CN107144644A - 立达霉有关物质的测定方法 - Google Patents

立达霉有关物质的测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107144644A
CN107144644A CN201610541021.3A CN201610541021A CN107144644A CN 107144644 A CN107144644 A CN 107144644A CN 201610541021 A CN201610541021 A CN 201610541021A CN 107144644 A CN107144644 A CN 107144644A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
mould
plus
vertical
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610541021.3A
Other languages
English (en)
Inventor
朱凤娇
吕新美
胡鲲
孙晶
董亚萍
程俊茗
吴映捷
董龙香
刘思雅
范宁宁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Maritime University
Shanghai Ocean University
Original Assignee
Shanghai Maritime University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Maritime University filed Critical Shanghai Maritime University
Priority to CN201610541021.3A priority Critical patent/CN107144644A/zh
Publication of CN107144644A publication Critical patent/CN107144644A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种立达霉有关物质的测定方法，所述的测定方法包括：(1)专属性试验，(2)稳定性试验，(3)最大的有关物质测定。其优点表现在：本发明采用HPLC对立达霉有关物质进行测定，具有高效、灵敏度高、分析速度快、准确度高等优点。本发明提供了立达霉的专属性试验方法、稳定性试验方法和最大的有关物质的测定方法。

Description

立达霉有关物质的测定方法
技术领域
本发明涉及农药技术领域，具体地说，是立达霉有关物质的测定方法。
背景技术
高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱中，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱法已在化学、医学、工业、农学、商检、法检等领域得到广泛的应用。
中国专利文献CN105223278A公开了一种固相萃取液质联用法测定葡萄酒中甲霜灵、多菌灵的方法，包括先调节待测葡萄酒的pH值，用乙腈对酒样进行液液萃取，加入氯化钠待溶液盐析后用固相萃取柱萃取乙腈层，通过固相萃取柱洗脱，收集净化后的洗脱液，继而转入旋转蒸发仪浓缩，用氮气吹干浓缩液，通过乙腈水溶液回溶后，注入液质联用仪进行分析，获得葡萄酒中甲霜灵、多菌灵的含量的步骤。中国专利文献CN104535671A公开了一种茄子中甲霜灵残留的检测方法，包括以下几个步骤：(1)样品处理：将采摘后的茄子置于破碎机中破碎，得到茄子浆；(2)提取：称取茄子浆20g于锥形瓶中，加入100mL的乙酸乙酯和丙酮混合液，在温度为35-40℃的条件下振荡提取60-70min，抽滤得清液，浓缩至近干，氮吹至干，用2mL乙腈复溶备用；(3)小柱分离：用5mL乙酸乙酯洗涤HLB小柱，再用5ml丙酮洗涤小柱，上样，用10mL体积比为1:2的乙腈和水混合液淋洗小柱，最后用10ml的乙腈洗脱，收集洗脱液，旋蒸至1ml，氮气吹干，采用乙腈定容至2ml，待检测；(4)检测：采用HPLC进行检测。但是关于本发明的立达霉有关物质的测定方法目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种立达霉有关物质的测定方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种立达霉有关物质的测定方法，所述的测定方法包括：
(1)专属性试验，
(2)稳定性试验，
(3)最大的有关物质测定。
一种立达霉专属性试验方法，所述的试验方法包括：
(1)酸破坏试验：取样品加盐酸溶液，置热水浴中加热，取出后放冷，用氢氧化钠中和，加流动相稀释，然后进行HPLC分析；
(2)碱破坏试验：取样品加氢氧化钠，置热水浴中加热，取出后放冷，用盐酸中和，加流动相稀释，然后进行HPLC分析；
(3)氧化破坏试验：取样品加过氧化氢，放置一段时间后取出，加流动相稀释，然后进行HPLC分析；
(4)加热破坏试验：取样品加流动相稀释，置100℃水浴中加热，取出后放至室温，然后进行HPLC分析；
(5)光破坏试验：取样品置于紫外灯下照射，加流动相稀释，然后进行HPLC分析。
所述的试验方法包括：
(1)酸破坏试验：取样品20mg加1mol/L盐酸溶液5mL，置热水浴中加热30min，取出后放冷，用1mol/L氢氧化钠溶液中和，加流动相稀释制成每1mL中含2mg样品的溶液，然后进行HPLC分析；
(2)碱破坏试验：取样品20mg加1mol/L氢氧化钠溶液5mL，置热水浴中加热30min，取出后放冷，用盐酸中和，加流动相稀释制成每1mL中含2mg样品的溶液，然后进行HPLC分析；
(3)氧化破坏试验：取样品20mg加30％过氧化氢5mL，放置1小时后取出，加流动相稀释制成每1mL中含2mg样品的溶液，然后进行HPLC分析；
(4)加热破坏试验：取样品加流动相稀释制成每1mL中含2mg样品的溶液，置100℃水浴中加热2小时，取出后放至室温，然后进行HPLC分析；
(5)光破坏试验：取样品置于紫外灯下照射24小时，称取20mg加流动相稀释制成每1mL中含2mg的溶液，然后进行HPLC分析。
HPLC分析的条件为：C18柱，柱温是30℃，检测波长225nm，流速1.5ml/min，流动相为甲醇：水＝5:95。
一种立达霉稳定性试验方法，所述的稳定性试验方法包括以下步骤：称取样品并用流动相溶解，在0-24h内在HPLC进样分析，记录色谱图，以主峰峰面积考察溶液的稳定性。
一种立达霉最大的有关物质的测定方法，所述的测定方法为运用HPLC测定2,6-二甲苯胺，色谱柱为C18柱，流动相为乙腈：磷酸水＝40：60，检测波长为225nm，检测温度为30℃，流速为1.25mL/min，进样量为10μL。
2,6-二甲苯胺的检出限为0.02μg/mL。
2,6-二甲苯胺的定量限为0.1μg/mL。
本发明优点在于：
1、本发明采用HPLC对立达霉有关物质进行测定，具有高效、分离效能高，灵敏度高，分析速度快，准确度高等优点。
2、本发明提供了立达霉的专属性试验方法、稳定性试验方法和最大的有关物质的测定方法。
附图说明
附图1：未破坏的系统适应性溶液色谱图。
附图2：光破坏立达霉的色谱图。
附图3：酸破坏立达霉的色谱图。
附图4：碱破坏立达霉的色谱图。
附图5：氧化破坏立达霉的色谱图。
附图6：2,6-二甲苯胺的色谱图。
附图7。2,6-二甲苯胺和立达霉的色谱图。
附图8：0.1μg/mL的2,6-二甲苯胺的色谱图。
具体实施方式
下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
对照品：
立达霉(甲霜灵)对照品：购自北京世纪奥科生物技术有限公司，德国Dr.Ehrenstorfer，CAS编号57837-19-1(Water Content0.1％,Det.Purity99.0％,Tolerance/Uncertainty+/-0.5％,Determined by Karl-Fischer Titration)。
供试品：
“复方立达霉粉”(美婷)，长沙拜特生物科技研究所有限公司提供，样品编号分别为20111101、20111201、20120101、20120508、20120708、20120722、20120811、20120813、20120830、20121101、20121201和20130101。
溶液制备
供试品溶液取本品适量，加流动相稀释至每1mL中约含立达霉0.1mg的溶液，作供试品溶液。
对照品溶液精密称取立达霉对照品适量，加流动相溶解并稀释为每1mL中约含0.1mg立达霉的溶液，作为对照品溶液。
1、专属性试验
酸破坏试验：取立达霉20mg，加1mol/L盐酸溶液5mL，置热水浴中，加热30min取出，放冷，用1mol/L氢氧化钠溶液中和，加流动相稀释制成每1mL中含2mg的溶液，上HPLC。
碱破坏试验：取立达霉20mg，加1mol/L氢氧化钠5mL，置热水浴中，加热30min取出，放冷，用1mol/L盐酸溶液中和，加流动相稀释制成每1mL中含2mg的溶液，上HPLC。
氧化破坏试验：取立达霉20mg，加30％过氧化氢5mL，放置1h，取出，加流动相稀释制成每1mL中含2mg的溶液，上HPLC。
加热破坏试验：取立达霉适量，加流动相溶解并稀释成每1mL中含有2mg的溶液，置100℃水浴中，加热2h，取出，放至室温。上HPLC。
光破坏试验：取立达霉适量，置紫外灯下，照射24h，称取20mg，精密测定，加流动相溶解并稀释成每1mL中含有2mg的溶液，上HPLC。
根据制剂处方及工艺，制备空白辅料样品，上HPLC。
取系统适用性溶液，上HPLC。
HPLC条件：色谱柱是RP-ODS柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温是30℃，检测波长包括225nm，流速1.5ml/min，流动相为甲醇：水＝5:95(V:V)。
未破坏的系统适应性溶液色谱图见附图1，光破坏立达霉的色谱图见附图2，酸破坏立达霉色谱图见附图3，碱破坏立达霉色谱图见附图4，氧化破坏立达霉色谱图见附图5。
结果显示，立达霉经过酸/碱水浴、光和氧化破坏能产生明显的降解产物，立达霉在加热破坏时未出现降解产物。建立的HPLC法能有效分离立达霉及其经酸碱、光和氧化破坏后产生的降解产物，立达霉峰与其它分解产物峰分离良好，说明本法专属性强。
2、稳定性试验
精密称取“复方立达霉粉”(批号20111101)适量，加流动相溶解，在0～24h内进样测定并记录色谱图，以主峰峰面积和杂质含量为指标考察溶液稳定性，结果见表1。立达霉主峰面积的RSD＝0.25％。结果表明立达霉供试品溶液24h内稳定性良好。
表1稳定性试验结果
3、样品测定
将不同批次的“复方立达霉粉”按照以上方法(稳定性试验的操作方法)进行测定，结果见表2。在有关物质方面，“复方立达霉粉”样品中单个最大杂质最高为3.48％，最低为1.97％，平均为2.75％。“复方立达霉粉”样品中总杂质最高为5.32％，最低为3.24％，平均为4.48％。
表2样品有关物质测定结果
根据有关物质测定结果，将单个杂质限度定为4.0％，杂质总量限度定为6.0％。
4、最大的有关物质
最大的有关物质为2,6-二甲苯胺。2,6-二甲苯胺是立达霉合成途径过程的中间产物(详见《立达霉(甲霜灵)生产工艺》)，有可能在生产立达霉原料过程中掺入到立达霉原料中。
2,6-二甲苯胺的分析方法采取高效液相色谱法，色谱条件为：C18RP-ODS柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相【乙腈：磷酸水＝40：60(V/V)】；检测波长为225nm；检测温度30℃，流速为1.25mL/min。进样量10μL。该检测方法可以有效地将检测2,6-二甲苯胺，2,6-二甲苯胺保留时间约为1.68min(附图6)。将2,6-二甲苯胺和立达霉的混合液上HPLC，2,6-二甲苯胺保留时间约为1.68min，立达霉的保留时间为4.97min(附图7)，证明该方法特异性良好。
以信噪比S/N≥3计算，确定2,6-二甲苯胺的检出限为0.02μg/mL，相当于总含量的0.01％。以信噪比S/N≥10计算，确定2,6-二甲苯胺的定量限为0.1μg/mL(附图8)，相当于总含量的0.05％。以上比例均远低于杂质的限度值。
将系列浓度梯度的2,6-二甲苯胺标准溶液上HPLC。以2,6-二甲苯胺浓度(μg/mL)为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。2,6-二甲苯胺标准溶液在0.1μg/mL-1000μg/mL的线性范围内与峰面积的线性关系良好，线性回归方程为y＝5.5254x+6.1058，相关系数(R2)为0.9999。
将一定量2,6-二甲苯胺添加到空白溶液中，用以上方法，测定2,6-二甲苯胺的准确度和精密度。2,6-二甲苯胺的平均回收率为94.60％～99.02％，精密度为0.55％～4.45％，详细见表3。
表3 2,6-二甲苯检测的准确度和精密度(n＝5)
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种立达霉有关物质的测定方法，其特征在于，所述的测定方法包括：
(1)专属性试验，
(2)稳定性试验，
(3)最大的有关物质测定。
2.一种立达霉专属性试验方法，其特征在于，所述的试验方法包括：
(1)酸破坏试验：取样品加盐酸溶液，置热水浴中加热，取出后放冷，用氢氧化钠中和，加流动相稀释，然后进行HPLC分析；
(2)碱破坏试验：取样品加氢氧化钠，置热水浴中加热，取出后放冷，用盐酸中和，加流动相稀释，然后进行HPLC分析；
(3)氧化破坏试验：取样品加过氧化氢，放置一段时间后取出，加流动相稀释，然后进行HPLC分析；
(4)加热破坏试验：取样品加流动相稀释，置100℃水浴中加热，取出后放至室温，然后进行HPLC分析；
(5)光破坏试验：取样品置于紫外灯下照射，加流动相稀释，然后进行HPLC分析。
3.根据权利要求2所述的立达霉专属性试验方法，其特征在于，所述的试验方法包括：
(1)酸破坏试验：取样品20mg加1mol/L盐酸溶液5mL，置热水浴中加热30min，取出后放冷，用1mol/L氢氧化钠溶液中和，加流动相稀释制成每1mL中含2mg样品的溶液，然后进行HPLC分析；
(2)碱破坏试验：取样品20mg加1mol/L氢氧化钠溶液5mL，置热水浴中加热30min，取出后放冷，用盐酸中和，加流动相稀释制成每1mL中含2mg样品的溶液，然后进行HPLC分析；
(3)氧化破坏试验：取样品20mg加30％过氧化氢5mL，放置1小时后取出，加流动相稀释制成每1mL中含2mg样品的溶液，然后进行HPLC分析；
(4)加热破坏试验：取样品加流动相稀释制成每1mL中含2mg样品的溶液，置100℃水浴中加热2小时，取出后放至室温，然后进行HPLC分析；
(5)光破坏试验：取样品置于紫外灯下照射24小时，称取20mg加流动相稀释制成每1mL中含2mg的溶液，然后进行HPLC分析。
4.根据权利要求2所述的立达霉专属性试验方法，其特征在于，流动相为甲醇：水＝5:95。
5.根据权利要求2所述的立达霉专属性试验方法，其特征在于，HPLC分析的条件为：C18柱，柱温是30℃，检测波长225nm，流速1.5ml/min，流动相为甲醇：水＝5:95。
6.一种立达霉稳定性试验方法，其特征在于，所述的稳定性试验方法包括以下步骤：称取样品并用流动相溶解，在0-24h内在HPLC进样分析，记录色谱图，以主峰峰面积考察溶液的稳定性。
7.一种立达霉最大的有关物质的测定方法，其特征在于，所述的测定方法为运用HPLC测定2,6-二甲苯胺，色谱柱为C18柱，流动相为乙腈：磷酸水＝40：60，检测波长包括225nm，检测温度为30℃，流速为1.25mL/min，进样量为10μL。
8.根据权利要求6所述的立达霉最大的有关物质的测定方法，其特征在于，2,6-二甲苯胺的检出限为0.02μg/mL。
9.根据权利要求6所述的立达霉最大的有关物质的测定方法，其特征在于，2,6-二甲苯胺的定量限为0.1μg/mL。
CN201610541021.3A 2016-07-11 2016-07-11 立达霉有关物质的测定方法 Pending CN107144644A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610541021.3A CN107144644A (zh) 2016-07-11 2016-07-11 立达霉有关物质的测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610541021.3A CN107144644A (zh) 2016-07-11 2016-07-11 立达霉有关物质的测定方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107144644A true CN107144644A (zh) 2017-09-08

Family

ID=59783463

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610541021.3A Pending CN107144644A (zh) 2016-07-11 2016-07-11 立达霉有关物质的测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107144644A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104251896A (zh) * 2014-09-30 2014-12-31 江苏红豆杉药业有限公司 一种半合成紫杉醇的质量控制方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104251896A (zh) * 2014-09-30 2014-12-31 江苏红豆杉药业有限公司 一种半合成紫杉醇的质量控制方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
庞元勋等: "恶霉灵、甲霜灵复配制剂的高效液相色谱分析", 《农药》 *
彭红等: "《药物分析实验》", 31 March 2015, 中国医药科技出版社 *
肖国初等: "复方立达霉粉的稳定性研究", 《南方农业学报》 *
轩涛等: "HPLC法测定甲磺酸罗哌卡因中2,6-二甲基苯胺的含量", 《福建分析测试》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107247105B (zh) 一种固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法检测茶叶中高氯酸盐的方法
CA2685358C (en) Method of detecting blood plasma danshensu and salvianolic acid b after administration of fuzheng huayu (fzhy)
CN103048401B (zh) 化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的测定方法
CN102495167A (zh) 枸杞多糖提取物中枸杞多糖的检测方法
CN104502518B (zh) 一种治疗小儿厌食症的中药制剂的检测方法
CN107091898A (zh) 一种茶叶鲜样中游离氨基酸含量的快速分析方法
CN107202836A (zh) 一种茶叶鲜样中茶氨酸含量的快速分析方法
CN107462650A (zh) 人体尿液中环境激素的检测方法
CN104237408B (zh) 复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法
CN110231412B (zh) 绞股蓝中皂苷含量的检测方法
CN108802240A (zh) 毛发中大麻类化合物的提取和检测方法
CA2685359C (en) Method of detecting blood plasma amygdalin after administration of fuzheng huayu(fzhy)
CN103575830B (zh) 血浆中4种蒽醌的分析方法及其在药代动力学中的应用
CN112684068A (zh) 测定羟基-α-山椒素含量的方法
CN102539592A (zh) 检测体液中极长链脂肪酸含量的方法
CN107144644A (zh) 立达霉有关物质的测定方法
CN101334389B (zh) 巴戟天寡糖的含量测定方法
CN102608231A (zh) Hplc法测定维生素c泡腾片中维生素c含量的方法
CN109061009B (zh) 一种发酵液中衣康酸含量的测定方法
CN110412164B (zh) 一种盐酸美西律的有关物质的检测方法
CN111044641B (zh) 羟基脲及其制剂的检测方法和应用
CN107449848A (zh) 一种鉴别化妆品原料中拉瑞阿提取物的方法
CN111650289A (zh) 一种3-氯-1-(n,n-二甲基)丙胺盐酸盐有关物质的测定方法
CN106018642B (zh) 一种测定乐舒洗液中苦参碱含量的spe‑hplc法
CN103808819B (zh) 一种红景天药材中主要成分的含量测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170908

RJ01 Rejection of invention patent application after publication