CN110982793A - 一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法 - Google Patents
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- C12N2795/00011—Details
Abstract
本发明公开了一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，包括以下步骤；S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒；S2向培养皿内添加培养基，培养基包括10‑15g牛肉汤、5‑10g蛋白胨、30‑50g氯化钠、10‑20g葡萄糖、5‑18g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加杀菌剂；S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物；S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C及血清D加入噬菌体的宿主菌；本发明，筛选精度高。
Description
技术领域
本发明涉及体内抗菌活性噬菌体的体外筛选技术领域，具体为一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法。
背景技术
现有的两种经典筛选技术从噬菌体抗体库中筛选表达特异性抗体的噬菌体的经典方法主要有两种将纯抗原包被在固相介质上，如酶标板、免疫试管或亲和层析柱，然后加入待筛选的噬菌体，洗去非亲和性或低亲和性的噬菌体，回收高亲和性的噬菌体风将抗原与生物素基团相连，再将其固定在包被有的顺磁珠上对噬菌体进行筛选。两种方法中均需加脱脂牛奶或，其效果较差封闭未被抗原占据的位点，以避免噬菌体非特异性的结合。对于前一方法，回收与抗原特异性结合的噬菌体可用碱性溶液如三乙基胺，或酸性溶液如甘氨酸一盐酸‘，洗脱，或用可溶的抗原或半抗原洗脱’几对于后一方法，用二琉基苏糖醇，通过破坏抗原与生物素之间的二硫键来洗脱。回收的噬菌体感染宿主菌，增殖后进行下一轮筛选。一般经过轮这样的筛选可得到表达高亲和性的目的抗体的克隆。
经典筛选技术的前提条件是目标抗体所针对抗原的性质明确，能得到抗原纯品。对于抗原无法提纯或抗原性质不确定的情况，如癌细胞表面受体，抑或经典筛选过程会使抗原失活，如某些膜的内在蛋白，经典筛选技术不再适用。
专利公开号CN201310498522.4的对比文件，提供了一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其中从感染者痰液标本以外的临床微生物检验送检标本中(例如灌洗液、伤口、粪便、尿液等)分离得到的所有种类的细菌和与其相关的噬菌体，但是从感染者体外获取的这些标本中，存在其它的多种细菌，容易对实验结果产生不利的影响，进而导致筛选出的噬菌体在受到其它细菌或细胞的影响下，发生噬菌体的流失，筛选精度下降。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于：提供一种筛选精度高的体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法。
为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，包括以下步骤；
S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒，；
S2向培养皿内添加培养基，培养基包括10-15g牛肉汤、5-10g蛋白胨、 30-50g氯化钠、10-20g葡萄糖、5-18g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；
S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加杀菌剂；
S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物。
S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；
S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C 及血清D加入噬菌体的宿主菌；
S7将S5处理后的血清，置于光照下，将环境温度调至37度；
S8测量四份血清中的宿主菌活菌数，如果B、C、D中宿主菌的生长速度一致，且生长速度小于宿主菌在A中的生长速度，则该待筛选的噬菌体可以作为动物实验的候选噬菌体，反之则淘汰该待筛选的噬菌体。
优选地，所述S1中，消毒措施为酒精洗涤、紫外线杀菌或高温灭菌中的一种。
优选地，所述S2中，培养基的成分包括10g牛肉汤、8g蛋白胨、50g氯化钠、12g葡萄糖、6g血液。
优选地，所述S2中，培养基的成分包括15g牛肉汤、7g蛋白胨、30g氯化钠、20g葡萄糖、18g血液。
优选地，所述S3中，杀菌剂为光催化剂，所述光催化剂通过水热法制备碘化氧铋(BiOI)和溶胶-凝胶法制备二氧化钛(TiO2)。
通过加入光催化剂，来刷选出耐光催化剂的噬菌体，排出其它细菌的干扰，提高筛选精度。
优选地，所述S3中，杀菌剂为无机抗菌剂。
通过加入无机抗菌剂来筛选出耐无机抗菌剂的噬菌体，以适应选取实验所需的噬菌体，排出其它干扰因素，提高筛选精度。
优选地，所述S3中，杀菌剂为有机抗菌剂。
通过加入有机抗菌剂来筛选出耐无机抗菌剂的噬菌体，以适应选取实验所需的噬菌体，排出其它干扰因素，提高筛选精度。
优选地，所述S3中，血清C经45-50℃，30min的灭活处理。
优选地，所述S8中，使用细菌计数仪计算带有噬菌体的宿主菌。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
通过加入相应的杀菌剂来筛选出耐杀菌剂的噬菌体，以适应选取实验所需的噬菌体，排出其它干扰因素，提高筛选精度。
具体实施方式
术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本申请的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
实施例一
本实施例公开了一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，包括以下步骤：
S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒，消毒措施为酒精洗涤、紫外线杀菌或高温灭菌中的一种；
S2向培养皿内添加培养基，具体为10g牛肉汤、8g蛋白胨、50g氯化钠、 12g葡萄糖、6g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；
S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加光催化剂，光催化剂通过水热法制备碘化氧铋(BiOI) 和溶胶-凝胶法制备二氧化钛(TiO2)；
S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物。
S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；
S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C 及血清D加入噬菌体的宿主菌；
S7将S5处理后的血清，置于光照下，将环境温度调至37度；
S8使用细菌计数仪测量四份血清中的宿主菌活菌数，如果B、C、D中宿主菌的生长速度一致，且生长速度小于宿主菌在A中的生长速度，则该待筛选的噬菌体可以作为动物实验的候选噬菌体，反之则淘汰该待筛选的噬菌体。
通过加入光催化剂，来刷选出耐光催化剂的噬菌体，排出其它细菌的干扰，提高筛选精度。
实施例二
S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒，消毒措施为酒精洗涤、紫外线杀菌或高温灭菌中的一种；
S2向培养皿内添加培养基，具体为15g牛肉汤、7g蛋白胨、30g氯化钠、 20g葡萄糖、18g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；
S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加光催化剂，光催化剂通过水热法制备碘化氧铋(BiOI) 和溶胶-凝胶法制备二氧化钛(TiO2)；
S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物。
S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；
S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C 及血清D加入噬菌体的宿主菌；
S7将S5处理后的血清，置于光照下，将环境温度调至37度；
S8使用细菌计数仪测量四份血清中的宿主菌活菌数，如果B、C、D中宿主菌的生长速度一致，且生长速度小于宿主菌在A中的生长速度，则该待筛选的噬菌体可以作为动物实验的候选噬菌体，反之则淘汰该待筛选的噬菌体。
改变培养基的成分配比，观测噬菌体的提取数量是否发生变化，进而进一步的提高实验精度。
实施例三
S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒，消毒措施为酒精洗涤、紫外线杀菌或高温灭菌中的一种；
S2向培养皿内添加培养基，具体为10g牛肉汤、8g蛋白胨、50g氯化钠、 12g葡萄糖、6g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；
S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加无机抗菌剂；
S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物。
S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；
S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C 及血清D加入噬菌体的宿主菌；
S7将S5处理后的血清，置于光照下，将环境温度调至37度；
S8使用细菌计数仪测量四份血清中的宿主菌活菌数，如果B、C、D中宿主菌的生长速度一致，且生长速度小于宿主菌在A中的生长速度，则该待筛选的噬菌体可以作为动物实验的候选噬菌体，反之则淘汰该待筛选的噬菌体。
通过加入无机抗菌剂来筛选出耐无机抗菌剂的噬菌体，以适应选取实验所需的噬菌体，排出其它干扰因素，提高筛选精度。
实施例四
S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒，消毒措施为酒精洗涤、紫外线杀菌或高温灭菌中的一种；
S2向培养皿内添加培养基，具体为10g牛肉汤、8g蛋白胨、50g氯化钠、 12g葡萄糖、6g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；
S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加有机抗菌剂；
S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物。
S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；
S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C 及血清D加入噬菌体的宿主菌；
S7将S5处理后的血清，置于光照下，将环境温度调至37度；
S8使用细菌计数仪测量四份血清中的宿主菌活菌数，如果B、C、D中宿主菌的生长速度一致，且生长速度小于宿主菌在A中的生长速度，则该待筛选的噬菌体可以作为动物实验的候选噬菌体，反之则淘汰该待筛选的噬菌体。
通过加入有机抗菌剂来筛选出耐无机抗菌剂的噬菌体，以适应选取实验所需的噬菌体，排出其它干扰因素，提高筛选精度。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
以上所述实施例仅表示发明的实施方式，本发明的保护范围不仅局限于上述实施例，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明保护范围。
Claims (9)
1.一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：包括以下步骤；
S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒，；
S2向培养皿内添加培养基，培养基包括10-15g牛肉汤、5-10g蛋白胨、30-50g氯化钠、10-20g葡萄糖、5-18g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；
S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加杀菌剂；
S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物；
S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；
S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C及血清D加入噬菌体的宿主菌；
S7将S5处理后的血清，置于光照下，将环境温度调至37度；
S8测量四份血清中的宿主菌活菌数，如果B、C、D中宿主菌的生长速度一致，且生长速度小于宿主菌在A中的生长速度，则该待筛选的噬菌体可以作为动物实验的候选噬菌体，反之则淘汰该待筛选的噬菌体。
2.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S1中，消毒措施为酒精洗涤、紫外线杀菌或高温灭菌中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S2中，培养基的成分包括10g牛肉汤、8g蛋白胨、50g氯化钠、12g葡萄糖、6g血液。
4.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S2中，培养基的成分包括15g牛肉汤、7g蛋白胨、30g氯化钠、20g葡萄糖、18g血液。
5.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S3中，杀菌剂为光催化剂，所述光催化剂通过水热法制备碘化氧铋(BiOI)和溶胶-凝胶法制备二氧化钛(TiO2)。
6.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S3中，杀菌剂为无机抗菌剂。
7.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S3中，杀菌剂为有机抗菌剂。
8.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S3中，血清C经45-50℃，30min的灭活处理。
9.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S8中，使用细菌计数仪计算带有噬菌体的宿主菌。
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