CN107075473B - 其中未分化细胞被去除的分化诱导的细胞群、其用途及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，其中未分化多能干细胞的含量比例为0.2％以下。

Description

其中未分化细胞被去除的分化诱导的细胞群、其用途及其制 备方法
技术领域
本发明涉及其中未分化细胞被去除的分化诱导的细胞群、其用途及其制备方法。
背景技术
已经对包含通过诱导多能干细胞分化而获得的分化细胞的细胞群积极地进行了研究和开发。这种细胞群(多能干细胞加工产品)作为药物(细胞药物)或作为药物设计、开发等研究工具的有用性引起了人们的关注。根据目的，多能干细胞，如iPS细胞，被广泛使用。
然而，在这些分化诱导的细胞群中，未分化状态的多能干细胞不可避免地保留并被掺入。这是有问题的，因为无论旨在何种目的，分化诱导的细胞的纯度优选较高。特别地，当使用在未分化状态的具有致瘤性的多能干细胞时，如果分化诱导的细胞群含有未分化的多能干细胞，则使用分化诱导的细胞群作为药物具有安全风险。
因此，已经提出了用于进一步提高分化诱导的细胞群的纯度的各种技术。这些技术大致分为两组：主要提高分化诱导效率的技术组，以及纯化和精制分化诱导的细胞的技术组。后一组进一步分为两组：选择性地分离分化诱导的细胞(阳性选择)的技术，以及去除不可避免地混有的未分化多能干细胞(阴性选择)的技术。用于纯化和精制分化诱导的细胞的技术可以依据如下方法的差异进行分类。例如，作为使用特定培养基的方法，NPL 1和NPL2提出了使用蛋氨酸(-)培养基的方法，NPL 3和NPL 4提出了使用无糖培养基的方法。另外，作为使用存活信号抑制剂的方法，NPL 5提出了使用存活蛋白抑制剂的方法。此外，作为使用FACS分选的方法，NPL 6提出了通过抗SSEA-5抗体进行清洗，NPL7提出使用糖链抗体(凝集素)进行清洗。
引用列表
非专利文献
NPL1:Matsuura K,Kodama F,Sugiyama K,Shimizu T,Hagiwara N,OkanoT.Elimination of remaining undifferentiated iPS cells in the process of humancardiac cell sheet fabrication using a methionine-free culture condition(在使用不含蛋氨酸的培养条件的人心脏细胞片层制造过程中除去剩余的未分化的iPS细胞).Tissue Eng Part C Methods.2014年9月23日.(印刷前的Epub文件)
NPL 2:Shiraki N,Shiraki Y,Tsuyama T,Obata F,Miura M,Nagae G,AburataniH,Kume K,Endo F,Kume S.Methionine metabolism regulates maintenance anddifferentiation of human pluripotent stem cells(甲硫氨酸代谢调节人多能干细胞的维持和分化).Cell Metab.2014年5月6日；19(5):780-94.
NPL 3:Tohyama S,Hattori F,Sano M,Hishiki T,Nagahata Y,Matsuura T,Hashimoto H,Suzuki T,Yamashita H,Satoh Y,Egashira T,Seki T,Muraoka N,YamakawaH,Ohgino Y,Tanaka T,Yoichi M,Yuasa S,Murata M,Suematsu M,Fukuda K.Distinctmetabolic flow enables large-scale purification of mouse and humanpluripotent stem cell-derived cardiomyocytes(不同的代谢流量可以大规模纯化小鼠和人多能干细胞来源的心肌细胞).Cell Stem Cell.2013年1月3日；12(1):127-37.
NPL 4:Hemmi N,Tohyama S,Nakajima K,Kanazawa H,Suzuki T,Hattori F,SekiT,Kishino Y,Hirano A,Okada M,Tabei R,Ohno R,Fujita C,Haruna T,Yuasa S,Sano M,Fujita J,Fukuda K.A Massive Suspension Culture System With MetabolicPurification for Human Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes(用于人类多能干细胞衍生的心肌细胞的代谢纯化的大规模悬浮培养系统).Stem Cells TranslMed.2014年10月29日.pii:sctm.2014-0072.(印刷前的Epub文件)
NPL 5:Lee MO,Moon SH,Jeong HC,Yi JY,Lee TH,Shim SH,Rhee YH,Lee SH,OhSJ,Lee MY,Han MJ,Cho YS,Chung HM,Kim KS,Cha HJ.Inhibition of pluripotent stemcell-derived teratoma formation by small molecules(通过小分子抑制多能干细胞衍生的畸胎瘤形成).Proc Natl Acad Sci USA.2013年8月27日；110(35):E3281-90.
NPL 6:Tang C,Lee AS,Volkmer JP,Sahoo D,Nag D,Mosley AR,Inlay MA,Ardehali R,Chavez SL,Pera RR,Behr B,Wu JC,Weissman IL,Drukker M.An antibodyagainst SSEA-5glycan on human pluripotent stem cells enables removal ofteratoma-forming cells(针对人多能干细胞上的SSEA-5聚糖的抗体能够除去畸胎瘤形成细胞).Nat Biotechnol.2011年8月14日；29(9):829-34.
NPL 7:Onuma Y,Tateno H,Hirabayashi J,Ito Y,Asashima M.rBC2LCN,a newprobe for live cell imaging of human pluripotent stem cells(rBC2LCN是人类多能干细胞活细胞成像的新探针).Biochem Biophys Res Commun.2013年2月15日；431(3):524-9.
发明概述
技术问题
本发明的目的是提供一种包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，其中未分化多能干细胞的含量比例低于以前。
问题的解决方案
本发明人通过几种新方法成功地获得包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，其中未分化多能干细胞的含量比例为0.2％以下。本发明包括以下实施方案。
第1-1项.包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，其中未分化多能干细胞的含量比例为0.2％以下。
第1-2项.根据第1-1项所述的细胞群，其中所述多能干细胞为诱导的多能干细胞。
第1-3项.根据第1-2项所述的细胞群，其中所述诱导的多能干细胞为iPS细胞。
第1-5项.根据第1-1至第1-4项中任一项所述的细胞群，其中细胞的总数为1×104个以上。
第1-6项.根据第1-1至第1-5项中任一项所述的细胞群，其中未分化多能干细胞的含量比例通过使用流式细胞术的未分化细胞标记物分析来确定。
第1-7项.根据第1-1至第1-6项中任一项所述的细胞群用作药物。
第2-1项.制备包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群的方法，所述方法包括：
(A)在抗CD30抗体-结合剂的存在下，培养包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，从而降低未分化多能干细胞的含量比例；和/或
(B)在BET抑制剂的存在下，培养包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，从而降低未分化多能干细胞的含量比例。
第2-2项.根据第2-1项所述的制备方法，其中所述多能干细胞为诱导的多能干细胞。
第2-3项.根据第2-2项所述的制备方法，其中所述诱导的多能干细胞为iPS细胞。
第3-1项.包含抗CD30抗体-结合剂的组合物，所述组合物用于在制备包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群的方法中降低未分化多能干细胞的含量比例。
第3-2项.包含BET抑制剂的组合物，所述组合物用于在制备包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群的方法中降低未分化多能干细胞的含量比例。
发明的有益效果
本发明使得能够使用纯度高于常规细胞群的纯度的分化诱导的细胞群，并且提供例如具有少得多的副作用(例如致瘤性)的药物和具有更高准确度的研究工具。
附图说明
图1显示实施例1的结果。
图2显示实施例1的结果。
图3显示实施例2的结果。
图4显示实施例2的结果。
图5显示实施例2的结果。
图6显示实施例3的结果。
图7显示实施例4的结果。
图8显示实施例4的结果。
图9显示实施例5的结果。
图10显示实施例6的结果。
图11显示试验例的结果。
图12显示试验例的结果。
图13显示实施例7的结果。
具体实施方式
1.本发明的细胞群
本发明涉及包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，其中未分化多能干细胞的含量比例为0.2％以下。
在本发明的细胞群中，未分化多能干细胞的含量比例优选为0.1％以下，更优选为0.05％以下。
多能干细胞没有特别限制，可以使用大范围的多能干细胞。多能干细胞可以是诱导的多能干细胞。
诱导的多能干细胞没有特别限制。例如，可以使用iPS细胞等。其中，iPS细胞和ES细胞在安全性等方面是特别优选的，特别是用作药物。
本发明的特征在于细胞群中未分化多能干细胞的含量比例(即残留率)低于以前。也就是说，在开发能够实现常规无法实现的未分化多能干细胞残留率的新方法的基础上完成本发明。具体而言，这些新方法是在关注保持未分化状态的多能干细胞的特征的同时进行纯化的技术，如后文所述。因此，在本发明中，对分化细胞的种类没有特别限定。
分化细胞的实例包括但不限于心肌细胞、神经细胞、视网膜细胞(例如视网膜色素上皮细胞)、血液(造血)细胞、肝细胞、胰腺β细胞、肾细胞、软骨细胞、生殖细胞等。其中特别优选的是心肌细胞。
本发明的细胞群的特征在于未分化多能干细胞的含量比例低。根据需要，本发明的细胞群可以进一步含有与分化诱导的细胞和未分化多能干细胞不同的细胞。
对本发明的细胞群中的细胞总数没有特别限定。细胞总数通常为1×104个以上，优选为1×105-1×109个，更优选为1×108-1×109个。
本发明细胞群中未分化多能干细胞的含量比例可以定义为通过使用流式细胞术的未分化细胞标记物分析获得的含量比例。具体而言，该分析可以按如下方式进行。
在诱导未分化多能干细胞分化之后，将细胞解离试剂(cell dissociationreagent)如Accutase在37℃下用于约1×105-5×105个分化细胞5分钟，解离并通过离心收集分化细胞。将分化细胞悬浮于100μ的PBS中，分别加入抗人TRA-1-60抗体和同种型对照抗体，两者均被荧光标记。然后，将所得物各自在暗处于4℃下反应20分钟。在将分化的细胞用PBS洗涤并离心收集后，将其悬浮在300μ的PBS中并通过细胞筛(cell strainer)，然后收集在FACS管中。在流式细胞仪中，荧光发射由对应于标记的荧光的检测器检测，并定量。用同种型对照抗体染色的部分定义为阴性部分，而具有较高荧光强度的部分定义为阳性部分。在用抗人TRA-1-60抗体染色的部分中，属于阳性部分的比例表示为百分比。
本发明的细胞群可以不受限制地用于各种目的。例如，由于未分化多能干细胞的含量比例较低，因此本发明的细胞群作为药物(细胞药物)使用具有较小的安全风险，是优选的。作为药物使用，即目标疾病、剂量和用法可以根据分化细胞的类型适当地确定。虽然没有特别限定，例如，当分化细胞为心肌细胞时，本发明的细胞群可用于治疗心肌梗死和心肌病(例如扩张型心肌病)中所涉及的严重心力衰竭等。
当用作药物时，本发明的细胞群具有使安全风险(例如致瘤性)降低的效果。
当用作药物时，本发明的细胞群可用作药物组合物的活性成分。对这样的药物组合物没有特别限定，其可以含有可包含在所谓的细胞药物中的各种其他成分。
在本发明的细胞群中，根据使用目的等，上述细胞群可以包含在细胞培养基中，或形成片层。
2.本发明的细胞群的制备方法
尽管没有特别限定，本发明的细胞群可以通过以下说明的方法得到。如果需要，可以组合这些方法。这些方法都属于去除不可避免混有的未分化多能干细胞的技术，是可以将未分化多能干细胞的含量比例降低到常规方法无法实现的水平的新方法。
(1)使用抗CD30抗体-结合剂的方法
该方法使用抗CD30抗体-结合剂，该抗CD30抗体-结合剂包含特异性识别CD30的抗体，CD30被称为未分化细胞标记物。
CD30属于TNF-R超家族，并在一些淋巴瘤上表达。在正常组织中，CD30应仅在活化的淋巴细胞上表达。NF-κB和MAPK途径被称为下游信号。CD30被认为通过这些信号有助于存活。
具体地，抗CD30抗体-结合剂是抗体-药物缀合物(ADC)，其中具有细胞杀伤活性的药物通过在细胞内环境中可裂解的接头(linker)结合。抗CD30抗体-结合剂进入由抗体识别的细胞，并释放到细胞中，从而选择性地杀死细胞。
该试剂没有特别限制。实例包括微管抑制剂MMAE等。
此外，对接头没有特别限定。实例包括可被蛋白水解酶裂解的接头和其它接头。
抗CD30抗体-结合剂的实例包括但不限于：可作为抗体药物商购的Adcetris(注册商标)(SGN-35)(Millennium,Seattle Genetics和Takeda Chemical)。2011年FDA批准Adcetris(注册商标)可适用于CD30阳性淋巴瘤。于2014年4月Adcetris(注册商标)在日本也得到日本药事局的批准。
可以通过在抗CD30抗体-结合剂的存在下培养包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群来降低未分化多能干细胞的含量比例。
抗CD30抗体-结合剂在细胞培养基中的浓度可以根据多能干细胞种类等适当地确定。抗CD30抗体-结合剂的浓度优选为5μg/ml-50μg/ml，更优选为10μg/ml-50μg/ml，更加优选为25μg/ml-50μg/ml。
在上述内容中，培养时间也可以根据多能干细胞的种类等适当地确定。培养时间优选为24小时-96小时，更优选为48小时-96小时，更加优选为72小时-96小时。
(2)使用BET抑制剂的方法
该方法使用BET抑制剂，BET抑制剂为组蛋白乙酰化抑制剂。
BET(溴结构域和超末端(bromodomain and extra terminal))蛋白家族由BRD2、BRD3、BRD4和BRDT组成，并且深入参与RNA聚合酶II的转录调控。BET蛋白家族通过溴结构域(表观识别蛋白(epigenetic reader))识别组蛋白尾部的乙酰化赖氨酸残基，并将转录调控复合物募集到乙酰化的染色质。据报道，BET抑制剂，如低分子量化合物JQ1，对癌症和炎症具有治疗作用(Nature.2010；468:pp.1067-73and Cell.2011；146:pp.904-17)。特别地，认为BRD4在几种类型的癌症中调节c-Myc、NK-κB和Nanog的表达。这归因于BRD4与超级增强子的结合。
通过在BET抑制剂的存在下培养未分化多能干细胞来杀死未分化多能干细胞。如上述方法(1)中，通过在BET抑制剂的存在下培养包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，可降低未分化多能干细胞的含量比例。
除了JQ1之外，BET抑制剂的实例还包括I-BET151、I-BET762等。
细胞培养基中的BET抑制剂的浓度可以根据BET抑制剂的种类、多能干细胞的种类等适当地确定。例如，当使用JQ1时，其浓度优选为0.1μM-10μM，更优选为0.2μM-10μM，更加优选为0.5μM-10μM。
在上述内容中，培养时间也可以根据BET抑制剂的种类、多能干细胞的种类等适当地确定。例如，当使用JQ1时，培养时间优选为24小时-96小时，更优选为48小时-96小时，更加优选为72小时-96小时。
3.本发明的组合物
本发明还提供了在上述方法中使用的以下组合物。
(a)包含抗CD30抗体-结合剂的组合物；
(b)包含BET抑制剂的组合物；和
(c)包含抗CD30抗体-结合剂和BET抑制剂的组合物。
这些组合物中抗CD30抗体-结合剂和/或BET抑制剂的混合浓度没有特别限制，可以根据所需的储存稳定性、使用目的等适当地确定。
这些组合物可进一步包含其它组分，只要不干扰上述方法即可。其他组分的实例包括但不限于糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、棉子糖、海藻糖、甘露糖醇、羟乙基淀粉和支链淀粉；有机酸，如葡萄糖酸、乳酸、乙酸、丙酸、β-羟基丁酸和柠檬酸；电解质，如氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠和碳酸钾；维生素，如L-抗坏血酸和维生素E；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酸和赖氨酸；激素，如抗利尿激素和胰岛素；抗凝剂，如柠檬酸、柠檬酸盐、肝素和依地酸二钠，抗高血压药剂，如钙通道阻断剂、肾上腺素β-受体拮抗剂和血管紧张素转换酶抑制剂；核碱基，如三磷酸腺苷；防冻剂，如抗冻蛋白；以及活性氧清除剂、细胞活化剂、抗生素、抗血小板因子、肝病抑制剂，赋形剂、粘合剂、崩解剂、分散剂、粘性剂、再吸收促进剂、表面活性剂、增溶剂、防腐剂(preservatives)、抗菌剂(antiseptics)、乳化剂、等渗剂、稳定剂、缓冲液、pH调节剂等。可以根据需要混合这些组分中的至少一种。
实施例
以下参考实施例更详细地描述本发明。本发明不限于以下实施例。
实施例1：使用抗CD30抗体-结合剂去除未分化细胞的方法
将人iPS细胞株MYH-GIP4接种在12孔板(细胞密度：20％融汇)中。接种后48小时，将0μg/ml、0.05μg/ml和5μg/ml的抗CD30抗体-结合剂(通用名：Brentuximab vedotin，简写为“BV”)(商品名：Adcetris(注册商标))加入到每个孔中(每24小时更换含有药剂的培养基)。此后，每24小时进行显微镜观察。由于除BV之外Adcetris(注册商标)还含有添加剂，描述了由BV的净重换算得到的数值(即，“BV为0μg/ml、0.05μg/ml和5μg/ml”)。
结果证实，在48-72小时后，在添加有5μg/ml的BV的组中部分诱导细胞死亡(图1)。
类似地，为了检测BV对正常人真皮成纤维细胞(NHDF)的影响，进行与实施例1相同的实验。
将人成纤维细胞(NHDF)接种在12孔板(细胞密度：50％融汇)中。接种后48小时，将0μg/ml、0.05μg/ml和5μg/ml的BV加入到每个孔中(每24小时更换含有药剂的培养基)。此后，每隔24小时进行显微镜观察。
结果表明，加入5μg/ml的BV后72小时未通过肉眼观察到诱导细胞死亡(图2)。
实施例2：使用抗CD30抗体-结合剂去除未分化细胞的方法
为了阐明人iPS细胞的数量如何随各种BV浓度和BV处理时间而变化，将BV体外添加到人iPS细胞中，进行反映细胞数量的细胞增殖测定(CCK-8测定)，并定量评价活细胞。
将三种人iPS细胞株(1231A3、MYH-GIP4和253G1)和NHDF各自接种在12孔板(细胞密度：20％融汇)中。然而，NHDF的细胞密度设定为50％融汇。
接种后48小时，将0μg/ml、5μg/ml、25μg/ml和50μg/ml的BV加入到每个孔中(每24小时更换含有药剂的培养基)。此后，在加入后的24小时、48小时和72小时进行细胞增殖测定。
图3(24小时后)、图4(48小时后)和图5(72小时后)显示结果。在人iPS细胞中，72小时后观察到最高的细胞生长抑制作用，同时也证实了BV的浓度依赖性作用。将细胞数几乎完全抑制了72小时的BV浓度对1231A3而言为5-50μg/ml，对MYH-GIP4和253G1而言为25-50μg/ml。另一方面，证实NHDF几乎不受BV影响。
实施例3：使用抗CD30抗体-结合剂去除未分化细胞的方法
为了阐明人iPS细胞的数量如何随各种BV浓度和BV处理时间而变化，将BV体外添加到人iPS细胞中，进行反映细胞数量的细胞增殖测定(CCK-8测定)，并定量评价活细胞。
将三种人iPS细胞株(253G1、MYH-GIP4和201B7)和NHDF各自接种在12孔板(细胞密度：20％融汇)中。然而，NHDF的细胞密度设定为50％融汇。
接种后48小时，将0μg/ml、0.1μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml和50μg/ml的BV加入到每个孔中(每24小时更换含有药剂的培养基)。此后，在加入后72小时进行细胞增殖测定。
图6显示结果。在人iPS细胞中证实了BV的浓度依赖性作用。特别地，显示出用50μg/ml的BV处理后72小时，所有人iPS细胞的细胞增殖被抑制至20％以下。另一方面，证实NHDF几乎不受BV影响。
实施例4：使用抗CD30抗体-结合剂去除未分化细胞的方法
该方法针对人iPS细胞来源的心肌细胞(iPS-CM)。除了心肌细胞外，iPS-CM被认为还含有致瘤性未分化细胞。
根据以下文献实施诱导分化为心肌细胞的方法：Matsuura K等人，Creation ofhuman cardiac cell sheets using pluripotent stem cells(使用多能干细胞创建人类心脏细胞片层).Biochem Biophys Res Commun,2012,425(2)pp.321-7。将源自人iPS细胞株253G1的iPS-CM接种在12孔板中(细胞密度：90％融汇)中。接种后48小时，将0μg/ml、5μg/ml和10μg/ml的BV加入到每个孔中(每24小时更换含有药剂的培养基)。此后，加入后72小时和96小时提取mRNA。通过定量PCR定量Lin28表达水平。
结果表明，在72小时治疗组中，添加有BV的组中的未分化标记物Lin28的表达降低至对照组(BV：0μg/ml)的约50％。在96小时治疗组中，添加有BV的组中的Lin28的表达降低至对照组的约50％-70％(图7)。
此外，当认为纯的人iPS细胞的Lin28表达水平为100％时，在第72小时，对照组的Lin28表达水平为约0.7％，而在第72小时，添加有BV的组的Lin28表达水平降低到约0.3％。此外，在第96小时，添加有BV的组的Lin28表达水平降低至约0.1％(图8)。
上述结果表明，通过用BV处理iPS-CM可以有效地去除未分化细胞。特别地，当将未分化标记物Lin28作为指标时，与人iPS细胞相比，BV处理后在iPS-CM中Lin28的阳性率被抑制至0.1％。这被认为是归因于BV的强大的未分化细胞去除效果。
实施例5：使用BET抑制剂去除未分化细胞的方法
为了检测BET抑制剂(使用的药物的名称：JQ1)对人iPS细胞和正常的人真皮成纤维细胞(NHDF)的影响，将JQ1体外添加到人iPS细胞和正常的人真皮成纤维细胞(NHDF)中，并用肉眼观察细胞增殖和细胞死亡。
将人iPS细胞株253G1接种在12孔板(细胞密度：20％融汇)中。将人成纤维细胞(NHDF)接种在12孔板(细胞密度：50％融汇)中。
接种后48小时，将0μM、0.01μM、0.02μM、0.05μM、0.1μM、0.2μM、0.5μM、1μM、2μM、5μM和10μM的JQ1加入到每个孔中(每48小时更换含有药剂的培养基)。此后，96小时后进行显微镜观察，进行结晶紫染色以使细胞可见(图9)。
结果证实，对于人iPS细胞，96小时后在添加了0.2μM或更多的JQ1的组中诱导了完全细胞死亡。另一方面，在NHDF中没有观察到细胞死亡。
实施例6：使用BET抑制剂除去未分化细胞的方法
为了阐明人iPS细胞的数量如何随各种JQ1浓度而变化，将JQ1体外添加到人iPS细胞中，96小时后进行反映细胞数量的细胞增殖测定(CCK-8测定)，并定量评价活细胞。
将人iPS细胞株253G1接种在12孔板(细胞密度：20％融汇)中。
接种后48小时，将0μM、0.01μM、0.02μM、0.05μM、0.1μM、0.2μM、0.5μM、1μM、2μM、5μM和10μM的JQ1加入到每个孔中(每48小时更换含有药剂的培养基)。此后，在加入后96小时进行细胞增殖测定(图10)。
结果证实，96小时后在添加了0.2μM或更多的JQ1的组中，人iPS细胞253G1的生长被抑制到10％以下的细胞增殖率。
试验例：JQ1毒性试验
为了确定JQ1对人正常分化细胞(NHDF和iPS-CM)无毒性，进行了与实施例6相同的细胞增殖测定。
将NHDF和iPS-CM各自接种在12孔板中(细胞密度分别为50％和90％融汇)。
图11和12分别显示NHDF和iPS-CM的结果。证实JQ1对NHDF和iPS-CM几乎没有毒性。
实施例7：使用BET抑制剂去除未分化细胞的方法
将源自人iPS细胞株MYH-GIP4的iPS-CM接种在12孔板(细胞密度：90％融汇)中。接种后48小时，将0μM、1μM和5μM的JQ1加入到每个孔中(每48小时更换含有药剂的培养基)。此后，在加入后96小时对TRA-1-60阳性率进行定量。作为对照，使用同种型对照抗体进行相同的测定，证实没有假阳性。
结果(图13)显示，对照组(JQ1：0μM)中的TRA-1-60阳性率为2.0％，而添加有1-μMJQ1的组中的阳性率降至0.2％，且在添加有5-μMJQ1的组中的阳性率降至0.1％。
上述结果表明，通过用JQ1处理iPS-CM可以有效去除未分化细胞。特别地，当使用未分化标记物TRA-1-60作为指标时，与人iPS细胞相比，在JQ1处理后，iPS-CM中的TRA-1-60阳性率被抑制至0.1％。这被认为是归因于JQ1的强大的未分化细胞去除效果。

Claims (3)

1.制备包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群的方法，所述方法包括：
(A)在抗CD30抗体-结合剂的存在下，培养包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，从而降低未分化多能干细胞的含量比例；和
(B)在BET抑制剂的存在下，培养包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，从而降低未分化多能干细胞的含量比例；
其中，所述CD30抗体-结合剂是抗体-药物缀合物，其中具有细胞杀伤活性的药物通过在细胞内环境中可裂解的接头结合，所述细胞群中未分化多能干细胞的含量比例为0.2％以下。
2.制备包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群的方法，所述方法包括：
(A)在抗CD30抗体-结合剂的存在下，培养包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群，从而降低未分化多能干细胞的含量比例，
其中，所述CD30抗体-结合剂是抗体-药物缀合物，其中具有细胞杀伤活性的药物通过在细胞内环境中可裂解的接头结合，所述细胞群中未分化多能干细胞的含量比例为0.2％以下。
3.包含抗CD30抗体-结合剂的组合物在制备包含通过诱导多能干细胞分化获得的分化细胞的细胞群的方法中降低未分化多能干细胞的含量比例中的用途，其中，所述CD30抗体-结合剂是抗体-药物缀合物，其中具有细胞杀伤活性的药物通过在细胞内环境中可裂解的接头结合，所述细胞群中未分化多能干细胞的含量比例为0.2％以下。
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018014972A (ja) * 2016-07-29 2018-02-01 国立大学法人大阪大学 未分化細胞が除去された分化誘導細胞集団の製造方法
JP7123809B2 (ja) * 2016-12-20 2022-08-23 住友ファーマ株式会社 未分化ｉＰＳ細胞の除去剤
CN106854646A (zh) * 2016-12-21 2017-06-16 南开大学 一种维持小鼠胚胎干细胞Naive状态的低表达Lin28的小鼠胚胎干细胞
EP3569693A4 (en) * 2017-06-05 2020-11-18 Terumo Kabushiki Kaisha METHOD OF PREPARING A CELL CULTURE
WO2020067435A1 (ja) * 2018-09-27 2020-04-02 国立大学法人大阪大学 多能性幹細胞由来細胞のシート化方法
WO2020067438A1 (ja) 2018-09-27 2020-04-02 国立大学法人大阪大学 多能性幹細胞由来細胞のシート化方法
JPWO2020067436A1 (ja) * 2018-09-27 2021-08-30 国立大学法人大阪大学 多能性幹細胞由来細胞の移植片形成方法
EP3880801A4 (en) * 2018-11-13 2022-11-16 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center STEM CELL MULTIPLEXING METHODS AND COMPOSITIONS
US20220202948A1 (en) * 2019-02-13 2022-06-30 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Agent for Eliminating Pluripotent Stem Cells
KR102181316B1 (ko) * 2019-05-31 2020-11-20 한국한의학연구원 봉독을 유효성분으로 포함하는 미분화 인간 유도만능 줄기세포의 선택적 세포사멸 유도용 조성물 및 이를 이용한 세포사멸 방법
CN111979175A (zh) * 2020-08-28 2020-11-24 安徽惠恩生物科技股份有限公司 一种清除干细胞分化体系中残留的多能干细胞的方法
CN115074307B (zh) * 2021-03-15 2024-01-09 广州暨南大学医药生物技术研究开发中心有限公司 小分子化合物诱导成纤维细胞重编程为睾丸支持细胞的方法及其应用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004078917A2 (en) * 2003-03-07 2004-09-16 Gamida-Cell Ltd. Expansion of renewable stem cell populations using modulators of pi 3-kinase
AU2007210580B2 (en) * 2006-01-31 2012-10-11 Daiichi Sankyo Company, Limited A method for purifying cardiomyocytes or programmed cardiomyocytes derived from stem cells or fetuses
JP5507086B2 (ja) * 2006-03-06 2014-05-28 エージェンシー フォー サイエンス，テクノロジー アンド リサーチ ヒト胚性幹細胞の方法及びｐｏｄｘｌの発現
KR100937456B1 (ko) * 2007-08-01 2010-01-19 한국생명공학연구원 인간배아줄기세포를 조골세포 직계열로 분화시키는 방법
US20100035327A1 (en) * 2008-08-11 2010-02-11 Ann Marie Steele Use of rice-derived products in a universal cell culture medium
SG160248A1 (en) * 2008-09-18 2010-04-29 Agency Science Tech & Res Use of novel monoclonal antibodies targeting human embryonic stem cells to characterize and kill induced pluripotent stem cells
AU2010315712B2 (en) * 2009-10-19 2014-04-17 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Cardiomyocyte production
MX2012013255A (es) * 2010-05-14 2013-02-27 Dana Farber Cancer Inst Inc Composiciones y metodos para tratar neoplasias, enfermedades inflamatorias y otros trastornos.
US20130252331A1 (en) * 2010-05-14 2013-09-26 James Elliott Bradner Compositions and methods for modulating metabolism
KR101861171B1 (ko) * 2010-06-18 2018-05-31 후지필름 셀룰러 다이내믹스, 인코포레이티드 투석된 혈청이 있는 심근세포 배지
WO2012060461A1 (ja) * 2010-11-02 2012-05-10 日本電気株式会社 冷却装置及びその製造方法
CN103620024B (zh) * 2011-06-09 2016-06-22 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于使多能干细胞分化为血管床细胞的方法
RU2582259C2 (ru) * 2012-02-24 2016-04-20 Алтеоген Инк. Модифицированные антитела, с которыми связан мотив, включающий остаток цистеина, конъюгаты этих модифицированных антител с лекарственными веществами и способ их получения
WO2014058274A1 (ko) * 2012-10-12 2014-04-17 서강대학교 산학협력단 미분화 인간 유도만능줄기세포의 선택적 세포사멸 유도를 통한 테라토마 형성 억제 방법
US9763984B2 (en) * 2012-12-21 2017-09-19 Astellas Institute For Regenerative Medicine Methods for production of platelets from pluripotent stem cells and compositions thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A Scalable Approach to Prevent teratoma formation of human embryonic stem cells.;Z.Rong 等;《Journal of biological chemistry》;20120804;第287卷(第39期);全文 *
An antibody against SSEA-5 glycan on human pluripotent stem cells enables removal of teratoma-forming cells;Andrew S Lee等;《Nature Biotechnology》;20110930;第29卷(第9期);全文 *
Role of BRD4 in hematopoietic differentiation of embryonic stem cells;Ramon M Rodriguez等;《EPIGENETICS》;20140120;第9卷(第4期);全文 *

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Publication number Publication date
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