的应用：使用覆膜酵母发酵物生产敷料或面膜。

所述敷料的制备方法包含以下步骤：

1将覆膜酵母发酵液按20％比例的添加量与滤液混合，在混合液中加入总质量0.5％的卡波姆，均质10min；

2)接着转入搅拌罐中，加入总质量3％的甘油，高速搅拌；

3)缓慢滴入三乙醇胺，直到pH超过6，卡波姆形成凝胶，得到所述敷料。

所述面膜包括面膜基布和面膜精华液，所述面膜精华液按重量百分含量计，包括以下组分：

卡波姆:0.15-1.5％、高分子透明质酸：0.1-1％、低分子透明质酸：0.1-1％、甘油：5％、覆膜酵母发酵物：15-20％、三乙醇胺：0.15％、覆膜酵母发酵液2.5-5％、余量：纯化水；

所述面膜的制备方法包含以下步骤：

1)覆膜酵母发酵物活性检测；

2)在容器中加入纯化水；

3)向容器中依次加入卡波姆、高分子透明质酸、低分子透明质酸，搅拌10分钟至分散均匀；

4)将步骤3的液体加入均质机中，温度维持在60-75℃，均质机进行高速均质10分钟，至整个体系澄清透明，无颗粒状固体成分，冷却至室温；

5)向容器中加入甘油，充分搅拌10分钟至均匀；

6)加入覆膜酵母发酵物，充分搅拌10分钟至均匀；

8)加入覆膜酵母发酵液，充分搅拌10分钟至均匀；

9)向容器中缓慢加入三乙醇胺，边加入边搅拌，搅拌均匀；

10)采用135℃高温瞬时灭菌，质检合格后填充装有面膜基布的袋中。

本发明的有益效果为：

1、本发明实用YNB为发酵物的氮源，相比于蛋白胨更利于控制发酵表达过程，防止菌体过分生长而导致蛋白表达量不足。

2、本发明含有覆膜酵母发酵物是天然发酵酵母产品，含有丰富的维生素，必需氨基酸、酶、酵母肽。覆膜酵母菌发酵产物滤液可以增加丝聚蛋白的表达并防止丝氨酸蛋白酪氨酸介导的丝聚蛋白的减少，覆膜酵母菌发酵产物滤液可以增加表皮角质形成细胞中的caspase-14在3D模型中的表达，因为胱天蛋白酶caspase-14表达牵涉受损的皮肤屏障形成，所以覆膜酵母菌发酵产物滤液可以改善皮肤的屏障功能，经检测主要产物为十三肽，能够抗菌消炎、促进创面愈合、修复皮肤屏障、提高皮肤及黏膜免疫力，对抑制皮肤细菌生长，二者相结合治疗痤疮、皮炎、皮损等病症，减少疤痕形成，修复皮肤屏障，预防创面感染，促进创面愈合都有显著作用；

3、本发明生产的面膜和敷料具有良好的乳化性、增稠性、助悬性和成膜性，可以在皮肤表面形成一层湿性修复膜；有良好的吸水性，可以保持皮肤湿润、柔软，在皮肤上可形成一层保湿薄膜，隔绝外来物质侵犯皮肤，防止水分蒸发；可以在皮肤表面形成一层透气的薄膜，使皮肤光滑湿润，并可阻隔外来的细菌、灰尘，紫外线的侵入，保护皮肤免受侵害，具有轻微扩张毛细血管，增加血液循环，促进新陈代谢，改善皮肤营养吸收作用。

具体实施方式

下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

实施例1

一种覆膜酵母发酵物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：配制培养基

1)一级种子培养基用YPD培养基

YPD培养基：将10g覆膜酵母提取物，20gYNB，20g葡萄糖，溶于 1000mL去离子水中，115℃高压灭菌，备用；

2)发酵表达培养基用BSM培养基

BSM培养基:在1L去离子水中按以下顺序依次分别溶解下列物质： 26.7ml85％磷酸85％，18.2g硫酸钾，14.9g七水硫酸镁，0.93g二水硫酸钙， 4.13g氢氧化钾；使用25％的氨水调节pH至5.5，添加0.2％的YNB；

步骤2：发酵表达

1)取已鉴定活性的阳性菌落，接种于已经灭菌的200mL YPD培养基的挡板瓶中，在29℃，200rpm的条件下振荡培养24小时，使其在600nm波长处的吸光值达到4-6；

2)在种子菌发酵罐中加入YPD培养基和适量消泡剂，在115℃下，灭菌30min；

3)使用火焰接种法将挡板瓶中的种子液接入到种子菌发酵罐中，调整发酵参数，发酵12h；

4)在诱导表达发酵罐中加入改良BSM培养基和适量消泡剂，121℃，20min灭菌；

5)转接管路高压蒸汽灭菌15min后，将种子发酵罐中的种子液按照1:30 的量转入诱导表达发酵罐中，调整发酵参数，开始发酵；

6)发酵6h后开始流加甲醇，发酵，72h后得到发酵产物即为覆膜酵母发酵物。

上述覆膜酵母发酵物的应用：使用覆膜酵母发酵物生产敷料或面膜。

所述敷料的制备方法包含以下步骤：

1)将十三肽发酵液按20％比例的添加量与滤液混合，在混合液中加入总质量0.5％的卡波姆，均质10min；

2)接着转入搅拌罐中，加入总质量3％的甘油，高速搅拌；

3)缓慢滴入三乙醇胺，直到pH超过6，卡波姆形成凝胶，得到所述敷料。

所述面膜包括面膜基布和面膜精华液，所述面膜精华液按重量百分含量计，包括以下组分：

卡波姆:0.15％、高分子透明质酸：0.1％、低分子透明质酸：0.1％、甘油：5％、覆膜酵母发酵物：15％、三乙醇胺：0.15％、覆膜酵母发酵液2.5％、余量：纯化水；

所述面膜的制备方法包含以下步骤：

1)覆膜酵母发酵物活性检测；

2)在容器中加入纯化水；

3)向容器中依次加入卡波姆、高分子透明质酸、低分子透明质酸，搅拌10分钟至分散均匀；

4)将步骤3的液体加入均质机中，温度维持在60℃，均质机进行高速均质10分钟，至整个体系澄清透明，无颗粒状固体成分，冷却至室温；

5)向容器中加入甘油，充分搅拌10分钟至均匀；

6)加入覆膜酵母发酵物，充分搅拌10分钟至均匀；

8)加入覆膜酵母发酵液，充分搅拌10分钟至均匀；

9)向容器中缓慢加入三乙醇胺，边加入边搅拌，搅拌均匀；

10)采用135℃高温瞬时灭菌，质检合格后填充装有面膜基布的袋中。

实施例2

一种覆膜酵母发酵物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：配制培养基

1)一级种子培养基用YPD培养基

YPD培养基：将10g覆膜酵母提取物，20gYNB，20g葡萄糖，溶于 1000mL去离子水中，115℃高压灭菌，备用；

2)发酵表达培养基用BSM培养基

BSM培养基:在1L去离子水中按以下顺序依次分别溶解下列物质： 26.7ml85％磷酸85％，18.2g硫酸钾，14.9g七水硫酸镁，0.93g二水硫酸钙， 4.13g氢氧化钾；使用25％的氨水调节pH至5.5，添加0.2％的YNB；

步骤2：发酵表达

1)取已鉴定活性的阳性菌落，接种于已经灭菌的200mL YPD培养基的挡板瓶中，在29℃，200rpm的条件下振荡培养24小时，使其在600nm波长处的吸光值达到4-6；

2)在种子菌发酵罐中加入YPD培养基和适量消泡剂，在115℃下，灭菌30min；

3)使用火焰接种法将挡板瓶中的种子液接入到种子菌发酵罐中，调整发酵参数，发酵12h；

4)在诱导表达发酵罐中加入改良BSM培养基和适量消泡剂，121℃， 20min灭菌；

5)转接管路高压蒸汽灭菌15min后，将种子发酵罐中的种子液按照1:30 的量转入诱导表达发酵罐中，调整发酵参数，开始发酵；

6)发酵6h后开始流加甲醇，发酵，72h后得到发酵产物即为覆膜酵母发酵物。

上述覆膜酵母发酵物的应用：使用覆膜酵母发酵物生产敷料或面膜。

所述敷料的制备方法包含以下步骤：

1)将十三肽发酵液按20％比例的添加量与滤液混合，在混合液中加入总质量0.5％的卡波姆，均质10min；

2)接着转入搅拌罐中，加入总质量3％的甘油，高速搅拌；

3)缓慢滴入三乙醇胺，直到pH超过6，卡波姆形成凝胶，得到所述敷料。

所述面膜包括面膜基布和面膜精华液，所述面膜精华液按重量百分含量计，包括以下组分：

卡波姆:1％、高分子透明质酸：0.5％、低分子透明质酸：0.5％、甘油： 5％、覆膜酵母发酵物：15-20％、三乙醇胺：0.15％、覆膜酵母发酵液4％、余量：纯化水；

所述面膜的制备方法包含以下步骤：

1)覆膜酵母发酵物活性检测；

2)在容器中加入纯化水；

3)向容器中依次加入卡波姆、高分子透明质酸、低分子透明质酸，搅拌10分钟至分散均匀；

4)将步骤3的液体加入均质机中，温度维持在70℃，均质机进行高速均质10分钟，至整个体系澄清透明，无颗粒状固体成分，冷却至室温；

5)向容器中加入甘油，充分搅拌10分钟至均匀；

6)加入覆膜酵母发酵物，充分搅拌10分钟至均匀；

8)加入覆膜酵母发酵液，充分搅拌10分钟至均匀；

9)向容器中缓慢加入三乙醇胺，边加入边搅拌，搅拌均匀；

10)采用135℃高温瞬时灭菌，质检合格后填充装有面膜基布的袋中。

实施例3

一种覆膜酵母发酵物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：配制培养基

1)一级种子培养基用YPD培养基

YPD培养基：将10g覆膜酵母提取物，20gYNB，20g葡萄糖，溶于1000mL去离子水中，115℃高压灭菌，备用；

2)发酵表达培养基用BSM培养基

BSM培养基:在1L去离子水中按以下顺序依次分别溶解下列物质： 26.7ml85％磷酸85％，18.2g硫酸钾，14.9g七水硫酸镁，0.93g二水硫酸钙， 4.13g氢氧化钾；使用25％的氨水调节pH至5.5，添加0.2％的YNB；

步骤2：发酵表达

1)取已鉴定活性的阳性菌落，接种于已经灭菌的200mL YPD培养基的挡板瓶中，在29℃，200rpm的条件下振荡培养24小时，使其在600nm波长处的吸光值达到4-6；

2)在种子菌发酵罐中加入YPD培养基和适量消泡剂，在115℃下，灭菌30min；

3)使用火焰接种法将挡板瓶中的种子液接入到种子菌发酵罐中，调整发酵参数，发酵12h；

4)在诱导表达发酵罐中加入改良BSM培养基和适量消泡剂，121℃， 20min灭菌；

5)转接管路高压蒸汽灭菌15min后，将种子发酵罐中的种子液按照1:30 的量转入诱导表达发酵罐中，调整发酵参数，开始发酵；

6)发酵6h后开始流加甲醇，发酵，72h后得到发酵产物即为覆膜酵母发酵物。

上述覆膜酵母发酵物的应用：使用覆膜酵母发酵物生产敷料或面膜。

所述敷料的制备方法包含以下步骤：

1)将十三肽发酵液按20％比例的添加量与滤液混合，在混合液中加入总质量0.5％的卡波姆，均质10min；

2)接着转入搅拌罐中，加入总质量3％的甘油，高速搅拌；

3)缓慢滴入三乙醇胺，直到pH超过6，卡波姆形成凝胶，得到所述敷料。

所述面膜包括面膜基布和面膜精华液，所述面膜精华液按重量百分含量计，包括以下组分：

卡波姆:1.5％、高分子透明质酸：1％、低分子透明质酸：1％、甘油： 5％、覆膜酵母发酵物：20％、三乙醇胺：0.15％、覆膜酵母发酵液5％、余量：纯化水；

所述面膜的制备方法包含以下步骤：

1)覆膜酵母发酵物活性检测；

2)在容器中加入纯化水；

3)向容器中依次加入卡波姆、高分子透明质酸、低分子透明质酸，搅拌10分钟至分散均匀；

4)将步骤3的液体加入均质机中，温度维持在75℃，均质机进行高速均质10分钟，至整个体系澄清透明，无颗粒状固体成分，冷却至室温；

5)向容器中加入甘油，充分搅拌10分钟至均匀；

6)加入覆膜酵母发酵物，充分搅拌10分钟至均匀；

8)加入覆膜酵母发酵液，充分搅拌10分钟至均匀；

9)向容器中缓慢加入三乙醇胺，边加入边搅拌，搅拌均匀；

10)采用135℃高温瞬时灭菌，质检合格后填充装有面膜基布的袋中。

保存及用法：本发明面膜可放置于阴凉干燥处保存，温度不高于38℃。使用前先在手背或耳后皮肤试用，无敏感者，方可适用于面部皮肤。使用时，将本发明面膜均匀敷在面部，10-15min后冲洗干净，每周3次。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (4)

1.一种覆膜酵母发酵物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：配制培养基

1)一级种子培养基用YPD培养基

YPD培养基：将10g覆膜酵母提取物，20gYNB，20g葡萄糖，溶于1000mL去离子水中，115℃高压灭菌，备用；

2)发酵表达培养基用BSM培养基

BSM培养基:在1L去离子水中按以下顺序依次分别溶解下列物质：26.7ml85％磷酸85％，18.2g硫酸钾，14.9g七水硫酸镁，0.93g二水硫酸钙，4.13g氢氧化钾；使用25％的氨水调节pH至5.5，添加0.2％的YNB；

步骤2：发酵表达

1)取已鉴定活性的阳性菌落，接种于已经灭菌的200mL YPD培养基的挡板瓶中，在29℃，200rpm的条件下振荡培养24小时，使其在600nm波长处的吸光值达到4-6；

2)在种子菌发酵罐中加入YPD培养基和适量消泡剂，在115℃下，灭菌30min；

3)使用火焰接种法将挡板瓶中的种子液接入到种子菌发酵罐中，调整发酵参数，发酵12h；

4)在诱导表达发酵罐中加入改良BSM培养基和适量消泡剂，121℃，20min灭菌；

5)转接管路高压蒸汽灭菌15min后，将种子发酵罐中的种子液按照1:30的量转入诱导表达发酵罐中，调整发酵参数，开始发酵；

6)发酵6h后开始流加甲醇，发酵，72h后得到发酵产物即为覆膜酵母发酵物。

2.根据权利要求1所述的覆膜酵母发酵物的应用，其特征在于，使用覆膜酵母发酵物生产敷料或面膜。

3.根据权利要求2所述的覆膜酵母发酵物的应用，其特征在于，

所述敷料的制备方法包含以下步骤：

1)将覆膜酵母发酵液按20％比例的添加量与滤液混合，在混合液中加入总质量0.5％的卡波姆，均质10min；

2)接着转入搅拌罐中，加入总质量3％的甘油，高速搅拌；

3)缓慢滴入三乙醇胺，直到pH超过6，卡波姆形成凝胶，得到所述敷料。

4.根据权利要求2所述的覆膜酵母发酵物的应用，其特征在于，所述面膜包括面膜基布和面膜精华液，所述面膜精华液按重量百分含量计，包括以下组分：

卡波姆:0.15-1.5％、高分子透明质酸：0.1-1％、低分子透明质酸：0.1-1％、甘油：5％、覆膜酵母发酵物：15-20％、三乙醇胺：0.15％、覆膜酵母发酵液2.5-5％、余量：纯化水；

所述面膜的制备方法包含以下步骤：

1)覆膜酵母发酵物活性检测；

2)在容器中加入纯化水；

3)向容器中依次加入卡波姆、高分子透明质酸、低分子透明质酸，搅拌10分钟至分散均匀；

4)将步骤3的液体加入均质机中，温度维持在60-75℃，均质机进行高速均质10分钟，至整个体系澄清透明，无颗粒状固体成分，冷却至室温；

5)向容器中加入甘油，充分搅拌10分钟至均匀；

6)加入覆膜酵母发酵物，充分搅拌10分钟至均匀；

8)加入覆膜酵母发酵液，充分搅拌10分钟至均匀；

9)向容器中缓慢加入三乙醇胺，边加入边搅拌，搅拌均匀；

10)采用135℃高温瞬时灭菌，质检合格后填充装有面膜基布的袋中。