CN110507668A - 用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂及其应用 - Google Patents

用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂，所述干细胞制剂包括干细胞、外泌体和助剂，本发明提供的干细胞制剂，不但具有显著的治疗效果，而且通过干细胞、外泌体、营养剂、抗氧化剂及渗透剂等助剂的协同作用，可满足干细胞制剂的长期保存需求。

Description

用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物制剂技术领域，尤其涉及一种用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂及其应用。
背景技术
间充质干细胞广泛存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，也可从胎儿脐血中分离得到，此外还存在于胎盘，羊水、脐静脉内皮下层、外周血及肝脏、脂肪、肌肉、皮肤等多种组织中。间充质干细胞具有高度增殖、自我更新和多向分化潜能，间充质干细胞不仅能够向多种组织和细胞分化，而且易于分离、培养、扩增，易于外源基因的导入和表达，在体外长期培养过程中始终保持多向分化的潜能，遗传背景相当稳定。
1995年间充质干细胞首次应用于临床应用，2012年Osiris公司申报间充质干细胞作为药品上市得到加拿大FDA的批准，间充质干细胞的临床应用达到一个历史性高度。间充质干细胞目前已顶替胎盘干细胞而成为生物医学研究中首选的种子细胞，并被广泛应用于各种疾病的基础及临床研究。10至20年后，干细胞将会成为一种基本的医疗技术，帮助人们解决现在无法克服的疾病。
外泌体（exosome）最早是由细胞内多泡体(multivesicular body, MVB) 与细胞膜融合后, 释放到细胞外基质中的一种直径约为30-120nm 的膜性囊泡。外泌体内容物包括多种蛋白组分和核酸组分（mRNA、miRNA、DNA等）。外泌体仅由活细胞分泌，通常以胞内体逆出芽形成多囊泡胞内体，然后多囊泡胞内体与细胞膜融合并向细胞外释放而形成，与凋亡细胞产生的微泡有着显著的区别。几乎所有的哺乳动物细胞，包括干细胞，免疫和神经系统的原代细胞以及许多癌细胞，都会分泌外泌体。
目前，外泌体在精准医学方面的研究非常广泛，已用于各种疾病的早期体外检测中。外泌体治疗临床方面进展迅速，在2018年4月，美国食品和药物管理局（FDA）批准了Aegle公司的首个细胞外囊泡新药（IND）申请，以开始用于烧伤患者的临床试验。该公司通过专门的技术分离纯化间充质干细胞分泌的细胞外囊泡（EV），以治疗严重的皮肤病，包括烧伤和大疱性表皮松解症。
干细胞进行疾病的治疗，目前全球范围内已有10家企业的干细胞注射液已经上市，目前已经进入了临床使用阶段。目前国内已有多家企业已申报临床试验并已经通过审批，目前进入临床I,II期试验。但是由于个体差异，使用干细胞注射液治疗免疫性疾病的疗效在不同个体之间存在明显的差异，特别是针对部分类风湿性关节炎患者的治疗效果不显著。
发明内容
本发明的目的在于，针对现有技术的缺陷，本发明提供一种用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂，显著提高了免疫性疾病特别是风湿性关节炎的治疗效果。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
本发明第一方面，提供一种用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂包括干细胞、外泌体和助剂；所述外泌体为STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体。
优选地，所述干细胞为间充质干细胞，所述间充质干细胞的含量为1E7-2E8个/100ml。
优选地，所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞或子宫内膜间充质干细胞。
更优选地，所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞。所述骨髓间充质干细胞由现有技术中常规方法分离和增值得到，此处不再赘述。
优选地，所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞由以下方法获取得到：获得骨髓间充质干细胞，利用免疫磁珠分离骨髓间充质干细胞中STRO-1＋阳性细胞，获得STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞。
所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体由现有技术中干细胞外泌体分离的已知方法从STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞中分离得到。
例如，所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体可以由以下方法制备得到：
利用无血清培养基进行STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞的培养，取上清液；将收集到的上清液分装于50mL的离心管中，在4℃ ,300g离心10min，除去残余细胞；2000g离心20min，除去细胞碎片；收集上清液并用0.22μm孔径的过滤器进行过滤；将上述过滤后的上清液加入装有超滤膜的旋转超滤仪中，接通氮气并将最大进气压力控制在517.125kPa以下，打开磁力搅拌器；待上清液超滤完毕后，加入200-500mL 生理盐水并再次超滤，重复3-5次，获得所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体。
优选地，所述外泌体的浓度为0.01-0.2mg/ml。例如，0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、0.1mg/ml、0.11mg/ml、0.12mg/ml、0.13mg/ml、0.14mg/ml、0.15mg/ml、0.16mg/ml、0.17mg/ml、0.18mg/ml、0.19mg/ml或0.2mg/ml。
优选地，所述助剂选自人血白蛋白注射液、低分子肝素钙、复方氨基酸注射液、复方电解质注射或右旋糖苷-葡萄糖注射液中的一种或多种。
更优选地，所述助剂选自人血白蛋白注射液、低分子肝素钙、复方氨基酸注射液、复方电解质注射和右旋糖苷-葡萄糖注射液。
优选地，按照体积百分比，所述人血白蛋白注射液的含量为1-30%。例如，可以是1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%。
优选地，所述低分子肝素钙的含量为2000-10000IU/ml。例如，可以是2000IU/ml、3000IU/ml、4000IU/ml、5000IU/ml、6000IU/ml、7000IU/ml、8000IU/ml、9000IU/ml或10000IU/ml。
优选地，按照体积百分比，所述复方氨基酸注射液的含量为10-30%。例如，可以是10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%。
优选地，按照体积百分比，所述复方电解质注射液的含量为20-50%。例如，可以是20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%和50%。
优选地，按照体积百分比，所述右旋糖苷-葡萄糖注射液的含量为20-50%。例如，可以是20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%和50%。
优选地，所述助剂选自生理盐水。
优选地，所述助剂选自人血白蛋白、海藻糖、氯化钠、葡萄糖、乳酸钠林格注射液、肝素、L-谷氨酰胺、EDTA、磷酸盐缓冲液、亚硒酸钠、必需氨基酸和非必需氨基酸。
优选地，所述必需氨基酸选自赖氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和苏氨酸。
优选地，所述非必需氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸盐酸盐或天冬酰胺中的一种或多种。
优选地，按照体积百分比，所述干细胞制剂还包括1-2%的抗氧化剂，所述抗氧化剂选自维生素C或氨甲环酸。
优选地，按照体积百分比，所述干细胞制剂还包括5-10%的二甲基亚砜。例如，所述二甲基亚砜的体积百分比可以是5%、6%、7%、8%、9%或10%。
本发明第二方面，提供上述的干细胞制剂在制备治疗免疫性疾病中的应用。
优选地，所述免疫性疾病选自关节炎。
优选地，所述关节炎包括风湿性关节炎、类风湿关节炎、感染性关节炎、痛风性关节炎、骨关节炎或脊柱关节炎。
本发明所述的干细胞制剂由以下方法配置而成：按照比例，取人血白蛋白注射液、低分子肝素钙、复方氨基酸注射液、复方电解质注射、右旋糖苷-葡萄糖注射液、抗氧化剂、二甲基亚砜进行混合，混合后加入干细胞，将干细胞进行混悬后，加入STRO-1+骨髓间充质干细胞来源的外泌体，获得所述干细胞制剂。
相对于现有技术，本发明的有益效果在于：
本发明提供了一种干细胞制剂，本发明提供的干细胞制剂中包含干细胞和STRO-1+骨髓间充质干细胞来源的外泌体，采用STRO-1+骨髓间充质干细胞来源的外泌体作为针对免疫性疾病中炎症的消除因子，可有效的进行免疫调控，避免因个体间存在的免疫反应不同，造成干细胞制剂对免疫性疾病的治疗效果不显著。
另一方面，本发明中采用的STRO-1+骨髓间充质干细胞来源的外泌体，可促进患者自身细胞与注射的间充质干细胞的相互作用，有效提高间充质干细胞的治疗效果。
本发明的干细胞制剂加入的辅料，包括注射液，所述助剂为复配注射液，注射液配方进行大量的试验证明，可以为干细胞及外泌体提供充足的营养，满足干细胞及外泌体长期保存的营养需求。
另外，添加了维生素C或者氨甲环酸作为抗氧化剂，避免干细胞或外泌体被氧化变性；使用二甲基亚砜作为营养成分及调节渗透压的产品，能够减少干细胞及外泌体在冷冻过程中所受到的损伤，显著提高干细胞及外泌体的存活率及功能。
综上所述，本发明提供的干细胞制剂，不但具有显著的治疗效果，而且通过干细胞、外泌体、营养剂、抗氧化剂及渗透剂的协同作用，可满足干细胞制剂的长期保存需求，本发明的干细胞制剂在冷冻条件下可以保存10年以上。
附图说明
图1-显示了本发明实施例中干细胞制剂复苏后0h细胞贴壁率；
图2显示了本发明实施例中干细胞制剂复苏后1h细胞贴壁率；
图3显示了本发明实施例中干细胞制剂复苏后4h细胞贴壁率；
图4显示本发明实施例中空白组、实验组和对照组分别对Th1+淋巴细胞增殖的影响；
图5显示本发明实施例中空白组、实验组和对照组分别对Th2+淋巴细胞增殖的影响；
图6显示本发明实施例中空白组、实验组和对照组分别对Th17+淋巴细胞增殖的影响；
图7显示本发明实施例中空白组、实验组和对照组分别对Treg+淋巴细胞增殖的影响。
具体实施例
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
试剂说明：
无血清培养基：采购自陕西佰傲干细胞再生医学有限公司生产，商品名：Bio-UltraMSCs，货号：SF-P-01。
复方电解质注射液：采购自上海百特医疗用品有限公司，药准字H2000475。
复方氨基酸注射液：采购自回音必集团(江西)东亚制药有限公司，药准字H19993208。
人血清白蛋白注射液：采购自瑞士杰特贝林生物制品有限公司，生产批号P10009968。
低分子肝素钙注射液：采购自深圳赛保尔生物药业有限公司，生产批号1809103。
右旋糖酐葡萄糖注射液：采购自四川科伦药业股份有限公司，生产批号为T18040903-1。
维生素C注射液：采购自西安利君制药有限责任公司，生产批号为A8L708。
二甲基亚砜：采购自美国origen生物医学公司，生产批号为S20011。
实施例1
本实施例提供一种用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂，所述干细胞制剂包括干细胞、外泌体和助剂；所述外泌体为STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体。
本实施例所述干细胞为间充质干细胞，所述间充质干细胞的含量为1E7-2E8个/100ml。例如：1E7个/100ml、1.3E8个/100ml、1.5E8个/100ml、1.8E8个/100ml或2E8个/100ml。
本实施例所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞。本实施例所述骨髓间充质干细胞由现有技术中常规方法分离和增值得到，此处不再赘述。
在一些实施例中，所述间充质干细胞选自脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞或子宫内膜间充质干细胞。
本实施例所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞由以下方法获取得到：获得骨髓间充质干细胞，利用免疫磁珠分离骨髓间充质干细胞中STRO-1＋阳性细胞，获得STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞。
本实施例所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体由现有技术中干细胞外泌体分离的已知方法从STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞中分离得到。
例如，所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体可以由以下方法制备得到：
利用无血清培养基进行STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞的培养，取上清液；将收集到的上清液分装于50mL的离心管中，在4℃ ,300g离心10min，除去残余细胞；2000g离心20min，除去细胞碎片；收集上清液并用0.22μm孔径的过滤器进行过滤；将上述过滤后的上清液加入装有超滤膜的旋转超滤仪中，接通氮气并将最大进气压力控制在517.125kPa以下，打开磁力搅拌器；待上清液超滤完毕后，加入200-500mL 生理盐水并再次超滤，重复3-5次，获得所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体。
本实施例所述外泌体的浓度为0.01-0.2mg/ml。例如，0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.07mg/ml、0.08mg/ml、0.09mg/ml、0.1mg/ml、0.11mg/ml、0.12mg/ml、0.13mg/ml、0.14mg/ml、0.15mg/ml、0.16mg/ml、0.17mg/ml、0.18mg/ml、0.19mg/ml或0.2mg/ml。
本实施例所述助剂选自人血白蛋白注射液、低分子肝素钙、复方氨基酸注射液、复方电解质注射或右旋糖苷-葡萄糖注射液中的一种或多种。
在一些实施例中，所述助剂选自人血白蛋白注射液、低分子肝素钙、复方氨基酸注射液、复方电解质注射和右旋糖苷-葡萄糖注射液。
在一些实施例中，按照体积百分比，所述人血白蛋白注射液的含量为1-30%。例如，可以是1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%。
在一些实施例中，所述低分子肝素钙的含量为2000-10000IU/ml。例如，可以是2000IU/ml、3000IU/ml、4000IU/ml、5000IU/ml、6000IU/ml、7000IU/ml、8000IU/ml、9000IU/ml或10000IU/ml。
在一些实施例中，按照体积百分比，所述复方氨基酸注射液的含量为10-30%。例如，可以是10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%或30%。
在一些实施例中，按照体积百分比，所述复方电解质注射液的含量为20-50%。例如，可以是20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%和50%。
在一些实施例中，按照体积百分比，所述右旋糖苷-葡萄糖注射液的含量为20-50%。例如，可以是20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%和50%。
在一些实施例中，所述助剂选自生理盐水。
在一些实施例中，所述助剂选自人血白蛋白、海藻糖、氯化钠、葡萄糖、乳酸钠林格注射液、肝素、L-谷氨酰胺、EDTA、磷酸盐缓冲液、亚硒酸钠、必需氨基酸和非必需氨基酸。
在一些实施例中，所述必需氨基酸选自赖氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和苏氨酸。
在一些实施例中，所述非必需氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸盐酸盐或天冬酰胺中的一种或多种。
在一些实施例中，按照体积百分比，所述干细胞制剂还包括1-2%的抗氧化剂，所述抗氧化剂选自维生素C或氨甲环酸。
在一些实施例中，按照体积百分比，所述干细胞制剂还包括5-10%的二甲基亚砜。例如，所述二甲基亚砜的体积百分比可以是5%、6%、7%、8%、9%或10%。
本实施例第二方面，提供上述的干细胞制剂在制备治疗免疫性疾病中的应用。
在一些实施例中，所述免疫性疾病选自关节炎。所述关节炎包括风湿性关节炎、类风湿关节炎、感染性关节炎、痛风性关节炎、骨关节炎或脊柱关节炎。
本实施例所述的干细胞制剂由以下方法配置而成：按照比例，取人血白蛋白注射液、低分子肝素钙、复方氨基酸注射液、复方电解质注射、右旋糖苷-葡萄糖注射液、抗氧化剂、二甲基亚砜进行混合，混合后加入干细胞，将干细胞进行混悬后，加入STRO-1+骨髓间充质干细胞来源的外泌体，获得所述干细胞制剂。
将上述制备好的干细胞制剂置入冻存盒，24小时后转移至液氮罐中进行长期保存。
效果验证：
一、干细胞制剂保存效果检测
冻存1个月后，对上述冻存的干细胞制剂进行复苏，利用台盼蓝拒染法（具体方法参见索来宝公司的台盼蓝染色液检测方法）检测干细胞制剂中细胞的活率及贴壁率，细胞贴壁率按照复苏后8小时细胞粘附数量进行计算。细胞活率见表1所示，细胞贴壁率见表2及图1-图3。
表1-干细胞制剂复苏后不同时间点检测细胞活率
复苏后检测时间点 0h 1h 4h
细胞活率 98% 92% 86%
表2-干细胞制剂复苏后不同时间点检测细胞贴壁率
复苏后检测时间点 0h 1h 4h
细胞活率 80% 75% 71%
检测结果显示，干细胞制剂复苏后4小时内细胞的活率高于85%，细胞贴壁率高于70%，其结果证明干细胞制剂的保存效果良好，可有效的保存干细胞制剂的有效成分。
二、STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体效果验证
将所获得的STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞及骨髓间充质干细胞外泌体加入细胞培养液中，进行免疫调控能力检测，具体方法参见《同济大学学报(医学版)》 2017年06期《人不同组织间充质干细胞免疫调控能力的比较》。
采用percoll法进行人外周血单个核细胞的分离，将分离后细胞加入提前进行CD3/CD28包被的培养板中，培养24小时后，分成空白组、实验组和对照组，空白组加入基础培养液（90% 的a-MEM液和10%胎牛血清），实验组加入含有的STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体的培养液，对照组加入含有骨髓间充质干细胞来源外泌体的培养液，分别置于37度，5%二氧化碳培养箱中进行培养，培养9天后，采用Beckman CoulterCytoFLEX 流式细胞仪进行检测（具体参见CoulterCytoFLEX 流式细胞仪FC500使用说明）。检测结果如图4-图7所示。
图4结果可以看出，STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体与骨髓间充质干细胞来源外泌体相比，STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体可显著抑制Th1+淋巴细胞的增殖。
图5结果可以看出，STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体与骨髓间充质干细胞来源外泌体相比，STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体可显著促进Th2+淋巴细胞的增殖。
图6结果可以看出，STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体与骨髓间充质干细胞来源外泌体相比，STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体可显著抑制Th17+淋巴细胞的增殖。
图7结果可以看出，STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体与骨髓间充质干细胞来源外泌体相比，STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体可显著促进Treg+淋巴细胞的增殖。
以上结果显示：STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源外泌体相对于骨髓间充质干细胞来源外泌体具有较强的免疫调控能力。
三、本发明实施例提供的干细胞制剂的治疗效果验证
按照1987年美国风湿病学会(ARA)修订的诊断标准入选30名患者：①晨僵至少1小时(≥6周)；②腕掌指关节或近端指间关节肿(≥6周)； ③3个或者3个以上关节肿(≥6周)；④对称性关节肿(≥6周)；⑤皮下类风湿 结节；⑥手线变化；⑦类风湿因子阳性；具有其中四项即可诊断为类风湿性 关节炎患者。
将患者分为以下几组进行干细胞制剂的效果验证：
实验组：选10例患者，将本发明实施例提供的干细胞制剂进行复苏后，加入到生理盐水中，按照1:9的比例稀释，每个患者每次给1E8细胞，进行静脉输注；
对照组1：与实验组的不同之处在于，10例患者输注的是间充质干细胞制剂。
对照组2：与实验组的不同之处在于，10例患者输注的是STRO-1+骨髓间充质干细胞来源的外泌体制剂。
在治疗前后，对实验组、对照组1和对照组2中的患者分别选择28个关节进行疾病活动度评分：检查双侧近端指间关节、掌指关节、腕关节、肘关节、肩关节及膝关节共计28个关节，得出关节触痛数(T28)和肿胀关节数(SW28)，并结合红细胞沉降率(ESR)，采用以下公式计算：DAS28＝[0.56 ×T28+0.28×SW28+0.70×Ln(ESR)]×1.08+0.16。DAS28≤2.6分提示病情处于缓解期；2.6～3.2分之间提示病情处于低活动度；3.2～5.1分之间提示病情为中活动度；>5.1分提示病情为高活动度。评分结果见表3和表4。
表3-各组患者在治疗前的DAS28平均分
组别 实验组 对照组1 对照组2
治疗前评分 5.1±0.12 5.2±0.13 5.0±0.22
表4：各组患者在治疗后的DAS28平均分
治疗月数 实验组 对照组1 对照组2
3 4.32±0.19 4.35±0.11 4.36±0.21
6 3.12±0.31 4.02±0.09 4.11±0.19
9 2.5±0.19 3.32±0.19 3.32±0.78
10 2.32±0.13 3.32±0.13 3.02±0.62
12 1.92±0.42 2.89±0.29 2.9±0.13
14 1.30±0.10 2.79±0.65 2.6±0.09
结果显示，实验组患者在治疗第9个月，DAS28≤2.6分，病情即处于 缓解期；而对照组1和对照组2患者在治疗第14个月时仍未得到缓解，由此，说明本发明提供的干细胞制剂缩短了类风湿性关节炎的治疗周期，提高了治疗效率，具有显著的疗效。
尽管以上结合附图对本发明的实施方案进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在说明书的启示下，在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出多种形式的变化，这些均属于本发明保护之列。

Claims (12)

1.用于治疗免疫性疾病的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂包括干细胞、外泌体和助剂，所述外泌体为STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞来源的外泌体。
2.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞为间充质干细胞，所述间充质干细胞的含量为1E7-2E8个/100ml。
3.根据权利要求2所述的干细胞制剂，其特征在于，所述间充质干细胞选自骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、牙周膜间充质干细胞或子宫内膜间充质干细胞。
4.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞由以下方法获取得到：获得骨髓间充质干细胞，利用免疫磁珠分离骨髓间充质干细胞中STRO-1＋阳性细胞，获得STRO-1＋同质性骨髓基质干细胞。
5.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述外泌体的浓度为0.01-0.2mg/ml。
6.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述助剂选自人血白蛋白注射液、低分子肝素钙、复方氨基酸注射液、复方电解质注射液或右旋糖苷-葡萄糖注射液中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的干细胞制剂，其特征在于，按照体积百分比，所述人血白蛋白注射液的含量为1-30%；所述低分子肝素钙的含量为2000-10000IU/ml；所述复方氨基酸注射液的含量为10-30%；所述复方电解质注射液的含量为20-50%；所述右旋糖苷-葡萄糖注射液的含量为20-50%。
8.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂还包括1-2%的抗氧化剂，所述抗氧化剂选自维生素C或氨甲环酸。
9.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂还包括5-10%的二甲基亚砜。
10.权利要求1-9任一项所述的干细胞制剂在制备治疗免疫性疾病中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述免疫性疾病选自关节炎。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述关节炎包括风湿性关节炎、类风湿关节炎、感染性关节炎、痛风性关节炎、骨关节炎或脊柱关节炎。
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