CN107279990A - 一种洋海参胶囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于海洋生物技术领域,特别涉及一种洋海参胶囊及其制备方法;包括西洋参、干海参及倍他环糊精,所述干海参的质量分数为50%~60%,西洋参的质量分数为30%~35%,倍他环糊精的质量分数为10%~15%。本发明采用了大剂量海参含量,海参与西洋参的比值最高达到:2:1,由于西洋参为凉性,而海参为热性,在本发明的西洋参与海参比值内,海参可以利用自身的热性充分抵制西洋参的凉性,抵制服用西洋参后,出现的畏寒、体温下降、食欲不振、腹痛腹泻的副作用。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,特别涉及一种洋海参胶囊及其制备方法。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制,是人体识别和消灭外来侵入的病毒和细菌,处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。
当今社会造成免疫力降低的原因很多,比如心理紧张不安、焦急等心理劳累;肉体劳累,睡眠不足或过度劳累,会跟心理紧张一样加重植物性神经的负担,而且也会给内分泌系统及免疫系统带来不良影响,从而造成免疫力下降;消极悲观,过于消极悲观的性格会造成免疫力降低;吃多过主食、摄入过多碳水化合物导致免疫力低下;以上等等原因都会造成身体免疫力下降。免疫力低下最直接的表现就是容易生病,因经常患病,加重了机体的消耗,所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种增强免疫力的洋海参胶囊。
本发明是通过以下技术方案实现的:
一种洋海参胶囊,包括西洋参、干海参及包接剂,所述干海参的质量分数为50%~60%,西洋参的质量分数为30%~35%,包接剂的质量分数为10%~15%。
进一步,所述包接剂为倍他环糊精、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素及羟丙基淀粉。
进一步,所述西洋参的质量分数为58%,干海参的质量分数为31%,包接剂的质量分数为11%。
进一步,所述西洋参的质量分数为55%,干海参的质量分数为32%,包接剂的质量分数为13%。
一种洋海参胶囊的制备方法,包括如下步骤进行:
(1)原料处理:取鲜海参制备干海参,干海参去包装,备用;包接剂去包装,备用;
(2)粉碎与净化:取西洋参对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小 0.5-1.0mm,过60目筛,得西洋参粗粉,再对其进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10-25μm,过200目筛,得西洋参粗粉,经过60Co辐照灭菌,辐照剂量为4KGy,备用;将干海参进行再次粗粉碎,过80目筛,然后在进行超微粉碎,过200目筛,备用。
(3)混合:将步骤(2)中的备用的原料混合25~35分钟,在常温下使其搅拌混合均匀,搅拌速度为80-120转/分钟,然后将步骤(1)中备用的包接剂加入到上述混合物中,备用;
(4)烘干:步骤(3)中混合后的原料,60~70℃进行烘干,烘干4~6小时,烘干后水分小于7%;
(5)制粒:取明胶空心胶囊去外包,每粒明胶空心胶囊填充0.3g步骤(4) 中混合物制成一粒;
(6)包装:取聚氯乙烯固体药用硬片和药品包装用铝箔去外包,将步骤(5) 中制备的明胶空心胶囊每十二粒制成一板,进行外包装,检验,入库。
进一步,所述鲜海参制备干海参的步骤包括:
a.活海刺参进场验收;宰杀、去内脏;
b.清洗处理冰水浸泡1~8小时;
c.靠发刺参:将冰水中的刺身置于放有刺参量2-3倍水量的锅内加热,加热并搅拌,温度在60℃~90℃,搅拌30min,出锅与食用盐搅拌,后装在密封箱内焖8~10小时;取出盐焖的刺参投入去离子水中80~90min,再投放到装有多于刺身的食用水的锅内加热,加热至80~100℃,并搅拌3~5小时;取出置于保温容器内,加入8-10倍于刺参的可饮用水,水温10~50℃,发14~16小时;
d.采用微波定型;
e.FD冻干得到冻干海参,产品含水率为5~8%;
f.将冻干海参粗粉:取步骤e中干海参对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小0.5-1.0mm,过60目筛,得干海参粗粉;
g.产品检验;密封包装。
进一步,所述微波定型:将靠发好的刺参,通过微波输出频率的微波隧道,控制温度20~90℃,传递速度1~8米/分钟,杀死细菌。
进一步,所述FD冻干:将微波处理后的刺参放入冻干器中进行冷冻干燥,步骤包括:
低温预冻阶段:对干燥仓进行制冷,使物料温度降至-35℃以下,达到-35℃以下时刻起,保持-35℃以下的温度,对物料进行预冻保温5~6小时;
升华干燥阶段:干燥初期,将加热温度控制在65~70℃范围之内,并控制压强均低于25Pa,当系统显示物料温度接近-15℃时,迅速降低加热温度至55℃左右;
解析干燥阶段:控制加热温度在52-54℃范围之内,继续保持压强均低于 25Pa,当物料干燥已接近干燥终点时,保持加热温度于53℃左右,继续干燥5-6 小时,最终产品含水率为5-8%。
进一步,所述干海参的超微粉碎过程:采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到22000-23000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10-25μm,时间 2-3h,得到超微干海参粉。
进一步,所述西洋参的超微粉碎过程:采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到22000-23000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10-25μm,时间2-3h,得到超微西洋参粉。
本发明的有益效果:
本发明胶囊中采用了大剂量西洋参含量,西洋参与海参的比值最高达到: 2:1,由于西洋参为凉性,而海参为热性,在本发明的西洋参与海参比值内,海参可以利用自身的热性充分抵制西洋参的凉性,抵制服用西洋参后,出现的畏寒、体温下降、食欲不振、腹痛腹泻的副作用。
本发明采用西洋参,干海参及倍他环糊精为原料,充分利用了西洋参和干海参不同的特性;利用干海参中含有氨基酸和牛磺酸促进西洋参中含有人参皂苷Rb1和Re发生水解反应,生成利于人体快速的吸收的皂苷元;本发明充分利用倍他环糊精的包接作用提高有效成分在人体内吸收性和持续性,同时倍他环糊精还具有防潮湿作用。
本发明中将西洋参和干海参经过超微粉碎后,增加了西洋参和干海参之间的接触面积,使得海参分子与西洋参分子之间充分融合,增加他们之间的性能的互补,并增大了西洋参和干海参混合物的其表面生物的活性,混合粉末极宜吸附在肠壁上,有效成分很快通过肠壁吸收进入血液,同时由于表面活性的提高,增强了肠壁对其的吸附力,必然增加在人体内的存留时间,从而增加了人体的吸收率。
具体实施方式
实施例1
(1)取鲜海参100g制备干海参,鲜海参制备干海参的步骤包括:
a.活海刺参进场验收;宰杀、去内脏;
b.清洗处理冰水浸泡6小时;
c.靠发刺参:将冰水中的刺身置于放有刺参量2倍水量的锅内加热,加热并搅拌,温度在80℃,搅拌30分钟,出锅与食用盐搅拌,后装在密封箱内焖9 小时,取出盐焖的刺参投入去离子水中85分钟,再投放到装有多于刺身的食用水的锅内加热,加热至90℃,并搅拌4小时,取出置于保温容器内,加入9倍于刺参的可饮用水,水温30℃,发15小时;
d.采用微波定型:经靠发好的刺参,通过微波输出频率的微波隧道,控制温度60℃,传递速度5米/分钟,杀死细菌;
e.FD冻干:FD冻干将微波处理后的刺参放入冻干器中进行冷冻干燥,步骤包括:
低温预冻阶段:对干燥仓进行制冷,使物料温度降至-35℃以下,达到-35℃以下时刻起,保持-35℃以下的温度,对物料进行预冻保温6小时;
升华干燥阶段:干燥初期,将加热温度控制在65℃范围之内,并控制压强均低于25Pa,当系统显示物料温度接近-15℃时,迅速降低加热温度至55℃左右;
解析干燥阶段:控制加热温度在53℃左右,继续保持压强均低于25Pa,当物料干燥已接近干燥终点时,保持加热温度于53℃左右,继续干燥6小时,最终产品含水率为5%。
f.先将冻干海参粗粉:取干海参对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小 0.5mm,过60目筛,得干海参粗粉,得到70g干海参粗粉;
g.产品检验;密封包装,备用;取13.2g倍他环糊精去包装,备用。
(2)粉碎与净化:取西洋参37.4g对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小0.5mm,过60目筛,得西洋参粗粉,再对其进行超微粉碎,采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到23000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10μ m,时间2h,过200目筛,得西洋参粉,经过60Co辐照灭菌,辐照剂量为4KGy,备用;将步骤(1)中干海参进行再次粗粉碎,过80目筛,然后进行超微粉碎,采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到23000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10μm,时间3h,得到超微干海参粉;过200目筛,备用。
(3)混合:将步骤(2)中的备用的原料混合35分钟,在常温下使其搅拌混合均匀,搅拌速度为120转/分钟,然后将步骤(1)中备用的包接剂加入到上述混合物中,备用。
(4)烘干:步骤(5)中混合后的原料,70℃进行烘干,烘干6小时,烘干后水分为5.2%,备用。
(5)制粒:取明胶空心胶囊去外包,每粒明胶空心胶囊填充0.3g步骤(4) 中备用原料制成一粒。
(6)包装:取聚氯乙烯固体药用硬片和药品包装用铝箔去外包,将步骤(5) 中制备的明胶空心胶囊每十二粒制成一板,进行外包装,检验,入库,得产品1。
实施例2
(1)取鲜海参120g制备干海参,鲜海参制备干海参的步骤包括:
a.活海刺参进场验收;宰杀、去内脏;
b.清洗处理冰水浸泡8小时;
c.靠发刺参:将冰水中的刺身置于放有刺参量2倍水量的锅内加热,加热并搅拌,温度在90℃,搅拌30分钟,出锅与食用盐搅拌,后装在密封箱内焖10小时,取出盐焖的刺参投入去离子水中90分钟,再投放到装有多于刺身的食用水的锅内加热,加热至100℃,并搅拌5小时,取出置于保温容器内,加入 10倍于刺参的可饮用水,水温50℃,发16小时;
d.采用微波定型:经靠发好的刺参,通过微波输出频率的微波隧道,控制温度90℃,传递速度8米/分钟,杀死细菌;
e.FD冻干:FD冻干将微波处理后的刺参放入冻干器中进行冷冻干燥,步骤包括:
低温预冻阶段:对干燥仓进行制冷,使物料温度降至-35℃以下,达到-35℃以下时刻起,保持-35℃以下的温度,对物料进行预冻保温6小时;
升华干燥阶段:干燥初期,将加热温度控制在70℃范围之内,并控制压强均低于25Pa,当系统显示物料温度接近-15℃时,迅速降低加热温度至55℃左右;
解析干燥阶段:控制加热温度在54℃左右,继续保持压强均低于25Pa,当物料干燥已接近干燥终点时,保持加热温度于53℃左右,继续干燥6小时,最终产品含水率为8%;
f.先将冻干海参粗粉:取干海参对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小0.5mm,过60目筛,得干海参粗粉,得到90g干海参粗粉;
g.产品检验;密封包装,备用;取15g倍他环糊精去包装,备用。
(2)粉碎与净化:取西洋参45g对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小 1.0mm,过60目筛,得西洋参粗粉,再对其进行超微粉碎,采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到22000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小25μm,时间2h,过200目筛,得西洋参粉,经过60Co辐照灭菌,辐照剂量为4KGy,备用;将步骤(1)中干海参进行再次粗粉碎,过80目筛,然后进行超微粉碎,采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到22000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小25μm,时间3h,得到超微干海参粉;过200目筛,备用。
(3)混合:将步骤(2)中的备用的原料混合35分钟,在常温下使其搅拌混合均匀,搅拌速度为120转/分钟,然后将步骤(1)中备用的包接剂加入到上述混合物中,备用。
(4)烘干:步骤(5)中混合后的原料,70℃进行烘干,烘干6小时,烘干后水分为6.5%,备用。
(5)制粒:取明胶空心胶囊去外包,每粒明胶空心胶囊填充0.3g步骤(4) 中备用原料制成一粒。
(6)包装:取聚氯乙烯固体药用硬片和药品包装用铝箔去外包,将步骤(5) 中制备的明胶空心胶囊每十二粒制成一板,进行外包装,检验,入库,得产品2。
实施例3
(1)取鲜海参110g制备干海参,鲜海参制备干海参的步骤包括:
a.活海刺参进场验收;宰杀、去内脏;
b.清洗处理冰水浸泡1小时;
c.靠发刺参:将冰水中的刺身置于放有刺参量三倍水量的锅内加热,加热并搅拌,温度在60℃,搅拌30分钟,出锅与食用盐搅拌,后装在密封箱内焖8 小时,取出盐焖的刺参投入去离子水中80分钟,再投放到装有多于刺身的食用水的锅内加热,加热至80℃,并搅拌3小时,取出置于保温容器内,加入8倍于刺参的可饮用水,水温10℃,发14小时;
d.采用微波定型:经靠发好的刺参,通过微波输出频率的微波隧道,控制温度90℃,传递速度8米/分钟,杀死细菌;
e.FD冻干:FD冻干将微波处理后的刺参放入冻干器中进行冷冻干燥,步骤包括:
低温预冻阶段:对干燥仓进行制冷,使物料温度降至-35℃以下,达到-35℃以下时刻起,保持-35℃以下的温度,对物料进行预冻保温5小时;
升华干燥阶段:干燥初期,将加热温度控制在70℃范围之内,并控制压强均低于25Pa,当系统显示物料温度接近-15℃时,迅速降低加热温度至55℃左右;
解析干燥阶段:控制加热温度在53℃左右,继续保持压强均低于25Pa,当物料干燥已接近干燥终点时,保持加热温度于53℃左右,继续干燥5小时,最终产品含水率为5%;
f.先将冻干海参粗粉:取干海参对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小0.5mm,过60目筛,得干海参粗粉,得到80g干海参粗粉;
g.产品检验;密封包装,备用;取18.9g倍他环糊精去包装,备用。
(2)粉碎与净化:取西洋参46.5g对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小0.5mm,过60目筛,得西洋参粗粉,再对其进行超微粉碎,采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到23000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10μm,时间2h,过200目筛,得西洋参粉,经过60Co辐照灭菌,辐照剂量为4KGy,备用;将步骤(1)中干海参进行再次粗粉碎,过80目筛,然后进行超微粉碎,采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到23000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10μm,时间2h,得到超微干海参粉;过200目筛,备用。
(3)混合:将步骤(2)中的备用的原料混合25分钟,在常温下使其搅拌混合均匀,搅拌速度为80转/分钟,然后将步骤(1)中备用的包接剂加入到上述混合物中,备用。
(4)烘干:步骤(5)中混合后的原料,70℃进行烘干,烘干4小时,烘干后水分为6%,备用。
(5)制粒:取明胶空心胶囊去外包,每粒明胶空心胶囊填充0.3g步骤(4) 中备用原料制成一粒。
(6)包装:取聚氯乙烯固体药用硬片和药品包装用铝箔去外包,将步骤(5) 中制备的明胶空心胶囊每十二粒制成一板,进行外包装,检验,入库,得产品3。
下面将通过动物实验和临床试验来证明本发明具有的技术效果。
本发明产品具有增强免疫力功能的实验,参考保健食品检验与技术规范 (2003版,中国人民共和国卫生部)
取本发明实施例2的产品2进行动物试验。
1.1 实验动物
SPF级ICR雌性小鼠200只,体重18-22g,每40只小鼠为一大组,共五大组,免疫Ⅰ组,进行碳廓清实验;免疫Ⅱ组,进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测试;免疫Ⅲ组,进行脏体比值测定、半数溶血值(HC50) 的测定和抗体生成细胞数的测定;免疫Ⅳ组,进行迟发型变态反应实验;免疫Ⅴ组,进行小鼠腹腔巨噬鸡红细胞实验;每大组40只小鼠按体重随机分为4小组,即对照组,低,中,高计量组,每组10只小鼠。
1.2 实验条件
实验期间环境温度23℃-24℃,湿度54%-56%。
1.3 剂量选择及样品处理
据人体口服推荐量,设本发明产品低、中、高的剂量分别为0.30g/kg.bw、 0.60g/kg.bw、1.80g/kg.bw,分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。试验时,分别取本发明产品3.00g、6.00g、18.00g加蒸馏水定容至200ml,按 0.20g/kg.bw体积给小鼠灌胃,对照组灌胃予以等体积的蒸馏水,每天一次,连续灌胃至少30天,结果见表1-5。从表中的实验数据及结果可以说明各剂量组实验初期、实验中期、实验末小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与对照组比较,差异均无显著性(p>0.05),说明对小鼠体重无显著影响。
1.4 主要仪器与试剂
动物台秤、分析天平、洁净工作台,二氧化碳培养箱、离心机、722分光光度计、恒温水浴箱、酶标仪、显微镜等。
无菌手术器械、游标卡尺、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。
SRBC、生理盐水、Hank,s液、RPMI1640培养液、小牛血清、青链霉素、ConA、 1%冰醋酸、1mol/L的HCL溶液、酸性异丙醇、MTT、PBS缓冲液(Ph7.2-7.4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂、YAC-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶Ⅰ、0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液、2.5%Triton、印度墨汁、0.1%的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。
1.5 实验方法
1.5.1 脏器/体重比值测定:称重后处死小鼠,取出脾脏和胸腺,在电子分析天平上称重,计算脏/体比值,结果见表6。从表中的实验数据及结果可以说明样品各剂量对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值无显著影响(p>0.05)。
1.5.2 迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)
小鼠腹腔注射2%(v/v)SRBC(0.2ml/每鼠)致敏后4天,测量左后足跖部厚度,然后在测量部位皮下注射20%(v/v)SRBC(0.2ul/每鼠),于注射后24h 测量左后跖部厚度,同一部位测量三次,取平均值。以攻击前后足跖厚度差值 (足跖肿胀度)来表示DTH的程度,结果见表7。从表中的实验数据及结果可以说明中、高剂量组小鼠迟发型变态反应能力与对照比较显著提高(p<0.05)。
1.5.3 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中,制成细胞悬液,经200 目筛网过滤,用Hank’s液洗2次,每次离心10分钟(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1ml完全培养液中,计数活细胞,用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3*106个/ml。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1ml,在其中一孔加 75ulConA液(相当于7.5ug/ml),另一孔作为对照,置于5%二氧化碳,37℃培养72小时。培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/ml)50ul/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1ml酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中,每个孔作3个平行孔,用酶标仪,以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示,结果见表8。从表中的实验数据及结果可以说明样品各剂量对小鼠淋巴细胞转化能力无显著影响(p>0.05)。
1.5.4 抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
取羊血,用生理盐水洗涤3次,每次离心(2000r/min)10min,将压积SRBC 用生理盐水配成2%(v/v)的细胞悬液,每鼠腹腔注射0.2ml。4天后将小鼠处死,取脾,轻轻磨碎,用Hanks液制成细胞悬液,200目筛网过滤,洗涤,离心 2次,最后将细胞悬浮在8mlHanks液中,计数细胞,并将细胞浓度调整为5*106个/ml。将表层培养基加热溶解后与等量的PH7.4、2倍浓度的Hanks液混合,分装小试管,每管0.5ml,再向管内加入用SA液配制的10%SRBC50ul(v/v)、20ul 脾细胞悬液(5*106个/ml),迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上,待琼脂糖凝固后将玻片水平扣放在破片架上,放入二氧化碳培养箱中温育1.5h,然后用SA液稀释的补体(1:8)加入到玻片凹槽内,继续温育1.5h后计数溶血空斑数,结果见表9。从表中的实验数据及结果可以说明中、高剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比较显著提高(p<0.05)。
1.5.5 半数溶血值(HC50)的测定
取羊血,用生理盐水洗涤3次,每只鼠经腹腔注射2%(v/v,用生理盐水配制)SRBC0.2ml进行免疫。4天后,摘除眼球去血于离心管内,放置约1h,将凝固血管壁剥离,使血清充分析出,2000rpm离心10min,收集血清。用SA缓冲液将血清稀释200倍,取1ml置试管内,依次加入10%(v/v,SA缓冲液配制)SRBC0.5ml,补体1ml(用SA缓冲液1:8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温30min后,冰浴终止反应。2000rpm离心10min,取上清 1ml,加都氏试剂3ml。同时取10%(v/v,SA缓冲液配制)SRBC0.25ml,加都氏试剂至4ml于另一试管中,充分混匀,放置10min后,于540nm处以对照管作空白,分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示,按下式计算:半数溶血值(HC50)=样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值*稀释倍数,结果见表10。从表中的实验数据及结果可以说明高剂量组小鼠半数溶血值 (HC50)与对照组比较显著提高(p<0.05)。
1.5.6 小鼠碳廓清实验
小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁,每10g体重注射0.1ml, 墨汁注入后立即计时,于注入墨汁后第2、10min,分别从内眦静脉丛取血20ul, 加入到2ml0.1%Na2CO3溶液中,摇匀。以0.1%Na2CO3溶液作空白对照,用722型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值(OD)。将小鼠处死,取肝、脾,称重,计算吞噬指数a,结果见表11。从表中的实验数据及结果可以说明样品各剂量对小鼠碳廓清能力无显著影响(p>0.05)。
1.5.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)
小鼠腹腔注射20%(v/v,用生理盐水配制)的鸡红细胞(2000rpm,10min)悬液1ml,间隔30min,颈椎脱臼处死,仰位固定于鼠板上,正中剪开腹壁皮肤,经腹腔注入生理盐水2ml,转动鼠板1min。取腹腔巨噬细胞洗液1ml,滴于载玻片上,放入垫有湿纱布的搪瓷盒内,置37℃孵箱温育30min。孵毕,于生理盐水中漂洗以除去未贴片细胞。晾干,以甲醇:丙酮(1:1)固定,4%(v/v)Giemsa- 磷酸缓冲液染色,用蒸馏水漂洗晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞,按下式计算吞噬率和吞噬指数:
吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数*100
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数,结果见表12-1和表12-2。从表中的实验数据及结果可以说明各剂量对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无显著影响(p>0.05)。
1.5.8 NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶测定法)
受试小鼠颈椎脱臼处死,无菌取脾,制成脾细胞悬液,用Hank,s液洗2次,每次离心10min(1000转/min),弃上清将细胞浆弹起,加入0.5ml灭菌水20秒,裂解红细胞后再加入0.5ml2倍Hank,s液及8mlHank,s液,1000rpm离心10min, 用1ml含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬,用1%冰醋酸稀释后计数,用台酚兰染色计数活细胞(活细胞数应在95%以上),调整细胞浓度2*107个/ml 此为数应细胞,取传代后24h生长良好的YCA-1细胞用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4*105个/ml此为靶细胞:取靶细胞和效应细胞各100ul(效靶比50: 1),加入U型96孔培养板中;靶细胞自然稀释孔加靶细胞和培养液各100ul, 靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5%Triton各100ul,上述各项均设三个平行孔,于37℃,5%二氧化碳培养箱中培养4h,然后将96孔培养板以1500r/min离心5min, 每孔吸取上清100ul置平底96孔培养板中,同时加入LHD基质液100ul,根据室温反应3-10min,每孔加入1mol/l的HCL30ul,在酶标仪490nm处测定光密度(OD)。
NK细胞活性=[(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔 OD)]*100%。见表13,从表中的实验数据及结果可以说明中、高剂量组小鼠NK 细胞活性与对照组比较显著提高(p<0.05)。
1.6 实验数据统计:用Excel、Spss软件进行数据转化和统计分析。用Spss 软件分析时,先对数据进行方差齐性检验,若方差齐,采用单因素方差分析进行总体比较,发现差异再用Dunnett法进行多个计量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换,满足方差齐性检验后,用转换后的数据进行统计,若变量转换后仍未达到方差齐,则改用秩和检验进行统计,发现总体比较有差异,则采用不要求方差齐性的Tamhane,sT2检验进行两两比较。
2 结果
2.1 样品对小鼠体重的影响
见表1-5。各剂量组实验初期、实验中期、实验末小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与对照组比较,差异均无显著性(p>0.05)。
表1 免疫Ⅰ组小鼠体重
表2 免疫Ⅱ组小鼠体重
表3 免疫Ⅲ组小鼠体重
表4 免疫Ⅳ组小鼠体重
表5 免疫Ⅴ组小鼠体重
2.2 样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
见表6。样品各剂量对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值无显著影响 (p>0.05)。
表6 样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
2.3 样品对小鼠细胞免疫功能的影响
2.3.1 样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
见表7。中、高剂量组小鼠迟发型变态反应能力与对照比较显著提高 (p<0.05)。
表7 样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
2.3.2 样品对小鼠ConA诱导的淋巴细胞转化能力的影响
见表8。样品各剂量对小鼠淋巴细胞转化能力无显著影响(p>0.05)。
表8 样品对小鼠淋巴细胞转化能力的影响
2.4 样品对体液免疫的影响
2.4.1 样品对小鼠抗体生成细胞数的影响
见表9。中、高剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比较显著提高 (p<0.05)。
表9 样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
2.4.2 样品对小鼠半数溶血值(HC50)的影响
见表10。高剂量组小鼠半数溶血值(HC50)与对照组比较显著提高(p<0.05)。
表10 样品对小鼠半数溶血值(HC50)的影响
2.5 样品对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
2.5.1 样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响
见表11。样品各剂量对小鼠碳廓清能力无显著影响(p>0.05)。
表11 样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响
2.5.2 样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
见表12-1、12-2样品各剂量对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无显著影响(p>0.05)。
表12-1 样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响
表12-2 样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响
2.6 样品对小鼠NK细胞活性的影响
见表13,中、高剂量组小鼠NK细胞活性与对照组比较显著提高(p<0.05)。
表13 样品对小鼠NK细胞活性的影响
取实施例1的产品1和实施例3的产品做与实施例2中产品2同样的动物实验,得到与产品2中同样的试验结论。
结论:在本实验室条件下,经口灌胃给予小鼠0.30g/kg.bw、0.60g/kg.bw、 1.80g/kg.bw剂量的本发明的洋海参胶囊30天,与对照组比较,0.60g/kg.bw、 1.80g/kg.bw剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应能力、NK细胞活性及抗体生成细胞数(p<0.05),1.80g/kg.bw剂量能显著提高小鼠半数溶血值(p<0.05),各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、单核-巨噬细胞碳廓清能力、淋巴细胞转化能力及巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均无显著影响(p>0.05) 故实验证明本发明的洋海参胶囊具有增强免疫力的功能。
Claims (10)
1.一种洋海参胶囊,其特征在于,包括西洋参、干海参及包接剂,所述干海参的质量分数为50%~60%,西洋参的质量分数为30%~35%,包接剂的质量分数为10%~15%。
2.根据权利要求1所述一种洋海参胶囊,其特征在于,所述包接剂为倍他环糊精、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素及羟丙基淀粉。
3.根据权利要求1所述一种洋海参胶囊,其特征在于,所述西洋参的质量分数为58%,干海参的质量分数为31%,包接剂的质量分数为11%。
4.根据权利要求1所述一种洋海参胶囊,其特征在于,所述西洋参的质量分数为55%,干海参的质量分数为32%,包接剂的质量分数为13%。
5.一种洋海参胶囊的制备方法,其特征在于,包括如下步骤进行:
(1)原料处理:取鲜海参制备干海参,干海参去包装,备用;包接剂去包装,备用;
(2)粉碎与净化:取西洋参对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小0.5-1.0mm,过60目筛,得西洋参粗粉,再对其进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10-25μm,过200目筛,得西洋参粗粉,经过60Co辐照灭菌,辐照剂量为4KGy,备用;将干海参进行再次粗粉碎,过80目筛,然后在进行超微粉碎,过200目筛,备用;
(3)混合:将步骤(2)中的备用的原料混合25~35分钟,在常温下使其搅拌混合均匀,搅拌速度为80-120转/分钟,然后将步骤(1)中备用的包接剂加入到上述混合物中,备用;
(4)烘干:步骤(3)中混合后的原料,60~70℃进行烘干,烘干4~6小时,烘干后水分小于7%;
(5)制粒:取明胶空心胶囊去外包,每粒明胶空心胶囊填充0.3g步骤(4)中混合物制成一粒;
(6)包装:取聚氯乙烯固体药用硬片和药品包装用铝箔去外包,将步骤(5)中制备的明胶空心胶囊每十二粒制成一板,进行外包装,检验,入库。
6.根据权利要求5所述一种洋海参胶囊的制备方法,其特征在于,所述鲜海参制备干海参的步骤包括:
a.活海刺参进场验收;宰杀、去内脏;
b.清洗处理冰水浸泡1~8小时;
c.靠发刺参:将冰水中的刺身置于放有刺参量2-3倍水量的锅内加热,加热并搅拌,温度在60℃~90℃,搅拌30min,出锅与食用盐搅拌,后装在密封箱内焖8~10小时;取出盐焖的刺参投入去离子水中80~90min,再投放到装有多于刺身的食用水的锅内加热,加热至80~100℃,并搅拌3~5小时;取出置于保温容器内,加入8-10倍于刺参的可饮用水,水温10~50℃,发14~16小时;
d.采用微波定型;
e.FD冻干得到冻干海参,产品含水率为5~8%;
f.将冻干海参粗粉:取步骤e中干海参对其进行粗粉碎,粗粉碎后分子直径大小0.5-1.0mm,过60目筛,得干海参粗粉;
g.产品检验;密封包装。
7.根据权利要求6所述一种洋海参胶囊的制备方法,其特征在于,所述微波定型:将靠发好的刺参,通过微波输出频率的微波隧道,控制温度20~90℃,传递速度1~8米/分钟,杀死细菌。
8.根据权利要求6所述一种洋海参胶囊的制备方法,其特征在于,所述FD冻干:将微波处理后的刺参放入冻干器中进行冷冻干燥,步骤包括:
低温预冻阶段:对干燥仓进行制冷,使物料温度降至-35℃以下,达到-35℃以下时刻起,保持-35℃以下的温度,对物料进行预冻保温5~6小时;
升华干燥阶段:干燥初期,将加热温度控制在65~70℃范围之内,并控制压强均低于25Pa,当系统显示物料温度接近-15℃时,迅速降低加热温度至55℃左右;
解析干燥阶段:控制加热温度在52-54℃范围之内,继续保持压强均低于25Pa,当物料干燥已接近干燥终点时,保持加热温度于53℃左右,继续干燥5-6小时,最终产品含水率为5-8%。
9.根据权利要求5所述一种洋海参胶囊的制备方法,其特征在于,所述干海参的超微粉碎过程:采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到22000-23000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10-25μm,时间2-3h,得到超微干海参粉。
10.根据权利要求5所述一种洋海参胶囊的制备方法,其特征在于,所述西洋参的超微粉碎过程:采用气流粉碎机进行粉碎,转数达到22000-23000r/min,进行超微粉碎,超微粉碎后分子直径大小10-25μm,时间2-3h,得到超微西洋参粉。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20171024 |
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