CN107164545A - 西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法。本发明所提供的西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法包括如下步骤：以西瓜品种“京美”的基因组DNA为模板，采用28个核心SSR引物对分别进行PCR扩增，将扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳图谱构建“0，1”矩阵(在凝胶相同迁移率位置上，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”)；同样方法获得待测西瓜的“0，1”矩阵；将待测西瓜的“0，1”矩阵与“京美”的“0，1”矩阵进行比对。本发明构建的“京美”的“0，1”矩阵进与其他品种完全不同，能灵敏、高分辨地将其与其他品种区分，可有效用于“京美”的真伪鉴定，为“京美”的知识产权保护提供了有效的科学依据。
Description
技术领域
本发明属于蔬菜育种与应用技术，涉及一种西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法。
背景技术
西瓜不仅是北京市农民就业增收的高效园艺作物，也是满足城乡居民生活需求的重要时令水果。随着西瓜产业的蓬勃发展，对于优质西瓜品种的需求越来越大。但是，巨大的利益驱使，导致西瓜市场混乱，“同物异名、同名异物”现象普遍存在，这给西瓜品种的知识产权保护、种子质量管理和新品种认定带来了很大的困难。
为了规范市场并保护育种者的权益，需要对西瓜品种进行科学鉴定和评价。但目前缺乏简单高效的品种特异性检测手段，迫切需要研制一种简便、快速、准确的西瓜种质资源鉴定评价技术及标准方法，以作为新品种保护的技术基础和授权的科学依据。
传统的品种特异性测试主要以形态特征为基础，受环境影响大、稳定性差，测试周期长，严重影响特异性测试的有效性和权威性。分子标记因具有多态性高、测试周期短、不受环境影响等显著优势，成为品种特异性审查和品种鉴定的发展方向。目前，简单重复序列SSR(simple sequence repeats)技术具有共显性、准确率高、稳定性好等特点，因此，SSR分子标记在西瓜品种特异性评价中具有良好的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法。
本发明所提供的西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法，可包括如下步骤：
(A)建立西瓜品种“京美”的特异性分子身份证，包括如下步骤：
(A1)以西瓜品种“京美”的基因组DNA为模板，采用28个核心SSR引物对分别进行PCR扩增，得到扩增产物。
其中，所述28个核心SSR引物对及每个引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段的大小分别为如下a1)-a28)：
a1)由序列1和序列2所示两条DNA单链组成的引物对1；267bp、259bp、246bp；
a2)由序列3和序列4所示两条DNA单链组成的引物对2；164bp、162bp、160bp、156bp；
a3)由序列5和序列6所示两条DNA单链组成的引物对3；150bp、140bp；
a4)由序列7和序列8所示两条DNA单链组成的引物对4；140bp、134bp；
a5)由序列9和序列10所示两条DNA单链组成的引物对5；166bp、157bp；
a6)由序列11和序列12所示两条DNA单链组成的引物对6；170bp、133bp；
a7)由序列13和序列14所示两条DNA单链组成的引物对7；229bp、221bp；
a8)由序列15和序列16所示两条DNA单链组成的引物对8；178bp、163bp；
a9)由序列17和序列18所示两条DNA单链组成的引物对9；279bp、269bp；
a10)由序列19和序列20所示两条DNA单链组成的引物对10；245bp、195bp、187bp；
a11)由序列21和序列22所示两条DNA单链组成的引物对11；275bp、268bp、168bp；
a12)由序列23和序列24所示两条DNA单链组成的引物对12；240bp、209bp；
a13)由序列25和序列26所示两条DNA单链组成的引物对13；210bp、189bp；
a14)由序列27和序列28所示两条DNA单链组成的引物对14；180bp、172bp；
a15)由序列29和序列30所示两条DNA单链组成的引物对15；225bp、195bp；
a16)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对16；299bp、278bp、245bp；
a17)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对17；130bp、125bp；
a18)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对18；175bp、165bp、145bp；
a19)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对19；210bp、190bp、160bp、129bp；
a20)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对20；210bp、158bp；
a21)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对21；300bp、279bp、252bp；
a22)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对22；190bp、165bp；
a23)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对23；128bp、120bp；
a24)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对24；184bp、170bp；
a25)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对25；258bp、249bp；
a26)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对26；174bp、168bp；
a27)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对27；249bp、237bp；
a28)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对28；152bp、143bp。
(A2)将所述扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳图谱构建“0，1”矩阵；所述根据电泳图谱构建“0，1”矩阵的方法为：观察所述电泳图谱在每个参考条带位置有无条带出现，根据观察结果对所述电泳图谱中所有参考条带的出现与否按照特定顺序依次进行标记，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”；
所述所有参考条带为步骤(A1)中出现的所述28个核心SSR引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段的条带，共66个；
所述特定顺序为：所述28个核心SSR引物对按照步骤(A1)中a1)-a28)的顺序排列，每个引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段按照由大到小的顺序排列。
即：最终所构建的“0，1”矩阵由数字“0”和“1”排列组成，“0”和“1”的个数之和为66。在构成所述“0，1”矩阵的66个数字(“0”或“1”)中，前3个出现的数字(“0”或“1”)分别表示采用所述引物对1进行扩增，267bp、259bp和246bp对应的参考条带的有无(有则记“1”，无则记“0”)；第4-7个出现的数字(“0”或“1”)分别表示采用所述引物对2进行扩增，164bp、162bp、160bp、156bp对应的参考条带的有无(有则记“1”，无则记“0”)；以此类推(按照以上步骤a1)-a28)中出现的顺序)，第65-66个出现的数字(“0”或“1”)分别表示采用所述引物对28进行扩增，152bp、143bp对应的参考条带的有无(有则记“1”，无则记“0”)。
所述“0，1”矩阵或由所述“0，1”矩阵转换而成的二维码即为西瓜品种“京美”的特异性分子身份证。
(B)以待测西瓜的基因组DNA替代步骤(A1)和(A2)中的西瓜品种“京美”的基因组DNA，执行步骤(A1)和(A2)，得到所述待测西瓜的指纹图谱。
所述待测西瓜的指纹图谱为所述待测西瓜的“0，1”矩阵或由所述“0，1”矩阵转换而成的二维码。
(C)将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证进行比对，从而确定所述待测西瓜是否为“京美”。
在本发明中，步骤(A2)中，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳可为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，具体如8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。220V稳压电泳直至溴酚蓝指示剂迁移至可以使扩增DNA片段能够被清楚识别的距离时，停止电泳；银染法染色，拍照记录电泳结果。
在所述方法的步骤(A2)中，具体可采用QR精灵软件(具体如仙居朝歌软件有限公司出品的QRCode转化工具QR精灵2.12)将所述“0，1”矩阵转换成相应的二维码。
在所述方法的步骤(C)中，将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证进行比对，具体可按照如下确定所述待测西瓜是否为“京美”：如果所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证相符，则所述待测西瓜为或候选为“京美”；反之，则所述待测西瓜不为或候选不为“京美”。
本发明还保护建立西瓜品种“京美”的特异性分子身份证的方法。
本发明所提供的建立西瓜品种“京美”的特异性分子身份证的方法，具体可包括上述的步骤(A)。
利用所述方法获得的西瓜品种“京美”的特异性分子身份证也属于本发明的保护范围。
所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证在鉴定待测西瓜是否为“京美”中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明还提供一种鉴定西瓜种质资源特异性的方法。
本发明所提供的鉴定西瓜种质资源特异性的方法，具体可包括如下步骤：
(a)建立西瓜种质资源特异性指纹图谱库，包括如下步骤：
(a1)选取若干已知西瓜品种构成西瓜种质资源库；
(a2)分别以所述西瓜种质资源库中的各西瓜品种的基因组DNA为模板，采用所述28个核心SSR引物对分别进行PCR扩增，得到扩增产物；
(a3)针对每个西瓜品种，将所述扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后按照上述步骤(A2)的方法根据电泳图谱构建“0，1”矩阵；
所述西瓜种质资源库中的所有西瓜品种的所述“0，1”矩阵或由所述“0，1”矩阵转换而成的二维码即构成所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库；
(b)以待测西瓜的基因组DNA替代步骤(a2)和(a3)中所述西瓜种质资源库中的西瓜品种的基因组DNA，执行步骤(a2)和(a3)，得到所述待测西瓜的指纹图谱；
(c)将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中的各指纹图谱进行比对，从而确定所述待测西瓜是否为所述西瓜种质资源库中的品种和/或确定所述待测西瓜为所述西瓜种质资源库中的哪一品种。
在步骤(a3)中，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳可为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，具体如8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
在步骤(c)中，将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中的各指纹图谱分别进行比对，按照如下确定所述待测西瓜是否为所述西瓜种质资源库中的品种，以及为所述西瓜种质资源库中的哪一品种：如果所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中的某一指纹图谱A相符，则所述待测西瓜为或候选为所述西瓜种质资源库中的品种，且为或候选为所述西瓜种质资源库中具有所述指纹图谱A的品种；如果所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中全部指纹图谱均不相符，则所述待测西瓜不为或候选不为所述西瓜种质资源库中的品种。
在步骤(c)中，将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中的各指纹图谱分别进行比对的方法具体可采用PowerMarkerV3.0软件进行聚类分析。
在本发明中，所述西瓜种质资源库中的已知西瓜品种有：京美、京美母本、京美父本，以及表1中所示的来自于33个育种公司的100份西瓜品种。
在本发明中，用于PCR扩增模板的西瓜基因组DNA来自于西瓜幼芽样本。所述基因组DNA是采用碱提取DNA法制备的，具体步骤如下：将待测西瓜样品的种子37℃发芽3-4天，取1cm幼芽，分别装入2ml离心管，加入0.1M的NaOH溶液100μl，用组织捣碎仪打碎样品，沸水水浴1min，加入pH 8.0的Tris-HCl缓冲液1ml，充分混匀，得待测样品基因组DNA，4℃下保存备用。
在本发明中，进行PCR扩增采用的反应体系如下：基因组DNA 20ng、含Mg2+的10×buffer 1.25μl，dNTP 0.2mmol·L-1 1μl，上下游引物0.25mmol·L-1各1μl，Taq酶5U·μL-10.2μl，ddH2O补足至12.5μl。
在本发明中，进行PCR扩增采用的扩增程序如下：94℃下预变性5min；94℃下变性30sec、55℃退火30sec、72℃下延伸30sec，35个循环反应；72℃延伸5min；16℃永久保存。
在本发明中，所述8％非变性聚丙烯酰胺溶液由20ml ddH2O、4ml 10×TBE、16ml20％(质量百分比)Acr-Bis、40μl TEMED、400μl 10％(质量百分比)AP配制而成。
实验证明，本发明与常规的田间种植鉴定方法对比，其优点表现在：
1)精准：本明是以SSR技术为基础，构建了每个品种的唯一分子身份证，获得的“京美”父本、母本和F1的特异性分子身份证，能灵敏、高分辨地将其与其他品种区分，可有效用于“京美”的真伪鉴定，为“京美”的知识产权保护提供了有效的科学依据。同时，在对不同类型西瓜品种鉴定评价时，只需将待测品种与已有特异性分子身份证比较分析，即可确定其真实性与特异性。
2)高效：常规的田间种植鉴定法要在结瓜后才能判断品种特异性，周期长达1-2个月，本发明只需把待测品种种子发芽3-4天后，一步法快速提取基因组DNA，用上述SSR引物进行分子标记检测，5h之内即可完成品种特异性的鉴定工作。
3)简单：与常规田间种植鉴定法相比，其操作简单，程序化操作，不需特殊理论基础。
附图说明
图1为利用表2中28对核心引物构建的京美母本特异性分子身份证。
图2为利用表2中28对核心引物构建的京美父本分子身份证。
图3为利用表2中28对核心引物构建的京美特异性分子身份证。
图4为用PowerMarkerV3.0软件对102份供试材料进行特异性分析。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、西瓜品种“京美”的特异性分子身份证的获得
实验材料为来自33个育种公司的100份西瓜品种，以及京美母本、京美父本，来源见表1。
表1各西瓜种质资源的名称及来源
1、样品DNA的快速提取
将待测样品种子37℃发芽3-4天，取1cm左右的幼芽，分别装入2ml离心管，加入0.1M的NaOH溶液100μl，用组织捣碎仪打碎样品，沸水水浴1min左右，加入pH 8.0的Tris-HCl缓冲液1ml，充分混匀，得待测样品基因组DNA，4℃下保存备用。
2、PCR扩增
①反应体系
12.5μl反应体系如下：基因组DNA 20ng、含Mg2+的10×buffer 1.25μl，dNTP0.2mmol·L-1 1μl，上下游引物0.25mmol·L-1各1μl，Taq酶5U·μL-1 0.2μl，ddH2O补足至12.5μl。
②反应条件
94℃下预变性5min；94℃下变性30sec、55℃退火30sec、72℃下延伸30sec，35个循环反应；72℃延伸5min；16℃永久保存。
③引物信息
所采用的引物对为28个核心SSR引物对及每个引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段的大小详见表2。进行PCR扩增时，28个核心SSR引物对分别进行扩增。
表2 28个核心SSR引物对及可能扩增片段相关信息
3、聚丙烯酰胺凝胶凝胶电泳
针对每个样本的28分扩增产物分别在8％聚丙烯酰胺非变性凝胶(由20ml ddH2O、4ml 10×TBE、16ml 20％Acr-Bis、40μl TEMED、400μl 10％AP配制而成。％均表示质量百分比)电泳分离，120V稳压1.5小时后，0.1％AgNO3银染6min；然后用2％NaOH、0.4％甲醛显色。
4、拍照记录样品DNA的特征谱带。
5、对电泳结果，进行人工比对、校正，在凝胶相同迁移率位置上，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”，构建“0，1”矩阵，具体方法为：以所述28个核心SSR引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段的条带(即表2中的“所有可能扩增条带”，共66个)为参考条带，观察电泳图谱在每个参考条带位置有无条带出现，根据观察结果对所述电泳图谱中所有参考条带的出现与否按照特定顺序依次进行标记，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”；所述特定顺序为：所述28个核心SSR引物对按照编号1-28的顺序排列，每个引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段按照由大到小的顺序排列。
即：最终所构建的“0，1”矩阵由数字“0”和“1”排列组成，“0”和“1”的个数之和为66。在构成所述“0，1”矩阵的66个数字(“0”或“1”)中，前3个出现的数字(“0”或“1”)分别表示采用表2中编号为1的引物对进行扩增，267bp、259bp和246bp对应的参考条带的有无(有则记“1”，无则记“0”)；第4-7个出现的数字(“0”或“1”)分别表示采用表2中编号为2的引物对进行扩增，164bp、162bp、160bp、156bp对应的参考条带的有无(有则记“1”，无则记“0”)；以此类推(按照以上表2中编号1-28的顺序)，第65-66个出现的数字(“0”或“1”)分别表示采用表2中编号为28的引物对进行扩增，152bp、143bp对应的参考条带的有无(有则记“1”，无则记“0”)。
6、采用仙居朝歌软件有限公司出品的QRCode转化工具QR精灵2.12，按照操作指南，将步骤5所得“0，1”矩阵，转换为对应待测品种的特异性分子身份证，即待测品种的二维码。
图1是利用表2中28对核心引物构建的京美母本特异性分子身份证；图2是利用表2中28对核心引物构建的京美父本分子身份证；图3是利用表2中28对核心引物构建的京美特异性分子身份证。
7、通过PowerMarkerV3.0软件进行聚类分析(按照操作手册进行操作)。聚类结果显示，京美母本、京美父本和京美，与其他商业品种完全区分，说明其分子身份证是特异的。
图4是用PowerMarkerV3.0软件对102份供试材料进行特异性分析。
本实施例结果显示：本发明所提供的方法可有效用于“京美”的真伪鉴定，本发明为“京美”的知识产权保护提供了有效的科学依据。
<110> 北京市农林科学院
<120> 西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
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tggttgaaat caataaaaag tgaa 24
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<212> DNA
<213> 人工序列
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tggatgtttt tggcatttga 20
<210> 17
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<212> DNA
<213> 人工序列
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ttagcctaag caagggtttt t 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
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aagtacacat tttaaacaat caatcca 27
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<212> DNA
<213> 人工序列
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tggcctagaa gattattgag ctgc 24
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<212> DNA
<213> 人工序列
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cattatcaca tggcagataa tggaaa 26
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<212> DNA
<213> 人工序列
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tggatagaat ggaaagctct ga 22
<210> 22
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<213> 人工序列
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tcccacacat cattccaaaa 20
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ttcttgaaac tcaaccctca aa 22
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aaagcgtgtc gagtgtgaga 20
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atttctggcc ccagtgtaag 20
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gaacaacgca accacgtatg 20
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caaccggtct tcgtgaattt 20
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<213> 人工序列
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cggccaccac ttctcatatt 20
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ccctattgcc tatttttctc aa 22
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aaatttgtgc tcttcgtggg 20
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<213> 人工序列
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tcttttaagt tttgagggag agc 23
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<212> DNA
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ttcccaagct agccttttca 20
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<213> 人工序列
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aacgcacgat agttagaagg 20
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tgactaatta aactacactc agact 25
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<213> 人工序列
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catttccgtt tccattttct tcac 24
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<213> 人工序列
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aagtaacatc aagcagttcg ccat 24
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tgagaaaatg gaagatgcaa atga 24
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ttcttctcac tctctcctaa gattttgc 28
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atggttcatt ttcacgttcg 20
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aaaaatcaag caaagaacaa cat 23
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<213> 人工序列
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tgcttcaaaa tctattcaca atttgc 26
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ttcttggttt cgggtttctt taca 24
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cccccgccaa aattaaaa 18
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ttccacacca aggaggtagg 20
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<213> 人工序列
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catgtcattc gataaagcag aaa 23
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<213> 人工序列
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ggaagagtga ggtgataaat caatatgt 28
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<400> 56
aattggccca aatatccata tgac 24
Claims (9)
1.西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法，包括如下步骤：
(A)建立西瓜品种“京美”的特异性分子身份证，包括如下步骤：
(A1)以西瓜品种“京美”的基因组DNA为模板，采用28个核心SSR引物对分别进行PCR扩增，得到扩增产物；
其中，所述28个核心SSR引物对及每个引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段的大小分别为如下a1)-a28)：
a1)由序列1和序列2所示两条DNA单链组成的引物对1；267bp、259bp、246bp；
a2)由序列3和序列4所示两条DNA单链组成的引物对2；164bp、162bp、160bp、156bp；
a3)由序列5和序列6所示两条DNA单链组成的引物对3；150bp、140bp；
a4)由序列7和序列8所示两条DNA单链组成的引物对4；140bp、134bp；
a5)由序列9和序列10所示两条DNA单链组成的引物对5；166bp、157bp；
a6)由序列11和序列12所示两条DNA单链组成的引物对6；170bp、133bp；
a7)由序列13和序列14所示两条DNA单链组成的引物对7；229bp、221bp；
a8)由序列15和序列16所示两条DNA单链组成的引物对8；178bp、163bp；
a9)由序列17和序列18所示两条DNA单链组成的引物对9；279bp、269bp；
a10)由序列19和序列20所示两条DNA单链组成的引物对10；245bp、195bp、187bp；
a11)由序列21和序列22所示两条DNA单链组成的引物对11；275bp、268bp、168bp；
a12)由序列23和序列24所示两条DNA单链组成的引物对12；240bp、209bp；
a13)由序列25和序列26所示两条DNA单链组成的引物对13；210bp、189bp；
a14)由序列27和序列28所示两条DNA单链组成的引物对14；180bp、172bp；
a15)由序列29和序列30所示两条DNA单链组成的引物对15；225bp、195bp；
a16)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对16；299bp、278bp、245bp；
a17)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对17；130bp、125bp；
a18)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对18；175bp、165bp、145bp；
a19)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对19；210bp、190bp、160bp、129bp；
a20)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对20；210bp、158bp；
a21)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对21；300bp、279bp、252bp；
a22)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对22；190bp、165bp；
a23)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对23；128bp、120bp；
a24)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对24；184bp、170bp；
a25)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对25；258bp、249bp；
a26)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对26；174bp、168bp；
a27)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对27；249bp、237bp；
a28)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对28；152bp、143bp；
(A2)将所述扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳图谱构建“0，1”矩阵；所述根据电泳图谱构建“0，1”矩阵的方法为：观察所述电泳图谱在每个参考条带位置有无条带出现，根据观察结果对所述电泳图谱中所有参考条带的出现与否按照特定顺序依次进行标记，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”；
所述所有参考条带为步骤(A1)中出现的所述28个核心SSR引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段的条带，共66个；
所述特定顺序为：所述28个核心SSR引物对按照步骤(A1)中a1)-a28)的顺序排列，每个引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段按照由大到小的顺序排列；
所述“0，1”矩阵或由所述“0，1”矩阵转换而成的二维码即为西瓜品种“京美”的特异性分子身份证；
(B)以待测西瓜的基因组DNA替代步骤(A1)和(A2)中的西瓜品种“京美”的基因组DNA，执行步骤(A1)和(A2)，得到所述待测西瓜的指纹图谱；
所述待测西瓜的指纹图谱为所述待测西瓜的“0，1”矩阵或由所述“0，1”矩阵转换而成的二维码；
(C)将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证进行比对，从而确定所述待测西瓜是否为“京美”。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(A2)中，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(C)中，将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证进行比对，按照如下确定所述待测西瓜是否为“京美”：如果所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证相符，则所述待测西瓜为或候选为“京美”；反之，则所述待测西瓜不为或候选不为“京美”。
4.建立西瓜品种“京美”的特异性分子身份证的方法，包括权利要求1或2中步骤(A)。
5.利用权利要求4所述方法获得的西瓜品种“京美”的特异性分子身份证。
6.权利要求5所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证在鉴定待测西瓜是否为“京美”中的应用。
7.一种鉴定西瓜种质资源特异性的方法，包括如下步骤：
(a)建立西瓜种质资源特异性指纹图谱库，包括如下步骤：
(a1)选取若干已知西瓜品种构成西瓜种质资源库；
(a2)分别以所述西瓜种质资源库中的各西瓜品种的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述的28个核心SSR引物对分别进行PCR扩增，得到扩增产物；
(a3)针对每个西瓜品种，将所述扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后按照权利要求1或2中步骤(A2)的方法根据电泳图谱构建“0，1”矩阵；
所述西瓜种质资源库中的所有西瓜品种的所述“0，1”矩阵或由所述“0，1”矩阵转换而成的二维码即构成所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库；
(b)以待测西瓜的基因组DNA替代步骤(a2)和(a3)中所述西瓜种质资源库中的西瓜品种的基因组DNA，执行步骤(a2)和(a3)，得到所述待测西瓜的指纹图谱；
(c)将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中的各指纹图谱分别进行比对，从而确定所述待测西瓜是否为所述西瓜种质资源库中的品种和/或确定所述待测西瓜为所述西瓜种质资源库中的哪一品种。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤(a3)中，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：步骤(c)中，将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中的各指纹图谱分别进行比对，按照如下确定所述待测西瓜是否为所述西瓜种质资源库中的品种，以及为所述西瓜种质资源库中的哪一品种：如果所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中的某一指纹图谱A相符，则所述待测西瓜为或候选为所述西瓜种质资源库中的品种，且为或候选为所述西瓜种质资源库中具有所述指纹图谱A的品种；如果所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜种质资源特异性指纹图谱库中全部指纹图谱均不相符，则所述待测西瓜不为或候选不为所述西瓜种质资源库中的品种。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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