CN107389814A - 一种rp‑hplc‑dad快速分析沙棘主要黄酮苷元的方法 - Google Patents

一种rp‑hplc‑dad快速分析沙棘主要黄酮苷元的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107389814A
CN107389814A CN201710560508.0A CN201710560508A CN107389814A CN 107389814 A CN107389814 A CN 107389814A CN 201710560508 A CN201710560508 A CN 201710560508A CN 107389814 A CN107389814 A CN 107389814A
Authority
CN
China
Prior art keywords
buckthorn
sea
methanol
detection method
dad
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710560508.0A
Other languages
English (en)
Inventor
惠人杰
高越颖
冯静
曾帅
叶扬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201710560508.0A priority Critical patent/CN107389814A/zh
Publication of CN107389814A publication Critical patent/CN107389814A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及分析化学技术领域,公开了一种运用反相高效液相色谱二极管阵列检测快速测定沙棘中儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚和异鼠李素成分含量的方法。该方法将沙棘黄酮主成分标准品或提取物以甲醇稀释,以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相,采用甲醇‑水(酸性)为流动相并进行等度洗脱,在各黄酮吸收波长下记录色谱图。本方法采用十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相,以甲醇‑水(酸性)为流动相,可以定量测定沙棘黄酮提取物中几乎全部黄酮苷元成分,各成分基本实现基线分离,可以有效实现对沙棘黄酮提取物的精确质控。本发明方法专属性强,灵敏度高,准确性好。

Description

一种RP-HPLC-DAD快速分析沙棘主要黄酮苷元的方法
技术领域
本发明涉及中药生产质量检测技术领域,具体涉及沙棘中6种主要黄酮苷元的含量测定方法及其在提取分析中的应用。
背景技术
沙棘为胡颓子科酸刺属的灌木或小乔木,别名醋柳、黑刺、酸刺、其察日嘎纳(蒙名)、达普(藏名)、吉汗(维吾尔名)。沙棘主要分布在亚洲和欧洲,沙棘的各个组织,特别是浆果,在中国西藏、蒙古和中东地区被用于传统药品。1977年,沙棘被列入了《中华人民共和国药典》,之后在中国药典中均有收录。
黄酮类化合物是沙棘的主要活性成分之一,沙棘黄酮已经被证实具有抗氧化活性、改善高血脂、预防血栓形成、抗炎、保护细胞、治疗糖尿病等作用。
目前经报道的主要沙棘黄酮主要成分有槲皮素、山奈酚、异鼠李素等,种类较少,难以覆盖沙棘黄酮的全部主要成分。近年来,沙棘作为西部防风治沙的主要经济作物,得到了广泛种植,原料丰富。深入开发沙棘的经济价值,尤其是其药用价值,则需要对沙棘的药用成分进行更为精准有效的提取和分析。目前沙棘黄酮的提取分析方法多以总黄酮的简单分析为主,但缺乏相应提取物中分类黄酮苷元定量分析研究,无法实现对提取成分的精确质控和深入药理药效分析。
本发明针对以上问题,以RP-HPLC-DAD为检测手段,开发快速有效的黄酮分析方法,从而克服了总黄酮分析的局限性,对沙棘黄酮提取物可实现精确质控。且方法操作简便、快速、适用性广,特别适用工业化的质控分析。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能应用于企业质控检测的具有高度准确性和普适性的多种黄酮快速测定方法。
本发明提供的技术方案包括如下步骤:
(1)通过盐酸水解黄酮提取物样品,获得可检测游离黄酮苷元
(2)步骤(1)获得的样品经RP-HPLC-DAD检测,获得黄酮苷元的精确含量
本发明通过酸性水解,将黄酮苷水解后,释放独立的游离苷元,依靠RP-HPLC-DAD对游离苷元进行准确定量,获得黄酮提取物的精确质控数据。
一种黄酮苷水解方法:采用盐酸作为水解作用剂,甲醇为反应溶剂;
反应条件为:以甲醇溶解黄酮提取物,加入盐酸溶液,80-95℃下加热回流0.5-3h;
优选地,黄酮提取物甲醇溶液、25%盐酸以1:1的体积比混合,90℃下,进行水解反应, 2h。
由于所述的水解方法可将黄酮苷稳定水解,获取游离黄酮苷元,且水解后,黄酮苷元稳定,适宜后续分析检测。
一种黄酮苷元的RP-HPLC-DAD快速定量方法:将黄酮提取物水解后,选用C18色谱柱,以甲醇:水(含磷酸)为流动相,等度洗脱,测定。
洗脱条件为:甲醇:水(含磷酸)=60:40,流速0.5-2mL/min,柱温30-50℃;
优选地,色谱柱选用SHIMADZU C18柱(150mm×2.1mm,5μm);磷酸浓度0.4%,流动相以甲醇:水(体积比)为60:40,流速1.0mL/min,柱温40℃,进样量20μL。
一种沙棘黄酮的提取方法:沙棘中黄酮的提取方法:取10g粉碎后的沙棘叶和沙棘籽,烘干,加8倍量的石油醚(沸程60~90℃)70℃下搅拌回流2h,抽滤。脱脂后的沙棘叶渣和沙棘籽渣用乙醇提取数次,合并续滤液,冻干,得沙棘叶和沙棘籽黄酮粗提物。
上述的沙棘叶中黄酮的提取方法,乙醇浓度为70%,提取时间为2h,提取次数为3次,料液比为1:16。
上述的沙棘籽中黄酮的提取方法,乙醇浓度为50%,提取时间为1.5h,提取次数为3次,料液比为1:16。
上述的沙棘中黄酮的提取方法,所述黄酮中含有儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚和异鼠李素。
本发明提供的6种黄酮苷元的含量测定方法,具有以下有益效果:
1)工艺合理,儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚和异鼠李素6种成分基本实现基线分离。
2)本发明提供一种沙棘的质量评价方法,完成了沙棘的含量测定,其中含量测定是采用 HPLC法测定儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚和异鼠李素的含量。经方法学验证,该方法精密度、稳定性、重现性及加样回收率均良好,该方法满足含量测定的技术要求。
3)本发明方法快速、灵敏度高,准确度好。
附图说明
图1为本发明检测黄酮混合标准品的分析谱图
图2为本发明检测沙棘叶黄酮提取物的分析谱图
图3为本发明检测沙棘籽黄酮提取物的分析谱图
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案,下面将进一步通过实例进行表述。
本发明所使用的试剂均从市场上购得。
实施例1:沙棘黄酮含量测定及方法学验证
仪器:岛津LC-20AT高效液相色谱仪
色谱柱:SHIMADZU C18柱(150mm×2.1mm,5μm);
流动相:A:甲醇,B:水(含0.4%磷酸),A:B=60:40(v/v);
流速:1.0mL/min;
柱温:40℃;
检测波长:儿茶素的最大吸收波长为208nm,芦丁的最大吸收波长为257nm,杨梅素的最大吸收波长为373nm,槲皮素的最大吸收波长为371nm,山奈酚的最大吸收波长为367nm,异鼠李素的最大吸收波长为371nm;
进样量:20μL;
稀释液:甲醇;
1.1供试品溶液制备
精密称取沙棘叶和沙棘籽黄酮粗提物粉末50mg,加入20mL甲醇,混合均匀后加入20 mL 25%的HCl溶液,氮气保护,90℃下加热回流1h,待溶液冷却至室温后,过滤,将续滤液转移至50mL容量瓶中,摇匀,用甲醇定容至刻度,即得供试品溶液。
1.2对照品溶液的制备
分别精密称取儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚、异鼠李素对照品各5.0mg,混合均匀后,用甲醇逐级稀释,并以HCl调至样品pH值,得系列浓度的混合对照品溶液。
1.3色谱条件
色谱柱为SHIMADZU C18柱(150mm×2.1mm,5μm);流动相A:甲醇,B:水(含 0.4%磷酸),A:B=60:40(v/v),采用等度洗脱;流速为1.0mL/min;柱温40℃;检测波长 208nm;进样量为20μL。
1.4精密度考察
取沙棘叶及沙棘籽粉末各10g,精密称定,提取黄酮粗品,按1.1项下方法制备供试品溶液,重复进样6次,记录各成分的峰面积,并计算含量。测得结果表明,各成分含量的检测结果RSD值均小于1.77%,表明方法精密度良好。
1.5稳定性试验
取同一供试品溶液,每隔2h进样,进行色谱分析,结果表明,各成分含量检测结果RSD 值小于1.51%,显示方法稳定。
1.6重复性试验
取同批沙棘叶和沙棘籽黄酮粗品各6份,按1.1项下方法制备供试品溶液,重复进样,检测各成分含量。结果表明,6种黄酮的含量结果RSD值小于1.83%。
1.7工作曲线绘制
将系列浓度的混合对照品溶液按照1.3项下进行色谱检测,并建立相应工作曲线。所得各线性方程分别为:儿茶素:y=128086x+101987,R2=0.9996;芦丁:y=13553x+27405, R2=0.9996;杨梅素:y=32713x-2733.8,R2=0.9999;槲皮素:y=37503x-9514.1,R2=0.9994;山奈酚:y=38039x-5124.4,R2=0.9997;异鼠李素:y=38376x-3240.2,R2=0.9998;各黄酮标准曲线的相关系数(r)均高于0.9995,线性关系良好。
1.8样品含量测定
取6批沙棘叶和沙棘籽样品各2份,按照1.1项中方法制得样品溶液,每份溶液按照1.3 项下色谱条件进样3次,结果见表1。
表1沙棘叶与沙棘籽样品测定结果(‰)
Table 1 Seabuckthorn leaves and seabuckthorn seed sampledetermination results(‰)
最后应说明的是:对于本技术领域的技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行改进和修饰,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,也应落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (7)

1.一种运用RP-DAD-HPLC快速测定沙棘主要黄酮苷元含量的检测方法,其特征在于:
(1)检测周期10min
(2)同时测定6种沙棘主要黄酮苷元。
(3)所述的黄酮苷元为儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚和异鼠李素。
(4)采用RP-DAD-HPLC法对6种主要黄酮苷元的含量进行测定,使用分波段扫描,对不同黄酮苷元进行单独测量。
2.根据权利要求1所述的6种主要黄酮苷元的含量测定方法,其特征在于,在RP-DAD-HPLC色谱仪上进行等度洗脱,色谱柱为十八烷基键合硅胶色谱柱,采用甲醇-水-酸为流动相,检测波长为200~400nm,柱温为35-45℃。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法,其特征在于,所述色谱柱为SHIMADZU C18柱(150mm×2.1mm,5μm)。
4.根据权利要求1或2所述的检测方法,其特征在于,所述流动相中甲醇、水(酸的体积浓度为0.1%-0.8%)的体积比为60:40,所述流速为1.0mL/min。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,酸的体积百分浓度为0.4%。
6.根据权利要求1或2所述的检测方法,其特征在于,检测波长为:儿茶素208nm,芦丁257nm,杨梅素373nm,槲皮素371nm,山奈酚367nm,异鼠李素371nm。
7.根据权利要求1或2所述的检测方法,其特征在于,所述柱温为40℃。
CN201710560508.0A 2017-07-11 2017-07-11 一种rp‑hplc‑dad快速分析沙棘主要黄酮苷元的方法 Pending CN107389814A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710560508.0A CN107389814A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 一种rp‑hplc‑dad快速分析沙棘主要黄酮苷元的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710560508.0A CN107389814A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 一种rp‑hplc‑dad快速分析沙棘主要黄酮苷元的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107389814A true CN107389814A (zh) 2017-11-24

Family

ID=60339160

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710560508.0A Pending CN107389814A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 一种rp‑hplc‑dad快速分析沙棘主要黄酮苷元的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107389814A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111505183A (zh) * 2020-05-22 2020-08-07 杭州海关技术中心 一种lc-ms/ms测定山银花和/或金银花中多种黄酮苷元含量的方法
CN111505180A (zh) * 2020-05-09 2020-08-07 杭州海关技术中心 一种葛根中多种黄酮苷元含量同时测定的方法
CN112526047A (zh) * 2020-10-23 2021-03-19 中国海关科学技术研究中心 基于超高效液相色谱-高分辨质谱技术定量检测沙棘中黄酮类化合物的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563027A (zh) * 2004-04-01 2005-01-12 华东师范大学 沙棘籽渣中同时分级提取沙棘黄酮和沙棘多糖的方法
CN101671371A (zh) * 2009-10-15 2010-03-17 江南大学 一种洋葱皮中黄酮类化合物的提取方法
CN102759589A (zh) * 2012-07-18 2012-10-31 石家庄藏诺生物股份有限公司 一种归丹沙棘胶囊中二苯乙烯苷与丹酚酸b的同时定量方法
CN103852552A (zh) * 2014-03-12 2014-06-11 江南大学 一种同时测定酒花中七种黄酮类物质的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563027A (zh) * 2004-04-01 2005-01-12 华东师范大学 沙棘籽渣中同时分级提取沙棘黄酮和沙棘多糖的方法
CN101671371A (zh) * 2009-10-15 2010-03-17 江南大学 一种洋葱皮中黄酮类化合物的提取方法
CN102759589A (zh) * 2012-07-18 2012-10-31 石家庄藏诺生物股份有限公司 一种归丹沙棘胶囊中二苯乙烯苷与丹酚酸b的同时定量方法
CN103852552A (zh) * 2014-03-12 2014-06-11 江南大学 一种同时测定酒花中七种黄酮类物质的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
UPENDRA K. ET AL.: "Microwave-Assisted Efficient Extraction of Different Parts of Hippophae rhamnoides for the Comparative Evaluation of Antioxidant Activity and Quantification of Its Phenolic Constituents by Reverse-Phase High-Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC)", 《J. AGRIC. FOOD CHEM.》 *
姚志敏 等: "均匀设计优选提取条件测定沙棘粉中儿茶素含量", 《福建分析测试》 *
李岩 等: "HPLC法同时测定白刺果实中8种黄酮成分的含量", 《食品工业》 *
沈勇 等: "高效液相色谱法测定山核桃叶中5个黄酮苷元含量", 《药物分析杂志》 *
陈燕玲 等: "沙棘叶黄酮提取工艺的单因素研究及其品类变化", 《广州化工》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111505180A (zh) * 2020-05-09 2020-08-07 杭州海关技术中心 一种葛根中多种黄酮苷元含量同时测定的方法
CN111505180B (zh) * 2020-05-09 2022-06-21 杭州海关技术中心 一种葛根中多种黄酮苷元含量同时测定的方法
CN111505183A (zh) * 2020-05-22 2020-08-07 杭州海关技术中心 一种lc-ms/ms测定山银花和/或金银花中多种黄酮苷元含量的方法
CN111505183B (zh) * 2020-05-22 2022-07-12 杭州海关技术中心 一种lc-ms/ms测定山银花和/或金银花中多种黄酮苷元含量的方法
CN112526047A (zh) * 2020-10-23 2021-03-19 中国海关科学技术研究中心 基于超高效液相色谱-高分辨质谱技术定量检测沙棘中黄酮类化合物的方法
CN112526047B (zh) * 2020-10-23 2023-06-27 中国海关科学技术研究中心 基于超高效液相色谱-高分辨质谱技术定量检测沙棘中黄酮类化合物的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Olszewska Separation of quercetin, sexangularetin, kaempferol and isorhamnetin for simultaneous HPLC determination of flavonoid aglycones in inflorescences, leaves and fruits of three Sorbus species
Han et al. Chemical fingerprinting of Gardenia jasminoides Ellis by HPLC–DAD–ESI-MS combined with chemometrics methods
CN102749348B (zh) 一种鉴别药用植物中活性成分组的方法
Deng et al. Quantitative analysis of flavonoids and phenolic acid in Coreopsis tinctoria Nutt. by capillary zone electrophoresis
CN107389814A (zh) 一种rp‑hplc‑dad快速分析沙棘主要黄酮苷元的方法
CN106124639A (zh) 杜仲药材的多成分含量测定方法
CN104280493A (zh) 板蓝根药材的检测方法
CN106370763B (zh) 检测葛根及葛根提取物和含葛根制剂成分的uplc方法
Yue-ling et al. HPLC determination of quercetin in three plant drugs from genus sedum and conjecture of the best harvest time
CN104458941A (zh) 一种基于uhplc技术的补骨脂多成分qams检测方法及其应用
CN102890126B (zh) 一种同时测定杜仲中多种活性成分含量的方法
CN106950309B (zh) 不同量比的当归和红花药对的质量控制方法
CN104634911B (zh) 一种喘可治注射液4种黄酮类有效成分检测方法
Liang et al. Application of microscopy technique and high performance liquid chromatography for quality assessment of Polygonum multiflorum Thunb.(Heshouwu)
CN106093264A (zh) 一种草莓叶黄素循环组分的测定方法
CN114814057B (zh) 一种非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法及应用
CN106404955B (zh) 一种测定高粱红色素中槲皮素-7-葡萄糖苷含量的方法
Wang et al. Rapid profiling and target analysis of principal components in Fuling Decoctions by UFLC-DAD-ESI-MS
CN114994220A (zh) 一种七清败毒颗粒的指纹图谱的构建方法和其成分含量的测定方法及应用
CN104597168B (zh) 桑枝精制饮片含量测定方法
CN107468750A (zh) 一种山豆根的炮制工艺
CN107102087A (zh) 一种离子色谱检测黄连中多种有机酸含量的方法
CN105301130A (zh) 一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法
Xu et al. Quantitative Determination of 15 Active Components in Lepidium meyenii with UHPLC‐PDA and GC‐MS
CN106153761A (zh) 同时检测无籽刺梨果实中3种黄酮类成分的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20171124