CN105079629A - 一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和用途。本发明选择黄芪、山慈菇、昆布、大枣、川芎、桂枝、三棱、牡蛎、知母、土茯苓、白术以及甘草组成中药组合物，实验结果表明，该中药组合物可以改善AD小鼠学习记忆能力及海马形态结构，改善AD小鼠脑组织BBB的通透性，改善AD小鼠海马APP、海马Aβ_1-42及血清Aβ_1-42水平，降低AD小鼠海马IL-1β、TNF-α和IL-6水平，增强AD小鼠海马抗氧化能力，增加AD小鼠海马LRP1和Apo？J蛋白表达，改善脾指数、胸腺指数和脑指数，并且对AD小鼠其他脏器指数和体重无影响。本发明的提出为进一步研发防治AD的中药新药提供了一种新的技术手段。

Description

一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和用途，特别涉及一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和用途。本发明属于中药研究技术领域。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，严重危及人类的生命和健康(BeagleyKW，HustonWM，HansbroPM，etal.Chlamydialinfectionofimmunecells：alteredfunctionandimplicationsfordisease[J].CritRevImmunol，2009，29(4)：275-305.)。在全球范围内，AD患者人数达到了3500万，预计在20年后，这个数字会增加一倍，而这些患者主要来自于低收入国家，给低收入的国家和社会带来沉重的经济负担。伴随着我们国家老龄化社会的到来，AD发病率随着年龄的增加而逐年升高，并且女性患者的发病率高于男性患者的发病率。因此，预防和治疗AD已成为我们国家中老年疾病研究领域最迫切的前沿课题。

AD的发病机制尚未完全清楚，研究者们提出了众多理论学说，例如β-淀粉样蛋白(Amyloidbeda，Aβ)学说、炎症因子学说、神经血管学说、胆碱能损伤学说、自由基学说、基因突变学说、钙稳态失调学说、Tau蛋白学说等等。

Aβ蛋白学说是AD发病机制中最重要的学说之一。在正常的情况下，Aβ是β-淀粉样蛋白前体蛋白(Amyloid-βprecursorprotein，APP)通过β、γ-分泌酶水解产生的一种肽类物质，主要包括Aβ_1-40和Aβ_1-42。Aβ_1-42含量仅占有Aβ蛋白总量的10％，但却是脑内Aβ沉淀物形成的最关键组成部分，Aβ_1-42参与构成老年斑(Senileplaques，SP)的核心成分(TakahashiE，KuribayashiH，ChambersJK，etal.SenileplaquesandcerebralamyloidangiopathyinanagedCaliforniasealion(Zalophuscalifornianus)[J].Amyloid，2014，21(3)：211-215.)。当机体处于生理状态时，Aβ_1-42产生和降解处于稳态的平衡当中；当机体处于病理状态时，Aβ_1-42产生和降解的稳态就会被打破，导致Aβ_1-42在神经元的外侧积聚，很容易形成纤维化，形成SP，同时Aβ_1-42对神经元具有严重的神经毒性，可以引起神经元损伤，造成神经元数量减少(AgostaF，DallaLiberaD，SpinelliEG，etal.MyeloidmicrovesiclesincerebrospinalfluidareassociatedwithmyelindamageandneuronallossinmildcognitiveimpairmentandAlzheimerdisease[J].AnnNeurol，2014，76(6)：813-825.)，海马区域神经元侵犯最为严重。因此评价AD的治疗效果需要检测脑组织海马APP、海马Aβ_1-42、血清Aβ_1-42含量及其观察海马区域神经元的形态结构。

炎症因子学说与Aβ蛋白学说是密切关联的。炎症因子学说指出脑组织小胶质细胞具有吞噬功能，可以吞噬少量的Aβ，随着Aβ产生增加，会激活小胶质细胞及星形胶质细胞分泌功能，产生大量炎症因子。Aβ沉积在神经元的外侧，促进小胶质细胞产生白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)，促进星形胶质细胞分泌肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6，IL-6)等(SwardfagerW，K，RothenburgL,etal.AmetaanalysisofcytokinesinAlzheimer'sdisease[J].BiolPsychiatry，2010，68(10)：930-941.LinX，BaiG，LinL，etal.Vaccinationinducedchangesinpro-inflammatorycytokinelevelsasanearlyputativebiomarkerforcognitiveimprovementinatransgenicmousemodelforAlzheimerdisease[J].HumVaccinImmunother，2014，10(7)：2024-2031.)。因此评价AD的治疗效果需要检测炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6。

神经血管学说是ZlokovicBV提出的关于AD发病机制的学说，与Aβ蛋白学说也是密切关联的(ZlokovicBV.NeurovascularmechanismsofAlzheimer’sneurodegeneration[J].TrendsNeurosci，2005，28(4)：202-208.)。ZlokovicBV指出血脑屏障(Blood-BrainBarrier，BBB)通透性的改变可以影响Aβ的清除，加速Aβ的沉积(ZlokovicBV.NeurovascularpathwaystoneurodegenerationinAlzheimer'sdiseaseandotherdisorders[J].NatRevNeurosci，2011，12(12)：723-738.)，脑组织BBB损伤会促进AD的发病(LangerHF，ChavakisT.Plateletsandneurovascularinflammation[J].ThrombHaemost，2013，110(5)：888-893.)。多种蛋白质参与Aβ的清除，其中载脂蛋白J(ApolipoproteinJ，ApoJ)、载脂蛋白E等与Aβ结合后，就被低密度脂蛋白相关蛋白1(Lipoproteinreceptor-relatedprotein1，LRP1)所识别，Aβ与LRP1蛋白结合后，促进Aβ转出脑组织，减少脑组织Aβ含量，减轻AD的症状，可见LRP1和ApoJ蛋白参与Aβ的清除过程。因此评价AD的治疗效果需要检测脑组织BBB的通透性及其LRP1和ApoJ蛋白的表达。

另外研究表明，脑血管功能障碍与AD认知功能密切相关(LoRY，JagustWJ，Alzheimer'sDiseaseNeuroimagingInitiative.VascularburdenandAlzheimerdiseasepathologicprogression[J].Neurology，2012，79(13)：1349-1355.)，体内实验显示AD小鼠模型的学习记忆能力下降(YuL，WangS，ChenX，etal.OrientinalleviatescognitivedeficitsandoxidativestressinAβ_1-42-inducedmousemodelofAlzheimer'sdisease[J].LifeSci.2015Jan15；121：104-109.)。AD还表现抗氧化功能降低及自由基产生增加，引起总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量降低及氧化产物丙二醛(MDA)增加。因此评价AD的治疗效果有必要检测AD小鼠模型的学习记忆能力及T-AOC、SOD、GSH-PX和MDA含量。

针对AD的典型病理特征，即神经元外侧Aβ大量沉积、神经元数目减少、神经元内部神经原纤维缠结、血管周围的病变等，现代医学研究指出许多药物可以防治AD，例如抗Aβ药物(WangF，LiuH，ShenX，etal.Thecombinedtreatmentofamyloid-β_1-42-stimulatedbonemarrow-deriveddendriticcellsplussplenocytesfromyoungmicepreventsthedevelopmentofAlzheimer'sdiseaseinAPPswe/PSENldE9mice[J].NeurobiolAging，2015，36(1)：111-122.)、抗氧化剂(KawadaH，BlessingK，KiyotaT，etal.Effectsofmultifunctionalantioxidantsonmitochondrialdysfunctionandamyloid-βmetaldyshomeostasis[J].JAlzheimersDis，2015，44(1)：297-307.)、乙酰胆碱酯酶抑制剂(KonrathEL，PassosCdosS，KleinLCJr，etal.AlkaloidsasasourceofpotentialanticholinesteraseinhibitorsforthetreatmentofAlzheimer'sdisease[J].JPharmPharmacol，2013，65(12)：1701-1725.)、抗神经元细胞凋亡药物、雌激素、抗精神病药物等。但是这些药物的副作用比较明显，因此探寻副作用小、作用靶点多、具有整体调节的中药组合物就显得尤为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和用途。

本发明提供的中药组合物包括十二种药材，其中黄芪，味甘、性温，归肺经、脾经、肝经、肾经，具有补气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿的功效；山慈菇，味甘、性寒，归肝经、胃经、脾经，具有化瘀、散结的功效；昆布，味咸、性寒，归肝经、胃经、肾经，具有散结软坚、消痰利水的功效；大枣，味甘、性温，归脾经、胃经，具有养血安神、补中益气的功效；川芎，味辛、性温，归肝经、胆经、心包经，具有活血行气、祛风止痛的功效；桂枝，味辛、性温，归心经、肺经、膀胱经，具有温经通脉、发汗解肌、助阳化气、散寒止痛的功效；三棱，味辛、性平，归肝经、脾经，具有消积止痛、破血行气的功效；牡蛎，味咸，性微寒，归肝经、胆经、肾经，具有养阴固涩、平肝息风的功效；知母，味苦、性寒，归肺经、胃经、肾经，具有清热泻火、生津润燥的功效；土茯苓，味甘、性平，归肝经、胃经、脾经，具有解毒除湿、利关节的功效；白术，味苦、性温，归脾经、胃经，具有健脾益气、燥湿利水的功效；甘草，味甘、性平，归心经、脾经、肺经、胃经，具有调和诸药、补脾益气、祛痰止咳的功效。

基于以上的综合分析，本发明提出了一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物，其由以下重量份的各原料药组成：黄芪10-30重量份、山慈菇4-12重量份、昆布5-13重量份、大枣5-15重量份、川芎2-10重量份、桂枝2-10重量份、三棱4-12重量份、牡蛎10-30重量份、知母5-15重量份、土茯苓30-40重量份、白术1-5重量份以及甘草2-10重量份。

优选的，本发明的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物，其由以下重量份的各原料药组成：黄芪20重量份、山慈菇8重量份、昆布9重量份、大枣10重量份、川芎6重量份、桂枝6重量份、三棱8重量份、牡蛎20重量份、知母10重量份、土茯苓35重量份、白术3重量份以及甘草6重量份。

本发明中药组合物的功效主要为补气化瘀、散结养血、活血通脉、消积养阴、清热解毒、健脾调和。该中药组合物可以补气活血，促进气旺血行，还可以散结清热、解毒健脾、通络养阴，尤其是针对本虚标实、气虚血瘀的AD，就会有较好的治疗效果。

一种临床上适宜的用于防治阿尔茨海默病的中药制剂，其由本发明所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。

所述的制剂可以为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。本发明制剂的制备方法属于常规制剂方法，在此无庸赘述。

进一步的，本发明还提供了一种制备所述的中药组合物的方法，包括以下步骤：

(1)按照所述的重量份称取各原料药，将各原料药混合均匀后放入高颈圆底烧瓶中，加入药物重量8-12倍的蒸馏水，浸泡1-2h后，煎煮1-2h，冷却；

(2)将步骤(1)冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液；

(3)步骤(2)剩余的药物残渣放入高颈圆底烧瓶中，重复步骤(1)和(2)得到第二次滤液，合并二次滤液；

(4)设定电热恒温鼓风干燥箱温度为70℃，干燥4-5d，得到所述中药组合物的干膏。

将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，研磨，分子筛处理，得到所述中药组合物的干粉。

本发明选择十二味药材组成中药组合物，观察了该中药组合物高、中、低剂量(中药组合物原药材36.66g/kg，18.33g/kg、9.17g/kg)分别对AD小鼠的影响及作用机制，检测指标包括AD小鼠的学习记忆能力，海马形态结构，脑组织BBB的通透性，海马APP、海马Aβ_1-42及血清Aβ_1-42，海马IL-1β、TNF-α和IL-6，海马抗氧化能力，海马LRP1和ApoJ蛋白表达，脾指数、胸腺指数和脑指数，其他脏器指数和小鼠体重，以此评价本发明中药组合物防治AD的效果，以期为临床上治疗AD提供客观的实验依据。

实验使用Morris水迷宫开展了定位航行实验、空间探索实验和跨越平台实验，以此评价中药组合物对AD小鼠学习记忆能力的影响。实验结果显示，模型组AD小鼠的逃避潜伏期延长、游泳距离增加、跨平台次数降低和目标象限停留时间缩短，说明模型组AD小鼠的学习记忆能力下降，模型稳定，适宜开展AD的实验研究。经过中药组合物的治疗后，中药组合物高中剂量组小鼠逃避潜伏期缩短、游泳距离减少、跨平台次数增加和目标象限停留时间延长，说明中药组合物高中剂量可以改善AD小鼠模型的学习记忆能力，治疗效果很好。但是中药组合物低剂量对AD小鼠模型学习记忆能力的治疗作用较差。

实验使用透射电子显微镜观察了小鼠海马CA1区的形态结构，以此评价中药组合物对AD小鼠海马CA1区超微结构的影响。实验结果显示，对照组小鼠海马CA1区神经元细胞体较大，细胞核大，细胞质丰富，线粒体和粗面内质网清晰可见，核膜清晰，毛细血管形态规则，内皮细胞完整，说明对照组小鼠海马CA1区结构正常，适合当对照组开展实验研究。模型组AD小鼠海马CA1区神经元细胞器不丰富，细胞核小，核膜不清晰，空泡较多，毛细血管扁椭圆形，毛细血管外侧有圆形的空泡，提示海马CA1区神经元和毛细血管损伤，说明模型组小鼠海马CA1区结构异常，适合当模型组开展实验研究。经过中药组合物的治疗后，小鼠海马CA1区神经元细胞体较大，形态规则，细胞核较大，神经元的细胞器不同程度地增加，核膜下可见染色质，毛细血管形态规则，管腔清晰，毛细血管完整，说明中药组合物不同程度地改善小鼠海马CA1区神经元和毛细血管的结构，对神经元和毛细血管有不同程度的保护作用。但是中药组合物低剂量对AD小鼠模型海马CA1区神经元和毛细血管形态结构的保护作用较差。

实验使用酶标仪测定脑组织的EB浓度和EB含量，以此评价中药组合物对AD小鼠脑组织BBB通透性的影响。实验结果表明，模型组AD小鼠脑组织EB浓度和EB含量升高，说明脑组织EB的渗出量增加，BBB的通透性增加。经过中药组合物的治疗后，中药组合物高中剂量组EB浓度和EB含量降低，说明中药组合物高中剂量改善脑组织BBB的通透性，降低异常物质进入脑组织，对脑组织BBB有一定的保护作用。但是中药组合物低剂量对AD小鼠脑组织BBB的保护作用较弱。

实验通过ELISA方法测定海马APP、海马Aβ_1-42和血清Aβ_1-42的含量，以此评价中药组合物对Aβ相关因子的影响。实验结果表明，模型组AD小鼠海马APP和海马Aβ_1-42含量增加，血清Aβ_1-42含量降低，这种趋势与AD小鼠学习记忆能力、海马形态结构和脑组织BBB通透性的变化趋势相近，说明AD小鼠海马区域淀粉样物质增加的同时伴有AD小鼠学习记忆能力下降、海马形态结构异常和脑组织BBB通透性增加，进一步说明AD小鼠模型稳定。经过中药组合物的治疗后，中药组合物高中剂量可以改善AD小鼠海马APP、海马Aβ_1-42和血清Aβ_1-42含量，这种趋势与AD小鼠学习记忆能力、海马形态结构和BBB通透性的变化趋势也相近，说明AD小鼠海马区域淀粉样物质降低的同时伴有改善AD小鼠学习记忆能力、海马形态结构和BBB通透性，以此来影响AD的发生发展，起到治疗AD的作用。但是中药组合物低剂量对AD小鼠海马APP、海马Aβ_1-42和血清Aβ_1-42的影响作用较弱。

实验还通过ELISA方法测定海马IL-1β、TNF-α和IL-6含量，以此评价中药组合物对海马炎症因子的影响。实验结果表明，模型组海马IL-1β、TNF-α和IL-6含量增加，说明小胶质细胞和星形胶质细胞活跃，产生了大量的炎症因子，炎症反应明显，AD小鼠模型比较稳定。经过中药组合物的治疗后，中药组合物高中剂量可以降低海马IL-1β、TNF-α和IL-6含量，说明中药组合物可以降低小胶质细胞和星形胶质细胞活跃程度，减少炎症因子的释放，减轻海马区域的炎症反应，起到治疗AD的作用。但是中药组合物低剂量对AD小鼠IL-1β、TNF-α和IL-6的影响作用较弱。实验观察到海马APP和Aβ_1-42与海马IL-1β、TNF-α和IL-6的变化趋势相近，提示海马Aβ相关因子与炎症因子是密切相关的，进一步验证了AD发病机制的重要学说，包括Aβ蛋白学说与炎症因子学说相互关联，也说明了海马APP、Aβ_1-42、IL-1β、TNF-α和IL-6是AD治疗过程中的重要评价指标。

实验使用试剂盒测定小鼠海马T-AOC、SOD、GSH-PX和MDA含量，以此评价中药组合物对AD小鼠模型海马抗氧化能力的影响。实验结果表明，模型组AD小鼠海马T-AOC、SOD、GSH-PX降低，MDA增加，提示AD小鼠海马的抗氧化酶减少，氧化产物增加，说明模型组AD小鼠海马的抗氧化能力减弱。而经过中药组合物的治疗后，中药组合物高中剂量可以促进海马T-AOC、SOD、GSH-PX含量增加，同时减少海马MDA含量，从而增加海马抗氧化酶，减少氧化产物，以此来改善AD小鼠海马的抗氧化能力，起到治疗AD的作用。但是中药组合物低剂量对AD小鼠海马抗氧化能力的影响作用较弱。

实验使用免疫组织化学方法和Real-time-PCR方法测定了与AD密切相关的LRP1和ApoJ蛋白，以此评价中药组合物防治AD的效果及其相关作用机制。实验结果表明，模型组AD小鼠海马LRP1和ApoJ的平均光密度值降低，海马LRP1mRNA和ApoJmRNA的相对表达量降低，说明模型组可以与Aβ结合的蛋白质减少，降低了Aβ转出脑组织，Aβ沉积于脑组织，会加速AD的发生发展。经过中药组合物的治疗后，中药组合物高中剂量可以增加AD小鼠海马LRP1和ApoJ平均光密度值，增加海马LRP1mRNA和ApoJmRNA的相对表达量，从而增加参与Aβ转运的蛋白，增加Aβ转出脑组织，减少脑组织Aβ的含量，起到治疗AD的作用。但是中药组合物低剂量对AD小鼠海马LRP1和ApoJ的平均光密度值和海马LRP1mRNA和ApoJmRNA的相对表达量的影响作用较弱。免疫组织化学方法和Real-time-PCR方法测得的实验结果变化趋势与AD小鼠学习记忆能力、海马形态结构和BBB通透性的变化趋势相近，这提示LRP1和ApoJ是AD的重要靶点蛋白，中药组合物改善LRP1和ApoJ蛋白表达，从而改善AD小鼠模型的学习记忆能力、形态学及其脑组织BBB通透性等。

实验使用电子天平测定小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数，以此评价中药组合物对AD小鼠免疫功能和脑组织萎缩程度的影响。实验结果显示，模型组AD小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数降低，提示模型组AD小鼠脾脏主要产生的B细胞和胸腺主要产生的T细胞减少，脑组织相对质量降低，说明体液免疫及其细胞免疫水平降低，抗感染的能力减弱，脑组织出现萎缩。经过中药组合物的治疗后，中药组合物高中剂量可以改善小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数，提示中药组合物可以增加脾脏主要产生的B细胞和胸腺主要产生的T细胞，改善脑组织的萎缩程度，说明中药组合物对AD小鼠模型的免疫器官及其脑组织有一定的保护作用。但是中药组合物低剂量对AD小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数的影响作用较弱。

实验还使用电子天平测定了小鼠的心指数、肺指数、肾指数、肝指数和体重，以此评价中药组合物的副作用。实验结果表明，与对照组比较，模型组小鼠心指数、肺指数、肾指数、肝指数和体重改变不明显。经过中药组合物的治疗后，与模型组比较，中药组合物高、中、低剂量组小鼠心指数、肺指数、肾指数、肝指数和体重改变也不明显，提示中药组合物治疗AD的同时不会改变小鼠心指数、肺指数、肾指数、肝指数和体重，说明中药组合物副作用较小。

以上实验表明，本发明的中药组合物可以改善AD小鼠学习记忆能力及海马形态结构，改善AD小鼠脑组织BBB的通透性，改善AD小鼠海马APP、海马Aβ_1-42及血清Aβ_1-42水平，降低AD小鼠海马IL-1β、TNF-α和IL-6水平，增强AD小鼠海马抗氧化能力，增加AD小鼠海马LRP1和ApoJ蛋白表达，改善脾指数、胸腺指数和脑指数，并且对AD小鼠其他脏器指数和体重无影响，说明本发明的中药组合物能够通过作用于多个靶点蛋白来防治AD并且无副作用，本发明中药组合物的提出，可以为研发出作用机制明确、作用效果明显、无副作用的抗AD中药新药奠定基础。

附图说明

图1为本发明的中药组合物对AD小鼠逃避潜伏期的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图2为本发明的中药组合物对AD小鼠游泳距离的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图3为本发明的中药组合物对AD小鼠跨平台次数和目标象限停留时间的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图4为本发明的中药组合物对AD小鼠海马CA1区神经元超微结构的影响(透射电子显微镜，×2550)；

A：对照组；B：模型组；C：多奈哌齐组；D：高剂量组；E：中剂量组；F：低剂量组

图5为本发明的中药组合物对AD小鼠海马CA1区神经元细胞质超微结构的影响(透射电子显微镜，×16500)；

A：对照组；B：模型组；C：多奈哌齐组；D：高剂量组；E：中剂量组；F：低剂量组

图6为本发明的中药组合物对AD小鼠海马CA1区毛细血管超微结构的影响(透射电子显微镜，×6000)；

A：对照组；B：模型组；C：多奈哌齐组；D：高剂量组；E：中剂量组；F：低剂量组

图7为本发明的中药组合物对AD小鼠脑组织BBB通透性的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图8为本发明的中药组合物对AD小鼠海马APP含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图9为本发明的中药组合物对AD小鼠海马Aβ_1-42含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图10为本发明的中药组合物对AD小鼠血清Aβ_1-42含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图11为本发明的中药组合物对AD小鼠海马IL-1β含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图12为本发明的中药组合物对AD小鼠海马TNF-α含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图13为本发明的中药组合物对AD小鼠海马IL-6含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图14为本发明的中药组合物对AD小鼠海马T-AOC含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图15为本发明的中药组合物对AD小鼠海马SOD含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图16为本发明的中药组合物对AD小鼠海马GSH-PX含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图17为本发明的中药组合物对AD小鼠海马MDA含量的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图18为本发明的中药组合物对AD小鼠海马LRP1蛋白表达的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图19为本发明的中药组合物对AD小鼠海马ApoJ蛋白表达的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图20为本发明的中药组合物对AD小鼠海马LRP1mRNA表达的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

图21为本发明的中药组合物对AD小鼠海马ApoJmRNA表达的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05，³⁾P＞0.05

图22为本发明的中药组合物对AD小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05，³⁾P＞0.05

图23为本发明的中药组合物对AD小鼠心指数、肺指数、肾指数和肝指数的影响；

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05，³⁾P＞0.05

图24为本发明的中药组合物对AD小鼠体重的影响。

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05。

具体实施方式

下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

实施例1一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物的制备

所述的中药组合物由以下重量的各原料药组成：黄芪20g、山慈菇8g、昆布9g、大枣10g、川芎6g、桂枝6g、三棱8g、牡蛎20g、知母10g、土茯苓35g、白术3g以及甘草6g。

实施例2一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物的制备

所述的中药组合物由以下重量的各原料药组成：黄芪15g、山慈菇5g、昆布10g、大枣5g、川芎8g、桂枝4g、三棱10g、牡蛎12g、知母10g、土茯苓32g、白术2g以及甘草8g。

实施例3一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物的制备

所述的中药组合物由以下重量的各原料药组成：黄芪30g、山慈菇4g、昆布5g、大枣10g、川芎2g、桂枝10g、三棱4g、牡蛎30g、知母12g、土茯苓40g、白术5g以及甘草2g。

实施例4一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物(干膏)的制备

(1)分别称取黄芪20g、山慈菇8g、昆布9g、大枣10g、川芎6g、桂枝6g、三棱8g、牡蛎20g、知母10g、土茯苓35g、白术3g、甘草6g，一共141g，配制5倍的中药组合物，得到705g的中药组合物。将705g中药组合物的混合物放入20000ml的高颈圆底烧瓶中，加入6000ml蒸馏水，浸泡2h，煎煮2h，冷却10min；

(2)冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液；

(3)将药物残渣放到高颈圆底烧瓶中，加入6000ml蒸馏水，重复上面过程，得到第二次滤液，合并两次的滤液；

(3)设定电热恒温鼓风干燥箱温度为70℃，干燥5d，得到中药组合物干膏198.56g，中药组合物出膏率为(干膏/中药组合物)×100％，即(198.56/705)×100％＝28.16％。

实施例5一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物(干粉)的制备

将实施例4得到的中药组合物干膏粉碎，研磨，分子筛处理，得到中药组合物干粉195.23g，中药组合物的出粉率＝(干粉/中药组合物)×100％＝(195.23/705)×100％＝27.69％。

实验使用中药组合物705g，最终得到中药组合物干粉195.23g，即1g中药组合物干粉相当于中药组合物原药材3.61g。分装中药组合物干粉，10g/袋，-80℃冰箱(日本SANYO公司)保存备用。

实施例6本发明的中药组合物在防治阿尔茨海默病中的用途

1材料

1.1动物

雄性，7月龄，清洁级，健康的C57BL/6小鼠48只，体重(23±2)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2012-0001。所有小鼠的饲养条件包括常温、常湿、无菌、自由摄取食物、自由饮水，由黑龙江中医药大学实验动物中心李宝龙副主任负责C57BL/6小鼠的日常管理和处理。

1.2药物和试剂

盐酸多奈哌齐片(中国重庆植恩药业有限公司，批号20141201)。黄芪、山慈菇、昆布、大枣、川芎、桂枝、三棱、牡蛎、知母、土茯苓、白术、甘草共十二种药材由黑龙江中医药大学周忠光教授购买于黑龙江中医药大学第一附属医院，内分泌科栗明副主任医师鉴定这些中药可配伍组合使用，按照实施例5的方法制备成干粉，放于-80℃冰箱保存，用于动物实验。Aβ_1-42、D-半乳糖(Sigma公司)。APP、Aβ_1-42、IL-1β、TNF-α和IL-6酶联免疫试剂盒及其T-AOC、SOD、GSH-PX和MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)。β-actionsc-47778(SantaCruzBiotechnology公司)。ApoJsc-8354、LRP1sc-25469(SantaCruzBiotechnology公司)。其他试剂均为国产分析纯。

1.3仪器

Morris水迷宫(安徽淮北正华生物仪器设备有限公司)；TECNAIG2型透射电子显微镜(FEI/Philips公司)；101-0AB型电热恒温鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；脑立体定位仪器SN-2(日本)；组织脱水机和展片机(德国Leica公司)；BMJ-B型包埋机(常州市中威电子仪器有限公司)；6100型RT-雷杜酶标仪(美国RT公司)；HMIAS高清晰度彩色医学图文分析系统(武汉千屏影像技术有限公司)；TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；SIMF124制冰机、-80℃冰箱(日本SANYO公司)；CM1900冰冻切片机(德国Leica公司)；超净工作台(苏州博莱尔净化设备有限公司)；PLZOZ-S电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)等。

2方法

2.1AD小鼠模型复制

选择健康、一般状态良好的C57BL/6小鼠开始制备AD小鼠模型。抓取C57BL/6小鼠，10％水合氯醛麻醉小鼠，专用固定器固定小鼠，小鼠的头部固定于脑立体定位仪器SN-2(日本)，剪去小鼠的毛发，消毒后剪开皮肤，充分暴露颅骨，微量加样器于小鼠的双侧脑室一次性注入5μl凝聚态Aβ_1-42(80pmol/μl)，针头留下2min，牙科泥封闭颅骨孔，滴加庆大霉素，包扎小鼠，皮肤消毒，肌肉注射青霉素10万/d，小鼠单笼饲养，避免小鼠感染和相互撕咬。第二d开始，小鼠苏醒后，每d小鼠腹腔注射D-半乳糖(180mg/kg)，持续40d。给予小鼠的饮用水中加入三氯化铝，持续40d。以上选择Aβ_1-42(80pmol/μl)双侧脑室区域注射、D-半乳糖(180mg/kg)腹腔注射及其给予小鼠含有三氯化铝的饮用水，三个因素综合处理小鼠，复制AD小鼠模型。

对照组采用同样的方法，在小鼠双侧脑室和腹腔注射等量的生理盐水，并且给予小鼠不含有三氯化铝的饮用水。

2.2药物剂量的设定

2.2.1中药组合物剂量的设定

中药组合物包括黄芪20g、山慈菇8g、昆布9g、大枣10g、川芎6g、桂枝6g、三棱8g、牡蛎20g、知母10g、土茯苓35g、白术3g、甘草6g，一共141g，此剂量经过黑龙江中医药大学附属第一医院内分泌科栗明副主任医师评定，是临床患者使用的安全有效剂量。正常体重人体的安全有效剂量141g，依据小鼠和人的体表面积比值0.0026：1，求得标准体重小鼠中药组合物剂量是[(141g×0.0026)/20g小鼠]，得到标准体重小鼠中药组合物剂量为0.3666g/20g小鼠。通过换算成分母是单位kg，即0.3666g/20g小鼠×50，得到18.33g/kg，此剂量为中药组合物的中剂量，高剂量是中剂量×2，低剂量是中剂量/2。因此设定了中药组合物的高、中、低剂量分别是36.66g/kg、18.33g/kg、9.17g/kg。

2.2.2阳性药物剂量的设定

临床上AD患者使用多奈哌齐的安全有效剂量是(5-10)mg，依据小鼠和人的体表面积比值为0.0026：1，通过换算成分母是单位kg，得到多奈哌齐的最低安全有效剂量是5×0.0026×50＝0.65mg/kg，多奈哌齐的最高安全有效剂量是10×0.0026×50＝1.3mg/kg，即正常标准体重小鼠多奈哌齐的安全有效剂量是(0.65-1.3)mg/kg，换算成分子是单位g，得到正常标准体重小鼠多奈哌齐的安全有效剂量是(0.00065-0.0013)g/kg，因此选择0.001g/kg多奈哌齐安全有效剂量对AD小鼠进行实验研究。

2.3实验动物分组及其给药

2.3.1动物分组

采用Aβ_1-42、D-半乳糖和三氯化铝制备AD小鼠模型，实验确定40只AD小鼠，将AD小鼠随机分成模型组、多奈哌齐组、中药组合物高、中、低剂量组(分别简称高、中、低剂量组)，每组8只。另设定同月龄、同背景、健康的C57BL/6小鼠8只为对照组。

2.3.2动物给药

对照组、模型组小鼠分别给予等量生理盐水灌胃，多奈哌齐组给予多奈哌齐0.001g/kg灌胃，中药组合物组按照1g中药组合物干粉相当于中药组合物原药材3.61g，将干粉用生理盐水溶解后灌胃，中药组合物高、中、低剂量组分别给予相当于中药组合物原药材36.66g/kg、18.33g/kg、9.17g/kg的干粉溶液灌胃，灌胃持续40d。

2.4定位航行实验

定位航行实验用于检测小鼠的学习能力，采用Morris水迷宫仪器(安徽淮北正华生物仪器设备有限公司)进行测定。Morris水迷宫主要结构包括圆形的水池、移动的平台、电脑、摄像机和软件分析系统。实验设定的基本条件包括水温(23±2)℃；水深20cm，高于移动平台1cm；移动的平台放于第四象限；保持室内外的参照物一致；水池内放上奶粉及其白色素；小鼠每进行一次Morris水迷宫测试后均需使用吹干机吹干小鼠；水池的边缘标记好四个象限；测试房间内减少噪音干扰。Morris水迷宫实验设定的时间是5d，其中第1、2、3、4d为训练时间，第5d为测试时间。每次训练时间为60s，若60s内未找到移动平台，则将小鼠引至平台停留15s，此逃避潜伏期为60s。第5d开始测试小鼠的学习能力，记录小鼠到达移动平台位置的逃避潜伏期，以此评价小鼠的学习能力。

2.5空间探索实验

空间探索实验用于检测各组小鼠的记忆能力，Morris水迷宫实验过程及其注意事项同上(2.4)，在测试第5d时候撤去移动平台，测试在60s内小鼠找到移动平台的游泳距离，以此来评价小鼠的记忆能力。

2.6跨越平台实验

跨越平台实验用于检测小鼠的学习记忆保持能力，Morris水迷宫实验过程及注意事项同上(2.4)，在测试第5d时候撤去移动平台，测试在60s内小鼠跨越平台所在位置的次数(跨平台次数)及其小鼠在原平台所在象限的游泳时间(目标象限停留时间)，以此来评价小鼠的学习记忆保持能力。

2.7透射电子显微镜观察海马CA1区结构

2.7.1心脏灌注

Morris水迷宫实验结束后，小鼠采取水合氯醛(浓度为10％)腹腔注射进行麻醉，小鼠麻醉好后，固定小鼠的四肢和头部，剪开胸腔，充分暴露心脏，使用输液器的针头直接刺入小鼠左心室心尖搏动最明显的部位，剪开右心耳，缓慢匀速点滴生理盐水100ml。观察小鼠肝脏组织逐渐变白，直到小鼠肝脏完全变白为止，同时右心耳流出清澈液体。改用2.5％戊二醛进行缓慢匀速灌注大约70ml，随时观察小鼠四肢及其尾巴，直到小鼠四肢及其尾巴僵硬为止，确定小鼠灌注成功。

2.7.2透射电子显微镜观察

将小鼠放到超净工作台(苏州博莱尔净化设备有限公司)上，取材小鼠脑组织，寻找海马，海马CA1区切成1-3mm³的小块，放入2.5％戊二醛中预固定2h、四氧化锇固定、脱水、包埋、CM1900冰冻切片机(德国Leica公司)切片、染色，TECNAIG2型透射电子显微镜(FEI/Philips公司)观察小鼠脑组织海马CA1区的形态结构。

2.8测定小鼠脑组织BBB通透性

小鼠脑组织BBB通透性用脑组织伊文氏蓝(EB)渗出量来表示。取4mgEB加甲酰胺溶液至25ml(160μg/ml)，混匀；按照倍比稀释方法依次配成8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml的EB标准溶液；45℃避光孵育72h；实验以甲酰胺溶液为空白对照进行分析，使用6100型RT-雷杜酶标仪(美国RT公司)检测630nm的吸光度值(A)。以EB浓度为横坐标，吸光度值(A)为纵坐标，求出标准曲线方程。

Morris水迷宫实验结束后，小鼠尾静脉注射2％EB，10％水合氯醛麻醉小鼠，针头扎入左心室灌注生理盐水，剪开右心耳，灌注生理盐水约70ml，超净工作台(苏州博莱尔净化设备有限公司)上迅速解剖，取脑组织，记录脑组织重量为脑组织湿重，脑组织浸泡于甲酰胺溶液，45℃避光孵育72h，匀浆，TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂)3000rpm/min离心10min。使用6100型RT-雷杜酶标仪(美国RT公司)，630nm处测定上清液吸光度值(A)。根据EB标准曲线求出EB含量，EB含量用EB浓度(μg/ml)或EB浓度/脑组织湿重(μg/g)来表示。其中，后者比前者评价小鼠脑组织BBB的通透性更为客观。

2.9测定海马APP、海马Aβ_1-42、血清Aβ_1-42及其海马IL-1β、TNF-α和IL-6

2.9.1海马样品制备

Morris水迷宫实验结束后，断头处死小鼠，使用超净工作台(苏州博莱尔净化设备有限公司)迅速在冰上取材小鼠脑组织，去除小脑和脑干，取材海马，匀浆，4℃冰箱静置匀浆液1h。TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂)3000rpm/min离心20min，取上清液，分装，检测海马样品蛋白含量。余下海马样品保存于-80℃冰箱(日本SANYO公司)备用。

2.9.2血清样品制备

Morris水迷宫实验结束后，抓取小鼠，眼科镊子快速摘除小鼠眼球，获得混合血。血液滴入离心管内，静置1h。TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂)3000rpm/min离心20min，将血清转移到EP小管内，检测血清Aβ_1-42，计算血清Aβ_1-42含量。余下的血清保存于-80℃冰箱(日本SANYO公司)备用。

2.9.3采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定

严格按照酶联免疫试剂盒的说明书进行操作。设置空白孔、标准品孔及样品孔。各孔中加入相应的物质。37℃孵育30min，弃上清液。每孔加入酶标抗体50μl混匀。37℃孵育30min，弃上清液。洗涤好后每个孔内按照顺序加入显色剂A50μl、显色剂B50μl混匀。37℃孵育30min，弃上清液。每个孔内加入50μl终止液，终止本次ELISA的实验反应。采用6100型RT-雷杜酶标仪(美国RT公司)进行测定450nm的波长下的吸光度值(OD)。根据标准曲线的方程及其各孔的吸光度值(OD)计算出样品蛋白的含量。

2.10测定脑组织T-AOC、SOD、GSH-PX和MDA含量

Morris水迷宫实验测定结束后，麻醉小鼠(10％水合氯醛)，取材小鼠全脑，取材海马，匀浆，静置1h，TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂)3000rpm/min离心20min，取上清液，进行分装。按照试剂盒说明书测定T-AOC、SOD、GSH-PX和MDA含量。

2.11测定海马LRP1和ApoJ蛋白表达

2.11.1心脏灌注

Morris水迷宫实验结束后，水合氯醛麻醉小鼠，剪开胸腔，充分暴露心脏，剪开右心耳，左心室心尖处缓慢匀速点滴生理盐水100ml，观察小鼠肝脏组织完全变白为止，改用4％多聚甲醛匀速灌注大约50ml，直到小鼠四肢及其尾巴僵硬为止，确定小鼠灌注成功。

2.11.2石蜡切片

小鼠心脏灌注好后，超净工作台(苏州博莱尔净化设备有限公司)上准备取材全脑组织，去除小脑和脑干，将脑组织修整齐后，放到含有4％多聚甲醛的固定容器中24h。使用从低浓度逐渐过渡到高浓度的乙醇脱水，二甲苯透明，脑组织放到融化的液态石蜡，石蜡块放到冷水30min，切片机对脑组织进行连续切片，切片的厚度是5μm，切片裱于经过多聚赖氨酸处理过的玻片上，切片烘烤2h，保存于4℃冰箱中。

2.11.3测定蛋白表达

采用免疫组织化学的方法测定海马LRP1和ApoJ蛋白表达。石蜡切片脱蜡、3％H₂O₂处理、加入一抗、4℃冰箱过夜、PBS洗涤、加入二抗、37℃温箱孵育、PBS洗涤、DAB显色、光学显微镜下观察切片、蒸馏水冲洗、苏木精复染、PBS洗涤、分化、蓝化、脱水、透明、封片。设立阴性对照组和阳性对照组，可以排除假阳性和假阴性。采用HMIAS高清晰度彩色医学图文分析系统(武汉千屏影像技术有限公司)进行分析，计数各组平均光密度值，比较分析海马LRP1和ApoJ蛋白的表达量。

2.12测定海马LRP1mRNA和ApoJmRNA的表达

采用Real-time-PCR测定海马LRP1和ApoJmRNA的表达。需要将新鲜小鼠海马组织的RNA反转录成cDNA，设计特异性引物。

β-actionForwardPrimer：5’-CGTGCGTGACATCAAAGAGAA-3’，

ReversePrimer：5’-AACCGCTCGTTGCCAATAGT-3’；

LRP1ForwardPrimer：5’-CCGACTGGCGAACAAATACAC-3’，

ReversePrimer：5’-ATCGGCTTTGTTGCACGTG-3’；

ApoJForwardPrimer：5’-TGACCCCATCACAGTGGTGTT-3’，

ReversePrimer：5’-GCTTTTCCTGCGGTATTCCTG-3’。

加入特殊SYBRGreenI荧光材料，SYBRGreenI荧光材料与双链的DNA结合后，绿色荧光物质荧光信号会明显增加。设置参数50℃2min，95℃10min，95℃15s，60℃1min，40Cycles。通过Real-time-PCR进行实时的监测SYBRGreenI荧光信号的强弱，得到实验数据，Real-time-PCR所有数据均采用2^-ΔΔCt法计算。

2.13测定脏器指数

Morris水迷宫实验测试结束后，断头处死，超净工作台(苏州博莱尔净化设备有限公司)上解剖小鼠，取材小鼠脾、胸腺、脑、心、肺、肾和肝，洗涤脏器，吸干水分，PLZOZ-S电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)称量小鼠脏器质量，计算小鼠的脏器指数。

脏器指数(mg/g)＝脏器质量(mg)/小鼠体重(g)

2.14测定小鼠体重

Morris水迷宫实验测试结束后，测定各组小鼠的体重，统计体重数据，计算比较各组小鼠的体重差异，以此评价中药组合物的副作用。

2.15统计分析

采用SPSS19.0软件统计分析，数据采用表示，多组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义，P＞0.05表示差异无统计学意义。

3结果

3.1中药组合物对AD小鼠逃避潜伏期的影响

通过定位航行实验检测小鼠的逃避潜伏期。随着各组小鼠训练时间的延长，各组小鼠的逃避潜伏期均表现出下降的趋势。

统计分析测试第5d的逃避潜伏期，结果表明，与对照组小鼠逃避潜伏期(22.51±4.42)比较，模型组AD小鼠逃避潜伏期(39.71±6.75)明显延长(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠逃避潜伏期(39.71±6.75)比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组小鼠逃避潜伏期分别是(24.82±6.51)、(25.65±8.39)、(26.42±7.24)，显示小鼠逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠逃避潜伏期(39.71±6.75)比较，低剂量组小鼠逃避潜伏期(36.24±6.15)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表1、图1。

表1中药组合物对AD小鼠逃避潜伏期的影响(n＝8)

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.2中药组合物对AD小鼠游泳距离的影响

通过空间探索实验检测小鼠的游泳距离。随着各组小鼠训练时间的延长，各组小鼠的游泳距离均表现出下降的趋势。

统计分析第5d的游泳距离，结果表明，与对照组小鼠游泳距离(687.45±82.73)比较，模型组AD小鼠游泳距离(853.75±70.15)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠游泳距离(853.75±70.15)比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组小鼠游泳距离分别是(692.92±159.59)、(704.53±127.35)、(713.38±132.61)，显示小鼠游泳距离明显减少(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠游泳距离(853.75±70.15)比较，低剂量组小鼠游泳距离(818.26±94.80)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表2、图2。

表2中药组合物对AD小鼠游泳距离的影响(n＝8)

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.3中药组合物对AD小鼠跨平台次数和目标象限停留时间的影响

通过跨越平台实验检测小鼠的跨平台次数，以此评价小鼠的学习记忆保持能力。结果表明，与对照组小鼠跨平台次数(3.63±1.41)比较，模型组AD小鼠跨平台次数(1.75±0.71)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠跨平台次数(1.75±0.71)比较，多奈哌齐组小鼠跨平台次数(3.38±1.19)、高剂量组小鼠跨平台次数(3.50±1.20)、中剂量组小鼠跨平台次数(3.25±1.67)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠跨平台次数(1.75±0.71)比较，低剂量组小鼠跨平台次数(1.88±0.83)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表3、图3。

通过跨越平台实验检测小鼠的目标象限停留时间，以此来评价小鼠的学习记忆保持能力。结果表明，与对照组小鼠目标象限停留时间(24.17±3.25)比较，模型组AD小鼠目标象限停留时间(13.26±2.87)明显缩短(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠目标象限停留时间(13.26±2.87)比较，多奈哌齐组小鼠目标象限停留时间(22.06±3.93)、高剂量组小鼠目标象限停留时间(21.21±3.71)、中剂量组小鼠目标象限停留时间(19.53±2.77)明显延长(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠目标象限停留时间(13.26±2.87)比较，低剂量组小鼠目标象限停留时间(15.56±3.17)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表3、图3。

表3中药组合物对AD小鼠跨平台次数和目标象限停留时间的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.4中药组合物对AD小鼠海马CA1区超微结构的影响

3.4.1中药组合物对AD小鼠海马CA1区神经元超微结构的影响

透射电子显微镜观察海马CA1区神经元的结构显示，对照组小鼠海马CA1区神经元形态比较规则，细胞体较大，细胞核椭圆形，细胞核大，细胞质丰富；模型组AD小鼠海马CA1区神经元细胞质内细胞器不丰富，细胞核小而圆；多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组小鼠海马CA1区神经元细胞体较大，形态规则，细胞核较大，细胞核椭圆形；低剂量组小鼠海马CA1区神经元细胞体不规则，细胞核较小，细胞核不规则。见图4。

3.4.2中药组合物对AD小鼠海马CA1区神经元细胞质超微结构的影响

透射电子显微镜观察海马CA1区神经元细胞质的结构显示，对照组小鼠海马CA1区神经元细胞质丰富，线粒体和粗面内质网清晰可见，核膜清晰；模型组AD小鼠海马CA1区神经元细胞质内线粒体较少，空泡较多，粗面内质网较少，高尔基复合体较少，核膜较清晰；多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组小鼠海马CA1区神经元细胞质内线粒体、粗面内质网、高尔基复合体等细胞器较多，神经元的细胞器不同程度地增加，核膜下可见染色质；低剂量组小鼠海马CA1区神经元细胞质内线粒体较少，空泡较少。见图5。

3.4.3中药组合物对AD小鼠海马CA1区毛细血管超微结构的影响

透射电子显微镜观察海马CA1区毛细血管的结构显示，对照组小鼠海马CA1区毛细血管形态规则，内皮细胞核扁椭圆形，内皮细胞完整，毛细血管内可见到几个双凹圆盘状的红细胞；模型组AD小鼠海马CA1区毛细血管扁椭圆形，毛细血管管腔较小，内皮细胞核不清晰，毛细血管外侧有圆形的空泡；多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组小鼠海马CA1区毛细血管形态比较规则，管腔清晰，毛细血管完整；低剂量组小鼠海马CA1区毛细血管不规则，管腔外侧有少量空泡，毛细血管管腔较小。见图6。

3.5中药组合物对AD小鼠脑组织BBB通透性的影响

脑组织BBB的通透性使用EB浓度和EB含量来表示，其中后者考虑到了小鼠脑组织的重量，评价脑组织BBB通透性更为客观。测定小鼠脑组织EB浓度的标准曲线方程为Y＝0.2036X+0.1785，R²＝0.9611。

统计分析结果表明，与对照组小鼠脑组织EB浓度(0.27±0.07)比较，模型组AD小鼠脑组织EB浓度(0.44±0.12)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠脑组织EB浓度(0.44±0.12)比较，多奈哌齐组小鼠脑组织EB浓度(0.29±0.07)、高剂量组小鼠脑组织EB浓度(0.31±0.09)、中剂量组小鼠脑组织EB浓度(0.32±0.07)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠脑组织EB浓度(0.44±0.12)比较，低剂量组小鼠脑组织EB浓度(0.39±0.12)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表4、图7。

统计分析结果表明，与对照组小鼠脑组织EB含量(1.21±0.36)比较，模型组AD小鼠脑组织EB含量(2.11±0.60)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠脑组织EB含量(2.11±0.60)比较，多奈哌齐组小鼠脑组织EB含量(1.29±0.31)、高剂量组小鼠脑组织EB含量(1.39±0.40)、中剂量组小鼠脑组织EB含量(1.45±0.33)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠脑组织EB含量(2.11±0.60)比较，低剂量组小鼠脑组织EB含量(1.84±0.56)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表4、图7。

表4中药组合物对AD小鼠脑组织BBB通透性的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.6中药组合物对AD小鼠海马APP含量的影响

通过ELISA方法检测AD小鼠海马APP的含量，测定小鼠海马APP的标准曲线方程为Y＝0.0007X+0.2113，R²＝0.9669。统计分析结果表明，与对照组小鼠海马APP含量(525.11±135.36)比较，模型组AD小鼠海马APP含量(743.50±79.21)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马APP含量(743.50±79.21)比较，多奈哌齐组小鼠海马APP含量(547.79±128.37)、高剂量组小鼠海马APP含量(573.74±159.08)、中剂量组小鼠海马APP含量(587.25±141.65)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马APP含量(743.50±79.21)比较，低剂量组小鼠海马APP含量(692.55±141.55)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表5、图8。

表5中药组合物对AD小鼠海马APP含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.7中药组合物对AD小鼠海马Aβ_1-42含量的影响

通过ELISA方法检测AD小鼠海马Aβ_1-42的含量，测定小鼠海马Aβ_1-42的标准曲线方程为Y＝0.0015X+0.1772，R²＝0.9767。统计分析结果表明，与对照组小鼠海马Aβ_1-42含量(235.14±73.35)比较，模型组AD小鼠海马Aβ_1-42含量(344.06±89.61)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马Aβ_1-42含量(344.06±89.61)比较，多奈哌齐组小鼠海马Aβ_1-42含量(244.48±48.67)、高剂量组小鼠海马Aβ_1-42含量(256.98±76.98)、中剂量组小鼠海马Aβ_1-42含量(270.62±59.31)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马Aβ_1-42含量(344.06±89.61)比较，低剂量组小鼠海马Aβ_1-42含量(306.01±59.29)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表6、图9。

表6中药组合物对AD小鼠海马Aβ_1-42含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.8中药组合物对AD小鼠血清Aβ_1-42含量的影响

通过ELISA方法检测AD小鼠血清Aβ_1-42的含量，测定小鼠血清Aβ_1-42的标准曲线方程为Y＝0.0036X+0.1617，R²＝0.9772。统计分析结果表明，与对照组小鼠血清Aβ_1-42含量(146.41±32.82)比较，模型组AD小鼠血清Aβ_1-42含量(86.23±18.91)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠血清Aβ_1-42含量(86.23±18.91)比较，多奈哌齐组小鼠血清Aβ_1-42含量(142.29±23.90)、高剂量组小鼠血清Aβ_1-42含量(139.47±16.56)、中剂量组小鼠血清Aβ_1-42含量(127.17±25.23)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠血清Aβ_1-42含量(86.23±18.91)比较，低剂量组小鼠血清Aβ_1-42含量(100.07±19.72)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表7、图10。

表7中药组合物对AD小鼠血清Aβ_1-42含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.9中药组合物对AD小鼠海马IL-1β含量的影响

通过ELISA方法检测AD小鼠海马IL-1β的含量，测定小鼠海马IL-1β的标准曲线方程为Y＝0.0017X+0.0940，R²＝0.9949。统计分析结果表明，与对照组小鼠海马IL-1β含量(265.74±54.99)比较，模型组AD小鼠海马IL-1β含量(384.93±57.04)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马IL-1β含量(384.93±57.04)比较，多奈哌齐组小鼠海马IL-1β含量(273.68±54.83)、

高剂量组小鼠海马IL-1β含量(288.95±64.48)、中剂量组小鼠海马IL-1β含量(295.74±62.21)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马IL-1β含量(384.93±57.04)比较，低剂量组小鼠海马IL-1β含量(337.82±44.55)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表8、图11。

表8中药组合物对AD小鼠海马IL-1β含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.10中药组合物对AD小鼠海马TNF-α含量的影响

通过ELISA方法检测AD小鼠海马TNF-α的含量，测定小鼠海马TNF-α的标准曲线方程为Y＝0.0004X+0.1501，R²＝0.9804。统计分析结果表明，与对照组小鼠海马TNF-α含量(1026.52±223.49)比较，模型组AD小鼠海马TNF-α含量(1598.92±236.84)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马TNF-α含量(1598.92±236.84)比较，多奈哌齐组小鼠海马TNF-α含量(1125.06±249.55)、高剂量组小鼠海马TNF-α含量(1255.69±217.66)、中剂量组小鼠海马TNF-α含量(1297.77±257.31)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马TNF-α含量(1598.92±236.84)比较，低剂量组小鼠海马TNF-α含量(1456.42±203.82)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表9、图12。

表9中药组合物对AD小鼠海马TNF-α含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.11中药组合物对AD小鼠海马IL-6含量的影响

通过ELISA方法检测AD小鼠海马IL-6的含量，测定小鼠海马IL-6的标准曲线方程为Y＝0.0704X+0.1814，R²＝0.9755。统计分析结果表明，与对照组小鼠海马IL-6含量(6.29±1.47)比较，模型组AD小鼠海马IL-6含量(8.63±0.97)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马IL-6含量(8.63±0.97)比较，多奈哌齐组小鼠海马IL-6含量(6.44±1.27)、高剂量组小鼠海马IL-6含量(6.68±1.01)、中剂量组小鼠海马IL-6含量(6.79±2.11)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马IL-6含量(8.63±0.97)比较，低剂量组小鼠海马IL-6含量(7.78±1.27)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表10、图13。

表10中药组合物对AD小鼠海马IL-6含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.12中药组合物对AD小鼠海马T-AOC含量的影响

统计分析结果表明，与对照组小鼠海马T-AOC含量(1.28±0.19)比较，模型组AD小鼠海马T-AOC含量(0.68±0.17)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马T-AOC含量(0.68±0.17)比较，多奈哌齐组小鼠海马T-AOC含量(1.22±0.21)、高剂量组小鼠海马T-AOC含量(1.25±0.29)、中剂量组小鼠海马T-AOC含量(1.16±0.28)明显升高(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马T-AOC含量(0.68±0.17)比较，低剂量组小鼠海马T-AOC含量(0.85±0.18)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表11、图14。

表11中药组合物对AD小鼠海马T-AOC含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.13中药组合物对AD小鼠海马SOD含量的影响

统计分析结果表明，与对照组小鼠海马SOD含量(198.25±19.37)比较，模型组AD小鼠海马SOD含量(109.75±24.12)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马SOD含量(109.75±24.12)比较，多奈哌齐组小鼠海马SOD含量(195.76±25.85)、高剂量组小鼠海马SOD含量(189.38±23.75)、中剂量组小鼠海马SOD含量(166.04±25.22)明显升高(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马SOD含量(109.75±24.12)比较，低剂量组小鼠海马SOD含量(129.47±34.83)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表12、图15。

表12中药组合物对AD小鼠海马SOD含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.14中药组合物对AD小鼠海马GSH-PX含量的影响

统计分析结果表明，与对照组小鼠海马GSH-PX含量(480.69±56.62)比较，模型组AD小鼠海马GSH-PX含量(362.21±43.36)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马GSH-PX含量(362.21±43.36)比较，多奈哌齐组小鼠海马GSH-PX含量(476.37±72.10)、高剂量组小鼠海马GSH-PX含量(440.71±67.64)、中剂量组小鼠海马GSH-PX含量(456.92±80.11)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马GSH-PX含量(362.21±43.36)比较，低剂量组小鼠海马GSH-PX含量(378.71±46.19)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表13、图16。

表13中药组合物对AD小鼠海马GSH-PX含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.15中药组合物对AD小鼠海马MDA含量的影响

统计分析结果表明，与对照组小鼠海马MDA含量(6.91±1.53)比较，模型组AD小鼠海马MDA含量(11.28±2.57)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马MDA含量(11.28±2.57)比较，多奈哌齐组小鼠海马MDA含量(7.55±1.84)、高剂量组小鼠海马MDA含量(8.47±2.07)、中剂量组小鼠海马MDA含量(8.65±1.75)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马MDA含量(11.28±2.57)比较，低剂量组小鼠海马MDA含量(9.46±2.24)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表14、图17。

表14中药组合物对AD小鼠海马MDA含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.16中药组合物对AD小鼠海马LRP1蛋白表达的影响

LRP1蛋白表达于海马神经元、血管内皮细胞等，可以观察到在海马神经元细胞体和细胞质内有棕黄色的颗粒样物质。小鼠海马区域LRP1蛋白的表达量使用海马LRP1平均光密度值进行表示。

统计分析结果表明，与对照组小鼠海马LRP1平均光密度值(0.34±0.09)比较，模型组AD小鼠海马LRP1平均光密度值(0.21±0.06)明显减少(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马LRP1平均光密度值(0.21±0.06)比较，多奈哌齐组小鼠海马LRP1平均光密度值(0.31±0.06)、高剂量组小鼠海马LRP1平均光密度值(0.33±0.13)、中剂量组小鼠海马LRP1平均光密度值(0.31±0.09)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马LRP1平均光密度值(0.21±0.06)比较，低剂量组小鼠海马LRP1平均光密度值(0.22±0.06)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表15、图18。

表15中药组合物对AD小鼠海马LRP1蛋白表达的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.17中药组合物对AD小鼠海马ApoJ蛋白表达的影响

ApoJ蛋白表达于海马神经元的细胞核内，细胞核内出现棕黄色的颗粒样物质为阳性表达的海马神经元。小鼠海马区域ApoJ蛋白的表达量使用海马ApoJ平均光密度值进行表示。

统计分析结果表明，与对照组小鼠海马ApoJ平均光密度值(0.31±0.07)比较，模型组AD小鼠海马ApoJ平均光密度值(0.19±0.04)明显减少(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马ApoJ平均光密度值(0.19±0.04)比较，多奈哌齐组小鼠海马ApoJ平均光密度值(0.29±0.08)、高剂量组小鼠海马ApoJ平均光密度值(0.27±0.05)、中剂量组小鼠海马ApoJ平均光密度值(0.28±0.08)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马ApoJ平均光密度值(0.19±0.04)比较，低剂量组小鼠海马ApoJ平均光密度值(0.23±0.07)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表16、图19。

表16中药组合物对AD小鼠海马ApoJ蛋白表达的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.18中药组合物对AD小鼠海马LRP1mRNA表达的影响

实验使用Real-time-PCR方法测定小鼠海马LRP1mRNA相对表达量，LRP1mRNA相对表达量采用2^-ΔΔCt进行表示。

统计分析结果表明，与对照组小鼠海马LRP1mRNA相对表达量(1.04±0.32)比较，模型组AD小鼠海马LRP1mRNA相对表达量(0.51±0.14)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马LRP1mRNA相对表达量(0.51±0.14)比较，多奈哌齐组小鼠海马LRP1mRNA相对表达量(0.92±0.28)、高剂量组小鼠海马LRP1mRNA相对表达量(0.86±0.20)、中剂量组小鼠海马LRP1mRNA相对表达量(0.75±0.15)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马LRP1mRNA相对表达量(0.51±0.14)比较，低剂量组小鼠海马LRP1mRNA相对表达量(0.55±0.18)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表17、图20。

表17中药组合物对AD小鼠海马LRP1mRNA表达的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.19中药组合物对AD小鼠海马ApoJmRNA表达的影响

使用Real-time-PCR法测定小鼠海马ApoJmRNA的相对表达量，ApoJmRNA相对表达量采用2^-ΔΔCt进行表示。

统计分析结果表明，与对照组小鼠海马ApoJmRNA相对表达量(1.03±0.26)比较，模型组AD小鼠海马ApoJmRNA相对表达量(0.55±0.19)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马ApoJmRNA相对表达量(0.55±0.19)比较，多奈哌齐组小鼠海马ApoJmRNA相对表达量(0.84±0.20)、高剂量组小鼠海马ApoJmRNA相对表达量(0.89±0.23)、中剂量组小鼠海马ApoJmRNA相对表达量(0.86±0.27)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠海马ApoJmRNA相对表达量(0.55±0.19)比较，低剂量组小鼠海马ApoJmRNA相对表达量(0.65±0.09)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表18、图21。

表18中药组合物对AD小鼠海马ApoJmRNA表达的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.20中药组合物对AD小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数的影响

统计分析结果表明，与对照组小鼠脾指数(3.15±0.24)比较，模型组AD小鼠脾指数(2.65±0.19)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠脾指数(2.65±0.19)比较，多奈哌齐组小鼠脾指数(3.07±0.22)、高剂量组小鼠脾指数(3.05±0.27)、中剂量组小鼠脾指数(2.97±0.31)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠脾指数(2.65±0.19)比较，低剂量组小鼠脾指数(2.71±0.24)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表19、图22。

统计分析结果表明，与对照组小鼠胸腺指数(2.21±0.25)比较，模型组AD小鼠胸腺指数(1.83±0.15)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠胸腺指数(1.83±0.15)比较，多奈哌齐组小鼠胸腺指数(2.18±0.17)、高剂量组小鼠胸腺指数(2.14±0.28)、中剂量组小鼠胸腺指数(2.10±0.30)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠胸腺指数(1.83±0.15)比较，低剂量组小鼠胸腺指数(1.89±0.24)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表19、图22。

统计分析结果表明，与对照组小鼠脑指数比较(8.22±0.15)，模型组AD小鼠脑指数(7.66±0.21)明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠脑指数(7.66±0.21)比较，多奈哌齐组小鼠脑指数(8.12±0.19)、高剂量组小鼠脑指数(8.07±0.24)、中剂量组小鼠脑指数(7.98±0.26)明显增加(P＜0.05)，差异有统计学意义；与模型组AD小鼠脑指数(7.66±0.21)比较，低剂量组小鼠脑指数(7.81±0.21)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表19、图22。

表19中药组合物对AD小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05；与模型组比较：²⁾P＜0.05，³⁾P＞0.05

3.21中药组合物对AD小鼠心指数、肺指数、肾指数和肝指数的影响

统计分析结果表明，与对照组小鼠心指数(5.31±0.14)比较，模型组AD小鼠心指数(5.29±0.11)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义；与模型组AD小鼠心指数(5.29±0.11)比较，多奈哌齐组小鼠心指数(5.31±0.16)、高剂量组小鼠心指数(5.38±0.15)、中剂量组小鼠心指数(5.36±0.12)、低剂量组小鼠心指数(5.28±0.16)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表20、图23。

统计分析结果表明，与对照组小鼠肺指数(6.44±0.16)比较，模型组AD小鼠肺指数(6.39±0.24)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义；与模型组AD小鼠肺指数(6.39±0.24)比较，多奈哌齐组小鼠肺指数(6.37±0.23)、高剂量组小鼠肺指数(6.48±0.22)、中剂量组小鼠肺指数(6.46±0.21)、低剂量组小鼠肺指数(6.45±0.25)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表20、图23。

统计分析结果表明，与对照组小鼠肾指数(15.55±0.52)比较，模型组AD小鼠肾指数(15.52±0.40)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义；与模型组AD小鼠肾指数(15.52±0.40)比较，多奈哌齐组小鼠肾指数(15.56±0.68)、高剂量组小鼠肾指数(15.64±0.57)、中剂量组小鼠肾指数(15.60±0.53)、低剂量组小鼠肾指数(15.70±0.53)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表20、图23。

统计分析结果表明，与对照组小鼠肝指数(40.14±1.40)比较，模型组AD小鼠肝指数(40.79±3.13)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义；与模型组AD小鼠肝指数(40.79±3.13)比较，多奈哌齐组小鼠肝指数(41.18±3.02)、高剂量组小鼠肝指数(40.76±4.40)、中剂量组小鼠肝指数(41.75±4.04)、低剂量组小鼠肝指数(41.50±4.55)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表20、图23。

表20中药组合物对AD小鼠心指数、肺指数、肾指数和肝指数的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05

3.22中药组合物对AD小鼠体重的影响

统计分析结果表明，与对照组小鼠体重(27.11±1.23)比较，模型组AD小鼠体重(27.24±1.42)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义；与模型组AD小鼠体重(27.24±1.42)比较，多奈哌齐组小鼠体重(27.74±1.28)、高剂量组小鼠体重(27.36±1.62)、中剂量组小鼠体重(27.86±1.26)、低剂量组小鼠体重(27.19±1.46)改变不明显(P＞0.05)，差异无统计学意义。见表21、图24。

表21中药组合物对AD小鼠体重的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05

以上实验表明，中药组合物可以改善AD小鼠学习记忆能力及海马形态结构，改善AD小鼠脑组织BBB的通透性，改善AD小鼠海马APP、海马Aβ_1-42及血清Aβ_1-42水平，降低AD小鼠海马IL-1β、TNF-α和IL-6水平，增强AD小鼠海马抗氧化能力，增加AD小鼠海马LRP1和ApoJ蛋白表达，改善脾指数、胸腺指数和脑指数，并且对AD小鼠其他脏器指数和体重无影响，说明中药组合物治疗AD有效并且无副作用，这为进一步开展中药新药防治AD奠定了基础。

综上所述，由十二味药材组成的中药组合物通过作用于多个靶点蛋白来防治AD，且无副作用。

以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物，其特征在于由以下重量份的各原料药组成：黄芪10-30重量份、山慈菇4-12重量份、昆布5-13重量份、大枣5-15重量份、川芎2-10重量份、桂枝2-10重量份、三棱4-12重量份、牡蛎10-30重量份、知母5-15重量份、土茯苓30-40重量份、白术1-5重量份以及甘草2-10重量份。

2.如权利要求1所述的一种用于防治阿尔茨海默病的中药组合物，其特征在于由以下重量份的各原料药组成：黄芪20重量份、山慈菇8重量份、昆布9重量份、大枣10重量份、川芎6重量份、桂枝6重量份、三棱8重量份、牡蛎20重量份、知母10重量份、土茯苓35重量份、白术3重量份以及甘草6重量份。

3.一种临床上适宜的用于防治阿尔茨海默病的中药制剂，其特征在于由权利要求1或2所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。

4.如权利要求3所述的中药制剂，其特征在于所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

5.一种制备权利要求1或2所述的中药组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)按照权利要求1或2所述的重量份称取各原料药，将各原料药混合均匀后放入高颈圆底烧瓶中，加入药物重量8-12倍的蒸馏水，浸泡1-2h后，煎煮1-2h，冷却；

(2)将步骤(1)冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液；

(3)步骤(2)剩余的药物残渣放入高颈圆底烧瓶中，重复步骤(1)和(2)得到第二次滤液，合并二次滤液；

(4)设定电热恒温鼓风干燥箱温度为70℃，干燥4-5d，得到所述中药组合物的干膏。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，研磨，分子筛处理，得到所述中药组合物的干粉。

7.权利要求1或2所述的中药组合物在制备防治阿尔茨海默病的药物中的应用。