CN107223567A - 一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法 - Google Patents

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Abstract

本发明一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法，其特征在于：首先将文冠果成熟胚作为外植体进行处理与消毒，消毒完毕后即可接种在事先配制好的不定芽诱导培养基上，所述诱导培养基的配方为MS+6‑BA1.0mg/L+TDZ 0.05mg/L+NAA0.01mg/L；第三步将消毒后的种子，在超净工作台上进行无菌操作，将大子叶的先端用消毒手术刀切除，将大子叶背面朝下接种在事先配制好的不定芽诱导培养基中进行诱导；接种完成后，暗培7天，转至光照时间为13h，光照强度为2000‑3000lux，温度为25±2℃，空气湿度为30‑40％的条件下培养。采用以上方法可使文冠果成熟胚的分化率达到77.5％。

Description

一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法
技术领域
本发明涉及一种不定芽诱导方法，尤指一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法。
背景技术
文冠果无患子科、文冠果属落叶灌木或小乔木，高可达5米；小枝褐红色粗壮，叶连柄长可达30厘米；小叶对生，两侧稍不对称，顶端渐尖，基部楔形，边缘有锐利锯齿，两性花的花序顶生，雄花序腋生，直立，总花梗短，花瓣白色，基部紫红色或黄色，花盘的角状附属体橙黄色，花丝无毛；蒴果长达6厘米；种子黑色而有光泽。春季开花，秋初结果。
分布中国北部和东北部，西至宁夏、甘肃，东北至辽宁，北至内蒙古，南至河南。野生于丘陵山坡等处，各地也常栽培。
文冠果耐干旱、贫瘠、抗风沙，在石质山地、黄土丘陵、石灰性冲积土壤、固定或半固定的沙区均能成长，是中国特有的一种食用油料树种。
文冠果具有较高的工业价值和营养价值，油脂成份在种子和种仁中含量极高。研究结果证明：种仁中含油量达66.39％，优良品种的种仁中含油量达72％，超过一般的油料植物，其油脂的基本组成如下：硬脂酸、油酸38.9％(般食用油的主要成份之一)亚油酸40.2％(和豆油、核桃油相近，也是营养价值最高的部分，山嵛酸7.2％、亚麻酸及甘碳烯酸各为0.3％。文冠果是我国特有的经济木本油料树种，油黄色而透明，食用味美，油中所含亚油酸是中药益寿宁的主要成份，具有极好降血压作用，食用文冠果油可有效预防高血压、高血脂、血管硬化等病症。此外，文冠果种仁除可加工食用油外，还可制作高级润滑油、高级油漆、增塑剂、化妆品等工业原料。由文冠果籽油制备的生物柴油相关烃脂类成分含量高，内含18C的烃类占93.4％，而且无S、无N等污染环境因子，符合理想生物柴油指标。文冠果的柴油提取已获成功，陕西、河南、甘肃、北京等国内地区已在积极筹建文冠果油大中型加工厂，日本、韩国、加拿大等国也纷纷建造文冠果园林基地及加工厂。
发明内容
本发明一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法的目的是提供一种提高文冠果成熟胚分化率的方法。
本发明一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法所采用的技术手段是：首先配制诱导培养基，所述诱导培养基的配方为MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.05mg/L+NAA0.01mg/L；之后将文冠果成熟胚作为外植体进行处理与消毒；第三步将消毒后的种胚在超净工作台上进行无菌操作，将大子叶的先端用消毒手术刀切除，将大子叶背面朝下接种在事先配制好的不定芽诱导培养基中进行诱导；接种完成后，暗培7天后，转至光照时间为13h，光照强度为2000-3000lux，温度为25±2℃，空气湿度为30-40％的条件下培养。
对文冠果成熟胚作为外植体进行处理与消毒的步骤为：首先将文冠果种子用中性洗涤剂饱和液浸泡10min，同方向搅拌，然后用清水冲洗干净，再用清水浸泡15h；然后用0.5％浓度高锰酸钾溶液消毒10min，不断搅拌，用清水冲洗干净，再用75％酒精浸泡30s，用清水冲洗3-5遍；再次用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和烧杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀轻轻剥去种皮，剥完后，将完整的种胚放入消毒后的烧杯中，用流水冲洗1h；最后接种前，要在超净工作台上，再用70％酒精浸泡种子10s，用无菌水冲洗3遍；然后用0.1％浓度升汞溶液(HgCl)进行消毒，消毒时间为5min，同方向摇晃，用无菌水冲洗5遍，每次保持1min。
文冠果种子用中性洗涤剂主要成分是烷基磺酸钠和脂肪醇醚硫酸钠。
与现有技术的相比，本发明一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法的有益效果是：此方法将文冠果成熟胚为为外植体，在不定芽诱导培养基中进行诱导，通过直接途径进行不定芽的诱导，避免了通过间接途径(愈伤组织途径)产生不定芽的变异可能，同时，还能有效提高文冠果成熟胚不定芽的分化率。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
1、外植体的处理与消毒
(1)将文冠果种子用中性洗涤剂，用中性洗涤剂主要成分是烷基磺酸钠和脂肪醇醚硫酸钠，饱和液浸泡10min，同方向搅拌，然后用清水冲洗干净，再用清水浸泡15h；
(2)用0.5％浓度高锰酸钾溶液消毒10min，不断搅拌，用清水冲洗干净，再用75％酒精浸泡30s，用清水冲洗3-5遍；
(3)用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和烧杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀轻轻剥去种皮，剥完后，将完整的胚放入消毒后的烧杯中，用流水冲洗1h；
(4)接种前，要在超净工作台上，再用70％酒精浸泡种胚10s，用无菌水冲洗3遍；然后用0.1％浓度升汞溶液(HgCl)进行消毒，消毒时间为5min，同方向摇晃，用无菌水冲洗5遍，每次保持1min。
消毒完毕后即可接种在事先配制好的不定芽诱导培养基上。
2、诱导培养基
诱导培养基的配方为：MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.05mg/L+NAA0.01mg/L，诱导培养基需提前配制。
3、接种方法
将按照上述消毒方法消毒后的种子，在超净工作台上进行无菌操作。将大子叶的先端用消毒手术刀切除，将大子叶背面朝下接种在事先配制好的不定芽诱导培养基中进行诱导。
4、培养条件
接种完成后，暗培7天后，转至光照时间为13h，光照强度为2000-3000lux，温度为25±2℃，空气湿度为30-40％的条件下培养，30天后统计分化率。
实施例2
1、外植体的处理与消毒
(1)将文冠果种子用中性洗涤剂，用中性洗涤剂主要成分是烷基磺酸钠和脂肪醇醚硫酸钠，饱和液浸泡12min，同方向搅拌，然后用清水冲洗干净，再用清水浸泡17h；
(2)用0.5％浓度高锰酸钾溶液消毒10min，不断搅拌，用清水冲洗干净，再用75％酒精浸泡40s，用清水冲洗4-5遍；
(3)用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和烧杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀轻轻剥去种皮，剥完后，将完整的胚放入消毒后的烧杯中，用流水冲洗1.5h；
(4)接种前，要在超净工作台上，再用70％酒精浸泡种胚10s，用无菌水冲洗4遍；然后用0.1％浓度升汞溶液(HgCl)进行消毒，消毒时间为5min，同方向摇晃，用无菌水冲洗6遍，每次保持1min。
2、诱导培养基
诱导培养基配方：MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.05mg/L+NAA0.01mg/L，诱导培养基需提前配制。
3、接种方法
将按照上述消毒方法消毒后的种胚，在超净工作台上进行无菌操作。将大子叶的先端用消毒手术刀切除，将大子叶背面朝下接种在事先配制好的不定芽诱导培养基中进行诱导。
4、培养条件
接种完成后，暗培7天后，转至光照时间为13h，光照强度为1500lux，温度为25±2℃，空气湿度为30-40％的条件下培养，30天后统计分化率。
实施例3
1、外植体的处理与消毒
(1)将文冠果种子用中性洗涤剂，用中性洗涤剂主要成分是烷基磺酸钠和脂肪醇醚硫酸钠，饱和液浸泡15min，同方向搅拌，然后用清水冲洗干净，再用清水浸泡20h；
(2)用0.5％浓度高锰酸钾溶液消毒10min，不断搅拌，用清水冲洗干净，再用75％酒精浸泡45s，用清水冲洗5遍；
(3)用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和烧杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀轻轻剥去种皮，剥完后，将完整的种胚放入消毒后的烧杯中，用流水冲洗2h；
(4)接种前，要在超净工作台上，再用70％酒精浸泡种胚10s，用无菌水冲洗3-5遍；然后用0.1％浓度升汞溶液(HgCl)进行消毒，消毒时间为5min，同方向摇晃，用无菌水冲洗8遍，每次保持1min。
消毒完毕后即可接种在事先配制好的不定芽诱导培养基上。
2、诱导培养基
诱导培养基配方：MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.05mg/L+NAA0.01mg/L，诱导培养基需提前配制。
3、接种方法
将按照上述消毒方法消毒后的种胚，在超净工作台上进行无菌操作。将大子叶的先端用消毒手术刀切除，将大子叶背面朝下接种在事先配制好的不定芽诱导培养基中进行诱导。
4、培养条件
接种完成后，暗培7天后，转至光照时间为13h，光照强度为3000lux，温度为25±2℃，空气湿度为30-40％的条件下培养，30天后统计分化率。
以上方法可使文冠果成熟胚的分化率达到77.5％。

Claims (3)

1.一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法，其特征在于：首先配制诱导培养基，所述诱导培养基的配方为MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.05 mg/L+NAA0.01 mg/L；之后将文冠果成熟胚作为外植体进行处理与消毒；第三步将消毒后的种胚胚在超净工作台上进行无菌操作，将大子叶的先端用消毒手术刀切除，将大子叶背面朝下接种在事先配制好的不定芽诱导培养基中进行诱导；接种完成后，暗培7天后，转至光照时间为13h，光照强度为2000lux，温度为25±2℃，空气湿度为30-40％的条件下培养。
2.根据权利要求1所述的一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法，其特征在于：对文冠果成熟胚作为外植体进行处理与消毒的步骤为：首先将文冠果种子用中性洗涤剂饱和液浸泡10min，同方向搅拌，然后用清水冲洗干净，再用清水浸泡15h；然后用0.5％浓度高锰酸钾溶液消毒10min，不断搅拌，用清水冲洗干净，再用75％酒精浸泡30s，用清水冲洗3-5遍；再次用75％酒精浸泡和擦拭剪刀和烧杯等工具和器皿，用消毒后的剪刀轻轻剥去种皮，剥完后，将完整的胚放入消毒后的烧杯中，用流水冲洗1h；最后接种前，要在超净工作台上，再用70％酒精浸泡种子10s，用无菌水冲洗3遍；然后用0.1％浓度升汞溶液(HgCl)进行消毒，消毒时间为5min，同方向摇晃，用无菌水冲洗5遍，每次保持1min。
3.根据权利要求2所述的一种以文冠果成熟胚为外植体的不定芽诱导方法，其特征在于：文冠果种子用中性洗涤剂主要成分是烷基磺酸钠和脂肪醇醚硫酸钠。
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