CN101334389B - 巴戟天寡糖的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种巴戟天寡糖的含量测定方法，包括：采用高效液相色谱法进行测定；以含有乙腈的水溶液为流动相，采用示差检测器或蒸发光散射检测器进行测定；按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3～9聚体的含量，再将菊淀粉型寡糖3～9聚体的含量进行加和，即得巴戟天寡糖的含量；本发明以单一对照品来测定某一化学部位中多个结构类似的化合物总量的同时，还对所测化学部位中各个成分及其相对含量进行测定，简化了操作步骤，提高了含量测定的精确性，减少了对照品数量，缩短了测定时间，重复性好，适用性高。

Description

巴戟天寡糖的含量测定方法
技术领域
本发明提供了一种巴戟天寡糖的检测方法，其为一种含有多个寡糖成分的寡糖混合物的含量测定方法，尤其是指在制剂或提取物或原料药中的巴戟天寡糖的高效液相含量测定方法。
背景技术
在制药领域，对于某种成分的含量测定，采用高效液相的色谱分析是很常规的方法，本领域技术人员常常设定某一成分为对照品，在标的物中参照该对照品进行某成分的分析测定，对于含有多种中药有效成分且需要同时对该多种中药成分进行定性和定量测定的时候，往往根据该多种成分找出其一一对应的多种对照品，再依次进行测定，这种对含有多个同类近似成分的一个标的物进行逐一测定的缺点是不可避免的，操作繁琐、耗时费力、效率低下，同一化学部位中各成分相对含量标准各自独立、互不相关，如此难免会造成一定程度的偏差，无法更有效、精确地控制质量。
对含巴戟天寡糖的制剂而言，以及对巴戟天寡糖原料药或由天然植物提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物而言，其有效成分为寡糖类物质，该寡糖物质是3-9糖的混合物，若采用化学显色反应，显示与其它糖类(单糖、双糖、多糖)相同的反应特征，因此，数据证明对于检测巴戟天寡糖，选择HPLC的色谱鉴别更具有专属性，而且为了测定的结果更加科学和严谨，需要研发出一种能在测定该化学部位总量的同时还能鉴别出其中各个成分、并给出各个成分相对含量、尽量减少对照品的种类、操作简单的高效液相含量测定方法。
发明内容
目前在含有巴戟天寡糖的中药制剂中，以及含有巴戟天寡糖的原料药或由天然植物提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物中，尤其是制剂及提取物生产的质量监控方面，没有规范成熟的含测方法，本发明的目的是提供一种巴戟天寡糖的含量测定方法，使用该方法以及该方法中的技术指标，可以很好的监控含有巴戟天寡糖的巴戟天制剂、尤其是口服制剂的质量，以及监控含有巴戟天寡糖的原料药或由天然植物提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物，使中药质量稳定可控，保障疗效，能更好地服务社会。
本发明的目的是开发一种含有巴戟天寡糖成分的制剂、原料药以及含有巴戟天寡糖的中药提取物的质量控制方法，该方法简便、高效，适合科研、市场销售、市场监督、临床应用和工业化生产中质量检测的需要。
本发明提供一种巴戟天寡糖的含量测定方法，该巴戟天寡糖至少含有菊淀粉型寡糖5聚体，并存在于巴戟天寡糖原料药或由天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物或含有巴戟天寡糖的制剂中，该含量测定方法包括：
(1)采用高效液相色谱法进行测定，以含有乙腈的水溶液为流动相，采用示差检测器或蒸发光散射检测器检测；
(2)对照品溶液的制备：称取菊淀粉型寡糖5聚体作为对照品，加水或步骤(1)中所述的流动相制成对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：取含有巴戟天寡糖的制剂或含有巴戟天寡糖的原料药或由天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物，加1-100重量倍数的水或者流动相使其混合或溶解，取上清液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(4)测定：分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定；
(5)计算：按供试品图谱中各个色谱峰与菊淀粉型寡糖5聚体对照品相对保留时间，鉴定总寡糖中各个寡糖的存在；按外标法以峰面积计算该巴戟天寡糖中所含有的菊淀粉型寡糖n聚体的含量，n为3～9的任一或其混合，进而确定该巴戟天寡糖中各菊淀粉型寡糖n聚体的相对含量比例，再将菊淀粉型寡糖n聚体的含量进行加和，即得所述的巴戟天总寡糖的含量。
上述的巴戟天寡糖在含有菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)的同时，优选还含有菊淀粉型寡糖3～4、6～9聚体中任一寡糖或其混合物。
上述巴戟天寡糖为具有抗抑郁作用的活性成分，包括菊淀粉型寡糖3糖～9糖，即，本发明所述的巴戟天寡糖是至少含有菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)的寡糖，或同时含有菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)以及菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)任意或其组合的混合物。
在本发明的优选实施例中，上述方法中步骤(1)中色谱柱优选采用氨基柱(氨基色谱柱)或C18反相柱；例如Inertsil NH2柱(5μm，4.6×250mm)，采用的检测器为示差检测器或蒸发光散射检测器，针对这样的色谱条件，所述的流动相一般选择含有40-80％(体积)的乙腈的水溶液；优选为体积比3∶1～1∶1的乙腈与水的混合溶液。
本发明所述的巴戟天寡糖是含有菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的混合物。一般而言，可以将菊淀粉型寡糖n聚体简称为n糖，n为3～9，例如，菊淀粉型寡糖5聚体即为5糖，菊淀粉型寡糖9聚体即为9糖。
发明人发现，为了改善拖尾，使得到的色谱图的峰型完整美观，本发明所述的含量测定方法中采用的含有乙腈的水溶液的流动相优选还含有三乙胺，所述的三乙胺在该流动相中所占的体积一般不超过0.5％；一般可为0.01％-0.5％。
在本发明的优选实施例中，上述含量测定方法步骤(1)所述的流动相最优选为体积比68∶32的乙腈和水的混合溶液，该混合溶液中还含有不超过该流动相体积的0.5％的三乙胺；例如，可以是体积比68∶32∶0.1的乙腈、水和三乙胺的混合溶液作为流动相，得到的图谱和峰型呈现令人惊喜的趋于完美效果。
本发明对照品选用菊淀粉型寡糖5聚体，选择菊淀粉型寡糖5聚体作为对照是因为巴戟天寡糖是3～9聚体寡糖的混合物，在研究确定的HPLC色谱条件下，5糖相对保留时间居中、色谱峰峰高或峰面积适中，以其标定其它3-4、6-9糖，各糖与5糖峰相对位置差较均匀，可减少以色谱图峰面积或峰高积分计算相对含量和总寡糖含量时存在的系统偏差。同时，采用5糖能够使得其他糖(即，3、4、6、7、8和9糖)的HPLC的峰型清晰、分离度较好、准确度高。
本发明的检测对象是巴戟天寡糖，其存在于含有巴戟天寡糖的原料药中，或存在于由天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物中，或存在于含有巴戟天寡糖的制剂中，该制剂包括固体制剂和液体制剂，固体制剂可是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂等等，液体制剂可是口服液、糖浆剂、注射剂等。
其中，含有巴戟天寡糖的原料药理论上既包括固体的原料药，也可以是液体的原料药，同样地，天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物理论上也可以是固体状态的提取物，还可以是液体状态的提取物。
上述的天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物既可以是巴戟天中药材提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物，也可以是多种天然植物(其中至少包括巴戟天，还可以是与巴戟天相近科属的植物，例如茜草科的大果巴戟、百眼藤、羊角藤等)提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物，还可以是包括上述植物在内的混合植物提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物。
不管本发明的检测对象巴戟天寡糖存在于巴戟天寡糖原料药中，还是存在于由天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物中，抑或存在于含有巴戟天寡糖的制剂中，以该巴戟天寡糖的存在形式为固体状态为例，所述的供试品溶液的制备包括：取含有巴戟天寡糖的固体制剂或固体巴戟天寡糖原料药或由天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的固体提取物，加水或者流动相使其溶解或混合，取上清液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
业内公知，此处的原料药或提取物均应含有巴戟天寡糖。而含有巴戟天寡糖的原料药，其中的巴戟天寡糖含量至少占原料药总量的50％以上；而由天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物，其中的巴戟天寡糖含量则没有限制，具体由提取天然植物(中药材)中的巴戟天寡糖含量和提取精制工艺、以及提取物应用目的而定。同样地，含有巴戟天寡糖的天然植物(中药材)中的其它成分或杂质的种类和量也较原料药复杂。
上述滤过优选采用的是微孔滤膜，该微孔滤膜的孔径一般可以是0.3、0.45、0.5、0.75um，优选0.45um。
优选地，上述每0.2-0.5g固体制剂或固体巴戟天寡糖原料药或固体提取物，于具塞锥形瓶中加入水和/或流动相10ml，超声，取上清液，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
以该巴戟天寡糖的存在形式为液体状态为例，所述的供试品溶液的制备包括：取含有巴戟天寡糖的液体制剂或含有巴戟天寡糖的液体原料药或由天然植物(中药材)提取得到的含有巴戟天寡糖的液体提取物，加水或者流动相稀释，取上清液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
优选地，上述每0.1-10ml的液体制剂或液体巴戟天寡糖原料药或液体提取物，于具塞锥形瓶中加入水和/或流动相至10ml，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
在制备供试品溶液的过程中，溶解过程中还经历了超声，溶解后用孔径为不超过0.75um的微孔滤膜滤过的过程，优选实施例中的微孔滤膜为0.45um的微孔滤膜，取续滤液即为供试品溶液；所述的固体制剂供试品溶液更优选为每0.3g供试品加入水或流动相10ml得到的溶液。
再以该巴戟天寡糖的存在于含有巴戟天寡糖的固体制剂中为例，所述的最优选的供试品溶液的制备方案包括：每0.3g含有巴戟天寡糖的固体制剂加入水10ml，即得供试品溶液；该固体制剂为胶囊剂(主要检测对象是胶囊剂的内容物)、粉针剂、片剂或颗粒剂。
本发明的含量测定方法中，所述的高效液相色谱法所采用的检测器为示差检测器或蒸发光散射检测器。
在本发明的另一实施例中，所述的含量测定方法包括：
(1)采用高效液相色谱法进行测定；色谱条件是采用氨基柱；以乙腈∶水∶三乙胺的体积比68∶32∶0.1为流动相；检测器为示差检测器；柱温40℃，检测器温度40℃；理论板数按菊淀粉型寡糖5聚体计算不低于2000；
(2)对照品溶液的制备，称取菊淀粉型寡糖5聚体作为对照品，加水制成每1ml含1mg的对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备，取含有巴戟天寡糖的胶囊剂的内容物0.25-0.35g，置具塞锥形瓶中，加入水10ml，功率100W频率40KHz下超声10分钟，静置，取上清液，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
(4)进行测定，分别吸取对照品溶液与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定；
(5)计算，按供试品图谱中各个色谱峰与菊淀粉型寡糖五聚体对照品相对保留时间，鉴定总寡糖中各个寡糖的存在；按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3～9聚体的含量，进而确定总寡糖中各个寡糖的相对含量比例，再将菊淀粉型寡糖3～9聚体的含量进行加和，即得巴戟天总寡糖的含量。
本发明在寡糖混合物中以其中的菊淀粉型寡糖5聚体这种成分作为对照品，采用高效液相色谱法，利用示差检测器或蒸发光散射检测器，优选采用示差检测器来测定寡糖含量的方法。其创新点在于：以该菊淀粉型寡糖5聚体这种成分为基准，将该成分的保留时间定为1，其他聚合体色谱峰的保留时间相应换算成相对保留时间，按外标法以峰面积分别计算各成分以及总的寡糖的含量，即可得到较为稳定且准确的巴戟天寡糖的含量。这样可以以一种对照品来测定多个结构类似的化合物的含量，提高了含量测定的精确性，简化了操作步骤，减少了对照品数量，缩短了测定时间，重复性好，适用性高。
以下述实例来说明但不限制该专利：
该液相色谱图中供试品图谱中5糖色谱峰的保留时间，应与菊淀粉型寡糖5聚体对照品保留时间一致，与菊淀粉寡糖5聚体相比，还应出现相对保留时间为0.50～0.70的菊淀粉型寡糖3聚体峰；0.70～0.90的菊淀粉型寡糖4聚体峰；1.10～1.40的菊淀粉型寡糖6聚体峰；1.50～1.83的菊淀粉型寡糖7聚体峰；1.83～2.50的菊淀粉型寡糖8聚体峰；1.85～3.40的菊淀粉型寡糖9聚体峰，再按外标法以峰面积分别计算各寡糖的含量。
本发明的色谱条件的选择是基于大量的实验数据，选择各方面指标包括峰型、分离度、峰面积、重现性等等，综合评价得出的最佳的色谱柱、流动相、检测器以及柱温等条件。具体如下：
对照品菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)的HPLC分析：
取含量测定项下5糖对照品供试液20μl，在本发明所述的色谱条件下进行HPLC分析，记录色谱图，数据：相对保留时间17.502，峰面积118018，峰面积(％)100.0000。
巴戟天寡糖胶囊(含有巴戟天寡糖及辅料)的HPLC分析：
取含量测定项下巴戟天寡糖胶囊供试液20μl，在上述的色谱条件下进行HPLC分析，记录色谱图，图中的峰由左至右依次为1～7号色谱峰，经HPLC-MS-MS等波谱学方法确定依次(由左至右)为：菊淀粉型寡糖3聚体(C18H32O16，简称：3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(C24H42O21，简称：4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(C30H52O26，简称：5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(C36H62O31，简称：6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(C42H72O36，简称：7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(C48H82O41，简称：8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(C54H92O46，简称：9糖)。其中5糖色谱峰的保留时间与对照品保留时间一致。3～9聚合体色谱峰的保留时间，以5糖为标准，换算成相对保留时间，图谱解析如下。数据见表1。
  ID   Ret.Time   Area   Area％   Resolution   T.Plate#
  1   10.099   84373   8.9974   2.908   4428.619
  2   13.259   142746   15.2222   4.496   4409.893
  3   17.405   163729   17.4599   4.554   4637.704
  4   22.773   174663   18.6258   4.613   4873.221
  5   30.173   152323   16.2435   4.902   4956.905
  6   39.836   121337   12.9392   4.801   4754.490
  7   52.705   94798   10.1092   5.042   5691.831
表1巴戟天寡糖胶囊中各色谱峰的相对保留时间
Figure S2008101340912D00081
(表中Resolution：分离度，T.Plate#理论塔板数，Ret.Time：保留时间，Area：面积)色谱鉴别结果：对上述结果进行统计分析，得到3～9糖各色谱峰相对保留时间的最大值、最小值及平均值，见表2。
表2巴戟天寡糖胶囊各色谱峰的相对保留时间统计值
Figure S2008101340912D00091
溶剂及巴戟天寡糖制剂空白样品(辅料)的HPLC分析
按照处方比例称取辅料，取纯水溶剂，或取流动相溶液，照供试品溶液制备方法处理，分别取20μl，注入HPLC，测定，上述色谱条件下进行HPLC分析，记录色谱图。色谱图与含巴戟天样品色谱图对照，结果显示空白样品色谱图中，在与巴戟天寡糖5糖对照品色谱图相应的保留时间处、及与含巴戟天寡糖制剂样品的色谱图中相应各寡糖相对保留时间处，均未见色谱峰。表明不存在空白溶剂及辅料干扰。
巴戟天寡糖胶囊的有效成分是巴戟天寡糖，为菊淀粉型寡糖3聚体(C18H32O16，简称：3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(C24H42O21，简称：4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(C30H52O26，简称：5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(C36H62O31，简称：6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(C42H72O36，简称：7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(C48H82O41，简称：8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(C54H92O46，简称：9糖)的混合物。本发明建立了该巴戟天寡糖胶囊的HPLC含量测定方法。实验说明如下：
1.仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：Inertsil NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(68∶32∶0.1)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.2mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于2000。
2.2.线性关系考察：精密吸取菊淀粉型寡糖5聚体对照品溶液(2.37mg/ml)5、10、15、20、25、30μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，菊淀粉型寡糖5聚体进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：y＝5555523.8X-6336 r＝0.9999。结果表明，菊淀粉型寡糖5聚体在0.0119～0.0711mg范围内具良好的线性关系。见表3。
表3  线性关系的考察
2.3精密度实验：精密吸取菊淀粉型寡糖5聚体对照品溶液(2.37mg/ml)10μl，连续进样6次，照上述色谱条件测定，计算平均峰面积和相对标准偏差，见表4。结果表明：该方法的精密度良好。
表4精密度测定结果
Figure S2008101340912D00111
2.4.空白试验：按照处方比例称取辅料，照“含量测定”项下供试品处理方法处理，取20μl，在上述的色谱条件下进行HPLC分析，记录色谱图，结果表明无干扰。
2.5.供试品溶液稳定性考察：供试品溶液(批号070602)，于制样后0、2、4、8、10、22小时，依法测定，结果表明，供试品溶液在22小时内基本稳定。结果见表5。
表5  稳定性试验结果
Figure S2008101340912D00112
2.6.重复性试验：按正文方法，取同批(070602)样品，平行制样6份，测定，结果见表6，结果表明重复性较好。
表6  重复性试验结果
Figure S2008101340912D00121
2.7.回收率试验：采用加样回收法，精密称取已知含量的同批(070602)(5糖含量54.1mg/g)样品0.15g，分别精密加入5糖对照品(7.716mg)，平行制样6份，测定，按下式计算回收率，结果表明本方法具有良好的准确度，数据见表7。
表7  回收率试验结果
Figure S2008101340912D00123
2.8.样品测定结果：测定3批样品，结果见表8。
表8、样品测定结果
Figure S2008101340912D00131
3  方法耐用性研究
3.1
色谱柱：MERK Lichrosorb NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(68∶32∶0.1)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.2mL/min；
结果：见表9、10。
表9、耐用性结果1
Figure S2008101340912D00132
表10、巴戟天寡糖胶囊各色谱峰的相对保留时间
Figure S2008101340912D00133
3.2
色谱柱：SEPAX Amethyst amino柱(5μm，4.6×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(68∶32∶0.1)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.2mL/min；
结果：见表11、12。
表11、耐用性结果2
Figure S2008101340912D00141
表12、巴戟天寡糖胶囊各色谱峰的相对保留时间
Figure S2008101340912D00142
4、相对保留时间范围的确定：对多批巴戟天寡糖颗粒剂及胶囊进行了测定，菊淀粉型寡糖3～9聚体的保留时间相对较为固定，菊淀粉型寡糖3～9聚体相对于5聚体的相对保留时间也较为稳定见表13。
表13、相对保留时间范围
Figure S2008101340912D00143
Figure S2008101340912D00151
经过系统研究，本发明采用菊淀粉性寡糖5聚体为对照品，以3-9糖的峰面积之和计算巴戟天寡糖含量的方法是切实可行的。该方法准确、灵敏、专一、空白辅料对测定无干扰，能有效控制本品含量。本发明的质量控制方法快速便捷，重复性良好，适合实验室的小样检测以及工业化大生产的质量检测。
具体实施方式
以下结合实施例详细说明本发明，但不限定本发明的实施范围。
实施例一.巴戟天寡糖胶囊含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：Inertsil NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(68∶32∶0.1)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.2mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于2000。
对照品溶液的制备  取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖胶囊样品0.3g，精密称定，置10ml量瓶中，加入水10ml，超声，取上清液，用水稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖胶囊中每粒含菊淀粉型寡糖5聚体不得低于9.0mg，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得低于75.0mg。
实施例二.巴戟天寡糖颗粒剂的含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：Inertsil NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(70∶30∶0.05)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.0mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于2500。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖颗粒剂样品0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入流动相10ml，超声，取上清液，用流动相稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖颗粒剂(1.5g/袋)中每克含菊淀粉型寡糖5聚体不得低于6.0mg，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得低于50.0mg。
实施例三.巴戟天寡糖片剂的含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(60∶40∶0.15)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.2mL/mim；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于3000。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖片剂样品0.4g，精密称定，置10ml量瓶中，加入水10ml，超声，取上清液，用水稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖片剂中每片(0.4g/片)含菊淀粉型寡糖5聚体不得低于9.0mg，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得低于75.0mg。
实施例四.巴戟天寡糖冻干粉针含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(40∶60∶0.01)；
检测器：蒸发光散射检测器；
温度：柱温35℃，检测器温度40℃；
流速：1.0mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于4000。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖冻干粉针样品0.3g，精密称定，置10ml量瓶中，加入流动相10ml至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖冻干粉针中每克含菊淀粉型寡糖5聚体不得低于60.0mg，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得低于500.0mg。
实施例五.巴戟天寡糖口服液的含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(80∶20∶5)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：0.8mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于1500。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖口服液样品10ml，精密称定，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖口服液中每10ml含菊淀粉型寡糖5聚体不得低于9.0mg，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得低于75.0mg。
实施例六.巴戟天寡糖糖浆剂的含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水(68∶32)；
检测器：蒸发光散射检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.0mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于3000。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖糖浆剂样品5ml，精密称定，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖糖浆剂中每ml含菊淀粉型寡糖5聚体不得低于0.9mg，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得低于7.5mg。
实施例七.巴戟天寡糖片剂的含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：C18柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(75∶25∶0.1)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.0mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于2500。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖片剂样品0.4g，精密称定，置10ml量瓶中，加入流动相10ml，超声，取上清液，用流动相稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖片剂中每片含菊淀粉型寡糖5聚体不得低于9.0mg，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得低于75.0mg。
实施例八.巴戟天寡糖胶囊的含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(55∶45∶0.05)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.2mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于2500。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖胶囊样品0.3g，精密称定，置10ml量瓶中，加入流动相10ml，超声，取上清液，用水稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖胶囊中每粒含菊淀粉型寡糖5聚体不得低于9.0mg，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得低于75mg。
实施例九.巴戟天寡糖原料药含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：Inertsil NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(68∶32∶0.1)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.2mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于2000。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖原料药，研匀，取约150mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水10ml，超声10分钟，用0.45um微孔滤膜滤过.，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖原料药按干燥品计算，含菊淀粉型寡糖5聚体不得少于6.0％，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得少于50.0％。
实施例十.巴戟天寡糖原料药的含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水(70∶30)；
检测器：蒸发光散射检测器；
温度：柱温30℃，检测器温度30℃；
流速：1.0mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于3000。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取巴戟天寡糖液体原料药1ml，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10ml，用0.45um微孔滤膜滤过.取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
巴戟天寡糖原料药含菊淀粉型寡糖5聚体不得少于6.0％，含菊淀粉型寡糖3～9聚体的总量以菊淀粉型寡糖5聚体计，不得少于50.0％。
实施例十一.天然植物中提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物的含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：Inertsil NH2柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水∶三乙胺(68∶32∶0.1)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温40℃，检测器温度40℃；
流速：1.2mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于2000。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取天然植物中提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物10g，用水溶解，使成浓度为1g/ml的溶液，上活性碳柱层析，先用水洗脱至还原糖检出(硫酸-苯酚法)呈阴性，再用大约6倍柱体积的30％乙醇洗脱。收集30％乙醇洗脱部分，经浓缩干燥得到巴戟天寡糖(样品)。取样品约150mg，精密称定，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
天然植物中提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物按干燥品计算，含菊淀粉型寡糖5聚体(C30H52O26)不得少于0.12％，含巴戟天寡糖(即菊淀粉型寡糖3聚体-9聚体的总量)以菊淀粉型寡糖5聚体(C30H52O26)计，不得少于1.0％。
实施例十二.天然植物中提取得到的含有巴戟天寡糖的液体提取物含量测定
1仪器与试剂：
岛津20AT高效液相色谱系统；
LCsolution色谱工作站；
试剂：乙腈-色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)，水-高纯水，其余试剂均为分析纯；
对照品：菊淀粉型寡糖5聚体，中国药品生物制品检定所提供，批号200701，纯度99.99％。
2.方法与结果：
2.1.色谱分析条件
色谱柱：c18柱(5μm，4.5×250mm)；
流动相：乙腈∶水(70∶30)；
检测器：RID-10A示差检测器；
温度：柱温30℃，检测器温度30℃；
流速：1.0mL/min；
在此条件下，样品中各组分达到基线分离。测得菊淀粉型寡糖5聚体峰理论板数不低于3000。
对照品溶液的制备取菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取天然植物中提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物10ml，上活性碳柱层析，先用水洗脱至还原糖检出(硫酸-苯酚法)呈阴性，再用大约4倍柱体积的30％乙醇洗脱。收集30％乙醇洗脱部分，经浓缩干燥得到巴戟天寡糖(样品)。取样品约150mg，精密称定，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积分别计算菊淀粉型寡糖3聚体(3糖)、菊淀粉型寡糖4聚体(4糖)、菊淀粉型寡糖5聚体(5糖)、菊淀粉型寡糖6聚体(6糖)、菊淀粉型寡糖7聚体(7糖)、菊淀粉型寡糖8聚体(8糖)和菊淀粉型寡糖9聚体(9糖)的含量，将3～9糖的含量进行加和，即得巴戟天寡糖有效成分的含量。
天然植物中提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物按干燥品计算，含菊淀粉型寡糖5聚体(C30H52O26)不得少于6％，含巴戟天寡糖(即菊淀粉型寡糖3聚体-9聚体的总量)以菊淀粉型寡糖5聚体(C30H52O26)计，不得少于50％。

Claims (10)

1.一种巴戟天寡糖的含量测定方法，该巴戟天寡糖至少含有菊淀粉型寡糖5聚体，并且存在于含有巴戟天寡糖的原料药或由天然植物提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物或含有巴戟天寡糖的制剂中，该含量测定方法包括： 
(1)采用高效液相色谱法进行测定，以含有乙腈的水溶液为流动相，采用示差检测器或蒸发光散射检测器检测； 
(2)对照品溶液的制备，称取菊淀粉型寡糖5聚体作为对照品，加水或步骤(1)中所述的流动相制成对照品溶液； 
(3)供试品溶液的制备，取含有巴戟天寡糖的制剂或含有巴戟天寡糖原料药或由天然植物提取得到的含有巴戟天寡糖的提取物，加1-100重量倍数的水或者流动相使其混合或溶解，取上清液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液； 
(4)测定，分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定； 
(5) 计算，按供试品图谱中各个色谱峰与菊淀粉型寡糖5聚体对照品相对保留时间，鉴定总寡糖中各个寡糖的存在；按外标法以峰面积计算该巴戟天寡糖中所含有的菊淀粉型寡糖n聚体的含量，n为3～9的任一或其混合，进而确定该巴戟天寡糖中各菊淀粉型寡糖n聚体的相对含量比例，再将菊淀粉型寡糖n聚体的含量进行加和，即得所述的巴戟天总寡糖的含量。 
2.权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述的巴戟天寡糖还含有菊淀粉型寡糖3～4、6～9聚体中任一寡糖或其混合物。 
3.权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述的步骤(1)的流动相含有40-80％体积的乙腈。 
4.权利要求2或3所述的含量测定方法，其中，所述的步骤(1)的流动相中还包括不超过该流动相中体积的0.5％的三乙胺。 
5.权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述的步骤(3)包括：取含有巴戟天寡糖的固体制剂或含有巴戟天寡糖的固体原料药或由天然植物提取得到 的含有巴戟天寡糖的固体提取物，加水或者流动相使其溶解或混合，取上清液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 
6.权利要求1所述的含量测定方法，其中，所述的步骤(3)包括：取含有巴戟天寡糖的液体制剂或含有巴戟天寡糖的液体原料药或由天然植物提取得到的含有巴戟天寡糖的液体提取物，加水或者流动相稀释，取上清液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 
7.权利要求5所述的含量测定方法，其中，所述的步骤(3)包括： 
每0.2-0.5g固体制剂或固体原料药或固体提取物，于具塞锥形瓶中加入水和/或流动相10ml，超声，取上清液，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 
8.权利要求6所述的含量测定方法，其中，所述的步骤(3)包括：每0.1-10ml的液体制剂或液体原料药或液体提取物，于具塞锥形瓶中加入水和/或流动相至10ml，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 
9.权利要求5所述的含量测定方法，其中，所述的步骤(3)包括：每0.3g含有巴戟天寡糖的固体制剂加入水10ml，即得供试品溶液；该固体制剂为胶囊剂的内容物、粉针剂、片剂或颗粒剂。 
10.权利要求1所述的含量测定方法，其中，该方法步骤(1)中所述的色谱条件包括采用氨基柱或C18反相柱。 
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