CN107132323A - 哌拉西林诱导溶血检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及哌拉西林诱导溶血检测试剂盒及其制备方法,所述试剂盒包括哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II、哌拉西林处理红细胞、非哌拉西林处理红细胞、抗体阳性对照液、抗体阴性对照液;所述哌拉西林处理红细胞是通过哌拉西林药物溶液处理的正常O型Rh阴性红细胞;所述非哌拉西林处理红细胞是浓度为2~2.5%的正常O型Rh阴性红细胞;所述哌拉西林抗体阳性対照液是哌拉西林抗体阳性血清;所述哌拉西林抗体阴性对照液是哌拉西林抗体阴性血清。本发明哌拉西林诱导型溶血检测试剂盒灵敏度高,重复性好,质量稳定,检测过程耗时短,方法简便易行,结果易于判定。
Description
技术领域
本发明涉及一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒及其制备方法,适用于检测诊断使用哌拉西林治疗引起且正在发生的溶血,以及预测将要使用哌拉西林的治疗是否可能引起溶血,指导临床合理选择使用抗生素。
背景技术
目前,药物造成的不良反应日渐增多,其中药源性溶血性贫血的病例也逐年增多。若不及时停药或进行治疗,将会加重病情甚至危及生命。哌拉西林为第三代半合成青霉素,具有广谱抗菌作用,为临床上最常用的抗菌药物之一,临床上主要用于绿脓杆菌及其他敏感的革兰氏阴性杆菌所致的肺炎、败血症、呼吸道、胆道和泌尿系统感染、亚急性心内膜炎及化脓性脑膜炎等。已有文献报道,哌拉西林可诱导免疫性溶血性贫血的发生。柱凝胶检测方法目前已广泛用于ABO血型、血清中不规则抗体的检测以及其在交叉配血中,但在哌拉西林诱导型溶血的检测中尚未见相关研究报道。微柱凝胶技术具有所需标本量少、无须洗涤、结果稳定、易于判读等优点,有望成为哌拉西林诱导型溶血检测的常规筛查技术,由于不需要大型仪器,且操作简单,价格便宜,适合中小医院及社区、乡镇医院开展,为我们哌拉西林诱导型溶血前期筛查提供便利。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术提供一种灵敏度高、重复性好、操作简便、价格便宜且质量稳定的哌拉西林诱导溶血检测试剂盒及其制备方法。
本发明解决上述问题所采用的技术方案为:一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒,它包括盒体和盒盖,所述盒体底面上设置有防滑胶层,所述盒体内设置有哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I和哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II,所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I和哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II均包括竖直固定板,所述竖直固定板顶部设置有水平支撑板,所述水平支撑板上设置有多个微柱型凝胶管,所述微柱型凝胶管包括反应腔和凝胶分离柱,所述反应腔位于凝胶分离柱上方,所述反应腔顶部设置有一圈凸缘,所述凝胶分离柱内自上而下设置有多层分离网,所述凸缘搁置于水平支撑板上,所述水平支撑板下方设置有支撑架,所述微柱型凝胶管插装于支撑架内,所述水平支撑板上方设置有保护膜,所述保护膜覆盖于多个微柱型凝胶管的凸缘上。
所述反应腔内壁上均匀设置有多个缓冲凸点。
所述水平支撑板正面平行设置有多个隔条,所述隔条设置于相邻两个微柱型凝胶管之间。
所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I有6个微柱型凝胶管,每个微柱管中均含有葡聚糖凝胶颗粒,凝胶颗粒中含有抗IgG或抗C3d成分;所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II有8个微柱型凝胶管,每个微柱管中均含有葡聚糖凝胶颗粒,凝胶颗粒中含有抗IgG+C3d成分。
所述试剂盒的盒体内还设置有哌拉西林处理红细胞、非哌拉西林处理红细胞、抗体阳性对照液和抗体阴性对照液,所述哌拉西林处理红细胞是通过哌拉西林药物溶液处理的正常O型Rh阴性红细胞,浓度为2~2.5%;所述非哌拉西林处理红细胞是浓度为2~2.5%的正常O型Rh阴性红细胞;所述哌拉西林抗体阳性対照液是哌拉西林抗体阳性血清;所述哌拉西林抗体阴性对照液是哌拉西林抗体阴性血清。
一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒的制备方法,所述方法包括如下步骤:
一、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I的制备:
步骤一、量取
按批量使用符合要求的器具将葡聚糖凝胶量取转移至洁净并灭菌的容器中;
步骤二、洗涤
用0.9%氯化钠溶液洗涤葡聚糖凝胶,0.9%氯化钠溶液与葡聚糖凝胶体积比为2:1,充分混匀,2000rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作6~8次,得洗涤后凝胶,作好标识;作为优选,洗涤后的凝胶中可添加乳糖0.02-0.1(v/v)%、以及柠檬酸三钾20mg-40 mg %,在试剂盒保存过程中稳定体系的pH值,并保持良好的均匀度。
步骤三、配制
按批量分别量取抗人球蛋白试剂、抗人球蛋白试剂、0.9%氯化钠溶液,按抗体与凝胶体积比1:5的比例,将上述试剂分别加入洗涤后凝胶中混合,分别用器具混合均匀成抗体凝胶,分别作好标识;
步骤四、灌装、离心
将步骤三配制的凝胶按照每孔20~30 μl的抗体凝胶量将各种凝胶加入微管中;
微管序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
抗体凝胶 | 抗IgG凝胶 | 抗C3d凝胶 | 空白凝胶 | 抗IgG凝胶 | 抗C3d凝胶 | 空白凝胶 |
步骤五、封口
离心结束后,卡转移至封口机上封口;封口条件为:压力3.0 kg、温度163±2℃,时间4秒/卡;
二、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II的制备:
步骤一、量取
按批量使用符合要求的器具将葡聚糖凝胶量取转移至洁净并灭菌的容器中;
步骤二、洗涤
用0.9%氯化钠溶液洗涤葡聚糖凝胶,0.9%氯化钠溶液与葡聚糖凝胶II,体积比为2:1,充分混匀,2000 rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作6~8次,再用凝胶浸泡液浸泡所得凝胶15分钟,凝胶浸泡液与凝胶体积比为1:1,2000 rpm离心1分钟后移去上清液,得洗涤后凝胶,作好标识;作为优选,洗涤后的凝胶中可添加乳糖0.02-0.1(v/v)%、以及柠檬酸三钾20mg-40 mg %。
步骤三、配制
量取抗人球蛋白试剂,按抗体与凝胶体积比为1:5~1:2的比例,将抗人球蛋白试剂加入洗涤后的凝胶中混合,分别用器具混合均匀成抗体凝胶,作好标识待用;
步骤四、灌装、离心
将步骤二配制的凝胶按照每孔25~35 μl的抗体凝胶量将抗人球蛋白试剂凝胶加入微管中;
微管序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
抗体凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 |
步骤五、封口
离心结束后,卡转移至封口机上封口;封口条件为:0.3~0.35 MPa压力、温度158±1℃,时间3秒/卡;
三、哌拉西林处理红细胞的制备:
步骤一、过滤、洗涤
取O型原料血红细胞,用一次性白细胞过滤器过滤,将三人份的O型原料血红细胞混合,用0.9%氯化钠溶液洗涤,原料血与0.9%氯化钠溶液体积比为1:4,3000 rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作2~4次;
步骤二、药物致敏
a、哌拉西林药物溶液配制:称取硼酸、氯化钾,加纯化水充分溶解,配制为0.1 mol/LpH为9.3~10.2的硼酸缓冲液,加入称取的哌拉西林,充分溶解混匀,即得哌拉西林药物溶液;
b、哌拉西林药物处理细胞:量取哌拉西林药物溶液,加入O型红细胞压积,37℃孵育1小时,每隔10~20分钟混匀一次,0.9%氯化钠溶液洗涤致敏红细胞2~4次或直到上清无溶血现象,用红细胞保存液稀释至2~2.5%浓度,2~8℃保存,所述红细胞保存液中至少包括胆固醇200~600mg/L、人血清白蛋白5~20g/L、乳糖0.02-0.1(v/v)%、十八烷基胺乙酸碱金属盐1000-1800mg/L、聚醚硫酸碱金属盐1000-1800mg/L、碱金属如钠、钾作为调节剂;
胆固醇、人血清白蛋白可用于延长红细胞有效性,十八烷基胺乙酸碱金属盐和聚醚硫酸碱金属盐一方面作为表面活性剂,另一方面可维持红细胞的渗透压在不溶解的有效范围内,提高检测的灵敏度,这样无需再额外添加无机碱金属盐类。
步骤三、分装
取哌拉西林药物处理细胞,分装至滴瓶中,每瓶2.5 ml,于2~8℃保存;
四、非哌拉西林处理细胞的制备:
步骤一、过滤、洗涤
取O型原料血红细胞,用一次性白细胞过滤器过滤,将三人份的O型原料血红细胞混合,用0.9%氯化钠溶液洗涤,原料血与0.9%氯化钠溶液体积比为1:4,3000 rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作2~4次,用红细胞保存液稀释至2~2.5%浓度,2~8℃保存,所述红细胞保存液中至少包括胆固醇200~600mg/L、人血清白蛋白5~20g/L、乳糖0.02-0.1(v/v)%、十八烷基胺乙酸碱金属盐1000-1800mg/L、聚醚硫酸碱金属盐1000-1800mg/L、碱金属如钠、钾作为调节剂;
步骤二、分装
取非哌拉西林药物处理细胞,分装至滴瓶中,每瓶1 ml,于2~8℃保存;
五、哌拉西林抗体阳性对照的制备:
步骤一、过滤
取哌拉西林抗体阳性血清,过滤;
步骤二、分装
取过滤后的哌拉西林抗体阳性血清,分装至聚乙烯瓶中,每瓶1.5 ml,于2~8℃保存;
六、哌拉西林抗体阴性对照的制备:
步骤一、过滤
取哌拉西林抗体阴性血清,过滤;
步骤二、分装
取过滤后的哌拉西林抗体阴性血清,分装至聚乙烯瓶中,每瓶1.5 ml,于2~8℃保存。
与现有技术相比,本发明的优点在于:
本发明哌拉西林诱导型溶血检测试剂盒灵敏度高,重复性好,质量稳定,检测过程耗时短,方法简便易行,结果易于判定,可同时对大量样本进行检测,易于自动化,能够使哌拉西林诱导型溶血检测技术成为临床常规检测项目。
附图说明
图1为本发明一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒的结构示意图。
图2为哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡的结构示意图。
其中:
盒体1
盒盖2
防滑胶层3
竖直固定板1
水平支撑板5
微柱型凝胶管6
凸体6.1
反应腔6.2
凝胶分离柱6.3
分离网6.4
缓冲凸点6.5
支撑架7
保护膜8
隔条9。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
如图1、图2所示,本实施例中的一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒,它包括盒体1和盒盖2,所述盒体1底面上设置有防滑胶层3,所述盒体1内设置有哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I和哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II,所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I和哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II均包括竖直固定板4,所述竖直固定板4顶部设置有水平支撑板5,所述水平支撑板5上设置有多个微柱型凝胶管6,所述微柱型凝胶管6包括反应腔6.1和凝胶分离柱6.2,所述反应腔6.1位于凝胶分离柱6.2上方,所述反应腔6.1顶部设置有一圈凸缘6.3,所述凝胶分离柱6.2内自上而下设置有多层分离网6.4,所述凸缘6.3搁置于水平支撑板5上,所述水平支撑板5下方设置有支撑架7,所述微柱型凝胶管6插装于支撑架7内,所述水平支撑板5上方设置有保护膜8,所述保护膜8覆盖于多个微柱型凝胶管6的凸缘6.3上;
所述反应腔6.1内壁上均匀设置有多个缓冲凸点6.5;
所述水平支撑板5正面平行设置有多个隔条9,所述隔条9设置于相邻两个微柱型凝胶管6之间;
所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I有6个微柱型凝胶管6,每个微柱管中均含有葡聚糖凝胶颗粒,凝胶颗粒中含有抗IgG或抗C3d成分;
所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II有8个微柱型凝胶管6,每个微柱管中均含有葡聚糖凝胶颗粒,凝胶颗粒中含有抗IgG+C3d成分;
所述试剂盒的盒体内还设置有哌拉西林处理红细胞、非哌拉西林处理红细胞、抗体阳性对照液和抗体阴性对照液,所述哌拉西林处理红细胞是通过哌拉西林药物溶液处理的正常O型Rh阴性红细胞,浓度为2~2.5%;所述非哌拉西林处理红细胞是浓度为2~2.5%的正常O型Rh阴性红细胞;所述哌拉西林抗体阳性対照液是哌拉西林抗体阳性血清;所述哌拉西林抗体阴性对照液是哌拉西林抗体阴性血清。
其制备方法包括以下步骤:
一、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I的制备:
步骤一、量取
按批量使用符合要求的器具将葡聚糖凝胶(溶胀胶)量取转移至洁净并灭菌的容器中;
步骤二、洗涤
用0.9%氯化钠溶液洗涤葡聚糖凝胶(溶胀胶),0.9%氯化钠溶液与葡聚糖凝胶(溶胀胶)体积比为2:1,充分混匀,2000rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作6~8次,得洗涤后凝胶,作好标识;作为优选,洗涤后的凝胶中可添加乳糖0.02-0.1(v/v)%、以及柠檬酸三钾20mg-40 mg %,在试剂盒保存过程中稳定体系的pH值,并保持良好的均匀度。
步骤三、配制
按批量分别量取抗人球蛋白试剂(抗IgG)、抗人球蛋白试剂(抗C3d)、0.9%氯化钠溶液,按抗体与凝胶体积比1:5的比例,将上述试剂分别加入洗涤后凝胶中混合,分别用器具混合均匀成抗体凝胶,分别作好标识;
步骤四、灌装、离心
微管序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
抗体凝胶 | 抗IgG凝胶 | 抗C3d凝胶 | 空白凝胶 | 抗IgG凝胶 | 抗C3d凝胶 | 空白凝胶 |
将步骤三配制的凝胶按照每孔20~30 μl的抗体凝胶量将各种凝胶加入微管中。
步骤五、封口
离心结束后,卡转移至封口机上封口。封口条件为:压力3.0 kg、温度163±2℃,时间4秒/卡;
二、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II的制备:
步骤一、量取
按批量使用符合要求的器具将葡聚糖凝胶(溶胀胶)量取转移至洁净并灭菌的容器中;
步骤二、洗涤
用0.9%氯化钠溶液洗涤葡聚糖凝胶(溶胀胶),0.9%氯化钠溶液与葡聚糖凝胶II(溶胀胶)体积比为2:1,充分混匀,2000 rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作6~8次,再用凝胶浸泡液浸泡所得凝胶15分钟,凝胶浸泡液与凝胶体积比为1:1,2000 rpm离心1分钟后移去上清液,得洗涤后凝胶,作好标识;作为优选,洗涤后的凝胶中可添加乳糖0.02-0.1(v/v)%、以及柠檬酸三钾20mg-40 mg %,在试剂盒保存过程中稳定体系的pH值,并保持良好的均匀度。
步骤三、配制
量取抗人球蛋白试剂(抗IgG+C3d),按抗体与凝胶体积比为1:5~1:2的比例,将抗人球蛋白试剂(抗IgG+C3d)加入洗涤后的凝胶中混合,分别用器具混合均匀成抗体凝胶,作好标识待用;
步骤四、灌装、离心
微管序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
抗体凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 | 抗IgG+C3d凝胶 |
将步骤二配制的凝胶按照每孔25~35 μl的抗体凝胶量将抗人球蛋白试剂(抗IgG+C3d)凝胶加入微管中。
步骤五、封口
离心结束后,卡转移至封口机上封口。封口条件为:0.3~0.35 MPa压力、温度158±1℃,时间3秒/卡;
三、哌拉西林处理红细胞的制备:
步骤一、过滤、洗涤
取O型原料血红细胞,用一次性白细胞过滤器过滤。将三人份的O型原料血红细胞混合,用0.9%氯化钠溶液洗涤(原料血与0.9%氯化钠溶液体积比为1:4),3000 rpm离心1分钟后移去上清液。重复操作2~4次。
步骤二、药物致敏
a 哌拉西林药物溶液配制:称取硼酸、氯化钾,加纯化水充分溶解,配制为0.1 mol/LpH为9.3~10.2的硼酸缓冲液,加入称取的哌拉西林,充分溶解混匀,即得哌拉西林药物溶液。
b 哌拉西林药物处理细胞:量取哌拉西林药物溶液,加入O型红细胞压积,37℃孵育1小时,每隔10~20分钟混匀一次。0.9%氯化钠溶液洗涤致敏红细胞2~4次(或直到上清无溶血现象),用红细胞保存液稀释至2~2.5%浓度,2~8℃保存。所述红细胞保存液中至少包括胆固醇200~600mg/L、人血清白蛋白5~20g/L、乳糖0.02-0.1(v/v)%、十八烷基胺乙酸碱金属盐1000-1800mg/L、聚醚硫酸碱金属盐1000-1800mg/L、碱金属如钠、钾作为调节剂。
步骤三、分装
取哌拉西林药物处理细胞,分装至滴瓶中,每瓶2.5 ml,于2~8℃保存。
四、非哌拉西林处理细胞的制备:
步骤一、过滤、洗涤
取O型原料血红细胞,用一次性白细胞过滤器过滤。将三人份的O型原料血红细胞混合,用0.9%氯化钠溶液洗涤(原料血与0.9%氯化钠溶液体积比为1:4),3000 rpm离心1分钟后移去上清液。重复操作2~4次。用红细胞保存液稀释至2~2.5%浓度,2~8℃保存。所述红细胞保存液中至少包括胆固醇200~600mg/L、人血清白蛋白5~20g/L、乳糖0.02-0.1(v/v)%、十八烷基胺乙酸碱金属盐1000-1800mg/L、聚醚硫酸碱金属盐1000-1800mg/L、碱金属如钠、钾作为调节剂。
步骤二、分装
取非哌拉西林药物处理细胞,分装至滴瓶中,每瓶1 ml,于2~8℃保存。
五、哌拉西林抗体阳性对照的制备:
步骤一、过滤
取哌拉西林抗体阳性血清,过滤。
步骤二、分装
取过滤后的哌拉西林抗体阳性血清,分装至聚乙烯瓶中,每瓶1.5 ml,于2~8℃保存。
六、哌拉西林抗体阴性对照的制备:
步骤一、过滤
取哌拉西林抗体阴性血清,过滤。
步骤二、分装
取过滤后的哌拉西林抗体阴性血清,分装至聚乙烯瓶中,每瓶1.5 ml,于2~8℃保存。
哌拉西林诱导型溶血检测试剂盒的使用
1. 哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I(直接抗人球蛋白试验DAT)检验方法:
(1)患者红细胞悬液的配制:患者新鲜血液样本压积红细胞用0.9%氯化钠溶液洗涤一次得到压积红细胞,用0.9%氯化钠溶液配制0.5~1%浓度的红细胞悬液(取压积红细胞8 μl加入到1 ml0.9%氯化钠溶液中);
(2)取哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I,每份待检患者样本标记3孔(分别为抗IgG、抗C3d及Ctrl);
(3)向标记的每孔中加入患者样本0.5~1.0%的红细胞悬液50 μl;
(4)混匀,置微柱凝胶卡配套专用离心机离心5分钟(900 rpm×2 min、1500 rpm×3min),观察结果并记录。
2. 哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II检验方法
(1)取哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II,4孔分别标记为“1”、“2”、“3”、“4”;
(2)哌拉西林处理红细胞悬液的配制:取试剂盒中哌拉西林处理红细胞用0.9%氯化钠溶液洗涤三次后得到压积红细胞,用0.9%氯化钠溶液配制成2~2.5%浓度的红细胞悬液;
(3)向第1、2、3孔的每孔中加入哌拉西林处理的红细胞悬液各25 μl;
(4)向第4孔中加入非哌拉西林处理的红细胞悬液25 μl;
(5)向第1和第4孔中分别加入待检样本0.9%氯化钠溶液1:5稀释的血浆50 μl,第2孔中加入阳性对照液50 μl,第3孔中加入阴性对照液50 μl;
(6)混匀,置免疫微柱孵育器37±1°C孵育30分钟;
(7)置微柱凝胶卡配套专用离心机离心5分钟(900 rpm×2 min, 1500 rpm×3 min),观察结果并记录。
3、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I—直接抗人球蛋白试验(DAT)结果判定:
注:“+”表示阳性,红细胞在凝胶表面或分散胶中;
“0”表示阴性,红细胞沉于微柱凝胶孔底部。
4、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II检测结果判定
5、哌拉西林诱导型溶血检测试剂盒(微柱凝胶法)检测结果判定
本发明哌拉西林诱导型溶血检测试剂盒可以具有优良的灵敏度、稳定性,是在于整个体系中各种成分的协同作用:微柱凝胶卡上排列有多个微柱管可以完成多次检测;缓冲体系可以维持微柱凝胶卡反应体系需要的pH;低盐浓度体系可以保证凝胶颗粒得到充分溶胀且凝胶颗粒直径在所需要的范围内;润滑体系可以保证凝胶颗粒之间适当的润滑能力;酯类防腐剂可以防止凝胶或抗体因为细菌繁殖而失效;丙烯酰化的凝胶可以保证凝胶颗粒之间合适的间隙。
除上述实施例外,本发明还包括有其他实施方式,凡采用等同变换或者等效替换方式形成的技术方案,均应落入本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒,其特征在于:它包括盒体(1)和盒盖(2),所述盒体(1)底面上设置有防滑胶层(3),所述盒体(1)内设置有哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I和哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II,所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I和哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II均包括竖直固定板(4),所述竖直固定板(4)顶部设置有水平支撑板(5),所述水平支撑板(5)上设置有多个微柱型凝胶管(6),所述微柱型凝胶管(6)包括反应腔(6.1)和凝胶分离柱(6.2),所述反应腔(6.1)位于凝胶分离柱(6.2)上方,所述反应腔(6.1)顶部设置有一圈凸缘(6.3),所述凝胶分离柱(6.2)内自上而下设置有多层分离网(6.4),所述凸缘(6.3)搁置于水平支撑板(5)上,所述水平支撑板(5)下方设置有支撑架(7),所述微柱型凝胶管(6)插装于支撑架(7)内,所述水平支撑板(5)上方设置有保护膜(8),所述保护膜(8)覆盖于多个微柱型凝胶管(6)的凸缘(6.3)上。
2.根据权利要求1所述的一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒,其特征在于:所述反应腔(6.1)内壁上均匀设置有多个缓冲凸点(6.5)。
3.根据权利要求1所述的一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒,其特征在于:所述水平支撑板(5)正面平行设置有多个隔条(9),所述隔条(9)设置于相邻两个微柱型凝胶管(3)之间。
4.根据权利要求1所述的一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒,其特征在于:所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I有6个微柱型凝胶管(6),每个微柱管中均含有葡聚糖凝胶颗粒,凝胶颗粒中含有抗IgG或抗C3d成分;所述哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II有8个微柱型凝胶管(6),每个微柱管中均含有葡聚糖凝胶颗粒,凝胶颗粒中含有抗IgG+C3d成分。
5.根据权利要求1所述的一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒的盒体内还设置有哌拉西林处理红细胞、非哌拉西林处理红细胞、抗体阳性对照液和抗体阴性对照液,所述哌拉西林处理红细胞是通过哌拉西林药物溶液处理的正常O型Rh阴性红细胞,浓度为2~2.5%;所述非哌拉西林处理红细胞是浓度为2~2.5%的正常O型Rh阴性红细胞;所述哌拉西林抗体阳性対照液是哌拉西林抗体阳性血清;所述哌拉西林抗体阴性对照液是哌拉西林抗体阴性血清。
6.一种哌拉西林诱导溶血检测试剂盒的制备方法,其特征在于所述方法包括如下步骤:
一、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡I的制备:
步骤一、量取
按批量使用符合要求的器具将葡聚糖凝胶量取转移至洁净并灭菌的容器中;
步骤二、洗涤
用0.9%氯化钠溶液洗涤葡聚糖凝胶,0.9%氯化钠溶液与葡聚糖凝胶体积比为2:1,充分混匀,2000rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作6~8次,得洗涤后凝胶,作好标识,洗涤后的凝胶中可添加乳糖0.02-0.1(v/v)%、以及柠檬酸三钾20mg-40 mg %;
步骤三、配制
按批量分别量取抗人球蛋白试剂、抗人球蛋白试剂、0.9%氯化钠溶液,按抗体与凝胶体积比1:5的比例,将上述试剂分别加入洗涤后凝胶中混合,分别用器具混合均匀成抗体凝胶,分别作好标识;
步骤四、灌装、离心
将步骤三配制的凝胶按照每孔20~30 μl的抗体凝胶量将各种凝胶加入微管中;
步骤五、封口
离心结束后,卡转移至封口机上封口;封口条件为:压力3.0 kg、温度163±2℃,时间4秒/卡;
二、哌拉西林诱导型溶血检测试剂卡II的制备:
步骤一、量取
按批量使用符合要求的器具将葡聚糖凝胶量取转移至洁净并灭菌的容器中;
步骤二、洗涤
用0.9%氯化钠溶液洗涤葡聚糖凝胶,0.9%氯化钠溶液与葡聚糖凝胶II,体积比为2:1,充分混匀,2000 rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作6~8次,再用凝胶浸泡液浸泡所得凝胶15分钟,凝胶浸泡液与凝胶体积比为1:1,2000 rpm离心1分钟后移去上清液,得洗涤后凝胶,作好标识,洗涤后的凝胶中可添加乳糖0.02-0.1(v/v)%、以及柠檬酸三钾20mg-40 mg%;
步骤三、配制
量取抗人球蛋白试剂,按抗体与凝胶体积比为1:5~1:2的比例,将抗人球蛋白试剂加入洗涤后的凝胶中混合,分别用器具混合均匀成抗体凝胶,作好标识待用;
步骤四、灌装、离心
将步骤二配制的凝胶按照每孔25~35 μl的抗体凝胶量将抗人球蛋白试剂凝胶加入微管中;
步骤五、封口
离心结束后,卡转移至封口机上封口;封口条件为:0.3~0.35 MPa压力、温度158±1℃,时间3秒/卡;
三、哌拉西林处理红细胞的制备:
步骤一、过滤、洗涤
取O型原料血红细胞,用一次性白细胞过滤器过滤,将三人份的O型原料血红细胞混合,用0.9%氯化钠溶液洗涤,原料血与0.9%氯化钠溶液体积比为1:4,3000 rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作2~4次;
步骤二、药物致敏
a、哌拉西林药物溶液配制:称取硼酸、氯化钾,加纯化水充分溶解,配制为0.1 mol/LpH为9.3~10.2的硼酸缓冲液,加入称取的哌拉西林,充分溶解混匀,即得哌拉西林药物溶液;
b、哌拉西林药物处理细胞:量取哌拉西林药物溶液,加入O型红细胞压积,37℃孵育1小时,每隔10~20分钟混匀一次,0.9%氯化钠溶液洗涤致敏红细胞2~4次或直到上清无溶血现象,用红细胞保存液稀释至2~2.5%浓度,2~8℃保存;所述红细胞保存液中至少包括胆固醇200~600mg/L、人血清白蛋白5~20g/L、乳糖0.02-0.1(v/v)%、十八烷基胺乙酸碱金属盐1000-1800mg/L、聚醚硫酸碱金属盐1000-1800mg/L、碱金属如钠、钾作为调节剂;
步骤三、分装
取哌拉西林药物处理细胞,分装至滴瓶中,每瓶2.5 ml,于2~8℃保存;
四、非哌拉西林处理细胞的制备:
步骤一、过滤、洗涤
取O型原料血红细胞,用一次性白细胞过滤器过滤,将三人份的O型原料血红细胞混合,用0.9%氯化钠溶液洗涤,原料血与0.9%氯化钠溶液体积比为1:4,3000 rpm离心1分钟后移去上清液,重复操作2~4次,用红细胞保存液稀释至2~2.5%浓度,2~8℃保存;所述红细胞保存液中至少包括胆固醇200~600mg/L、人血清白蛋白5~20g/L、乳糖0.02-0.1(v/v)%、十八烷基胺乙酸碱金属盐1000-1800mg/L、聚醚硫酸碱金属盐1000-1800mg/L、碱金属如钠、钾作为调节剂;
步骤二、分装
取非哌拉西林药物处理细胞,分装至滴瓶中,每瓶1 ml,于2~8℃保存;
五、哌拉西林抗体阳性对照的制备:
步骤一、过滤
取哌拉西林抗体阳性血清,过滤;
步骤二、分装
取过滤后的哌拉西林抗体阳性血清,分装至聚乙烯瓶中,每瓶1.5 ml,于2~8℃保存;
六、哌拉西林抗体阴性对照的制备:
步骤一、过滤
取哌拉西林抗体阴性血清,过滤;
步骤二、分装
取过滤后的哌拉西林抗体阴性血清,分装至聚乙烯瓶中,每瓶1.5 ml,于2~8℃保存。
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