CN107296896A - 一种治疗胶质瘤的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗胶质瘤的药物组合物，该药物组合物由有效成分和医学上可接受的辅料组成，其特征在于，所述的有效成分由重量百分比为45％‑65％石菖蒲提取的石菖蒲挥发油和重量百分比为35％‑55％山慈菇提取的山慈菇提取物组成。本发明所述的药物组合物能够明显抑制C6诱导的胶质瘤大鼠瘤体生长、降低胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达，抑制胶质瘤U251、恶性胶质瘤U‑87MG细胞的生长，促进肿瘤细胞的凋亡，将细胞的生长抑制于2倍体期，可以减少细胞的迁移和侵袭。

Description

一种治疗胶质瘤的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医用配制品，具体涉及含有来自菖蒲属植物的未确定结构的药物制剂。

背景技术

胶质瘤是难治性颅内肿瘤，由于肿瘤本身的高度増殖及对放化疗的耐受性、高复发率，且由于化疗药物难以透过血脑屏障和肿瘤的多耐药性，使得临床疗效欠佳，毒副作用较大。近年来虽有新药上市，但临床新药价格昂贵且治疗效果并不理想。

中医认为脑瘤多因邪毒侵袭，髓海受损，痰瘀凝聚，闭阻脉络，痰瘀化热，灼伤津液，引动内风，上犯清窍。临证复方研究多根据病情选用祛瘀通窍、平肝潜阳等方法。

公开号为103230519A的专利申请公开了一种治疗萎缩性胃炎伴肠上皮化生及不典型增生的中药，，该中药由石菖蒲、藿香、……和山慈姑13味中药制成，具有解毒活血之功，能消除胃黏膜炎症，有效地改善胃黏膜血流情况，使萎缩和肠化的腺体恢复正常，从而逆转胃癌前病变。但其所用中药材多达13味，不仅取材困难，而且质量也很难控制。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种治疗胶质瘤的药物组合物，该药物具有药简力专，效果显著的优点。

本发明解决上述问题的技术方案如下：

一种治疗胶质瘤的药物组合物，该药物组合物由有效成分和医学上可接受的辅料组成，其特征在于，所述的有效成分由重量百分比为45％-65％石菖蒲提取的石菖蒲挥发油和重量百分比为35％-55％山慈菇提取的山慈菇提取物组成。

上述方案中，所述的石菖蒲与山慈菇的最佳配比是，重量百分比为55％的石菖蒲提取的石菖蒲挥发油，重量百分比为45％的山慈菇提取的山慈菇提取物。

上述方案中，所述的石菖蒲为天南星科植物石菖蒲(Acorus tatarinowiiSchott.)的干燥根茎，所述的山慈菇为兰科植物杜鹃兰Cremastra appendiculata(D.Don)Makino干燥假鳞茎。

本发明所述药物组合物的制备方法由以下步骤组成：

1)取石菖蒲用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％～20％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25～50℃，恒温搅拌15～30分钟后，将石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30～60分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得石菖蒲挥发油包合物；

2)取山慈菇洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入各种剂型所需的辅料制成相应的剂型。

本发明所述的药物组合物可制成各种常规的口服固体剂型，如颗粒剂、丸剂、片剂或胶囊剂或滴丸。

本发明的药物组合物选用石菖蒲与山慈菇相伍，二者相得益彰，可抑制胶质瘤U251、恶性胶质瘤U-87MG细胞的生长，促进肿瘤细胞的凋亡，将细胞的生长抑制于2倍体期，可以减少细胞的迁移和侵袭。

本发明具备以下优点：

本发明由石菖蒲挥发油和山慈菇提取物组成，不仅药味少，有利于质量控制，而且治疗胶质瘤效果也十分显著。

为了便于公众更好地理解本发明，下面通过药效实验和具体实施方式来进一步说明本发明的有益效果。

一、动物实验

1.1实验动物

动物来源及饲养：SD大鼠，由广东省实验动物中心提供，雌雄各半，180-220g，自由饮食、光/暗周期为12hr/12hr(光照时间为6am-6pm)，噪音背景为40±10db、温度为25±3℃，饲养在SPF级动物房。

动物分组：75只SD大鼠，经过造模成功后，分为正常组、模型组、石菖蒲挥发油组、山慈菇提取物组、石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组，共计5组，每组15只。

1.2受试药物

石菖蒲挥发油组为生药量石菖蒲550g提取的挥发油，山慈菇提取物组为山慈菇450g提取的水提物，石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组为实施例1的软胶囊，分别加入乙醇配制成浓度相当于每ml含生药1.2g的试药试剂，造模后灌胃给药，各组每次灌胃剂量按生药量计算为9.7g/kg体重，每日2次，上、下午各一次，持续2周。

1.3SD胶质瘤大鼠造模

C6胶质瘤细胞系购自中科院上海细胞库，取对数生长期C6细胞，胰蛋白酶消化后离心去上清，而后用无血清培养基离心洗涤2次，计数细胞数，调整细胞浓度，将细胞悬浮于PBS中，置于37℃温水浴锅中备用。

SD大鼠用10％水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉生效后将大鼠固定于脑立体定位仪上，剪去头顶部、眼裂至外耳道之间的毛发，常规消毒铺单后于冠状缝后1mm、中线右3mm钻孔，进针约5mm，后退1mm注入10ul细胞(含C6细胞约10⁶个)。以骨蜡封闭骨窗，逐层缝合头颅。

造模14天取脑组织，HE染色，光镜下确定肿瘤组织形成为造模成功。

1.4实验方法

1.4.1行为学观察

观察各组实验动物生活状态及生存周期，每日固定时间观察大鼠活动性、饮食情况、体重变化，记录生存时间。

1.4.2测量肿瘤体积

按照实验分组，瘤内药物干预治疗后，给药后14天取脑组织，用游标卡尺测量肿瘤的最长径a和最短径b，根据公式V＝1/6π(ab²)计算肿瘤体积，计算肿瘤体积的平均值。

1.4.3免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)

胶质纤维酸性蛋白(GFAP)是胶质瘤区别于其他恶性肿瘤的重要特异性生物学标志物，取脑组织后，切片，烤片后脱蜡，微波热修复，一抗4℃过夜，二抗37℃30min，梯度脱水，二甲苯20min；树脂胶封片，镜检。免疫组化显色后，在400倍的放大倍率下选取个清晰视野，由图像分析系统进行灰度值积分测定。

1.5统计学处理

全部数据采用SPSS 13.0统计学软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差表示。

1.6结果

1.6.1大鼠生存状态观察

接种肿瘤细胞后第2天观察，头部手术切口均无感染，大鼠活动、进食均无明显变化。第1周大鼠出现进食、饮水、活动减少症状。第2周大鼠出现皮毛失去光泽，精神萎靡，接触反应迟钝，原地打转，左侧肢体偏瘫较严重症状。

1.6.2大鼠体重变化及死亡情况

正常培养大鼠体重稳定增长，阴性对照组及肿瘤组在手术后均有轻微体重下降之后很快回升。阴性对照组体重呈上升趋势，最后与正常对照组接近。造模初期，肿瘤组体重也呈上升趋势，但上升速率低于对照组，之后出现平台期，后期体重急剧下降，最终死亡。第1只死亡时间为13天，最后只死亡为22天，平均生存期16.8天(参见图1)。

1.6.3治疗前后肿瘤体积变化情况

给药后14天取脑组织，模型组肿瘤组织与周围分界不清，用药组肿瘤组织与周围分界相对清晰，比较肿瘤体积，用药后肿瘤体积有不同程度的下降，组合药物组肿瘤体积下降最明显。

表1治疗前后各组大鼠肿瘤体积变化(mm³)

注：模型对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

1.6.4各组大鼠胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的变化

给药后14天取脑组织，免疫组织化学法检测GFAP，胶质瘤组大鼠GFAP较正常组升高，用药后各组GFAP较模型组下降，组合药物组GFAP下降最明显。

表2各组GFAP的变化(％)

注：模型对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

1.7小结

以上结果显示，石菖蒲挥发油、山慈菇提取物、石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组合均可降低胶质瘤大鼠瘤体的大小，降低GFAP的表达，石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组合优于单用石菖蒲挥发油及单用山慈菇提取物。

二、细胞实验

2.1实验细胞

胶质瘤U251、恶性胶质瘤U-87MG细胞，购自中科院上海细胞库，实验分组为空白对照组、石菖蒲挥发油组、山慈菇提取物组、石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组。

2.2受试药物

取石菖蒲挥发油及山慈菇提取物，重量百分比为55％的石菖蒲提取的石菖蒲挥发油，重量百分比为45％的山慈菇提取的山慈菇提取物，制备母液浓度为1mg/mL，参考预实验结果取不同倍数稀释至培养基测量其对胶质瘤U251细胞、恶性胶质母细胞瘤U-87MG细胞的药效，石菖蒲挥发油组150μg/mL，山慈菇提取物组150μg/mL，石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组150μg/mL。

2.3实验方法

2.3.1石菖蒲挥发油、山慈菇提取物及组合用药对胶质瘤U251、U-87MG细胞毒性的影响

取对数生长期的细胞制备细胞悬液，根据每100μL含细胞数为5×10³个接种到96孔板中，37℃培养箱中培养1-2天，按照分组用药作用48h，弃去上清液每孔加入10ul CCK8，培养2h后分别测定波长450nmOD值，制作生长曲线。

2.3.2石菖蒲、山慈菇提取物及组合用药对胶质瘤U251、U-87MG细胞凋亡的影响

取对数生长期细胞按1×10⁶cells/mL以0.5mL接种24孔板，用药48h后胰酶消化并收集全部细胞到流式管，各管内加入5μL Annexin V-FITC和5μL PI，室温避光15min；上机前加入400μL 1×Binding Buffer，1h内进行检测。

2.3.3石菖蒲、山慈菇提取物及组合用药对胶质瘤U251、U-87MG细胞周期的影响

取对数生长期细胞按1×10⁶cells/mL以1mL接种24孔板，用药48h后胰酶消化并收集全部细胞到流式管，各管加入0.5mL DNA staining solution，涡旋振荡5-10s混匀，室温避光30m并上机检测。

2.3.4石菖蒲、山慈菇提取物及联合用药对胶质瘤U251、U-87MG细胞迁移的影响

取对数生长期含不同浓度药物的细胞按1×10⁶cells/mL以70μL接种24孔板(Dish中间的Insert)，培养24h，用镊子移除Insert即可产生500μm宽度的划痕，细胞面积占整体面积的75％，与24小时后拍照记录对比。根据收集图片数据分析实验结果。

2.3.5石菖蒲、山慈菇提取物及联合用药对胶质瘤U251、U-87MG细胞侵袭实验

Matrigel基质胶100μL的体积铺于Transwell小室37℃放置1h，下室中加入10％FBS培养基600μL/孔，在上室准确加入细胞200μL/孔，置于5％CO₂培养箱于37℃培养48hHE染色后计数。

2.4统计学处理

全部数据采用SPSS 13.0统计学软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差表示。

2.5结果

2.5.1各组细胞毒性的实验结果

正常胶质瘤U251、U-87MG细胞呈长梭形，用药后细胞形态不规则，部分细胞损伤呈圆形，数量减少，胞体略小，突起缩回，联合用药对细胞毒性影响最大(P<0.05)。

表3各组对胶质瘤U251、U-87MG细胞毒性的影响

注：模型对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

2.5.2细胞凋亡的影响

正常胶质瘤U251、U-87MG细胞存在部分细胞碎片，凋亡较少，用药后凋亡细胞数目不同程度的增加，联合用药对细胞凋亡影响最大(P<0.05)。

表4各组对胶质瘤U251、U-87MG细胞凋亡的影响

注：模型对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

2.5.3各组细胞周期的变化

与正常胶质瘤U251、U-87MG细胞对比，用药后可将肿瘤细胞阻滞于G0/G1期而降低S+G2/M期比率，其中联合用药组作用最明显(P<0.05)。

表5各组对胶质瘤U251、U-87MG细胞周期影响

^*注：模型对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

2.5.4各组细胞迁移的变化

正常胶质瘤U251、U-87MG细胞迁移速度及面积较大，与正常胶质瘤U251、U-87MG细胞对比，用药后可抑制肿瘤细胞向中间部分迁移，其中联合用药组作用最明显(P<0.05)。

表6各组对胶质瘤U251、U-87MG细胞迁移的影响

注：模型对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

2.5.5各组细胞侵袭的变化

正常胶质瘤U251、U-87MG细胞会被下室高糖培养基诱导向下层侵袭，与正常胶质瘤U251、U-87MG细胞对比，用药后侵袭细胞减少，其中联合用药组作用最明显(P<0.05)。

表7各组对胶质瘤U251、U-87MG细胞侵袭的影响

注：模型对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001(下同)

2.6小结

上述实验表明，石菖蒲挥发油、山慈菇提取物、石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组合均可抑制胶质瘤U251、U-87MG细胞的生长，促进肿瘤细胞的凋亡，将细胞的生长抑制于2倍体期，可以减少细胞的迁移和侵袭，且随着药物浓度增加，呈量效关系，石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组合优于单用石菖蒲挥发油及单用山慈菇提取物。

三、对比实验

石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组的药物是下述实施例1的软胶囊，对照组药物是公开号为CN103230519A的专利申请的实施例1的处方。

本实验对比观察石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组合与公开号为CN1408384A的专利申请的方案对胶质瘤U251、U-87MG细胞毒性的影响。

3.1实验细胞

胶质瘤U251、恶性胶质瘤U-87MG细胞均购自中科院上海细胞库，实验分组为空白对照组、石菖蒲挥发油组、山慈菇提物组、石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组。

3.2受试药物

重量百分比为55％的石菖蒲提取的石菖蒲挥发油，重量百分比为45％的山慈菇提取的山慈菇提取物，制备母液浓度为1mg/mL，参考预实验结果取不同倍数稀释至培养基测量其对胶质瘤U251细胞、恶性胶质母细胞瘤U-87MG细胞的药效，石菖蒲挥发油组150μg/mL，山慈菇提取物组150μg/mL，石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组150μg/mL。

将CN1408384A的专利申请的实施例1的药物，第一煎加水400mL，浸泡1h，煎30min，取汁200mL；第二煎加水400mL，煎20min，取汁200mL，按照细胞使用量＝人用剂量/4000mL(血液总量)计算，冷冻干燥后用与挥发油组相同的培养基溶解并作用于胶质瘤U251、U-87MG细胞。

3.3实验方法

取对数生长期的细胞制备细胞悬液，根据每100μL含细胞数为5×10³个接种到96孔板中，37℃培养箱中培养1-2天，按照分组用药作用48h，弃去上清液每孔加入10ul CCK8，培养2h后分别测定波长450nmOD值，制作生长曲线。

3.4统计学处理

全部数据采用SPSS 13.0统计学软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差表示。

3.5结果

正常胶质瘤U251、U-87MG细胞呈长梭形，用药后细胞形态不规则，部分细胞损伤呈圆形，数量减少，胞体略小，突起缩回，与CN103230519A中药对比，石菖蒲挥发油+山慈菇提取物用药对细胞毒性影响较大(P<0.05)。

表8各组对胶质瘤U251、U-87MG细胞毒性的对比

注：空白对照组比^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

3.6小结

本发明中石菖蒲挥发油+山慈菇提取物组合对胶质瘤U251、U-87MG细胞的细胞毒性作用优于对照组。

附图说明

图1为大鼠生存时间与体重变化关系的曲线图。

具体实施方式

实施例1

(1)处方：石菖蒲550g、山慈菇450g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲550g用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇450g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入植物油4g、淀粉25g、明胶10g、水10g和甘油2g，用旋转压囊机压制成软胶囊。

实施例2

(1)处方：石菖蒲450g、山慈菇550g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲450g用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇550g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入淀粉35g、糖粉18g和适量的65％乙醇制软材，过筛网，干燥得到颗粒，过筛整粒后，加入空胶囊中，共制备成硬胶囊。

实施例3

(1)处方：石菖蒲500g、山慈菇500g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇500g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入蜂蜜50g、米糊40g、面糊40g和适量65％的乙醇制备软材，然后压制成丸剂。

实施例4

(1)处方：石菖蒲600g、山慈菇400g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲600g用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇400g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入PVP 25g、CMC-Na 20g、L-HPC8g、CMS-Na 6g和适量的65％乙醇制备软材，过筛网，60℃干燥得到颗粒，过筛整粒后，采用包装设备将其包装成颗粒剂。

实施例5

(1)处方：石菖蒲650g、山慈菇350g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇500g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入淀粉30g、糊精10g、蔗糖8g和适量的65％乙醇混合均匀以后，制粒，干燥得到颗粒，过筛整粒后加入微粉硅胶0.5g混合均匀，压制成普通片剂。

实施例6

(1)处方：石菖蒲550g、山慈菇450g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲550g用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇450g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入硫酸钙36g、碳酸氢钙20g和适量的65％乙醇混合均匀以后，制粒，干燥得到颗粒，过筛整粒后加入滑石粉、硬脂酸镁混合均匀，压制成普通片剂。

实施例7

(1)处方：石菖蒲550g、山慈菇450g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲550g用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇450g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油及山慈菇提取物混合加入PEG6000的熔融液中，搅拌混合均匀，直至乙醇完全挥发，然后继续静置保温30-40min，待气泡除尽，然后将混合物混匀熔融液转入滴丸机的贮液筒内，在保温80-85℃的条件下，控制滴速，待冷凝完全，倾去冷凝液，收集滴丸，用滤纸除去滴丸上的冷凝液，然后干燥得到滴丸。

实施例8

(1)处方：石菖蒲550g、山慈菇450g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲550用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇450g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入黄酒50g、米醋40g、水蜜20g和适量65％的乙醇，制备软材，然后压制成丸剂。

实施例9

(1)处方：石菖蒲550g、山慈菇450g。

(2)制备方法：

1)取石菖蒲550g用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25℃，恒温搅拌15分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得菖蒲重挥发油包合物；

2)取山慈菇450g，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入糖粉20g、糊精16g、乳糖14g、甘露醇1.5g、木糖醇1.4g和适量的65％乙醇制软材，过筛网，60℃干燥得到颗粒，过筛整粒后，采用包装设备将其包装成颗粒剂，共制备成颗粒剂。

Claims (4)

1.一种治疗胶质瘤的药物组合物，该药物组合物由有效成分和医学上可接受的辅料组成，其特征在于，所述的有效成分由重量百分比为45％-65％石菖蒲提取的石菖蒲挥发油和重量百分比为35％-55％山慈菇提取的山慈菇提取物组成。

2.根据权利要求1所述的一种治疗胶质瘤的药物组合物，其特征在于所述的有效成分由重量百分比为55％石菖蒲提取的石菖蒲挥发油和重量百分比为45％山慈菇提取的山慈菇提取物组成。

3.根据权利要求1或2所述的一种治疗胶质瘤的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂或滴丸。

4.根据权利要求3所述的一种治疗胶质瘤的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物由以下方法制备获得：

(1)取石菖蒲用二氧化碳超临界萃取法或水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油；按石菖蒲重量的10％～20％称取β-环糊精，置容器中，加入纯化水，沸水浴加热，使其溶解，放置至25～50℃，恒温搅拌15～30分钟后，石菖蒲挥发油缓慢注入β-环糊精中，继续恒温搅拌30～60分钟后取出，冷却至25℃，快速抽滤，先用少量水冲洗后，再用乙醚洗涤，干燥，即得石菖蒲挥发油包合物；

(2)取山慈菇，洗净晾晒，加入8倍量水，水煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，干燥，粉碎即得山慈菇提取物；

(3)将石菖蒲挥发油包合物和山慈菇提取物合并，加入各种剂型所需的辅料制成相应的剂型。