CN101069734A - 一种治疗血管性痴呆症的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种治疗血管性痴呆症的中药组合物及其制备方法。本发明是依据传统中医药理论，通过对血管性痴呆症的病因病机的深入探讨，针对本病的临床表现，提出淤血阻络、痰浊闭窍是本病证的基本病机，应以活血通络为主、辅以豁痰开窍，使淤血得行，痰浊得化，达开窍醒神之目的。该中药组合物，以姜黄为君药，臣以三七、石菖蒲，以水蛭、茯苓、人参、白芍、制何首乌、豨莶草、黄连为佐药，以远志为使药，诸药合用，活血祛淤，开窍豁痰，醒神益智，使淤血得行，痰浊得化，达开窍醒神之目的。

Description

一种治疗血管性痴呆症的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及到一种用于治疗血管性痴呆症的中药组合物及其制备方法，属于中草药制剂技术领域。临床上主要用于治疗血管性痴呆，证属瘀血阻络、痰浊闭窍型。症见智能减退、头痛，口唇爪甲青紫，头重如裹，纳呆腹胀，神情默默，面色晦暗，肌肤干燥，肢体困重，舌质紫暗或有瘀斑瘀点，苔腻，脉滑或沉迟、涩。
背景技术
血管性痴呆(Vascular Dementiva，VD)是由各种脑血管病所导致的痴呆综合征。属于中医“呆病”、“文痴”、“健忘”等范畴。在我国，由于脑血管病的多发，使得VD成为高发疾病之一。大多数的资料表明，VD的发病率为70万人/年，日本报道的患病率较欧美高。在中国，对VD患病率的多少报道不一，综合11个城市和农村的普查，60岁以上的老年人中，VD的患病率为342/10万人口，其在城市和农村的患病率分别为478/10万和140/10万，城市的患病率明显高于农村。据流行病学调查表明[i]，65岁以上人群VD发病率约为4％～6％，80岁以上则为15％～20％。由于其发病率、致残率、病死率均较高，故已成为威胁高龄人群生命的重要疾病之一，并给社会和家庭带来沉重负担。因此，探索VD早期防治措施已成为现代科学研究及临床实践的重要课题。
迄今为止，对VD的核心症状即智能低下尚没有较好的解决办法。西医对血管性痴呆患者的治疗以改善大脑血液循环、促进大脑代谢、增强神经传递功能为主要途径。总体而言，这些药物对轻度痴呆患者能在一定程度上改善痴呆症状或延缓痴呆进展，但收效并不明显。中医在VD的治疗中显示了良好的前景，其疗效与目前的西药相比具有一定优势。因此，探讨中医药治疗方法及其药物对血管性痴呆影响的机制，将为血管性痴呆的有效防治提供必要的理论依据。
中医药对血管性痴呆的防治有悠久的历史。中药黄蒲清脑胶囊正是依据中医药理论，通过对血管性痴呆病机的深入探讨，针对血管性痴呆临床表现，提出血管性痴呆的瘀血阻络、痰浊闭窍的病机特点，以活血通络，化痰开窍为治疗法则，结合多年临床用药经验研制而成，旨在为血管性痴呆患者提供疗效确切、服用安全的中药新制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种疗效显著的治疗血管性痴呆症的中药组合物及其制备方法。
血管性痴呆属现代医学之病名，中医文献将它称之为“白痴”、“愚痴”、“呆病”、“神呆”、“痴呆”、“武痴”等，它包括现代医学的老年性痴呆、脑血管性痴呆和混合性痴呆。
历代医家对本病的病因病机多有论述，认识到本病病位在脑，并认为肾虚、肝郁、痰浊、瘀血、血虚为导致痴呆的原因，而且还认识到本病和中风有关系。近年来，现代医家结合各自的经验体会和现代研究成果，进一步完善了本病的病因病机内容。VD病位在脑，涉及肝肾心脾诸脏，尤与肾中精气的盛衰密切相关；多因年高正损、情志内伤等因素引起脏腑阴阳气血失调，以致痰瘀浊毒阻络蒙窍，造成脑络闭塞、神机失用而发病；本病病性为本虚标实，其本为精气亏虚，其标为痰瘀浊毒内阻。
综上所述，瘀血阻络、痰浊闭窍是本病证的基本病机。瘀血阻于脑络，蒙蔽神明则智能减退、神情默默。瘀血阻滞脉道，“不通则痛”，故头痛如刺，口唇爪甲青紫。血瘀不行，肌肤气血不充，失于濡养，所以见面色晦暗，肌肤干燥。痰浊上蒙清窍，清阳不展，故头重如裹，痰浊中阻，气机不利，则纳呆腹胀，脘闷不饥，痰浊阻滞于四肢，则肢体困重。舌质紫暗或有瘀斑瘀点，苔腻，脉滑或沉迟、涩。亦是血瘀痰浊闭阻脑窍所致。故本病证应以活血通络为主、辅以豁痰开窍，使瘀血得行，痰浊得化，达开窍醒神之目的。
该中药组合物，以姜黄为君药，臣以三七、石菖蒲，以水蛭、茯苓、人参、白芍、制何首乌、豨莶草、黄连为佐药，以远志为使药，诸药合用，活血祛瘀，开窍豁痰，醒神益智，使瘀血得行，痰浊得化，达开窍醒神之目的。
本处方有较好的临床基础，并经过了大量患者的临床观察初步证明了其疗效和安全性。目前运用于医药市场的治疗血管性痴呆的中药准字号药品很少，中药黄蒲清脑胶囊，正是依据中医药理论，结合多年临床用药经验而研制的，旨在为血管性痴呆患者提供疗效确切、服用安全的中药新制剂。故相信本产品如开发成功，投放市场，必将为血管性痴呆患者的健康做出重要贡献。
本发明药物是由如下重量份比例的原料药制成的：
姜黄300-450份    石菖蒲250-350份    三七100-150份    豨莶草200-300份
人参150-220份    制何首乌150-220份  水蛭100-150份    黄连150-220份
白芍200-300份    茯苓150-220份      远志250-350份
上述原料药的重量份比例优选：
姜黄375份        石菖蒲312.5份      三七125份    豨莶草250份
人参187.5份      制何首乌187.5份    水蛭125份    黄连187.5份
白芍250份        茯苓187.5份        远志312.5份
或：
姜黄300份        石菖蒲250份        三七125份    豨莶草300份
人参187.5份      制何首乌215份      水蛭100份    黄连220份
白芍200份        茯苓180份          远志350份
或：
姜黄450份        石菖蒲350份        三七100份    豨莶草300份
人参150份        制何首乌150份      水蛭150份    黄连180份
白芍300份        茯苓155份          远志250份
本发明药物可以按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，例如胶囊、片剂、丸剂、口服液等。
本发明药物可通过以下制备方法制成：
1)、取方中药材，分别选净，粗碎成5-10mm颗粒，按处方量称量。
2)、取姜黄，加8-12倍量70-90％乙醇，加热回流提取1-3次，第一次2-3小时，第二次1-2小时，提取液滤过，合并，减压回收乙醇后，适当浓缩成相对密度约为1.0-1.2(60℃热测)，备用。
3)、取三七、豨莶草、制何首乌、黄连，加8-10倍量50-70％乙醇，加热回流提取1-3次，每次2-3小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩成相对密度约为1.0-1.2(60℃热测)，备用。
4)、取石菖蒲，加8-12倍量水，浸泡30-60分钟后，提取挥发油4-8小时，挥发油另器收集，水提取液过滤，备用。
5)、取水蛭、白芍、茯苓、远志，加8-10倍量水，煎煮2-3次，每次1-2小时，提取液过滤，合并，加入石菖蒲提油后的水溶液，浓缩成相对密度为1.10-1.15(60℃热测)清膏，与姜黄、三七等提取液合并，混匀，放入真空干燥箱，在温度60-70℃，真空度0.04-0.06Mpa条件下减压干燥，干膏粉碎成100目粉，备用。
6)、取人参，粉碎成100目粉，备用。
7)、取5)和6)制备的粉末，加适量辅料，按常规制剂方法，制成胶囊剂。
或者
将5)、6)制备的细粉，按常规制剂方法制成片剂、丸剂；
或
将2)、3)、4)、5)中制备的提取物，加入6)中所得的颗粒细粉，按常规方法制成口服液。
具体实施方式
下面结合本发明药物胶囊剂、片剂、丸剂和口服液的制备的实例，说明本发明的具体实施方式。
实施例1：
姜黄375份      石菖蒲312.5份    三七125份    豨莶草250份
人参187.5份    制何首乌187.5份  水蛭125份    黄连187.5份
白芍250份      茯苓187.5份      远志312.5份
制备方法：
1)、取方中药材，分别选净，粗碎成5-10mm颗粒，按处方量称量。
2)、取姜黄，加10倍量80％乙醇，加热回流提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时，提取液滤过，合并，减压回收乙醇后，适当浓缩成相对密度约为1.0(60℃热测)，备用。
3)、取三七、豨莶草、制何首乌、黄连，加8倍量60％乙醇，加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩成相对密度约为1.0(60℃热测)，备用。
4)、取石菖蒲，加12倍量水，浸泡45分钟后，提取挥发油5小时，挥发油另器收集，出油率不得少于0.4％，水提取液过滤，备用。
5)、取水蛭、白芍、茯苓、远志，加8倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，提取液过滤，合并，加入石菖蒲提油后的水溶液，浓缩成相对密度为1.10-1.15(60℃热测)清膏，与姜黄、三七等提取液合并，混匀，放入真空干燥箱，在温度60-70℃，真空度0.04-0.06Mpa条件下减压干燥，干膏粉碎成100目粉，备用。
6)、取人参，粉碎成100目粉，备用。
7)、取5)和6)制备的粉末，加适量辅料，按常规制剂方法，制成胶囊剂。
实施例2：
姜黄300份      石菖蒲250份     三七125份    豨莶草300份
人参187.5份    制何首乌215份   水蛭100份    黄连220份
白芍200份      茯苓180份       远志350份
制备方法：同实施例1中1)、2)、3)、4)、5)、6)步骤并按常规方法制成片剂。
实施例3：
姜黄450份      石菖蒲350份     三七100份    豨莶草300份
人参150份      制何首乌150份   水蛭150份    黄连180份
白芍300份      茯苓155份       远志250份
制备方法：同实施例1中1)、2)、3)、4)、5)、6)步骤并按常规方法制成丸剂。
实施例4：
姜黄300份     石菖蒲350份      三七125份    豨莶草200份
人参220份     制何首乌220份    水蛭125份    黄连150份
白芍250份     茯苓220份        远志300份
制备方法：同实施例1中1)、2)、3)、4)、5)步骤，加入6)中所得的颗粒细粉，按常规方法制成口服液。
药理作用  本发明的药物其胶囊剂(商品名为黄蒲清脑胶囊)进行了下列动物试验以证明其疗效：
黄蒲清脑胶囊主要药效学试验
摘要：黄蒲清脑胶囊是河北天时医药技术开发有限公司开发的6类中药新药，功能：活血通络，豁痰开窍。用于治疗血管性痴呆，证属瘀血阻络、痰浊闭窍型。症见智能减退、头痛，口唇爪甲青紫，头重如裹，纳呆腹胀，神情默默，面色晦暗，肌肤干燥，肢体困重。为证明该药疗效，我们进行了药效学试验，主要药效学试验结果表明：黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)可明显提高双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠学习能力，提高血清及脑组织中SOD活力、降低MDA含量，增加脑皮层组织中的NE、DA含量；对肾上腺素加冰水引起的血瘀大鼠全血比粘度的升高有降低作用；可明显改善局灶性脑缺血大鼠的神经症状，缩小梗塞范围，减轻局部脑缺血所致脑组织损伤。黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)可明显改善脑缺血再灌注致小鼠记忆障碍，提高血清及脑组织中SOD、总NOS活力，降低MDA含量，抑制TChE活力；改善D-半乳糖致衰老小鼠的学习能力，提高血清及脑组织中SOD活力、降低MDA含量；可明显改善东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍；明显改善亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍；明显改善乙醇引起的记忆再现障碍；可延长小鼠断头后张口时间，对小鼠急性脑缺氧有一定的保护作用。研究结果为临床用药提供了必要的药理学依据。
一、对双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠的影响
试验目的：通过观察黄蒲清脑胶囊对双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠的影响，评价其治疗作用。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号041001；喜得镇(甲磺酸双氢麦角毒碱片)，天津华津制药厂、北京诺华制药有限公司合作生产，批号020632。
动物：SD大鼠(二级)，体重180--200g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
试剂：超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、丙二醛(MDA测)试盒，均为南京建成生物工程研究所产品；去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-TH)标准品均由中国生物药品制品检定所提供。
仪器：DTT-2避暗箱，中国医学科学院药研所制；970MC荧光分光光度计，上海分析仪器总厂。
试验方法：
参照赵宪林等双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠模型【1】。大鼠术前12小时禁食不禁水。用10％的水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定，颈前部去毛消毒后沿颈正中切开分离出双侧颈总动脉，双侧丝线结扎，术中大鼠肛温保持在36.5℃～37.5℃。假手术组10只大鼠仅行颈前切开，不结扎颈总动脉。选手术成功后大鼠75只随机分5组，每组15只，分别为模型对照组、黄蒲清脑胶囊小剂量组(0.28g/kg，折合生药1.71g/kg，相当于人临床用量的3.5倍)、  黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.56g/kg，折合生药3.42g/kg，相当于人临床用量的7倍)、黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.12g/kg，折合生药6.83g/kg，相当于人临床用量的14倍)及阳性药喜得镇组(1.2mg/kg，相当于人临床用量的14倍)。给药组大鼠每天灌胃给药1次，容量为1ml/100g体重，假手术组及模型对照组大鼠给予等容量蒸馏水，连续60天。各组大鼠分别于手术后30天、45天、60天进行避暗试验，测试其学习能力。测试时先将大鼠头部背对洞口放入明室，大鼠进入暗室受到电击为错误反应，记录5min内大鼠进入暗室内的潜伏期和错误次数。第60天测试完毕后，将大鼠断头取血，分离血清，3000rpm，4℃离心10min，取血清按说明书方法检测MDA、SOD含量；各组动物快速断头取脑，在冰盘上立即分离大脑皮层组织，液氮冷冻，置-80℃冰箱中备用。定量称取大脑皮层组织制成1％匀浆，取上清液按说明书方法检测脑组织MDA、SOD等含量，组织蛋白含量测定按Lowry方法进行。取大脑皮层组织加冷酸化正丁醇5ml匀浆，漩涡振荡，3000r/min离心5min。取上清液2.0ml，加正庚烷4.0ml，0.1mol/L HCL5.0ml，漩涡振荡，3000r/min离心5min。其水相测NE、DA、5-TH。
统计学处理：数据用
Figure A20061007884300081
表示，统计学处理采用spss11.0 for window统计软件。
试验结果：
1.对双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠一般状况的影响：
在整个试验期内，假手术组10只大鼠，活动及精神状态良好，毛色光滑；模型对照组大鼠多出现眼睑下垂，活动减少，精神状态较差，术后24小时死亡4只，试验过程中死亡3只，共有7只死亡；其余各给药组大鼠一般状况均较模型对照组大鼠有明显改善，术后24小时各有5只死亡，试验过程中均无一死亡。
2.对双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠学习能力的影响：
结果见表1、表2，从结果可见，模型对照组大鼠在术后30天、45天、60天不同时间点潜伏期明显短于假手术组(P＜0.01)，而5min错误次数明显高于假手术组(P＜0.01)，说明大鼠持久性前脑灌注不足已致学习记忆障碍。黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)组大鼠在术后30天、45天、60天不同时间点学习记忆潜伏期明显长于模型对照组(P＜0.01)，而5min错误次数少于模型对照组(P＜0.01)，表明其对慢性脑灌注不足大鼠学习记忆下降有改善作用。
表1  对血管痴呆大鼠学习能力的影响(避暗法)
Figure A20061007884300091
组别     剂量(g/kg)   动物数(只)                       5分钟内错误数(次)
  30天   45天     60天
假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组     ----0.280.561.121.2mg     10810101010   1.3±0.82**10.4±2.566.3±3.12**4.9±2.23**5.2±1.75**4.3±2.63**   1.1±0.99**11.2±2.318.3±3.02*3.9±2.77**4.8±1.32**4.1±2.60**     1.0±0.94**10.6±2.007.6±3.13*4.5±2.92**4.5±1.43**4.2±1.75**
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
表2  对血管痴呆大鼠学习能力的影响(避暗法)
Figure A20061007884300092
  组别 剂量(g/kg)   动物数(只)                  潜伏期(s)
  30天 45天 60天
  假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组   ----0.280.561.121.2mg     10810101010   193.9±30.26**68.1±23.74127.5±25.47**122.8±30.41**132.5±39.82**119.2±14.63** 188.7±29.97**76.2±28.26115.2±14.62**114.7±20.83**128.7±22.74**127.4±21.82** 189.3±22.57**72.6±26.12124.5±29.68**121.7±26.05**134.7±35.85**124.9±28.16**
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
3.对双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠血清SOD、MDA的影响
结果见表3，从结果可见，模型对照组大鼠血清MDA含量明显明显较假手术组升高(P＜0.01)，SOD活力明显较假手术组明显降低(P＜0.01)；黄蒲清脑胶囊(0.56g/kg)组大鼠MDA含量低于模型对照组，黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)组大鼠血清中SOD活力均明显高于模型对照组(P＜0.01)。
表3  双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆血清SOD、MDA的影响
Figure A20061007884300093
组别     剂量(g/kg)     动物数(只)     SOD(NU/ml)     MDA(nmol/ml)
    假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊     ----0.280.561.12     108101010     254.3±60.72**131.1±38.58235.3±54.47**238.4±64.50**235.8±53.87**     5.49±1.47**10.83±2.498.90±1.658.41±2.05*9.18±1.53
    喜得镇组   1.2mg     10     229.0±48.04**   7.65±1.34**
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
4.对双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠脑组织SOD、MDA的影响
结果见表4，从结果可见，模型对照组大鼠脑组织SOD活力较假手术组明显降低(P＜0.01)；MDA含量较假手术组明显增高(P＜0.01)；黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)组大鼠脑组织SOD活力均明显较模型对照组提高(P＜0.05或P＜0.01)，MDA含量均较模型对照组降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表4  对双侧颈总动脉永久结扎致血管性痴呆大鼠脑组织SOD、MDA的影响
Figure A20061007884300101
组别     剂量(g/kg 动物数(只)   SOD(NU/mgprot) MDA(nmol/mgprot)
假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组     ----0.280.561.121.2mg     10810101010   18.8 7±2.74**10.96±4.0215.69±4.20*16.65±4.28**15.48±3.21**14.33±3.07* 3.88±0.71**6.61±1.294.21±0.93**4.39±1.28**4.15±1.54**4.61±0.80**
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
5.黄蒲清脑胶囊对双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠大脑皮层中神经递质的影响
结果见表5，从结果可见，模型对照组大鼠大脑皮层组织中NE、DA与假手术组相比明显降低(P＜0.01)；黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)组大鼠脑组织中的NE、DA含量均较模型对照组明显增高(P＜0.05或P＜0.01)，而5-TH虽有增高趋势，但无统计学意义(P＞0.05)。
表5  对双侧颈总动脉永久结扎大鼠脑神经递质的影响
Figure A20061007884300102
组别  剂量(g/kg) 动物数(只)   NE(ng/g湿重  5-HT(ng/g湿重) DA(ng/g湿重)
假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组  ----0.280.561.121.2mg  10810101010   272.3±64.64**152.9±44.66226.9±96.92243.4±80.27**231.7±68.6**254.9±72.00**  443.6±92.53**255.0±92.27272.6±89.88313.3±111.64298.2±96.68321.1±109.55 505.2±110.53**216.8±54.16378.6±100.69**393.3±101.5**427.0±91.51**422.0±74.17**
与模型对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；各组动物数同上。
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊对双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠的学习记忆能力障碍有一定的改善作用，可提高血清及脑组织SOD活力，降低MDA含量，增加大脑皮层组织中NE、DA的含量。
二、对脑缺血再灌注损伤致血管性痴呆小鼠的影响
试验目的：通过观察黄蒲清脑胶囊对脑缺血再灌注损伤性血管性痴呆小鼠的影响，评价其治疗作用。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号041001；喜得镇(甲磺酸双氢麦角毒碱片)，天津华津制药厂、北京诺华制药有限公司合作生产，批号020632。
动物：昆明种小鼠(二级)，体重25--28g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
试剂：超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、丙二醛(MDA)测试盒、一氧化氮合酶测试盒、乙酰胆碱脂酶(TChE)测试盒，均为南京建成生物工程研究所产品。
仪器：SMG-2程控水迷宫，中国医学科学院药研所制；TDL-5-A型离心机，上海安亭科学仪器厂；FA2004型电子天平，上海精科天平仪器厂；722型光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂。
试验方法
参照徐秋萍等制作脑缺血再灌注致小鼠血管性痴呆模型的方法【2】。选健康雄性小鼠，术前先进行Morris水迷宫试验训练，水迷宫含4个盲端，终点有一高出水面的安全区。训练分3天进行，条件控制在室温(22±2)℃，水温(25±1)℃。训练时先将小鼠置于台阶上10秒钟，使其了解此安全区的存在，然后放在台阶附近，让其自行爬梯2次，以熟悉逃生途径。第1天训练A点，第2天训练B点，第3天训练C点，每次训练时间均限定在3min，超时者用玻璃棒引导动物游到台阶按3min计。剔除灵活性过差的小鼠，选学会游迷宫的小鼠用于试验。术前12h将小鼠禁食，不禁水。用10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定在手术台上，常规消毒，颈部正中切口，分离出双侧颈总动脉(CCA)，在夹闭双侧CCA之前，从小鼠尾尖约1cm处断尾放血约0.3ml(为循环血量的30％)，随即用无创动脉夹夹闭双侧CCA，20min后，再通10min，再夹闭20min，再通后缝合伤口，放回笼中保温饲养。假手术组动物仅行颈前切开，不阻断CCA，不放血。术中小鼠肛温保持在36.5℃～37.5℃。选手术成功的小鼠50只，随机分为5组，每组10只。分别为模型对照组、黄蒲清脑胶囊低剂量组(0.36g/kg，折合生药2.20g/kg，相当于人临床用量的4.5倍)、黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.72g/kg，折合生药4.39g/kg，相当于人临床用量的9倍)、黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.44g/kg，折合生药8.78g/kg，相当于人临床用量的18倍)及阳性药喜得镇组(1.5mg/kg，相当于人临床用量的18倍)。给药组每天灌胃给药，容量为0.2ml/10g体重，假手术组及模型对照组小鼠每天给予等容量蒸馏水，每日一次，手术后7天、14天开始Morris水迷宫测试，记录到达终点的时间(到达时间)和进入盲端的次数(错误次数)。测试完毕后，断头取血，分离血清，3000rpm，4℃离心10min，取血清按说明书方法检测MDA、SOD等含量：各组动物快速断头取脑，在冰盘上立即分离大脑皮层组织，置-80℃冰箱中备用。定量称取大脑皮层组织制成1％匀浆，取上清液按说明书方法检测脑组织MDA含量和SOD、NOS、TChE活力，组织蛋白含量测定按Lowry方法进行。
统计学处理：数据用 表示，统计学处理采用spss11.0 for window统计软件。
试验结果
1.对脑缺血再灌注痴呆小鼠记忆障碍的影响
结果见表6、表7，从结果可见，模型对照组小鼠在术后第7天、第14天到达时间明显较假手术组延长(P＜0.01)，进入盲端的错误次数明显增加(P＜0.01)。黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠在术后第7天、第14天到达时间明显较模型对照组小鼠缩短(P＜0.01)，进入盲端的错误次数明显减少(P＜0.01)。
表6  对血管性痴呆小鼠记忆能力的影响(Morris水迷宫试验)
  组别     剂量(g/kg)     动物数(只)                    到达时间
    7天     14天
  假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组     --0.360.721.441.5mg     10910101010     76.1±53.01**156.0±31.63100.4±60.70*106.2±54.44*99.4±39.25**102.3±63.16*     68.4±37.87**147.6±34.0099.4±35.00**86.2±25.90**95.4±42.59**97.9±47.80**
与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
表7  对血管性痴呆小鼠记忆能力的影响(Morris水迷宫试验)
Figure A20061007884300123
    组别     剂量(g/kg)     动物数(只)                  错误次数
    7天     14天
    假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组     --0.360.721.441.5mg     10910101010     3.9±2.28**8.7±3.004.4±2.59**5.1±2.68*4.8±3.085.2±2.57*     2.2±1.48**6.8±3.703.0±3.02*2.9±3.38*2.4±2.67**2.5±3.10*
与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
2.对脑缺血再灌注痴呆小鼠血清SOD、MDA的影响
结果见表8，从结果可见，模型对照组小鼠MDA含量明显均较假手术组升高(P＜0.01)，血清SOD活力明显较假手术组明显降低(P＜0.01)；黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠MDA含量均明显低于模型对照组(P＜0.01)，血清SOD活力均明显较模型对照组提高(P＜0.05)。
表8  对血管性痴呆小鼠血清SOD、MDA的影响
Figure A20061007884300124
  组别     剂量(g/kg)     动物数(只)   SOD(NU/ml)   MDA(nmol/ml)
  假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊     --0.36     10910   361.1±69.39**217.2±79.01312.7±81.74*   4.66±0.95**9.51±2.015.96±1.85**
喜得镇组     0.721.441.5mg     101010  294.6±105.6333.0±98.57*309.3±69.77* 5.46±1.17**5.65±1.06**4.90±1.34**
与模型对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
3.对脑缺血再灌注痴呆小鼠脑组织SOD、MDA的影响
结果见表9，从结果可见，模型对照组小鼠脑组织SOD活力较假手术组明显降低(P＜0.01)；MDA含量较假手术组明显增高(P＜0.05)；黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠脑组织SOD活力均较模型对照组小鼠提高(P＜0.01)，MDA含量均较模型对照组降低(P＜0.01)。
表9  对血管性痴呆小鼠脑组织SOD、MDA的影响
Figure A20061007884300131
  组别   剂量(g/kg)     动物数(只) SOD(NU/mgprot) MDA(nmol/mgprot)
  假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组   --0.360.721.441.5mg     10910101010 20.45±7.10**8.31±5.4214.67±3.77**15.30±7.09**14.83±4.99**14.11±2.70** 4.78±1.06*8.63±2.385.38±1.47**5.84±1.32**5.43±1.24**5.96±1.19**
与模型对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
4.对脑缺血再灌注痴呆小鼠脑组织NOS、TChE活力的影响
结果见表10，从结果可见，模型对照组小鼠脑组织NOS活力较假手术组明显降低(P＜0.01)，TChE活力较假手术组明显升高(P＜0.01)；黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠脑组织NOS活力较模型对照组提高(P＜0.01)，TChE活力较模型对照组降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表10  对血管性痴呆小鼠脑组织NOS、TChE的影响
Figure A20061007884300132
组别     剂量(g/kg)   动物数(只) NOS(U/mgprot) TChE(U/mgprot)
假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组     --0.360.721.441.5mg     10910101010 6.44±1.41**3.34±0.965.68±1.74**6.46±2.40**5.29±1.59**5.14±1.87** 0.18±0.044**0.66±0.230.30±0.054**0.46±0.050*0.36±0.054**0.26±0.048**
与模型对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊对脑缺血再灌注痴呆小鼠的学习记忆能力障碍有一定的改善作用，可提高血清及脑组织SOD活力，提高脑组织NOS活力，抑制TChE的活力，降低血清及脑组织MDA含量。
三、对D-半乳糖致衰老小鼠的影响
试验目的：通过观察黄蒲清脑胶囊对D-半乳糖致衰老小鼠的影响，评价其作用。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号041001；哈伯因(石杉碱甲片0.05mg/片)，河南竹林众生制药股份有限公司豫中制药厂，批号050402。
动物：昆明种小鼠(二级)，体重25-28g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
试剂：超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、丙二醛(MDA测)试盒，均为南京建成生物工程研究所产品；D-半乳糖，上海试剂二厂产品。
仪器DT-200小鼠跳台自动测试箱，成都泰盟科技有限公司；TDL-5-A型离心机，上海安亭科学仪器厂；FA2004型电子天平，上海精科天平仪器厂；722型光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂。
试验方法：
将60只小鼠随机分成6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、黄蒲清脑胶囊低剂量组(0.36g/kg，折合生药2.20g/kg，相当于人临床用量的4.5倍)、黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.72g/kg，折合生药4.39g/kg，相当于人临床用量的9倍)、黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.44g/kg，折合生药8.78g/kg，相当于人临床用量的18倍)及阳性药哈伯因组(0.1mg/kg，相当于人临床用量的18倍)。给药组每天灌胃给药，容量为0.2ml/10g体重，正常对照组及模型对照组小鼠每天给予等容量蒸馏水，每日一次，同时颈背部Sc D-半乳糖120mg/kg，连续6周【3】。分别于实验的第2周、第4周、第6周进行跳台试验测试其学习能力，将小鼠放在跳台仪内的安全台上适应3min，然后接通电流，小鼠跳下跳台即遭到电击，为错误反应，其正确反应是受到电击后跳上橡皮台躲避电击。记录小鼠第1次跳下安全台的时间(潜伏期)和5min内错误次数。测试完毕后，将小鼠断头取血，分离血清，3000rpm，4℃离心10min，取血清按说明书方法检测MDA、SOD含量；各组动物快速断头取脑，在冰盘上立即分离大脑皮层组织，置-80℃冰箱中备用。定量称取大脑皮层组织制成1％匀浆，取上清液按说明书方法检测脑组织MDA、SOD含量，组织蛋白含量测定按Lowry方法进行。
统计学处理：数据用
Figure A20061007884300141
表示，统计学处理采用spss11.0for window统计软件。
试验结果：
1.对D-半乳糖致衰老小鼠学习能力的影响
结果见表11、表12，从结果可见，模型对照组小鼠在实验的第4周、第6周两个时间点潜伏期明显较正常对照组缩短(P＜0.01)，5min错误次数明显多于正常对照组(P＜0.01)，说明小鼠皮下注射D-半乳糖120mg/kg已致学习记忆障碍。黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠在实验的第4周、第6周两个时间点潜伏期明显较模型对照组小鼠延长(P＜0.05或P＜0.01)，5min错误次数明显少于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01)，表明其对小鼠学习记忆下降有改善作用。
表11  对D-半乳糖致衰老小鼠学习能力的影响(跳台法)(
Figure A20061007884300142
，n＝10)
组别     剂量(g/kg)     5分钟内错误数(次数)
    2周     4周   6周
正常对照组模型对照组黄蒲清脑胶囊哈伯因组     --0.360.721.440.1mg     2.3±2.004.2±2.153.0±1.563.5±2.463.5±1.513.6±2.17     2.0±1.76**5.9±2.283.3±2.31*3.8±1.14*2.9±1.79**2.7±1.89**   2.1±2.02**6.5±2.323.8±1.62**2.7±1.57**3.3±1.77**2.5±1.78**
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
表12  对D-半乳糖致衰老小鼠学习能力的影响(跳台法)(
Figure A20061007884300151
，n＝10)
  组别     剂量(g/kg)     潜伏期(s)
    2周   4周   6周
  正常对照组模型对照组黄蒲清脑胶囊哈伯因组     --0.360.721.440.1mg     168.4±104.34110.4±34.91190.1±52.54195.0±68.76184.4±45.59144.6±41.46   182.6±68.71**40.8±25.11110.0±60.07**121.1±59.48**116.3±42.32**107.4±28.91**   152.6±60.83**49.3±31.26113.1±51.31**122.4±43.57**111.9±24.46**131.0±47.52**
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
2.对D-半乳糖致衰老小鼠血清SOD、MDA含量的影响
结果见表13，从结果可见，模型对照组小鼠MDA含量明显较正常对照组升高(P＜0.01)，血清SOD活力较正常对照组明显降低(P＜0.01)；黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠MDA含量均明显低于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01)，血清SOD活力均高于模型对照组(P＜0.05)。
表13  对D-半乳糖致衰老小鼠血清SOD、MDA的影响(
Figure A20061007884300152
，n＝10)
组别     剂量(g/kg)   动物数(只) SOD(NU/ml)   MDA(nmol/ml)
    正常对照组模型对照组黄蒲清脑胶囊哈伯因组     --0.360.721.440.1mg     101010101010 363.7±95.15**181.7±70.92255.6±81.37*286.0±99.37*260.8±62.68*254.0±43.51*   4.61±1.40**9.39±2.087.26±1.92*6.89±1.12**6.14±1.47**6.68±1.16**
与模型对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
3.对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织SOD、MDA含量的影响
结果见表13，从结果可见，模型对照组小鼠脑组织SOD活力均较正常对照组明显降低(P＜0.01)；MDA含量均较正常对照组明显增高(P＜0.01)；黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠脑组织SOD活力均较模型对照组提高(P＜0.01)，MDA含量均较模型对照组降低(P＜0.01)。
表14  对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织SOD、MDA的影响(
Figure A20061007884300161
，n＝10)
    组别     剂量(g/kg)     SOD(NU/ml)     MDA(nmol/ml)
    空白对照组模型对照组黄蒲清脑胶囊哈伯因组     --0.360.721.440.1mg     22.00±3.32**12.74±3.4419.43±4.22**20.64±3.82**19.53±3.74**18.27±3.24*     3.64±0.84**6.44±1.894.53±1.13**4.37±0.94**4.46±1.35**4.69±0.51**
与模型对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊对D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力障碍有一定的改善作用，可提高血清及脑组织SOD活力，降低MDA含量，纠正氧自由基代谢的紊乱，有一定的抗氧化作用。
四、对大鼠局灶性脑缺血的保护作用
试验目的：通过观察黄蒲清脑胶囊对大鼠局灶性脑缺血的影响，评价其防治作用。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号041001；喜得镇(甲磺酸双氢麦角毒碱片)，天津华津制药厂、北京诺华制药有限公司合作生产，批号020632。
动物：SD大鼠(二级)，体重180--200g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
试剂：三氯化铁，北京化学试剂公司，批号03227；红四氮唑，北京化学试剂公司。
试验方法：
将60只大鼠，随机分为6组，每组10只，分别为假手术组、模型对照组、黄蒲清脑胶囊小剂量组(0.28g/kg，折合生药1.71g/kg，相当于人临床用量的3.5倍)、黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.56g/kg，折合生药3.42g/kg，相当于人临床用量的7倍)、  黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.12g/kg，折合生药6.83g/kg，相当于人临床用量的14倍)及阳性药喜得镇组(1.2mg/kg，相当于人临床用量的14倍)。给药组大鼠每天灌胃给药1次，容量为lml/100g体重，假手术组、模型对照组大鼠给予等容量蒸馏水，连续7天。第6天给药后2小时，分别将各组大鼠用水合氯醛麻醉(35mg/Kg，ip)，参照文献方法[4]，在右眼和右耳之间的中点作一纵向1.5cm的切口，仔细分开颞肌，暴露颧突和颞骨，在颧突之头端1-2mm处，用牙科钻开一直径为2mm的小孔，并暴露中动脉起始部位。用分针将脑膜挑开，将吸有50％三氯化铁溶液10μl的定量滤纸条敷在此段大脑中动脉上，30分钟后取下滤纸，再用0.9％生理盐水清洗局部，缝合皮肤，放回笼中饲养。假手术组大鼠除不敷三氯化铁溶液滤纸条外，其余手术步骤同模型对照组。术后继续给药1天，并分别在术后8小时、24小时，按Bederson等的方法改进后进行神经症状评分[5]。评分标准：①提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称前伸，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或兼具，记为1分。②将大鼠置于平面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力记为0分；如手术对侧阻力下降，记为1分。③将大鼠两前肢置一金属网上，观察肌张力。如双侧肌张力对等且有力记为0分；如手术对侧前肢肌张力下降，记为1分。④提鼠尾，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上评分标准，满分为4分，分数越高，动物的神经症状越严重。24小时时间点评分后处死大鼠，剖取大脑，去掉嗅球和低位脑干，以均等间距冠状切成五片，分别置入2％TTC溶液中染色。染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将梗塞区脑组织仔细挖下，称重。以梗塞组织重量与全脑重量的百分比作为脑梗塞范围。
统计学处理：数据用 表示，统计学处理采用spss11.0for window统计软件。
试验结果：
1.对局灶性脑缺血大鼠神经症状的影响
结果见表15，从结果可见，模型对照组大鼠神经症状严重，黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)组大鼠在术后8小时、24小时两个时间点神经症状均较模型对照组大鼠减轻，评分减低(P＜0.01)。
表15  对脑缺血大鼠神经症状的影响
Figure A20061007884300172
    组别     剂量(g/kg)     动物数(只)               神经症状评分
    8小时   24小时
    假手术组模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组     --0.280.561.121.2mg     101010101010     0.0±0.00**3.6±0.702.2±0.92**2.0±1.15**1.9±0.57**1.6±0.84**   0.0±0.00**3.2±0.632.1±0.99**1.7±1.06**1.4±0.84**1.3±0.82**
与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
2.对局灶性脑缺血大鼠脑梗塞范围的影响
结果见表16，从结果可见，黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)组大鼠梗塞组织重量与全脑重量的百分比均较模型对照组大鼠减小(P＜0.01)。。
表16  黄蒲清脑胶囊对大鼠实验性脑梗塞梗塞范围的影响
Figure A20061007884300173
    组别     剂量(g/kg)     动物数(只)     脑梗塞范围(梗塞组织重量/全脑重量)
    假手术组     -     10     0.00±0.00
    模型对照组黄蒲清脑胶囊喜得镇组     -0.280.561.121.2mg     1010101010     4.76±0.643.09±0.70**3.14±0.69**2.75±0.44**3.02±0.63*
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)可明显改善局灶性脑缺血大鼠的神经症状，缩小梗塞范围，减轻局部脑缺血所致脑组织损伤。
四、对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍的影响
试验目的：观察黄蒲清脑胶囊对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍的影响。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号041001；哈伯因(石杉碱甲片0.05mg/片)，河南竹林众生制药股份有限公司豫中制药厂，批号050402；氢溴酸东莨菪碱注射液(0.3mg)，上海禾丰制药有限公司，批号20050206。
动物：昆明种小鼠(二级)，体重25--28g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
仪器：DT-200小鼠跳台自动测试箱，成都泰盟科技有限公司。
试验方法：
将60只小鼠随机分成6组，分别为正常对照组、模型对照组、黄蒲清脑胶囊低剂量组(0.36g/kg，折合生药2.20g/kg，相当于人临床用量的4.5倍)、黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.72g/kg，折合生药4.39g/kg，相当于人临床用量的9倍)、黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.44g/kg，折合生药8.78g/kg，相当于人临床用量的18倍)及阳性药哈伯因组(0.1mg/kg，相当于人临床用量的18倍)，每组10只。给药组每天灌胃给药一次，容量为0.2ml/10g体重，正常对照组、模型对照组每天给予等容量蒸馏水，连续12天。除正常对照组外，其余各组小鼠均腹腔注射东莨菪碱5mg/kg，30分钟后开始训练【6】。训练时，将小鼠放入跳台装置内，先适应3分钟，然后通电。动物受到电击时，正常反应是跳回平台以避免电击，小鼠双足着铜栅为触电，视为错误反应。训练5分钟并记录小鼠5分钟内错误反应次数。24小时后进行测试，记录5分钟内错误反应次数，即记忆期5分钟内错误反应次数。
统计学处理：数据用
Figure A20061007884300181
表示，统计学处理采用spss11.0for window统计软件。
试验结果：
结果见表17，从结果可见，模型对照组小鼠在训练期和记忆期5分钟错误反应次数均明显较正常对照组增多(P＜0.01)，说明已造成学习记忆获得障碍。黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠在训练期和记忆期5分钟错误反应次数均明显较模型对照组减少(P＜0.01)。
表17  黄蒲清脑胶囊对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍的影响
Figure A20061007884300182
  组别     剂量(g/kg)   动物数(只)                5分钟内错误数
  训练期   测试期
  正常对照组模型对照组黄蒲清脑胶囊哈伯因组     --0.360.721.440.1mg     101010101010   2.3±1.16**4.7±1.492.8±1.23**2.7±1.34**2.6±1.43**2.5±1.27**   2.1±0.87**4.2±1.032.2±1.03**2.4±0.84**2.3±0.67**2.1±1.37**
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊可明显改善东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍。
五、对亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍的影响：
试验目的：观察黄蒲清脑胶囊对亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍的影响。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号040220，胶囊内容物置于乳钵中研细加水研匀，制成不同浓度的混悬液备用；哈伯因(石杉碱甲片0.05mg/片)，河南竹林众生制药股份有限公司豫中制药厂，批号050402；亚硝酸钠(分析纯)，天津市标准科技有限公司，批号20050714。
动物：昆明种小鼠(二级)，体重25--28g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
仪器：DT-200小鼠跳台自动测试箱，成都泰盟科技有限公司。
试验方法：
将60只小鼠随机分成6组，分别为正常对照组、模型对照组、黄蒲清脑胶囊低剂量组(0.36g/kg，折合生药2.20g/kg，相当于人临床用量的4.5倍)、黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.72g/kg，折合生药4.39g/kg，相当于人临床用量的9倍)、黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.44g/kg，折合生药8.7gg/kg，相当于人临床用量的18倍)及阳性药哈伯因组(0.1mg/kg，相当于人临床用量的18倍)，每组10只。给药组每天灌胃给药一次，容量为0.2ml/10g体重，正常对照组、模型对照组每天给予等容量蒸馏水，连续12天。末次给药30分钟后开始训练。训练时，将小鼠放入反射箱内，先适应3分钟，然后通电。动物受到电击时，正常反应是跳回跳台以避免电击，小鼠双足着铜栅为触电，视为错误反应。训练5分钟，并记录5分钟内错误反应次数。训练结束后，除正常对照组外，其余各组小鼠均腹腔注射亚硝酸钠120mg/kg，24小时后进行测试【6】，记录5分钟内错误反应次数。
统计学处理：数据用
Figure A20061007884300191
表示，统计学处理采用spss11.0for window统计软件。
试验结果：
结果见表18，从结果可见，各组小鼠在训练期5分钟错误次数无明显区别，在测试期，黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)可明显减少5分钟错误反应次数(P＜0.05或P＜0.01)。
表18  黄蒲清脑胶囊对亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍的影响
Figure A20061007884300192
    组别     剂量(g/kg)   动物数(只)           5分钟内错误数
  训练期     测试期
    正常对照组模型对照组黄蒲清脑胶囊哈伯因组     --0.360.721.440.1mg     101010101010   1.6±0.841.8±1.551.9±1.101.6±0.971.5±1.081.7±1.06     2.0±1.56**4.8±1.582.5±0.97**2.8±1.23**2.9±1.66*3.0±1.56*
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊可明显改善亚硝酸钠致小鼠记忆获得障碍。
六、对40％乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
试验目的：观察黄蒲清脑胶囊对40％乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号041001；哈伯因(石杉碱甲片0.05mg/片)，河南竹林众生制药股份有限公司豫中制药厂，批号050402；无水乙醇(分析纯)，天津市永大化学试剂开发中心，批号20040304。
动物：昆明种小鼠(二级)，体重25--28g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
仪器：DT-200小鼠跳台自动测试箱，成都泰盟科技有限公司。
试验方法：
将60只小鼠随机分成6组，分别为正常对照组、模型对照组、黄蒲清脑胶囊低剂量组(0.36g/kg，折合生药2.20g/kg，相当于人临床用量的4.5倍)、黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.72g/kg，折合生药4.39g/kg，相当于人临床用量的9倍)、黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.44g/kg，折合生药8.78g/kg，相当于人临床用量的18倍)及阳性药哈伯因组(0.1mg/kg，相当于人临床用量的18倍)，每组10只。给药组每天灌胃给药一次，容量为0.2ml/10g体重，正常对照组、模型对照组每天给予等容量蒸馏水，连续12天。于末次给药后1小时开始训练，训练时将小鼠放入跳台装置内，先适应3分钟，然后通电，小鼠受到电击时，正常反应是跳回平台以躲避电击，小鼠双足着铜栅为触电，视为错误反应。训练5分钟并记录5分钟内错误次数。24小时后进行测试，于测试前30分钟模型组与各给药组小鼠灌胃40％乙醇0.1ml/10g体重【6】，正常对照组小鼠灌胃等容量生理盐水。30分钟后，测试5分钟内小鼠错误反应次数。
统计学处理：数据用
Figure A20061007884300201
表示，统计学处理采用spss11.0for window统计软件。
试验结果：
结果见表19，从结果可见，各组小鼠在训练期5分钟错误反应次数无明显区别，模型对照组小鼠在测试期5分钟错误反应次数明显较正常对照组增多(P＜0.01)，说明小鼠灌胃40％乙醇已造成学习记忆再现障碍。黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)组小鼠5分钟错误反应次数均明显较模型对照组减少(P＜0.05或P＜0.01)。
表19  对40％乙醇致小鼠记忆再现障碍的影响
Figure A20061007884300202
    组别     剂量(g/kg)     动物数(只)              5分钟内错误数
    训练期   测试期
    正常对照组模型对照组黄蒲清脑胶囊哈伯因组     --0.360.721.440.1mg     101010101010     1.7±1.251.6±1.262.0±1.332.1±1.601.9±1.371.7±1.42   1.6±1.50**4.6±1.583.1±1.29*2.7±1.16**2.8±1.75*2.9±1.29*
注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊可明显改善40％乙醇引起的小鼠记忆再现障碍。
七、对急性脑缺氧小鼠的保护作用：
试验目的：观察黄蒲清脑胶囊对急性脑缺氧小鼠的保护作用。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号041001；哈伯因(石杉碱甲片0.05mg/片)，河南竹林众生制药股份有限公司豫中制药厂，批号050402。
动物：昆明种小鼠(二级)，体重18--22g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
试验方法：
将50只小鼠随机分成5组，每组10只，分别为空白对照组、黄蒲清脑胶囊低剂量组(0.36g/kg，折合生药2.20g/kg，相当于人临床用量的4.5倍)、黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.72g/kg，折合生药4.39g/kg，相当于人临床用量的9倍)、黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.44g/kg，折合生药8.78g/kg，相当于人临床用量的18倍)及阳性药哈伯因组(0.1mg/kg，相当于人临床用量的18倍)。给药组每天灌胃给药，容量为0.2m1/10g体重，空白对照组每天给予等容量生理盐水，每日一次连续12天，末次给药后40分钟时断头，记录断头张口动作持续时间。
统计学处理：数据用
Figure A20061007884300211
表示，统计学处理采用spss11.0for window统计软件。
试验结果：
结果见表20，结果表明，黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)均可延长小鼠断头后张口时间(p＜0.01)。
表20  对急性脑缺氧小鼠张口时间的影响
Figure A20061007884300212
    组别     剂量(g/kg)     动物数(只)     张口时间(s)
    空白对照组黄蒲清脑胶囊哈伯因组     -0.360.721.440.1mg     1010101010     18.4±4.3024.3±4.73**26.8±2.48**28.4±4.97**22.3±2.71*
注：与空白对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊对小鼠急性脑缺氧有一定的保护作用。
八、对血瘀大鼠血液流变性的影响
试验目的：观察黄蒲清脑胶囊对血瘀模型大鼠血液流变性的影响。
试验材料：
药物：黄蒲清脑胶囊干粉(6.1g生药/g干粉)，河北天时医药技术开发有限公司提供，批号041001；复方丹参片，山西新双鹤药业有限公司生产，批号040321；盐酸肾上腺素注射液(1mg/ml)，由天津金耀氨基酸有限公司生产，批号031110。
动物：SD大鼠(二级)，体重180--200g，雄性，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003，动物饲料亦由该中心提供。
仪器：全自动自清洗血流变仪LBY-N6B，北京普利生仪器有限公司。
试验方法：
将60只大鼠，随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、黄蒲清脑胶囊小剂量组(0.28g/kg，折合生药1.71g/kg，相当于人临床用量的3.5倍)、黄蒲清脑胶囊中剂量组(0.56g/kg，折合生药3.42g/kg，相当于人临床用量的7倍)、黄蒲清脑胶囊高剂量组(1.12g/kg，折合生药6.83g/kg，相当于人临床用量的14倍)及阳性药复方丹参片组(0.5g/kg，相当于人临床用量的14倍)。给药组大鼠每天灌胃给药1次，容量为1ml/100g体重，空白对照组及模型对照组大鼠给予等容量蒸馏水，连续7天。于第8天空白对照组皮下注射生理盐水，其它各组均皮下注射2次盐酸肾上腺素，第一次给8μg/kg，第二次给6μg/kg，中间间隔4小时，第一次给肾上腺素后2小时，将动物置冰水中5min【7】，处置后24小时，用20％乌拉坦麻醉，腹主动脉取血，其中1.5ml血迅速注入肝素抗凝管内，摇匀后用于测定血流变学指标；另1.2ml血用毛细血管法测定血浆黏度和红细胞压积值。
统计学处理：数据用
Figure A20061007884300221
表示，统计学处理采用spss11.0for window统计软件。
试验结果：
结果见表21，从结果可见，各组大鼠血浆粘度和红细胞压积无明显区别，模型对照组大鼠全血粘度(高、中、低切)均较空白对照组升高(P＜0.001)，说明大鼠皮下注射肾上腺素加冰水刺激已致血瘀模型形成。黄蒲清脑胶囊(1.12g/kg)组大鼠全血粘度(高、中、低切)均较模型对照组大鼠降低(P＜0.01)，黄蒲清脑胶囊(0.56g/kg)组大鼠全血粘度(低切)均较模型对照组大鼠降低(P＜0.05)。
表21  黄蒲清脑胶囊对血瘀症大鼠的血液流变学的影响
组别     动物(只)     剂量(g/kg)   全血粘度低切   全血粘度中切   全血粘度高切   毛细血管血浆粘度   红细血胞压积(％)
空白对照组模型对照组黄蒲清脑胶囊复方丹参组     101010101010     ----0.280.561.120.5   11.19±1.31**14.49± 1.8413.39±1.4912.52±1.82*10.94±2.10**11.01±1.29**   6.22±0.59**7.94±0.747.28±0.786.97±0.805.91±0.73**6.01±0.50**   4.80±0.45**5.88±0.495.58±0.735.45 ±0.574.63±0.42**4.71±0.32**   1.02±0.051.17±0.091.17±0.051.22±0.071.20±0.071.13±0.06   51.4±2.8051.4±3.7250.9±3.6053.4±3.3153.2±2.3053.8±2.97
与模型对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
结论：本试验结果表明：黄蒲清脑胶囊可改善血瘀大鼠血流变学指标异常，具有一定的活血化瘀作用。
小结
主要药效学试验结果表明：黄蒲清脑胶囊(0.28g/kg、0.56g/kg、1.12g/kg)可明显提高双侧颈总动脉永久性结扎致血管性痴呆大鼠学习能力，提高血清及脑组织中SOD活力、降低MDA含量，增加脑皮层组织中的NE、DA含量；对肾上腺素加冰水引起的血瘀大鼠全血比粘度的升高有降低作用；可明显改善局灶性脑缺血大鼠的神经症状，缩小梗塞范围，减轻局部脑缺血所致脑组织损伤。黄蒲清脑胶囊(0.36g/kg、0.72g/kg、1.44g/kg)可明显改善脑缺血再灌注致小鼠记忆障碍，提高血清及脑组织中SOD、总NOS活力，降低MDA含量，抑制TChE活力；改善D-半乳糖致衰老小鼠的学习能力，提高血清及脑组织中SOD活力、降低MDA含量；可明显改善东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍；明显改善亚硝酸钠致小鼠记忆巩固障碍；明显改善乙醇引起的记忆再现障碍；可延长小鼠断头后张口时间，对小鼠急性脑缺氧有一定的保护作用。研究结果为临床用药提供了必要的药理学依据。

Claims (8)

1、一种治疗血管性痴呆症的中药组合物，其特征在于是由如下重量份比例的原料药制成的：
姜黄300-450份    石菖蒲250-350份    三七100-150份    豨莶草200-300份
人参150-220份    制何首乌150-220份  水蛭100-150份    黄连150-220份
白芍200-300份    茯苓150-220份      远志250-350份
2、根据权利要求1所述的药物，其原料药的重量份比例为：
姜黄375份    石菖蒲312.5份    三七125份    豨莶草250份
人参187.5份  制何首乌187.5份  水蛭125份    黄连187.5份
白芍250份    茯苓187.5份      远志312.5份
3、根据权利要求1所述的药物，其原料药的重量份比例为：
姜黄300份      石菖蒲250份    三七125份    豨莶草300份
人参187.5份    制何首乌215份  水蛭100份    黄连220份
白芍200份      茯苓180份      远志350份
4、根据权利要求1所述的药物，其原料药的重量份比例为：
姜黄450份    石菖蒲350份    三七100份    豨莶草300份
人参150份    制何首乌150份  水蛭150份    黄连180份
白芍300份    茯苓155份      远志250份
5、根据权利要求1-4任一所述的药物，其特征在于该药物为胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
6、根据权利要求5所述的药物，其特征在于该药物为胶囊剂。
7、权利要求6所述药物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)、取方中药材，分别选净，粗碎成5-10mm颗粒，按处方量称量。
2)、取姜黄，加8-12倍量70-90％乙醇，加热回流提取1-3次，第一次2-3小时，第二次1-2小时，提取液滤过，合并，减压回收乙醇后，适当浓缩成相对密度约为1.0-1.2(60℃热测)，备用。
3)、取三七、豨莶草、制何首乌、黄连，加8-10倍量50-70％乙醇，加热回流提取1-3次，每次2-3小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩成相对密度约为1.0-1.2(60℃热测)，备用。
4)、取石菖蒲，加8-12倍量水，浸泡30-60分钟后，提取挥发油4-8小时，挥发油另器收集，水提取液过滤，备用。
5)、取水蛭、白芍、茯苓、远志，加8-10倍量水，煎煮2-3次，每次1-2小时，提取液过滤，合并，加入石菖蒲提油后的水溶液，浓缩成相对密度为1.10-1.15(60℃热测)清膏，与姜黄、三七等提取液合并，混匀，放入真空干燥箱，在温度60-70℃，真空度0.04-0.06Mpa条件下减压干燥，干膏粉碎成100目粉，备用。
6)、取人参，粉碎成100目粉，备用。
7)、取5)和6)制备的粉末，加适量辅料，按常规制剂方法，制成胶囊剂。
8、权利要求5所述药物的制备方法，其特征在于：
将权利要求7中步骤5)、6)制备的细粉，按常规制剂方法制成片剂、丸剂；
或
将2)、3)、4)、5)中制备的提取物，加入6)中所得的颗粒细粉，按常规方法制成口服液。
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