一种抗急性放射性损伤的复合浆果组合物的制造方法
技术领域
本技术涉及一种浆果混合物,尤其涉及一种用于减少急性放射性损伤的浆果混合物。
背景技术
随着肿瘤的发病率的增加,放射治疗变得越来越普遍!对于放疗产生的损伤目前并没有统一有效的解决办法。放疗后患者体内产生大量的活性氧,活性氧在电离辐射导致的细胞损伤中发挥重要作用,导致DNA链断裂、脂质过氧化和蛋白质变性等。如果氧化应激超过机体自我调节能力,血红蛋白、细胞膜和酶将发生退行性改变,进而导致细胞功能紊乱。
发明内容
针对急性放射性给人体带来的巨大危害,人类机体经过电离辐射后会产生大量的活性氧(ROS),ROS在电离辐射导致的细胞损伤中发挥重要作用,导致DNA链断裂,脂质过氧化和蛋白质变性。如果通过补充抗氧化物质,清除或降低活性氧,从而保护细胞质或细胞膜上的脂质、核酸类和蛋白质免收ROS 的氧化损伤,则会起到抗辐射的作用。
本发明旨在研发一种通过食物摄取的方式得到减少急性放射性损伤的效果,黑莓、黑加仑、桑葚、枸杞子等包含大量的花青素、鞣化酸、黄酮、抗败血酸,这些物质具有良好的抗氧化性。花青素能有效降低毛细血管通透性、调控细胞周期活性,有清除自由基和良好的还原能力;黑莓中鞣化酸的含量居各食物之首,为较强抗氧化剂,是天然的抗致癌物质,黄酮类有很好的自由基清除、抗氧化和抗菌作用;抗坏血酸即维生素C,是一种自由基清除剂,将维生素E转化为其活性形式参与抗氧化反应。
目前,公认的天然抗氧化物质主要有以下几类:多酚类物质、黄酮类物质、维生素类抗氧化物质、多不饱和脂肪酸、类胡萝卜素类抗氧化物质等。
树莓籽中除含有树莓籽油还有高含量的原花青素,树莓籽油中的不饱和脂肪酸的含量可达85.97%,原花青素是一种天然高效的抗氧化剂和脂质过氧化剂,与维生素C和柠檬酸能表现出一定的协同抗氧化作用。
黑莓籽中三个不同的极性部位总黄酮含量约为30-50mg/g,总多酚含量约为3-5mg/g,黑莓籽中的多酚类物质主要是维生素E、花色苷,鞣花酸等。与维生素C配伍具有体内纠正脂质代谢紊乱和增强机体抗氧化防御体系的能力,减少氧化应激作用。
黑加仑籽中含有α-亚麻酸和γ-亚麻酸,这两种亚麻酸不但具有血小板聚集、降低血压、软化血管、降低血脂、预防和治疗心脏血管疾病的作用,而且还具有较强的抗癌、防癌(乳腺癌、直肠癌等)作用,对防止肿瘤发生,延缓衰老,调节人体生理功能,增加免疫能力有显著功效,同时还有美容、减肥作用。
桑葚籽中含有多不饱和脂肪酸、活性蛋白、维生素、氨基酸、胡萝卜素、矿物质,可以促进血红细胞的生长,防止白细胞减少。
枸杞籽中含有比果实更多的甜菜碱,与维生素C配伍,能抑制肿瘤的有丝分裂,作用较单独使用强,
蓝莓为暗紫色浆果,含有丰富的酚酸、多酚、花青素、黄酮类物质,其花青素被认为是自然界最有效的抗氧化剂,清除自由基的能力远高于其他水果,对缓解视疲劳具有显著功效。
石榴中约含有12种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸8种,相对含量为92.22%,另外石榴籽蛋白质中总氨基酸含量为15.67%,且氨基酸组成较全面,必需氨基酸含量达到总氨基酸含量的31.98%
枳椇(拐枣)果实中有很高的营养价值,有“糖果树”的盛名,此外,还含有丰富的有机酸、苹果酸钾等无机盐类以及多种维生素和18种人体必需的氨基酸,还含铁、磷、钙、铜、锰、锌等营养微量元素和一些生物碱。
本配方包含多酚、总黄酮、多不饱和脂肪酸等多种抗氧化物质,另外枳椇中的糖能与蓝莓冻干果中的花青素接合生成花色苷,易被人体吸收;原花青素与拐枣中的有机酸表现协同抗氧化作用;原花青素能保护浆果籽中的多不饱和脂肪酸不被氧化。
本发明这种复合浆果组合物作为一种预防性抗氧化剂,通过观察其对急性放射性损伤大鼠的抗氧化效果,并将维生素C和维生素E联合应用作为药物对照组,与复方树莓籽粉防治效果相比较,得到了优于药物对照组的浆果组合物配比。
本发明是一种抗急性放射性损伤的复合浆果组合物的制造方法,包含如下步骤:
A、将浆果组合物按比例混合低温冷冻后投入发酵罐,逐渐升温,温度控制在15℃~20℃;
B、将步骤A中发酵后的液体与皮渣进行过滤分离,通过回收皮渣来得到该浆果组合物籽的混合物;
C、将步骤B中分离得到的皮渣进行压榨;
D、将步骤C中压榨后得到的皮渣在100℃下烘干2.5~3小时;
E、将步骤D中得到的烘干后的皮渣进行自然晾晒,晾晒后进行破碎;
F、将步骤E中破碎后的皮渣在100℃下进行第二次烘干,烘干时间为1小时;
G、将步骤F中得到的二次烘干后的皮渣进行粉碎并过200目筛进行筛分,得到浆果籽粉;
H、将黑树莓、蓝莓、石榴、枳椇的果实分别冻干并粉碎过200目筛,得到各果实的冻干果粉;
I、将G步骤中的得到的浆果籽粉与步骤H得到的各果实的冻干果粉混合,得到混合后的粉状物;
J、通过步骤I混合后得到的粉状物,即为所述的复合浆果组合物的粉剂;
K、通过步骤I混合后得到的粉状物,装胶囊即成胶囊剂;
L、通过步骤I混合后得到的粉状物,压片即成片剂;
M、通过步骤I混合后得到的粉状物加水蒸煮提取后,即得口服液。
如上所述的浆果组合物包含如下重量份的浆果:
红树莓 30%~35%
黑莓 20%~25%
桑葚 20%~25%
黑加仑 10%~15%
枸杞子 3%~8%
在步骤I中浆果籽粉与各果实冻干果粉按如下重量份混合:
浆果籽粉 30%~45%
黑树莓冻干果粉 20%~30%
石榴冻干果粉 10%~15%
蓝莓冻干果粉 10%~15%
枳椇果实冻干果粉 5%~15%
按照以上方法取各比例浆果可制成包含粉剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液等口服制剂;或加入药物辅料制成包含粉剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液等常用口服制剂。
如以其中制作的片剂为例,包含步骤I得到的筛分后的粉状物及其他成分,各成分重量份如下:
粉状物 12%~17%
麦芽糊精 35%~40%
淀粉 30%~35%
木糖醇 5%~8%
碳酸钙 3%~5%
微晶纤维素 3%~5%
维生素C 2%~3%
该片剂通过将各物质按比例混合后造粒,经100目筛子筛分后烘干压片制得。
具体实施方式
实施例一,将红树莓、黑莓、桑葚、黑加仑、枸杞子按重量份分别为30%、25%、22%、13%、10%的比例混合,经低温冷冻后投入到发酵罐中,在发酵罐中逐步升温至17℃,发酵结束将残糖含量控制在低于4g/L,将发酵后的液体与皮渣通过过滤分离,得到含有果子籽料的皮渣,对皮渣进行压榨,进一步滤除汁液,再对压榨后的皮渣进行烘干三小时,烘干温度为100℃,烘干后的皮渣进行自然晾晒,晾晒后破碎,并对破碎后的皮渣进行第二次烘干,烘干时间为一小时,烘干温度为100℃,将二次烘干后的皮渣进行粉碎,并过200目筛,得到浆果籽粉料。
将黑树莓、石榴、蓝莓、枳椇果实冻干后分别粉碎并过200目筛,得到黑树莓冻干粉、石榴冻干粉、蓝莓冻干粉、枳椇果实冻干粉。
将上述浆果籽粉料、黑树莓冻干粉、石榴冻干粉、蓝莓冻干粉、枳椇果实冻干粉按重量份分别为35%、25%、12%、13%、15%进行混合,得到复合浆果组合物粉料。
将以上得到的浆果籽粉料、复合的浆果组合物及复合的浆果组合物与维生素配伍作为一种预防性抗氧化剂,观察其对急性放射性损伤的大鼠的抗氧化效果,并将维生素C和维生素E联合应用作为药物对照组。
实验的材料及方法:
1、动物及分组:清洁级、健康成年雄性大鼠60只,体质量180g~220g,于光照明暗12小时交替、自由饮水进食、室内温度21℃~25℃、湿度适宜的环境中适应性饲养。一周后按随机数字法将实验动物分为6组,分别为空白对照组、单纯照射组、维生素联合应用组、浆果籽料组、复合浆果组合物组及浆果组合物维生素配伍组。
2、实验材料:制得的浆果籽粉料、复合浆果组合物粉料、复合浆果组合物粉料与维生素C按6:1混合得到的复合粉料(以下简称复合维生素粉料)、维生素C及维生素E;SOD试剂盒及GSH-PX试剂盒;鼠外周血淋巴细胞分离液。
3、主要实验仪器:VARIAN21EX直线加速器、722E型可见分光光度计、Sunrise光吸收酶标仪。
4、动物处理:实验动物适应性喂养一周后,空白对照组、单纯照射组不做任何处理,维生素联合应用组用维生素E(30mg/kg)和维生素C(50mg/kg)混合灌胃、浆果籽料组用制得的浆果籽粉料(2.5g/kg)灌胃、复合浆果组合物组用制得的复合浆果组合物粉料(2.5g/kg)灌胃、浆果组合物维生素配伍组用制得的复合维生素粉料(2.5g/kg)灌胃,以上维生素和各粉料皆用生理盐水溶解至2ml,连续灌胃7天,自用饮水和进食。
5、动物模型的建立:第7天灌胃结束后1小时,将所有各组大鼠进行X射线全身一次性照射,总剂量为8Gy,吸收剂量率400cGy/min,源皮距100cm,照射野为80cm×80cm,建立急性放射性损伤大鼠模型。
6、血样采集:辐射后进食,24小时后10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血5ml,加入到肝素钠抗凝管中,混匀,部分送检测进行血细胞计数,部分全血用作谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力测定,部分离心后获取血浆测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。
7、SOD、MDA、GSH-PX指标和血细胞计数的测定:血浆SOD活力采用WST-1法测定,酶标仪波长为450nm,血浆MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定,测定波长532nm,全血GSH-PX酶活力采用比色法波长412nm测定,WBC和PLT检测采用阻抗法进行计数,最后数据取各大鼠的平均值。
结果:大鼠纳入实验的情况:单纯照射组3只大鼠在辐射后24小时内死亡,腹部解剖后发现肠腔扩张、胀气和黏膜充血,考虑死亡原因为放疗并发症放射性肠炎。
表1、各组大鼠SOD、MDA、GSH-PX检测结果:
组别 | 只数 | SOD(U/ml) | MDA(nmol/mi) | GSH-PX(酶活力单位) |
空白对照组 | 10 | 304.94 | 4.83 | 459.92 |
单纯照射组 | 7 | 261.84 | 6.16 | 371.19 |
维生素联合应用组 | 10 | 277.50 | 5.08 | 457.83 |
浆果籽料组 | 10 | 277.83 | 5.17 | 457.46 |
复合浆果组合物组 | 10 | 283.51 | 5.01 | 401.84 |
浆果组合物维生素配伍组 | 10 | 300.05 | 4.95 | 384.78 |
表2、各种大鼠白细胞、血小板的检测结果:
组别 | 只数 | WBC(×109/L) | PLT(×109/L) |
空白对照组 | 10 | 5.65 | 737.00 |
单纯照射组 | 7 | 2.39 | 535.78 |
维生素联合应用组 | 10 | 3.68 | 649.81 |
浆果籽料组 | 10 | 3.79 | 641.81 |
复合浆果组合物组 | 10 | 4.45 | 675.44 |
浆果组合物维生素配伍组 | 10 | 5.05 | 714.15 |
实施例二、将红树莓、黑莓、桑葚、黑加仑、枸杞子按重量份分别为33%、23%、25%、10%、9%的比例混合,经低温冷冻后投入到发酵罐中,在发酵罐中逐步升温至17℃,发酵结束将残糖含量控制在低于4g/L,将发酵后的液体与皮渣通过过滤分离,得到含有果子籽料的皮渣,对皮渣进行压榨,进一步滤除汁液,再对压榨后的皮渣进行烘干三小时,烘干温度为100℃,烘干后的皮渣进行自然晾晒,晾晒后破碎,并对破碎后的皮渣进行第二次烘干,烘干时间为一小时,烘干温度为100℃,将二次烘干后的皮渣进行粉碎,并过200目筛,得到浆果籽粉料。
将黑树莓、石榴、蓝莓、枳椇果实冻干后分别粉碎并过200目筛,得到黑树莓冻干粉、石榴冻干粉、蓝莓冻干粉、枳椇果实冻干粉。
将上述浆果籽粉料、黑树莓冻干粉、石榴冻干粉、蓝莓冻干粉、枳椇果实冻干粉按重量份分别为45%、20%、15%、10%、10%进行混合,得到复合浆果组合物粉料。
将以上得到的浆果籽粉料、复合的浆果组合物及复合的浆果组合物与维生素配伍作为一种预防性抗氧化剂,观察其对急性放射性损伤的大鼠的抗氧化效果,并将维生素C和维生素E联合应用作为药物对照组。
实验的材料及方法:
1、动物及分组:清洁级、健康成年雄性大鼠60只,体质量180g~220g,于光照明暗12小时交替、自由饮水进食、室内温度21℃~25℃、湿度适宜的环境中适应性饲养。一周后按随机数字法将实验动物分为6组,分别为空白对照组、单纯照射组、维生素联合应用组、浆果籽料组、复合浆果组合物组及浆果组合物维生素配伍组。
2、实验材料:制得的浆果籽粉料、复合浆果组合物粉料、复合浆果组合物粉料与维生素C按7:1混合得到的复合粉料(以下简称复合维生素粉料)、维生素C及维生素E;SOD试剂盒及GSH-PX试剂盒;鼠外周血淋巴细胞分离液。
3、主要实验仪器:VARIAN21EX直线加速器、722E型可见分光光度计、Sunrise光吸收酶标仪。
4、动物处理:实验动物适应性喂养一周后,空白对照组、单纯照射组不做任何处理,维生素联合应用组用维生素E(30mg/kg)和维生素C(50mg/kg)混合灌胃、浆果籽料组用制得的浆果籽粉料(2.5g/kg)灌胃、复合浆果组合物组用制得的复合浆果组合物粉料(2.5g/kg)灌胃、浆果组合物维生素配伍组用制得的复合维生素粉料(2.5g/kg)灌胃,以上维生素和各粉料皆用生理盐水溶解至2ml,连续灌胃7天,自用饮水和进食。
5、动物模型的建立:第7天灌胃结束后1小时,将所有各组大鼠进行X射线全身一次性照射,总剂量为8Gy,吸收剂量率400cGy/min,源皮距100cm,照射野为80cm×80cm,建立急性放射性损伤大鼠模型。
6、血样采集:辐射后进食,24小时后10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血5ml,加入到肝素钠抗凝管中,混匀,部分送检测进行血细胞计数,部分全血用作谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力测定,部分离心后获取血浆测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。
7、SOD、MDA、GSH-PX指标和血细胞计数的测定:血浆SOD活力采用WST-1法测定,酶标仪波长为450nm,血浆MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定,测定波长532nm,全血GSH-PX酶活力采用比色法波长412nm测定,WBC和PLT检测采用阻抗法进行计数,最后数据取各大鼠的平均值。
结果:大鼠纳入实验的情况:单纯照射组2只大鼠在辐射后24小时内死亡,腹部解剖后发现肠腔扩张、胀气和黏膜充血,考虑死亡原因为放疗并发症放射性肠炎。
表1、各组大鼠SOD、MDA、GSH-PX检测结果:
组别 | 只数 | SOD(U/ml) | MDA(nmol/mi) | GSH-PX(酶活力单位) |
空白对照组 | 10 | 305.14 | 4.87 | 460.03 |
单纯照射组 | 8 | 258.35 | 6.03 | 369.87 |
维生素联合应用组 | 10 | 278.45 | 5.14 | 457.63 |
浆果籽料组 | 10 | 277.57 | 5.07 | 456.47 |
复合浆果组合物组 | 10 | 283.49 | 5.10 | 410.58 |
浆果组合物维生素配伍组 | 10 | 289.89 | 5.01 | 400.34 |
表2、各种大鼠白细胞、血小板的检测结果:
组别 | 只数 | WBC(×109/L) | PLT(×109/L) |
空白对照组 | 10 | 5.59 | 737.57 |
单纯照射组 | 8 | 2.41 | 534.58 |
维生素联合应用组 | 10 | 3.72 | 647.56 |
浆果籽料组 | 10 | 3.69 | 645.75 |
复合浆果组合物组 | 10 | 4.58 | 675.11 |
浆果组合物维生素配伍组 | 10 | 4.87 | 685.23 |
实施例三,将红树莓、黑莓、桑葚、黑加仑、枸杞子按重量份分别为35%、21%、24%、15%、5%的比例混合,经低温冷冻后投入到发酵罐中,在发酵罐中逐步升温至17℃,发酵结束将残糖含量控制在低于4g/L,将发酵后的液体与皮渣通过过滤分离,得到含有果子籽料的皮渣,对皮渣进行压榨,进一步滤除汁液,再对压榨后的皮渣进行烘干三小时,烘干温度为100℃,烘干后的皮渣进行自然晾晒,晾晒后破碎,并对破碎后的皮渣进行第二次烘干,烘干时间为一小时,烘干温度为100℃,将二次烘干后的皮渣进行粉碎,并过200目筛,得到浆果籽粉料。
将黑树莓、石榴、蓝莓、枳椇果实冻干后分别粉碎并过200目筛,得到黑树莓冻干粉、石榴冻干粉、蓝莓冻干粉、枳椇果实冻干粉。
将上述浆果籽粉料、黑树莓冻干粉、石榴冻干粉、蓝莓冻干粉、枳椇果实冻干粉按重量份分别为30%、30%、15%、15%、10%进行混合,得到复合浆果组合物粉料。
将以上得到的浆果籽粉料、复合的浆果组合物及复合的浆果组合物与维生素配伍作为一种预防性抗氧化剂,观察其对急性放射性损伤的大鼠的抗氧化效果,并将维生素C和维生素E联合应用作为药物对照组。
实验的材料及方法:
1、动物及分组:清洁级、健康成年雄性大鼠60只,体质量180g~220g,于光照明暗12小时交替、自由饮水进食、室内温度21℃~25℃、湿度适宜的环境中适应性饲养。一周后按随机数字法将实验动物分为6组,分别为空白对照组、单纯照射组、维生素联合应用组、浆果籽料组、复合浆果组合物组及浆果组合物维生素配伍组。
2、实验材料:制得的浆果籽粉料、复合浆果组合物粉料、复合浆果组合物粉料与维生素C按5:1混合得到的复合粉料(以下简称复合维生素粉料)、维生素C及维生素E;SOD试剂盒及GSH-PX试剂盒;鼠外周血淋巴细胞分离液。
3、主要实验仪器:VARIAN21EX直线加速器、722E型可见分光光度计、Sunrise光吸收酶标仪。
4、动物处理:实验动物适应性喂养一周后,空白对照组、单纯照射组不做任何处理,维生素联合应用组用维生素E(30mg/kg)和维生素C(50mg/kg)混合灌胃、浆果籽料组用制得的浆果籽粉料(2.5g/kg)灌胃、复合浆果组合物组用制得的复合浆果组合物粉料(2.5g/kg)灌胃、浆果组合物维生素配伍组用制得的复合维生素粉料(2.5g/kg)灌胃,以上维生素和各粉料皆用生理盐水溶解至2ml,连续灌胃7天,自用饮水和进食。
5、动物模型的建立:第7天灌胃结束后1小时,将所有各组大鼠进行X射线全身一次性照射,总剂量为8Gy,吸收剂量率400cGy/min,源皮距100cm,照射野为80cm×80cm,建立急性放射性损伤大鼠模型。
6、血样采集:辐射后进食,24小时后10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血5ml,加入到肝素钠抗凝管中,混匀,部分送检测进行血细胞计数,部分全血用作谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力测定,部分离心后获取血浆测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。
7、SOD、MDA、GSH-PX指标和血细胞计数的测定:血浆SOD活力采用WST-1法测定,酶标仪波长为450nm,血浆MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定,测定波长532nm,全血GSH-PX酶活力采用比色法波长412nm测定,WBC和PLT检测采用阻抗法进行计数,最后数据取各大鼠的平均值。
结果:大鼠纳入实验的情况:单纯照射组2只大鼠在辐射后24小时内死亡,腹部解剖后发现肠腔扩张、胀气和黏膜充血,考虑死亡原因为放疗并发症放射性肠炎。
表1、各组大鼠SOD、MDA、GSH-PX检测结果:
组别 | 只数 | SOD(U/ml) | MDA(nmol/mi) | GSH-PX(酶活力单位) |
空白对照组 | 10 | 307.03 | 4.79 | 462.47 |
单纯照射组 | 8 | 262.54 | 6.17 | 373.46 |
维生素联合应用组 | 10 | 278.12 | 5.04 | 458.13 |
浆果籽料组 | 10 | 277.11 | 5.21 | 459.45 |
复合浆果组合物组 | 10 | 289.11 | 4.99 | 411.56 |
浆果组合物维生素配伍组 | 10 | 290.45 | 4.96 | 400.56 |
表2、各种大鼠白细胞、血小板的检测结果:
组别 | 只数 | WBC(×109/L) | PLT(×109/L) |
空白对照组 | 10 | 5.65 | 736.78 |
单纯照射组 | 8 | 2.42 | 530.45 |
维生素联合应用组 | 10 | 3.58 | 647.81 |
浆果籽料组 | 10 | 3.78 | 640.35 |
复合浆果组合物组 | 10 | 3.99 | 673.58 |
浆果组合物维生素配伍组 | 10 | 4.48 | 698.52 |
实施例四,将红树莓、黑莓、桑葚、黑加仑、枸杞子按重量份分别为32%、22%、25%、15%、6%的比例混合,经低温冷冻后投入到发酵罐中,在发酵罐中逐步升温至17℃,发酵结束将残糖含量控制在低于4g/L,将发酵后的液体与皮渣通过过滤分离,得到含有果子籽料的皮渣,对皮渣进行压榨,进一步滤除汁液,再对压榨后的皮渣进行烘干三小时,烘干温度为100℃,烘干后的皮渣进行自然晾晒,晾晒后破碎,并对破碎后的皮渣进行第二次烘干,烘干时间为一小时,烘干温度为100℃,将二次烘干后的皮渣进行粉碎,并过200目筛,得到浆果籽粉料。
将黑树莓、石榴、蓝莓、枳椇果实冻干后分别粉碎并过200目筛,得到黑树莓冻干粉、石榴冻干粉、蓝莓冻干粉、枳椇果实冻干粉。
将上述浆果籽粉料、黑树莓冻干粉、石榴冻干粉、蓝莓冻干粉、枳椇果实冻干粉按重量份分别为42%、21%、14%、12%、11%进行混合,得到复合浆果组合物粉料。
将以上得到的浆果籽粉料、复合的浆果组合物及复合的浆果组合物与维生素配伍作为一种预防性抗氧化剂,观察其对急性放射性损伤的大鼠的抗氧化效果,并将维生素C和维生素E联合应用作为药物对照组。
实验的材料及方法:
1、动物及分组:清洁级、健康成年雄性大鼠60只,体质量180g~220g,于光照明暗12小时交替、自由饮水进食、室内温度21℃~25℃、湿度适宜的环境中适应性饲养。一周后按随机数字法将实验动物分为6组,分别为空白对照组、单纯照射组、维生素联合应用组、浆果籽料组、复合浆果组合物组及浆果组合物维生素配伍组。
2、实验材料:制得的浆果籽粉料、复合浆果组合物粉料、复合浆果组合物粉料与维生素C按8:1混合得到的复合粉料(以下简称复合维生素粉料)、维生素C及维生素E;SOD试剂盒及GSH-PX试剂盒;鼠外周血淋巴细胞分离液。
3、主要实验仪器:VARIAN21EX直线加速器、722E型可见分光光度计、Sunrise光吸收酶标仪。
4、动物处理:实验动物适应性喂养一周后,空白对照组、单纯照射组不做任何处理,维生素联合应用组用维生素E(30mg/kg)和维生素C(50mg/kg)混合灌胃、浆果籽料组用制得的浆果籽粉料(2.5g/kg)灌胃、复合浆果组合物组用制得的复合浆果组合物粉料(2.5g/kg)灌胃、浆果组合物维生素配伍组用制得的复合维生素粉料(2.5g/kg)灌胃,以上维生素和各粉料皆用生理盐水溶解至2ml,连续灌胃7天,自用饮水和进食。
5、动物模型的建立:第7天灌胃结束后1小时,将所有各组大鼠进行X射线全身一次性照射,总剂量为8Gy,吸收剂量率400cGy/min,源皮距100cm,照射野为80cm×80cm,建立急性放射性损伤大鼠模型。
6、血样采集:辐射后进食,24小时后10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血5ml,加入到肝素钠抗凝管中,混匀,部分送检测进行血细胞计数,部分全血用作谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力测定,部分离心后获取血浆测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。
7、SOD、MDA、GSH-PX指标和血细胞计数的测定:血浆SOD活力采用WST-1法测定,酶标仪波长为450nm,血浆MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定,测定波长532nm,全血GSH-PX酶活力采用比色法波长412nm测定,WBC和PLT检测采用阻抗法进行计数,最后数据取各大鼠的平均值。
结果:大鼠纳入实验的情况:单纯照射组2只大鼠在辐射后24小时内死亡,腹部解剖后发现肠腔扩张、胀气和黏膜充血,考虑死亡原因为放疗并发症放射性肠炎。
表1、各组大鼠SOD、MDA、GSH-PX检测结果:
组别 | 只数 | SOD(U/ml) | MDA(nmol/mi) | GSH-PX(酶活力单位) |
空白对照组 | 10 | 306.41 | 4.81 | 459.78 |
单纯照射组 | 8 | 261.11 | 6.04 | 370.35 |
维生素联合应用组 | 10 | 276.85 | 5.11 | 455.84 |
浆果籽料组 | 10 | 277.83 | 5.14 | 455.47 |
复合浆果组合物组 | 10 | 283.20 | 5.09 | 411.04 |
浆果组合物维生素配伍组 | 10 | 294.13 | 5.02 | 400.74 |
表2、各种大鼠白细胞、血小板的检测结果:
组别 | 只数 | WBC(×109/L) | PLT(×109/L) |
空白对照组 | 10 | 5.65 | 737.00 |
单纯照射组 | 8 | 2.39 | 535.78 |
维生素联合应用组 | 10 | 3.68 | 649.81 |
浆果籽料组 | 10 | 3.79 | 641.81 |
复合浆果组合物组 | 10 | 4.05 | 672.85 |
浆果组合物维生素配伍组 | 10 | 4.45 | 700.35 |
由以上实施例可见浆果籽粉料的抗辐射效果与维生素C及维生素E效果相当,浆果籽粉料与浆果复合得到的复合浆果组合物粉料及复合浆果组合物与维生素C配伍的抗辐射效果依次更优,尤其是复合浆果组合物与维生素C按6:1配伍时效果最佳,可以将浆果组合物按如下比例与其他组分混合、造粒后粉碎经100目筛子筛分后烘干压片制得一种抗急性放射性损伤的复合浆果组合物片剂,比例如下:
粉状物 12%
麦芽糊精 40%
淀粉 30%
木糖醇 8%
碳酸钙 4%
微晶纤维素 4%
维生素C 2%。