CN107236754B - 利用聚球藻utex2973生产糖类化合物的构建体、菌株与方法 - Google Patents

利用聚球藻utex2973生产糖类化合物的构建体、菌株与方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物制造领域。具体而言是一种利用聚球藻UTEX2973生产糖类化合物的构建体、菌株与方法。构建体包含有在聚球藻UTEX2973中具有活性的启动子，处于该启动子控制之下的质子/蔗糖的协同转运蛋白基因，用于筛选转化体的抗生素抗性基因，以及用于基因组同源整合的同源臂。本发明提供在光合微生物蓝细菌体内利用太阳能固定二氧化碳合成糖类化合物，合成糖类物质的能量来自于太阳能，碳源来自于二氧化碳。因此，利用本发明方式制备的生物基产品不会受到原料不足的制约，使用这种生物基产品不会增加碳排放，是真正的零排放生物基产品。

Description

利用聚球藻UTEX2973生产糖类化合物的构建体、菌株与方法
技术领域
本发明涉及生物制造领域。具体而言是一种利用聚球藻UTEX2973生产糖类化合物的构建体、菌株与方法。
背景技术
代谢工程和合成生物学领域的快速发展，使得经过代谢工程改造的异养微生物，如大肠杆菌或酵母，已经可以将糖类原料发酵转化成为许多种生物燃料(Peralta-Yahyaet al.2012)和生物基化学品(Hara et al.2014)。与现有基于石化原料的化学品生产方式相比，基于糖原料的微生物发酵生产方式更环保且可持续，具有显著的应用潜力。虽然目前微生物发酵生产化学品得到了广泛的关注和发展，但是大部分产品的生产成本较高，目前仅有大约30种生物基化学品实现了商业化生产(E4tech et al.2015)。而生物化学品生产的经济可行性很大程度上依赖于糖原料成本。
粮食作物如甘蔗、玉米等以及纤维素生物质都已经被成功地用作微生物发酵的原料(Ziolkowska 2014)。但是以粮食作物为原料用于微生物发酵存在了“与人争粮、与粮争地”的弊端，而且原料供应受限。纤维素生物质是自然界中含量最多的糖类物质，因此纤维素近年来被认为是具有前景的糖类原料(Graham-Rowe 2011)。然而由于植物细胞壁中木质素和纤维素的降解和转化成本较高，由纤维素作为原料的发酵产品与石油化工产品相比并没有成本优势(Ziolkowska 2014)。因此，廉价且可持续获得的糖类原料对当今微生物发酵产业仍然十分重要，且对微生物发酵生产廉价化学品更为重要。
蓝细菌(蓝藻)是一种能进行植物型放氧光合作用的原核微生物，是海洋生态系统的重要初级生产者(Hernandez-Prieto et al.2014)。与高等植物相比，蓝细菌具有生长速度快、光合效率高、容易进行遗传改造等优势(Zhou and Li 2010)。另外，水生的蓝细菌可以用放置在不适宜耕种土地甚至漂浮在海洋中的培养器中进行培养。基于这些优势，蓝细菌已经在生产生物燃料、生物基化学品及糖类物质方面展现了其巨大的潜力，具有广泛的应用前景(Angermayr et al.2015；Gupta et al.2013；Hays and Ducat 2015；Sarkar andShimizu 2015)。
蔗糖是微生物发酵生产生物乙醇的主要糖类原料，目前主要在甘蔗中提取(Balatand Balat 2009)。已知至少有60种蓝细菌菌株可以合成蔗糖，蔗糖主要是作为蓝细菌应对外界渗透胁迫的相容性物质(Balat and Balat 2009)，也可作为穿梭于细胞之间的营养糖分以及信号分子(Hagemann 2011)。目前文献报道的蓝细菌生产蔗糖的研究工作主要以集胞藻PCC6803和聚球藻PCC7942作为宿主菌，通过代谢工程改造来提高其蔗糖产量(Du etal.2013； Ducat et al.2012)。通过在聚球藻PCC7942表达大肠杆菌来源的质子/蔗糖协同转运蛋白CscB，研究人员得到了目前蓝细菌生产蔗糖的最高产量36.1mg/L/h(Ducat etal.2012)。根据研究人员估算，如果能够将此工程菌大规模培养，其蔗糖年产量将是甘蔗的7倍(Ducat et al.2012)。这些研究充分说明利用蓝细菌细胞工厂生产蔗糖的巨大潜力。
蓝细菌中的糖原已经被证明可以作为糖类原料直接被微生物利用来生产乙醇(Aikawa et al.2013)。除了作为蓝细菌中主要的碳水化合物储存物质(Allen 1984)和黑暗条件下呼吸作用的能量来源(Grundel et al.2012)，糖原还对蓝细菌在缺氮、盐胁迫及氧化胁迫的适应中起到重要作用(Grundel et al.2012；Hickman et al.2013；Suzuki etal.2010)。Aikawa等报道了他们利用聚球藻PCC7002生产糖原的工作，在氮源减少、补加氯化钠的培养条件培养7天，聚球藻PCC7002胞内糖原积累速率为0.5g/L/d，这是目前文献报道的蓝细菌糖原最高产率(Aikawa et al.2014)。由于糖原积累依赖于限制氮源的培养条件，大多数蓝细菌糖原积累与细胞生物质积累之间存在明显的矛盾(Aikawa et al.2014)。因此，为了实现使用蓝细菌生产糖原，需要一个能够同时快速积累糖原和生物质的蓝细菌菌株。
聚球藻(Synechococcus elongatus)UTEX2973，来源于美国德克萨斯大学藻种保藏中心(the Culture Collection of Algae at the University of Texas at Austin)，是目前已报道的生长速度最快的蓝细菌(Yu et al.2015)。虽然它与聚球藻PCC7942的基因组具有99.8％的同源性，在同样的培养条件下聚球藻UTEX2973的生长速度是聚球藻PCC7942的两倍，并且可以更好地耐受室外的高光、高温环境(Yu et al.2015)。在38℃、500μE/m2/s，通入3％CO2的条件下，聚球藻UTEX2973的代时为2.3h，与酵母的生长代时相近(Yuet al.2015)。
发明内容
本发明的目的是一种利用聚球藻生产糖类化合物的构建体、菌株与方法。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种利用聚球藻UTEX2973生产糖类化合物的构建体，构建体包含有在聚球藻UTEX2973中具有活性的启动子，处于该启动子控制之下的质子/蔗糖的协同转运蛋白基因，用于筛选转化体的抗生素抗性基因，以及用于基因组同源整合的同源臂。
所述构建体含有所述在蓝细菌中具有活性的启动子上游的用于筛选蓝细菌转化体的抗生素抗性基因。
所述质子/蔗糖的协同转运蛋白基因为SEQ ID NO:1中所示的来源于大肠杆菌的cscB基因。
所述抗生素抗性基因为氯霉素抗性基因，其例如显示在SEQ ID NO:4中。
所述在蓝细菌中具有活性的启动子选自Plac启动子。其它启动子举例：PpetE，PcpcB，Pcpt，Penyc4等。
其它抗生素抗性基因列举：卡那霉素抗性基因，壮观霉素抗性基因，庆大霉素抗性基因等适用于蓝细菌的抗生素抗性基因。
所述用于基因组同源整合的同源臂为来源于聚球藻UTEX2973的NS3基因的C-末端序列(SEQ ID NO:2)和N-末端序列(SEQ ID NO:3)。
其他同源臂列举：来源于聚球藻UTEX2973的NS1基因的C-末端序列(SEQ ID NO:12)和N-末端序列(SEQ ID NO:13)；NS2基因的C-末端序列(SEQ ID NO:14)和N-末端序列(SEQ ID NO:15)。
一种载体，其包含上述任一项的构建体。
所述载体选自下列质粒，质粒pSK015，其于2016年3月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，SK028,分类命名大肠埃希氏菌，Escherichia coli保藏号为CGMCC No.12192。
一种包含上述任一项的构建体的蓝细菌。
一种包含上述的载体转化的蓝细菌。
所述蓝细菌选自：于2016年3月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，蓝细菌Syn2973::CscB，分类命名为聚球藻Synechococcus sp.,其保藏号为CGMCC No.12231。
一种在蓝细菌中生产糖类化合物的方法，在含有NaCl或KCl的条件下培养任一项的蓝细菌，从获得的培养物中提取所需的糖类化合物。所述糖类化合物为蔗糖和糖原。
所述蓝细菌的培养条件为38℃，250μE/m2/s，通入3％CO2，使用100-200mM的NaCl或KCl对蓝细菌进行盐胁迫,于培养物细胞内外获得所需的糖类化合物；优选为150mM。
使用含有150mM KCl的培养基重悬蓝细菌从而进行半连续培养，在培养21天之后共积累了8.1g/L的胞外蔗糖。
本发明所具有的优点：
本发明提供在光合微生物蓝细菌体内利用太阳能固定二氧化碳合成糖类化合物，合成糖类物质的能量来自于太阳能，碳源来自于二氧化碳。因此，利用本发明方式制备的生物基产品不会受到原料不足的制约，使用这种生物基产品不会增加碳排放，是真正的零排放生物基产品。
具体是，本发明在光合生物蓝细菌聚球藻UTEX2973中合成糖类化合物构建体，包含所述构建体的载体，包含所述构建体或用所述载体转化的蓝细菌，以及在蓝细菌中生产糖类化合物的方法。进而使得在蓝细菌聚球藻UTEX2973内大量分泌蔗糖的同时也在胞内积累大量的糖原，分泌到胞外的蔗糖以及在胞内的糖原均可以回收用于微生物发酵。
附图说明
图1为本发明实施例提供的聚球藻UTEX2973与聚球藻PCC7942生物质和糖原含量对比图；其中，a为两个菌株的生物质积累情况；b为两菌株在此培养条件下细胞内糖原的量；c为糖原分别占各自细胞干重的比例。
图2为本发明实施例提供的质粒pSK015的基本结构；其中，在聚球藻UTEX2973的M744_RS12430基因上下游片段(NS3-N和NS3-C)之间有氯霉素抗性基因(Cmr)、蔗糖转运蛋白基因cscB以及Plac启动子。
图3为本发明实施例提供的加入IPTG对Syn2973::CscB蔗糖积累的影响图；其中，a为是否加入IPTG下的生长曲线；b为蓝细菌胞外蔗糖的积累情况；c为胞内蔗糖的积累情况；d为胞外蔗糖占蔗糖总产量的百分比。
图4为本发明实施例提供的分别使用150mM的NaCl或KCl盐胁迫下聚球藻UTEX2973野生细胞的生物质积累(a)及胞内蔗糖积累情况(b)图。
图5为本发明实施例提供的基因工程菌株Syn2973::CscB在使用150mM KCl进行盐胁迫下，半连续培养第一个生长周期胞外蔗糖积累情况(a)以及生物质分布情况(b)图。
图6为本发明实施例提供的基因工程菌株Syn2973::CscB在使用150mM KCl进行盐胁迫下，半连续培养21天(7个周期)的生物质情况(a)及胞外蔗糖积累情况(b)图。
序列表信息：
SEQ ID NO:1：来源于大肠杆菌(Escherichia coli)的蔗糖转运蛋白(CscB)基因序列。
SEQ ID NO:2：来源于聚球藻UTEX2973的NS3基因的C-末端序列。
SEQ ID NO:3：来源于集聚球藻UTEX2973的NS3基因的N-末端序列。
SEQ ID NO:4：质粒pSK015上的氯霉素抗性序列(NCBI ID：NC_005923.1)。
SEQ ID NO:5：引物NS3-F的序列。
SEQ ID NO:6：引物NS3-R的序列。
SEQ ID NO:7：启动子Plac的序列。
SEQ ID NO:8：启动子PpetE的序列。
SEQ ID NO:9：启动子PcpcB的序列。
SEQ ID NO:10：启动子Pcpt的序列。
SEQ ID NO:11：启动子Penyc4的序列。
SEQ ID NO:12：来源于聚球藻UTEX2973的NS1基因的C-末端序列。
SEQ ID NO:13：来源于集聚球藻UTEX2973的NS1基因的N-末端序列。
SEQ ID NO:14：来源于聚球藻UTEX2973的NS2基因的C-末端序列。
SEQ ID NO:15：来源于集聚球藻UTEX2973的NS2基因的N-末端序列。
具体实施方式
以下的实施例可以结合附图使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
相关术语
蓝细菌(也称为蓝藻)是一类光合自养的原核微生物，其能够利用太阳能，固定二氧化碳为碳水化合物。
质子/蔗糖的协同转运蛋白(CscB)是能够利用跨膜的质子梯度特异性 地运输蔗糖进出细胞的通道蛋白。
在本发明的实施方案中，载体(Vector)是指能够将DNA片段(目的基因)转移到受者细胞中的一种自我复制的DNA分子。
接合转移(conjugation)是指细菌细胞间通过直接细胞接触或性鞭毛进行的遗传物质的传递过程，适用于对非天然感受态的宿主细胞基因工程改造过程中。
同源臂(Homology arms)是在对蓝细菌遗传改造的过程中，用于将启动子、处于该启动子控制之下的基因以及抗生素抗性基因，通过同源重组(homologous recombination)整合到宿主蓝细菌基因组的两个DNA片段；分为N-末端和C-末端。
本发明的实施方案是利用在蓝细菌中具有活性的启动子驱动质子/蔗糖的协同转运蛋白在蓝细菌中表达，利用蓝细菌光合生物的特点，吸收光能固定二氧化碳，在盐胁迫条件下合成并分泌蔗糖；同时利用聚球藻UTEX2973生长速度快，可以在积累生物质的同时大量积累胞内糖原的特点，合成分泌蔗糖的同时在胞内积累糖原。
实施例1：用聚球藻UTEX2973生产糖原
1.实验步骤
(1)将聚球藻UTEX2973和PCC7942野生型藻株分别在柱式光反应器培养：普通玻璃管，柱高580mm，直径30mm，装液量150mL(可装约300mL)。初始接种浓度OD730为0.05，培养基为BG11培养基(BG11培养基成分为1.5g/L NaNO3,40mg/L K2HPO4·3H2O,36mg/L CaCl2·2H2O,6mg/L柠檬酸,6mg/L柠檬酸铁铵,1mg/L EDTA二钠盐,20mg/L NaCO3,2.9mg/L H3BO3,1.8mg/L MnCl2·4H2O,0.22mg/L ZnSO4·7H2O,0.39mg/L NaMoO4·2H2O,0.079mg/LCuSO4·5H2O和0.01mg/L CoCl2·6H2O)；在38℃、250μE/m2/s光照、通入3％的CO2空气进行培养。在培养过程中，取样测试OD730和糖原含量。而蓝细菌生物质(Dry cell weight，DCW，细胞干重)含量按1ml OD730＝1.0的藻细胞约相当于0.34mg换算。
(2)糖原的检测：将上述获得蓝细菌藻液离心后，用无菌水洗涤3次，重悬于30％(W/V)的KOH，95℃温浴2h,然后加入冷的乙醇至终浓度为70-75％(V/V)，置于冰上至少2h，用于沉淀糖原。然后4℃，10000g离心10分钟，糖原沉淀用70％和98％的乙醇洗涤两次，60℃，10min真空离心干燥，糖原溶于100mM醋酸钠溶液(pH 4.5)，加入糖化酶(Novozyme,Denmark)进行糖化，60℃，2小时，将糖原转变为葡萄糖，然后通过测定葡萄糖含量计算糖原含量。
2、实验结果
如图1所示，在相同的培养条件(38℃、250μE/m2/s光照、通入3％的CO2空气)下，与聚球藻PCC7942相比，聚球藻UTEX2973的生物质积累速度达到1.56g DCW/L/d，比PCC7942快约50％(图1a)。积累生物质的同 时聚球藻UTEX2973糖原也迅速积累；在第22到51.5h，聚球藻UTEX2973糖原含量从细胞干重的14.7％上升到42.15％，糖原积累速率达到0.75g/L/d，高于目前文献报道最高产率0.5g/L/d；最后在平台期时其糖原含量达1.1g/L左右，占干重的51％以上。这些结果显示了聚球藻UTEX2973更强的生物质和糖原积累能力，证明了其作为生物发酵糖原料的潜力。
实施例2：构建用于导入聚球藻UTEX2973的载体pSK015
以NS3-F(5’-TCAGCCAGCTCGTCGTGATGTCGAAACCCAAGCC-3’)和NS3-R(5’-ACAGTCGGCGTCACGGCAACTTGCTCCGCGTAGG-3’)为引物对，以质粒pNS3-3B with cscB(Ducat etal.2012)为模板进行PCR扩增；并将PCR产物，与经EcoRI/SalI酶切，T4 DNA聚合酶补平的pBR322载体连接，从而得到重组质粒pSK015(图2)。
PCR扩增的条件、体系：
1、PCR扩增体系
10×扩增缓冲液：5μL、4种dNTP混合物(2.5mM)：4μL、NS3-F(20mM)：0.5μL、NS3-R(20mM)：0.5μL、质粒模板DNA(100ng/μl)：0.5μL、Fast Pfu Fly DNA聚合：1μL、加双蒸水至50μL；
2、PCR扩增条件：
95℃5min、95℃30s、55℃30s、72℃3min(返回第二步，共30个循环)、72℃10min。
实施例3：聚球藻UTEX2973的接合转移以及接合子的筛选
1、取1mL对数生长期(OD730约为1.0)的聚球藻UTEX2973培养物，5000rpm离心5分钟收集细胞；并用新鲜的BG11培养基洗涤细胞，再将细胞重悬于100μL BG11培养基中。
2、在LB培养基(10g/L蛋白胨，10g/L氯化钠，5g/L酵母抽提物)中分别培养含有pRL443质粒和pRL623质粒的大肠杆菌HB101菌株，以及含有pSK015质粒的大肠杆菌HB101菌株的两种菌株，将菌株培养至对数生长期(OD600约为1.0)；各取1mL大肠杆菌培养物，5000rpm离心5分钟收集菌体；并用新鲜的LB培养基洗涤细胞，再将细胞分别重悬于100μLLB培养基中。
3、将含有pRL443质粒和pRL623质粒的大肠杆菌HB101菌株、含有pSK015质粒的大肠杆菌HB101菌株、和聚球藻UTEX2973三种微生物细胞混合，均匀地涂布到铺在BG11平板(未加抗生素)上的硝酸纤维素膜上，并置于30℃、30μE/m2/s光照条件下温育12小时。
4、将硝酸纤维素膜转移到含有20μg/mL氯霉素的BG11平板上，并在30℃、30μE/m2/s的条件下继续培养。
5、大约4～5天，将接合子从平板上挑出，在新鲜的BG11平板(含有20μg/mL氯霉素)划线；待细胞富集后，再将它们接入到液体BG11(含20μg/mL氯霉素)培养基中培养。
6、将pSK015质粒按照常规方式接合转移到野生型聚球藻UTEX2973后,得到的藻株命名为Syn2973::CscB。
所述质粒pSK015，其于2016年3月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC 12192。
实施例4：基因工程聚球藻UTEX2973合成并分泌蔗糖
1、实验步骤
(1)将上述获得基因工程藻株Syn2973::CscB在柱式光反应器中培养；柱式光反应器为普通玻璃管，柱高580mm，直径30mm，装液量150mL(可装液约300mL)。初始接种浓度OD730为0.05，培养基为BG11(补加20μg/mL氯霉素)，在38℃、250μE/m2/s光照、通入3％的CO2空气的条件下进行培养。
(2)蓝细菌盐胁迫：向上述步骤培养至处于对数末期的蓝细菌培养基中添加使用BG11溶液配制的5M NaCl，使得培养基中的NaCl浓度为150mM。同时，向蓝细菌培养物中加入IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)至终浓度为1mM；而以不加入IPTG的上述培养物作为对照。盐胁迫之后，连续取样监测蓝细菌细胞内外蔗糖含量。
(3)蓝细菌胞内和胞外蔗糖提取：取1mL上述盐胁迫之后蓝细菌细胞藻液，8000rpm离心10min收集藻细胞。离心所得上清液，经稀释后用离子色谱检测，即得到细胞外蔗糖含量。向细胞沉淀加入1mL 80％乙醇混匀，65℃水浴4h。8000rpm离心10min，弃沉淀，上清用N2吹干，加入合适的ddH2O稀释后，使用离子色谱进行浓度测定，即得到细胞内蔗糖含量。
(4)离子色谱检测蔗糖含量：使用离子色谱ISC-3000(DIONEX,USA)，分析柱：MA1(DIONEX,USA)。流动相为800mM NaOH溶液，流速0.4mL/min，蔗糖出峰约在28min处。
2、实验结果
(1)由上述可见使用150mM NaCl对Syn2973::CscB藻株进行盐胁迫，同时比较了IPTG加入对蔗糖产量的影响。结果发现，在不加入IPTG时，细胞的生长状态更好(图3a)，并且胞外可以积累达3.2g/L的蔗糖(图3b)。在使用1mM IPTG诱导时，盐胁迫下细胞生长状态变差(图3a)，同时蔗糖产量降低为约2g/L(图3b)。而比较两种条件下蓝细菌细胞内的蔗糖含量发现，加入IPTG后，蓝细菌胞内蔗糖含量相对于对照显著降低(图3c)。通过计算发现，即使不加入IPTG，Syn2973::CscB藻株产生的蔗糖也有超过94％被分泌到细胞外；加入IPTG，藻株蔗糖分泌的比例与对照相比稍高(图3d)。这一结果说明，导入CscB基因的藻株能够非常有效地将其在盐胁迫中积累的蔗糖分泌到胞外。
实施例5：相同浓度氯化钠和氯化钾对聚球藻UTEX2973蔗糖合成的影响
1、实验步骤
(1)将聚球藻UTEX2973野生型藻株在柱式光反应器中培养；柱式光反应器为普通玻璃管，柱高580mm，直径30mm，装液量150mL(可装液约300ml)。初始接种浓度OD730为0.05，培养基为BG11，在38℃、250μE/m2/s光照、通入3％的CO2空气的条件下进行培养。
(2)蓝细菌盐胁迫：向上述培养至处于对数末期的野生型蓝细菌培养基中添加使用BG11溶液配制的5M NaCl或3M KCl，使得培养基中的盐浓度为150mM。盐胁迫之后，连续取样监测蓝细菌细胞内外蔗糖含量。
(3)蓝细菌胞内蔗糖提取和离子色谱检测蔗糖含量的方法参照实施例4。
2、实验结果
(1)由上述可见分别使用150mM的NaCl和KCl对聚球藻UTEX2973野生型进行盐胁迫，对比其胞内、胞外蔗糖的积累情况。实验发现，聚球藻UTEX2973野生型藻株在150mM KCl胁迫下的生长状态明显好于150mM NaCl胁迫(图4a)，并且两种盐胁迫下细胞生产蔗糖的能力并没有明显区别(图4b)。这一实验结果说明KCl也能够诱导蓝细菌合成积累蔗糖，而KCl胁迫时蓝细菌生长状态更好。
实施例6：半连续培养模式下Syn2973::CscB藻株的蔗糖合成
1、实验步骤
(1)将上述实施例获得的基因工程藻株Syn2973::CscB在柱式光反应器中培养；柱式光反应器为普通玻璃管，柱高580mm，直径30mm，装液量150mL(可装液约300mL)。初始接种浓度OD730为0.05，培养基为BG11(补加20μg/mL氯霉素)，在38℃、250μE/m2/s光照、通入3％的CO2空气的条件下进行培养。
(2)蓝细菌盐胁迫：向上述步骤培养至处于对数末期的蓝细菌培养基中添加使用BG11溶液配制的3M KCl，使得培养基中的KCl浓度为150mM，在盐胁迫下继续培养。
(3)之后，每3天重复如下操作：8000rpm离心10分钟收集蓝细菌细胞；然后将细胞重悬于等体积的含有150mM KCl和20μg/mL氯霉素的新鲜BG11培养基中，继续下一个培养周期(3天)。每个培养周期结束时，取样用于监测细胞外蔗糖含量。
(4)离子色谱检测蔗糖含量的方法参照实施例4。
2、实验结果
在150mM KCl胁迫条件下，Syn2973::CscB胞外蔗糖含量以24.64mg/L/h的速率线性增加(图5a)。在KCl胁迫后第54.5h，Syn2973::CscB向细胞外分泌的蔗糖含量占细胞干重的81.43％；与此同时，胞内糖原含量占细胞干重的41.83％，这一比例与野生型菌株在NaCl胁迫相同时间后的糖原含量相当。这一结果表明，即使Syn2973::CscB在盐胁迫条件下合成并 分泌了大量的蔗糖，其胞内糖原含量仍然可以维持一定的比例；这显示了聚球藻Syn2973::CscB强大的糖类化合物合成能力。而该藻株的这一特点，使得将来利用该藻株生产蔗糖的同时，蓝细菌细胞生物质由于富含糖原也可以用作微生物发酵的原料。
在半连续培养模式下，从第2个培养周期开始Syn2973::CscB细胞生长状况得到明显改善；在经过7个培养周期(21天)，Syn2973::CscB生长依旧良好(图6a)。从蔗糖分泌的情况看，在前3个培养周期，蔗糖产量保持稳定，约为2g/L；虽然随后单位培养周期蔗糖产量出现下降趋势，但是在7个培养周期(21天)内总共分泌了约8.70g/L的蔗糖。这些结果进一步展示了聚球藻Syn2973::CscB强大的糖类化合物合成能力。
生物材料样品保藏信息
菌株 保藏号 保藏时间
大肠杆菌SK028，其包含质粒pSK015 CGMCC 12192 2016年3月11日
蓝细菌Syn2973::CscB CGMCC 12231 2016年3月11日
上述菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(ChinaGeneral Microbiological Culture Collection Center，CGMCC)
另外，上述实例中的启动子抗生素抗性基因、同源臂分别可由下述记载的启动子、抗生素抗性基因和同源臂替换；启动子为PpetE，PcpcB，Pcpt，Penyc4等。抗生素抗性基因为卡那霉素抗性基因，壮观霉素抗性基因，庆大霉素抗性基因等适用于蓝细菌的抗生素抗性基因。同源臂为来源于聚球藻UTEX2973的NS1基因的C-末端序列和N-末端序列、来源于聚球藻UTEX2973的NS2基因的C-末端序列和N-末端序列。
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序列表
SEQ ID NO:1
大肠杆菌(Escherichia coli)的蔗糖转运蛋白(CscB)基因序列
ATGGCACTGAATATTCCATTCAGAAATGCGTACTATCGTTTTGCATCCAGTTACTCATTTCTCTTTTTTATT TCCTGGTCGCTGTGGTGGTCGTTATACGCTATTTGGCTGAAAGGACATCTAGGGTTGACAGGGACGGAATTAGGTACACTTTATTCGGTCAACCAGTTTACCAGCATTCTATTTATGATGTTCTACGGCATCGTTCAGGATAAACTCGGTCTGAAGAAACCGCTCATCTGGTGTATGAGTTTCATCCTGGTCTTGACCGGACCGTTTATGATTTACGTTTATGAACCGTTACTGCAAAGCAATTTTTCTGTAGGTCTAATTCTGGGGGCGCTCTTTTTTGGCCTGGGGTATCTGGCGGGATGCGGTTTGCTTGACAGCTTCACCGAAAAAATGGCGCGAAATTTTCATTTCGAATATGGAACAGCGCGCGCCTGGGGATCTTTTGGCTATGCTATTGGCGCGTTCTTTGCCGGCATATTTTTTAGTATCAGTCCCCATATCAACTTCTGGTTGGTCTCGCTATTTGGCGCTGTATTTATGATGATCAACATGTGTTTTAAAGATAAGGATCACCAGTGCGTAGCGGCGGATGCGGGAGGGGTAAAAAAAGAGGATTTTATCGCAGTTTTCAAGGATCGAAACTTCTGGGTTTTCGTCATATTTATTGTTGGGACGTGGTCTTTCTATAACATTTTTGATCAACAACTTTTTCCTGTCTTTTATGCAGGTTTATTCGAATCACACGATGTAGGAACGCGCCTGTATGGTTATCTCAACTCATTCCAGGTGGTACTCGAAGCGCTGTGCATGGCGATTATTCCGTTCTTTGTGAATCGGGTAGGGCCAAAAAATGCATTACTTATCGGTGTTGTGATTATGGCGTTGCGTATCCTTTCCTGCGCGCTGTTCGTTAACCCCTGGATTATTTCATTAGTGAAGCTGTTACATGCCATTGAGGTTCCACTTTGTGTCATATCCGTCTTCAAATACAGCGTGGCAAACTTTGATAAGCGCCTGTCGTCGACGATCTTTCTGATTGGTTTTCAAATTGCCAGTTCGCTTGGGATTGTGCTGCTTTCAACGCCGACTGGGATACTCTTTGACCACGCAGGCTACCAGACAGTTTTCTTCGCAATTTCGGGTATTGTCTGCCTGATGTTGCTATTTGGCATTTTCTTCCTGAGTAAAAAACGCGAGCAAATAGTTATGGAAACGCCTGTACCTTCAGCAATATAG
(a)序列特征：
●长度：1248碱基对
●类型：脱氧核糖核酸(DNA)
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：大肠杆菌
SEQ ID NO:2
聚球藻UTEX2973的M744_RS12430基因的C-末端序列(也包括一部分基因上游序列)(NCBI ID：NZ_CP006471.1)
TCAGCCAGCTCGTCGTGATGTCGAAACCCAAGCCACCCTCAGAGGTGAAGGCCGCTTCGAGCACATCGGGAAGCGTGTCGACGACGGTGCTCGGTGCCTCGGGTAAGAGCCAGATAGATGCGGTGACGTTCACCGTCGCGATCGTGGCGGGAACCACGGTCACTGCGTCCGTTACAACTCGCACGTCGTCGGCCAGCACGACTGACTCGACGGCTTCGATTAGCCCGGGAGAGGCAAGGCCATCAGGCTCGGTAGACAGAATGCTGATTAACACCTCGCCGGGAGCAGGGCTGCTCACAGCCGCGTCCTTCACCCGTGGGTCAGCCGTCAGCGCTTGATAGCGGTACCAGGCCGCACCGCCTGCGGTCGAGCTGCCCTTGATCCGCTCGATGGTGCGATCGCGAAGCTCGCCATCCGGCTCATTCGGCTGCCGCACCACGCCGTAGAACGCGGCAAGGTTGTCGAGGTCGGGGCCGTTTGAGTAGCGAAGCAGTGTCGCAAGAAGTGCGTCGTTGATCCGCTGACGCAGGATCAGCTCGCGGGCTGCGCAGACCTCCAGCAGCTTGATGACCGGGTCGGATTCGAGGATGGCGGTGTAGCTGGCGTCACGCGATCGCAGGTCGTCGATCAAGTCCTGCAGGATCAGTTCAAAGTCCAGCGCTTCGATGATGGTGGGCGCGGGAATCGTAGCAAAGTCAAGAACGGTCATGAGACGACTAAGCCCTCCAGCGTGATACGCCTGCCCTCGGGGATGTAGTAGCCGATCAGGTTCAGCTCGACTTGACCAGCTGCGCTGGCTGAGACGATGCGAACCTTCTCCAGCTTCAGCCGTGGCTCCCAGCGATCGAGCGCTTCAGCTGTGGCCGCCACCAGGTCAACGATGAGGGACTGGTTGATCGG
(a)序列特征：
●长度：900碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻UTEX 2973
SEQ ID NO:3：
聚球藻UTEX2973的M744_RS12430基因的N-末端序列(也包括一部分基因下游序列)(NCBI ID：NZ_CP006471.1)
GACAAGCCGGGGCAGACGTGAGCCGTAGTCCCGTCGCCAGACGCGGGTGCCCACGGGCGTCGTCAGGATGTCCGTAATTGACTGCCGGAGGTGGTCAATGCCCTTCAGCTCCTTGCCACTGTCACGGCTCATGCCTCGGGTCATTAGTCGCCCGCTCCGGTATCTTCACTGGCTTCGATGATTGCCGCCCCGCAGCTGCAGAGGTCACCGATCCGAGCAGTCGGCCTCTGGTTGGTAAAGACCGTGCGACTGCCGGTGATGATCGTGTTCAAGCCATGCAGGGGGCAGGCGTGAAGGTCATCCTTTCGGGCCACGGGGCGGCTGTTGACGAAGGTGTCGTCGCTCCCGGTGATGATGATCCCGCCGTGATCGGTCACGTCGTTTAGTCGAGCGATGCCTGGCGTCGTAGTCACGGGTTTAGGTCAATACGACTTGCGGTCACTGTAACGTTGCCCTCGGCGGTCACGTTAACGTCGCCTTGGGCTTCGACTTGCGCCTCCTGCACAAGGATCACAATCCGTCCTTGGGCTGCGGTGAGGTCGATCTTGTACTCATGCGCTTCGCGGTCGTACTGGATGATTGAGTCATCCTCGAACTGCGTCTTTTGGATCGTTTCTTTGTCCTCGATCTGGGGGTAGTCAGTCGAGAACGCGCCGGGCATCGCGAAGCCCTGACTGATCTCGCCGGAGGGGGCCATCACGACGACGGCCTCACCGACCTCGGGCGCCCACCAGAACCGATCCTTGCCCGCTCGCTGCGTGAGCCACGGAATCCAGTCAGTGAGGAGCAGCGCCTCGCCGCTCTCCTCGTC TTCCTCGATCGCGACACGGATCAGCCCCTTGGGATAGTCAGCCTCGGCTACCCTGCCTACGCGGAGCAAGTTGCCGTGACGCCGACTGT
(a)序列特征：
●长度：900碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻UTEX 2973
SEQ ID NO:4：
氯霉素抗性序列
ATGGAGAAAAAAATCACTGGATATACCACCGTTGATATATCCCAATGGCATCGTAAAGAACATTTTGAGGCATTTCAGTCAGTTGCTCAATGTACCTATAACCAGACCGTTCAGCTGGATATTACGGCCTTTTTAAAGACCGTAAAGAAAAATAAGCACAAGTTTTATCCGGCCTTTATTCACATTCTTGCCCGCCTGATGAATGCTCATCCGGAGTTCCGTATGGCAATGAAAGACGGTGAGCTGGTGATATGGGATAGTGTTCACCCTTGTTACACCGTTTTCCATGAGCAAACTGAAACGTTTTCATCGCTCTGGAGTGAATACCACGACGATTTCCGGCAGTTTCTACACATATATTCGCAAGATGTGGCGTGTTACGGTGAAAACCTGGCCTATTTCCCTAAAGGGTTTATTGAGAATATGTTTTTCGTCTCAGCCAATCCCTGGGTGAGTTTCACCAGTTTTGATTTAAACGTGGCCAATATGGACAACTTCTTCGCCCCCGTTTTCACTATGGGCAAATATTATACGCAAGGCGACAAGGTGCTGATGCCGCTGGCGATTCAGGTTCATCATGCCGTCTGTGATGGCTTCCATGTCGGCAGAATGCTTAATGAATTACAACAGTACTGCGATGAGTGGCAGGGCGGGGCGTAA
(a)序列特征：
●长度：660碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：质粒pNS3-3B with cscB
SEQ ID NO:5：
引物NS3-F的序列
TCAGCCAGCTCGTCGTGATGTCGAAACCCAAGCC
SEQ ID NO:6：
引物NS3-R的序列
ACAGTCGGCGTCACGGCAACTTGCTCCGCGTAGG
SEQ ID NO:7：
启动子Plac的序列
ATCAAATAAAACGAAAGGCTCAGTCGGAAGACTGGGCCTTTCGTTTTATCTGTTGTTTGTCGGTGAACGCTCTCCTGAGTAGGACAAATCCGCCGGGAGCGGATTTGAACGTTGCGAAGCAACGGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGCCATAAACTGCCAGGCATCAAATTAAGCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGTTTCTACTCTAGTTTCGAAACCCCAGGCTTGACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAAGGAGGAAAAACATATGTCTAGA
(a)序列特征：
●长度：327碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：pNS3-3B with cscB
SEQ ID NO:8：
启动子PpetE的序列
AAGGATTCATAGCGGTTGCCCAATCTAACTCAGGGAGCGACTTCAGCCCACAAAAAACACCACTGGGCCTACTGGGCTATTCCCATTATCATCTACATTGAAGGGATAGCAAGCTAATTTTTATGACGGCGATCGCCAAAAACAAAGAAAATTCAGCAATTACCGTGGGTAGCAAAAAATCCCCATCTAAAGTTCAGTAAATATAGCTAGAACAACCAAGCATTTTCGGCAAAGTACTATTCAGATAGAACGAGAAATGAGCTTGTTCTATCCGCCCGGGGCTGAGGCTGTATAATCTACGACGGGCTGTCAAACATTGTGATACCATGGGCAGAAGAAAGGAAAAACGTCCCTGATCGCCTTTTTGGGCACGGAGTAGGGCGTTACCCCGGCCCGTTCAACCACAAGTCCCTATAGATACAATCGCCAAGAAGT
(a)序列特征：
●长度：435碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：集胞藻PCC 6803
SEQ ID NO:9：
启动子PcpcB的序列
TTCGTTATAAAATAAACTTAACAAATCTATACCCACCTGTAGAGAAGAGTCCCTGAATATCAAAATGGTGGGATAAAAAGCTCAAAAAGGAAAGTAGGCTGTGGTTCCCTAGGCAACAGTCTTCCCTACCCCACTGGAAACTAAAAAAACGAGAAAAGTTCGCACCGAACATCAATTGCATAATTTTAGCCCTAAAACATAAGCTGAACGAAACTGGTTGTCTTCCCTTCCCAATCCAGGACAATCTGAGAATCCCCTGCAACATTACTTAACAAAAAAGCAGGAATAAAATTAACAAGATGTAACAGACATAAGTCCCATCACCGTTGTATAAAGTTAACTGTGGGATTGCAAAAGCATTCAAGCCTAGGCGCTGAGCTGTTTGAGCATCCCGGTGGCCCTTGTCGCTGCCTCCGTGTTTCTCCCTGGATTTATTTAGGTAATATCTCTCATAAATCCCCGGGTAGTTAACGAAAGTTAATGGAGATCAGTAACAATAACTCTAGGGTCATTACTTTGGACTCCCTCAGTTTATCCGGGGGAATTGTGTTTAAGAAAATCCCAACTCATAAAGTCAAGTAGGAGATTAAT
(a)序列特征：
●长度：591碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：集胞藻PCC 6803
SEQ ID NO:10：
启动子Pcpt的序列
TTAACAAAAAAGCAGGAATAAAATTAACAAGATGTAACAGACATAAGTCCCATCACCGTTGTATAAAGTTAACTGTGGGATTGCAAAA
(a)序列特征：
●长度：88碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：集胞藻PCC 6803
SEQ ID NO:11：
启动子Penyc4的序列
AAATATTCTGAAATGAGCTGTTGACAATTAATCATCCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCATACGCTCACAATTGGTACCGGTGATACCAGCATCGTCTTGATGCCCTTGGCAGCACCCTGCTAAGGAGGCAACAAG
(a)序列特征：
●长度：155碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：人工合成DNA
SEQ ID NO:12：
来源于聚球藻UTEX2973的NS1基因的C-末端序列。
TCCCTGCTCGTCACGCTTTCAGGCACCGTGCCAGATATCGACGTGGAGTCGATCACTGTGATTGGCGAAGGGGAAGGCAGCGCTACCCAAATCGCTAGCTTGCTGGAGAAGCTGAAACAAACCACGGGCATTGATCTGGCGAAATCCCTACCGGGTCAATCCGACTCGCCCGCTGCGAAGTCCTAAGAGATAGCGATGTGACCGCGATCGCTTGTCAAGAATCCCAGTGATCCCGAACCATAGGAAGGCAAGCTCAATGCTTGCCTCGTCTTGAGGACTATCTAGATGTCTG TGGAACGCACATTTATTGCCATCAAGCCCGATGGCGTTCAGCGGGGTTTGGTCGGTACGATCATCGGCCGCTTTGAGCAAAAAGGCTTCAAACTGGTGGGCCTAAAGCAGCTGAAGCCCAGTCGCGAGCTGGCCGAACAGCACTATGCTGTCCACCGCGAGCGCCCCTTCTTCAATGGCCTCGTCGAGTTCATCACCTCTGGGCCGATCGTGGCGATCGTCTTGGAAGGCGAAGGCGTTGTGGCGGCTGCTCGCAAGTTGATCGGCGCTACCAATCCGCTGACGGCAGAACCGGGCACCATCCGTGGTGATTTTGGTGTCAATATTGGCCGCAACATCATCCATGGCTCGGATGCAATCGAAACAGCACAACAGGAAATTGCTCTCTGGTTTAGCCCAGCAGAGCTAAGTGATTGGACCCCCACGATTCAACCCTGGCTGTACGAATAAGGTCTGCATTCCTTCAGAGAGACATTGCCATGCCCGTGCTGCGATCGCCCTTCCAAGCTGCCTTGCCCCGCTGTTTCGGGCTGGCAGCCCTGGCGTTGGGGCTGGCGACCGCTTGCCAAGAAAGCAGCGCTCCGCCGGCTGCCGGATCCCAGCCCTTGGGCTTGGCGATCGCTCAAACCGGCAATGCCTCTCTGTTTGGTCAGGAACAGTTGGCGGGTCTTCAGATTGCCAAAGCAGTCTTTGAACGACCTGCTACTGGTGTTCCGATTGACTTTCGCTTGCAGGACAGTGGCAGTGATGA
(a)序列特征：
●长度：1042碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻UTEX 2973
SEQ ID NO:13：
来源于集聚球藻UTEX2973的NS1基因的N-末端序列。
TGGATGTGATCGGAACCCTGAGCCGTCGTCCTGGAGGTGAAGTCTAATGTTTGAAACGATTTTTGCGCTGCTGATTGTTCTAGGCGCTGGCGCCGGGGCTGGCAGCTTAGTCCTGCGCAATCTCTACTACATCTGCCAACCCAGTGAAATTTTGATCTTTGCTGGCAGTAGTCGCCGCAGTAGTGATGGCCGCCGAGTTGGCTATCGCTTGGTCAAGGGCGGCAGCAGCCTGCGGGTACCTCTGCTGGAAAAAGCGCTCCGCATGGATCTGACCAACATGATCATTGAGTTGCGCGTTTCCAATGCCTTCTCCAAGGGCGGCATTCCCCTGACTGTTGAAGGCGTTGCCAATATCAAGATTGCTGGGGAAGAACCGACCATCCACAACGCGATCGAGCGGCTGCTTGGCAAAAACCGTAAGGAAATCGAGCAAATTGCCAAGGAGACCCTCGAAGGCAACTTGCGTGGTGTTTTAGCCAGCCTCACGCCGGAGCAGATCAACGAGGACAAAATTGCCTTTGCCAAAAGTCTGCTGGAAGAGGCGGAGGATGACCTTGAGCAGCTGGGTCTAGTCCTCGATACGCTGCAAGTCCAGAACATTTCCGATGAGGTCGGTTATCTCTCGGCTAGTGGACGCAAGCAGCGGGCTGATCTGCAGCGAGATGCCCGAATTGCTGAAGCCGATGCCCAGGCTGCCTCTGCGATCCAAACGGCCGAAAATGACAAGATCACGGCCCTGCGTCGGATCGATCGCGATGTAGCGATCGCCCAAGCCGAGGCCGAGCGCCGGATTCAGGATGCGTTGACGCGGCGCGAAGCGGTGGTGGCCGAAGCTGAAGCGGACATTGCTACCGAAGTCGCTCGTAGCCAAGCAGAACTCCCTGTGCAGCAGGAGCGGATCAAACAGGTGCAGCAGCAACTTCAAGCCGATGTGATCGCCCCAGCTGAGGCAGCTTGTAAACGGGCGATCGCGGAAGCGCGGGGGGCCGCCGCCCGTATCGTCGAAGATGGAAAAGCTCAAGCGGAAGGGACCCAACGGCTGGCGGAGGCTTGGCAGACCGCTGGTGCTAATGCCCGCGACATCTTCCTGCTCCAGAAG
(a)序列特征：
●长度：1099碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻UTEX 2973
SEQ ID NO:14：
来源于聚球藻UTEX2973的NS2基因的C-末端序列。
CTGAAACGGTGAAGTTTGCATTGTTTTTAAGCACGAGCCATCAACAGTAAGAGCGATCGCGCTGGGACGATGTAATCGCGCCGTAGGCAGGGTTTTGCCTCATCCGGCAGATGACAAGCTTCAAGATTCGGCAGTGAAGTATCGAGCAAGCGATACCAAACGCGGCCGCGAGGAGGCCTCGGCAACTGGAAGCGCAGGTCTTCCCAGTAAGCATTAAAGGCTAGGTAAAGCCATTCCTGCTGGCGAGGATGGCAGAGACTGACGGCCAGACTGTGGGACCACAGCGCCCAATCGGGTTGTTTGAGTTTGACGCCATGCCAGATGGCATAGGGACGACGCGGATGGGGTTCGTTCTGCAGCAGTTCGTTCTGTTGGAACATCACCAGCGACTGGGAAAGTTCAATCAGGCGGCGACTGAACACCAAGAAATCGGCATGGCGATCGCACAGCGACCAATCAAACCAGCTGATCTCATTGTCTTGGCAGTAGGCGTTATTGTTACCCTGCTGACTGCGTTTGACCTCATCGCCCATCGTCAGCATCGGTGTGCCCTGGGCGAGGAATAACGTGGCGAGCAAATTGCGCTGCTGCCGTTCCCGTAAGCTCAGAATCGTGGGGTCATCGGTCTCGCCTTCAATGCCGTAGTTCCAGCTGTAGTTGTCATTGGTCCCGTCCCGATTGTTCTCTCCATTGGCAAAGTTGTGCTTCTGGCTATAGCTGACTAGATCTCGCAGCGTAAAGCCGTCATGGCAGGTGATGAAGTTAATGGTGCGTCCGGCATACCATTGGTCTGTGCTGTAGACATCGGGGCTACCCAGCAGGCGTTGACTGAGGGCGTAAGTACAGCCCTGATCTCCACGCCAAAAACGCCGAATATCGTCCCGGAAGGGACCGTTCCAAGTCCCAA
(a)序列特征：
●长度：907碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻UTEX 2973
SEQ ID NO:15：
来源于集聚球藻UTEX2973的NS2基因的N-末端序列。
ACGGCAGCGAAAGGGCGACGGCGCGATCGCCGGTATGGAAAACGCTTGCTGCAGCATCAGATCGATGCGATCGCCGAAGACTGTGACCTAGATGAGGAAGCATGAGCGAACTGGGCTTGAGTCTGACGGCGATCGCGATTTTTACCACGACGGCATTAGCTTTGGTGGGACCAATGCTGGGTAGTTCTCCGCTGCTACCGGCGGGATTGGGTTTTAGCCTCTTGGTGCTGTTCAGTCTGGATGCGGTGACTTGGCAGGGGCGGGGTGCCACGTTACTGCTCGATGGCATTCAGCAGCGATCGCCCGAATATCGTCAGCGGATTTTGCATCACGAAGCGGGTCACTACTTGGTAGCAACCGCGCTGGGGTTACCCGTGACGGGCTACACCCTCTCAGCGTGGGAAGCGCTGCGCCAAGGACAACCTGGTCGCGGGGGTGTGCAGTTCCAAGCAGCTGCGCTAGAAGCCGAAGCCGCACAGGGGCAACTCAGTCAGCGATCGCTGGAACAGTGGTGTCAGGTGTTGATGGCCGGTGCAGCGGCAGAGCAACTGGTCTACGGCAACGTGGAAGGGGGAGCTGACGATCGCGCCCAGTGGAAACAACTGTGGCGGCAACTCGATCGCAATCCTGCCGAAGCGGATTTACGCAGTCGCTGGGGATTGTTACGGGCGAAGACTTTACTGGAGCAACAACGTCCCGCCTACGATGCTTTGGTGGCGGCGATGGCTGCAGAGGCCAGCATTGAAGACTGCAATCAAGCGATCGCCACTGCTTGGGTAGAAGAACCTGCGATCGCCGCTTAGTGAAGAGTCCAGAAGATTCCCCTCCCCTCTCGCCCAATGGACAAGGGAAATGTGATTCAGCATGAGTCAAGTCCCCAGTGCATGGATGGGTGTGCAATGACGGACAGAGGCTGTTGACTCTCAGTTATCCCTGTAAGCCAAATCGTCCGAAAATCACCAGCTGAAACGGTTAGGGTTGCATTGTTTTTAAGCACGAGCCATCAACAGTAAGAGCGATCGCGCAGGAACGGTTTAGTGTGTAGTTGCGG
(a)序列特征：
●长度：1051碱基对
●类型：DNA
●链型：单链
●拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：聚球藻UTEX 2973。
Figure IDA0001008606890000011
Figure IDA0001008606890000021
Figure IDA0001008606890000031
Figure IDA0001008606890000041
Figure IDA0001008606890000051
Figure IDA0001008606890000061
Figure IDA0001008606890000071
Figure IDA0001008606890000081
Figure IDA0001008606890000091
Figure IDA0001008606890000101
Figure IDA0001008606890000111
Figure IDA0001008606890000121
Figure IDA0001008606890000131

Claims (2)

1.一种蓝细菌，其特征在于：所述蓝细菌是2016年3月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的蓝细菌Syn2973::CscB，其保藏号为CGMCC No.12231。
2.一种在蓝细菌中生产糖类化合物的方法，其特征在于： 在含有150 mM NaCl或150mM KCl的条件下培养权利要求1所述的蓝细菌，从获得的培养物中提取所需的糖类化合物；
所述糖类化合物为蔗糖和糖原。
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