JP2018531269A - 脂肪由来幹細胞に基づく幹細胞治療 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、脂肪由来幹細胞(ASC)および組成物ならびに治療のためのそのようなASCおよび組成物を製造および使用する方法に関する。
多数の前臨床試験において、骨髄(MSC)ならびに脂肪組織からの間葉性間質細胞が強い再生能を有することが確立されている。両組織起源の間葉性間質細胞は、マトリクスリモデリング、血行再建および免疫調節を含む天然内在性修復機構を促進する細胞外物質を放出する、傍分泌機構を介して再生を改善する。
本発明者らにより、ASCの高品質“即納可”製剤が効率的に、高濃度で、プロテインフリーのクリオ保護剤(cryoprotectant)中で生産され、凍結できることが発見された。凍結ASC製剤は、解凍されたとき、即時臨床使用可である。さらに、ASC製剤は免疫抑制性質を有し、例えば、免疫抑制性治療における自己および同種使用の両方に適するものとなる。
(i)ドナーから採取した吸引脂肪組織の間質血管細胞群(SVF)を、所望によりASC接着が促進するように表面が前処理されているバイオリアクターに添加し;
(ii)バイオリアクターにおいて、接着細胞をヒト血小板ライセートを添加した無血清培養培地においてコンフルエントまで培養し;
(iii)接着細胞を剥離し;
(iv)剥離した細胞を、クリオ保護剤中少なくとも1×106細胞/mLの濃度で凍結させ;
(v)凍結細胞を解凍し、工程(ii)および(iii)および所望により(iv)を少なくとも1回繰り返し、
(vi)剥離した細胞を少なくとも1×107細胞/mLの濃度で凍結させ;そして
(vii)所望により、凍結組成物を解凍する
工程の1以上を含む、実質的に均質な成人幹細胞集団を含む組成物を製造する方法に関する。
本発明は、細胞バンクでの凍結保存に適する組成物であって、一般にASCのバイオリアクター中での凍結保存工程により分離される2ラウンドの増殖による、健常ドナーから単離したASCに基づく幹細胞生成物に関する。生成物は、例えば、心不全を伴うまたは伴わない心疾患などの虚血または他の組織破壊により特徴付けられる障害または疾患の再生治療、自己免疫性反応または移植片拒絶の免疫抑制または炎症性疾患の抗炎症性治療のための、同種治療薬物として有用である。特に、ASC組成物は、例えば、液体窒素中で保存される即納可凍結保存製品として使用でき、解凍後直ぐに使用できる。次いで、ASC組成物を静脈内、動脈内または組織、例えば、心筋への直接注射または点滴により投与できる。
“ASC”、“脂肪組織由来幹細胞”、“脂肪組織由来間質細胞”などは、脂肪組織由来である、間葉性幹細胞、多能性間質細胞、多能性幹細胞および間葉性間質/幹細胞としても知られる多能性間質幹細胞をいう。ASCを同定するある基準が当分野で知られ、例えば、Bourin et al. (2013)に記載され、これは全体として引用により本明細書に包含させる。ある実施態様において、ASCは、適切な条件下、脂肪細胞、軟骨芽細胞および造骨細胞分化系列に添って分化する能力により特徴付けられる。培養物におけるASCは、CD90、CD73、CD105の1以上の細胞表面マーカーを発現し、CD45およびCD31の発現を欠くことにより特徴付けられ得る。ある実施態様において、それらは骨髄由来MSCと、CD36陽性およびCD106陰性により区別できる。
方法:
本発明の方法は、例えば、ASCの増殖添加剤としてのヒト血小板ライセート、密閉バイオリアクターシステムでの増殖および高品質ASCを用いる同種凍結保存即使用可組成成物としてのASCの最終製剤の組み合わせに基づく、安全かつ効率的な製造テクノロジーを提供する。
一般に、本発明の方法を使用する、SVFからASC生成物の製造は、凍結保存時間を除き、わずか約15〜約18日を要するのみである。増殖効率は、バイオリアクターSVF1回操作から、11±5中間生成物バイアルの平均収量を得ることができ(SVF3回操作の平均)、最終生成物の平均バッチ当たり収量5±2アンプルを与える(バイオリアクターASC8回操作の平均)ことを考慮すると、特に驚くべきである。従って、各約1億1000万ASCを含む55クリオバイアルの平均収量が、SVF中の約1億単核細胞(MNC)から得られ得る。さらに、実施例に記載するとおり、ASC生成物は、継代2代ASC生成物の解凍直後に評価して、高生存能(平均90±2%)であることにより特徴付けられる。
(i)ドナーから採取した吸引脂肪組織のSVFを、少なくとも一表面が成人幹細胞の接着が促進されるように前処理されているバイオリアクターに添加し;
(ii)バイオリアクター中、接着細胞をヒト血小板ライセートを添加した無血清培養培地においてコンフルエントまで培養し;
(iii)接着細胞を剥離し;
(iv)剥離した細胞を、クリオ保護剤中少なくとも1×106細胞/mLの濃度で凍結させ;
(v)凍結細胞を解凍し、工程(ii)〜(iii)を少なくとも1回繰り返し、
(vi)剥離した細胞を少なくとも1×107細胞/mLの濃度で凍結させ;そして
(vii)所望により、凍結組成物を解凍する
工程を含む。
(i)ドナーから採取した吸引脂肪組織のSVFを、少なくとも一表面が成人幹細胞の接着が促進されるように前処理されているバイオリアクターに添加し;
(ii)バイオリアクターにおいて、接着細胞をヒト血小板ライセートを添加した無血清培養培地においてコンフルエントまで培養し;
(iii)接着細胞を剥離し;
(iv)工程(ii)および(iii)を少なくとも1回繰り返し;
(v)剥離した細胞を少なくとも1×107細胞/mLの濃度で凍結させ;そして、所望により、
(vi)凍結組成物を解凍する
工程を含む。
(i)ドナーから採取した吸引脂肪組織の間質血管細胞群(SVF)を、少なくとも一表面が成人幹細胞の接着が促進されるように前処理されているバイオリアクターに添加し;
(ii)ヒト血小板ライセートを添加した無血清培養培地においてSVFの接着細胞をコンフルエントまで培養し;
(iii)接着細胞を剥離し;
(iv)剥離した細胞を、クリオ保護剤中少なくとも1×106100万細胞/mLの濃度で凍結させ;
(v)凍結細胞を解凍し、工程(ii)〜(iv)を繰り返し、剥離した細胞を少なくとも1×107細胞/mLの濃度で凍結させ;そして、所望により、
(vi)凍結組成物を解凍する
工程を含む。
(a)約35〜45mM範囲の濃度のカリウムイオン、約80〜120mM範囲の濃度のナトリウムイオン、約2〜10mM範囲の濃度のマグネシウムイオンおよび約0.01〜0.1mM範囲の濃度のカルシウムイオンからなる群から選択される1以上の電解質;
(b)循環系からの漏出を制限するのに十分に大きなサイズであり、血液血漿と同等の膠質浸透圧の維持に有効であり、ヒト血清アルブミン、多糖およびコロイド状デンプンからなる群から選択される巨大分子膠質浸透圧性物質;
(c)生理学的および低温条件で有効な生物学的pH緩衝液;
(d)栄養有効量の少なくとも1つの単糖;
(e)非透過性およびヒドロキシル基除去有効量のマンニトール;
(f)細胞膜に不浸透性であり、寒冷暴露中の細胞膨張を中和するのに有効な非透過性アニオンであって、該非透過性イオンがラクトビオン酸、グルコン酸、クエン酸およびグリセロリン酸からなる群から選択される少なくとも一つのメンバーであるもの;
(g)ATPの再生に有効な基質であって、該基質がアデノシン、フルクトース、リボースおよびアデニンからなる群から選択される少なくとも一つのメンバーであるもの;および
(h)グルタチオン
を含む。
a)35〜45mM範囲の濃度のカリウムイオン、80〜120mM範囲の濃度のナトリウムイオン、2〜10mM範囲の濃度のマグネシウムイオンおよび0.01〜0.1mM範囲の濃度のカルシウムイオンからなる群から選択される1以上の電解質;
b)循環系からの漏出を制限するのに十分に大きなサイズであり、血液血漿と同等の膠質浸透圧の維持に有効であり、ヒト血清アルブミン、多糖およびコロイド状デンプンからなる群から選択される巨大分子膠質浸透圧性物質;
c)生理学的および低温条件で有効な生物学的pH緩衝液;
d)栄養有効量の少なくとも1つの単糖;
e)非透過性およびヒドロキシル基除去有効量のマンニトール;
f)細胞膜に不浸透性であり、寒冷暴露中の細胞膨張を中和するのに有効な非透過性アニオンであって、該非透過性イオンがラクトビオン酸、グルコン酸、クエン酸およびグリセロリン酸からなる群から選択される少なくとも一つのメンバーであるもの;
g)ATPの再生に有効な基質であって、該基質がアデノシン、フルクトース、リボースおよびアデニンからなる群から選択される少なくとも一つのメンバーであるものおよび
h)アポトーシス誘発細胞死を制御する少なくとも一つの薬剤
を含む。
本発明のASCは、凍結保存後でさえ多能性能、マーカープロファイルおよび/またはおよび増殖能、生存能、回収率および免疫抑制能などのASCの機能的特徴により特徴付けられる。これらのASC特徴は、下に詳述するが、本発明の方法により得られたASCに各々等しく適用される。マーカープロファイルは、例えば、実施例2、10、11または14に記載するように、例えば、各マーカーに対する蛍光標識抗体を使用するフローサイトメトリーにより好都合に決定され得る。
− 少なくとも90%がCD90、CD73、CD13、CD29およびCD166を発現し、多くて5%がCD45、CD19、CD14およびCD31を発現し、多くて10%がCD106を発現し、2〜15%がCD36を発現し、少なくとも10%がCD146を発現し、少なくとも80%がCD105を発現し、多くて40%がCD34を発現する;および
− 少なくとも90%がCD10、CD140b、CD160、CD204、CD272、CD44、CD54、CD9、ガレクチン3、ガレクチン9、HLA−GおよびLTβRを発現し、少なくとも80%がCD49aを発現し、少なくとも60%がCD258およびCD270を発現し、少なくとも5%がCD200を発現し、多くて15%がCD15、CD152、CD163、CD18、CD274、CD39、CD40、CD62L、CD80およびCD86を発現し、多くて30%がCXCR4を発現する
ものである。
IFN−ガンマで刺激していない同じASCからの細胞などの対照と比較して、50ng/ml IFN−ガンマ存在下で3日培養したとき
− マーカーを発現するASC集団のパーセンテージのASC集団の少なくとも5%における陽性または陰性変化または
− マーカーを発現する細胞の部分におけるマーカーの発現レベルの少なくとも0.5倍の陽性または陰性変化
を示す。
− CD274、CD106および/またはCD49aを発現するASC集団のパーセンテージの少なくとも5%の増加、例えばCD274のパーセンテージの少なくとも40%、例えば少なくとも60%の増加;
− CD200、CD270、CD9および/またはCXCR4を発現するASC集団のパーセンテージの少なくとも5%減少、例えば発現ASC集団のパーセンテージの少なくとも10%減少;
− マーカー陽性細胞でのCD10、CD54、HLA−ABCおよび/またはHLA−DR/DQ/DP発現レベル増加、例えばCD54発現細胞でのCD54の発現レベルの少なくとも20倍、例えば少なくとも35倍、例えば少なくとも30倍増加;および/または
− LTβR発現レベルの、例えば、少なくとも2倍の減少。
本発明によりまた提供されるのは、先の“ASC”セクションおよび“方法”セクションにおける各方法により得られるものを含む、ここでの態様および実施態様において詳述する各ASC集団の組成物である。このようなASC集団の各々はまた本発明の組成物の形式で提供される。
(a)ASC集団の少なくとも85%が生存可能細胞であり、2時間室温で保存後の生存能が少なくとも80%である;
(b)ASC集団が、48時間培養したとき少なくとも1のPDを提供する増殖能を有する;
(c)ASC集団が樹状細胞成熟および活性化を抑制できる;
(d)解凍後の回収率が95%を超え、解凍後室温で2時間保存後の細胞の回収率が少なくとも85%である;
(e)ASC集団が、総細胞数の少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%が5時間培養後接着性であるインビトロ細胞接着を有する
組成物である。
(a)幹細胞集団の少なくとも80%が生存可能細胞である;
(b)幹細胞集団が、48時間培養したとき、少なくとも1のPDを有する;
(c)幹細胞集団が樹状細胞成熟および活性化を抑制できる;
(d)回収率が少なくとも85%である;および
(e)ASC集団が、総細胞数の少なくとも60%、例えば少なくとも70%が5時間培養後接着性であるようなインビトロ細胞接着を有する
組成物である。
ある実施態様において、医薬、例えば、組織再生、免疫抑制のためおよび/または抗炎症剤として使用するためのASC組成物が提供される。
リスクのある患者に、最大1時間、最大2時間または最大3時間以内に注射または点滴により投与し得る。あるいは、CSCC_ASC生成物を解凍し、無菌点滴用溶液で約1200万、1300万、1400万、1500万、1600万、1700万、1800万、1900万または2000万細胞/mLの濃度に希釈し、静脈内または動脈内注射または点滴により投与するか、または直接疾患組織に投与することができる。
ASC生成物の製造
次の方法が使用されている。
間質血管細胞群の単離
吸引脂肪組織を健常ドナーから得る。ドナー適格性は、ドナー問診、質問表および感染性疾患マーカーHIV、B型およびC型肝炎、梅毒およびHTLVの試験に基づき決定する。皮下腹部脂肪の脂肪吸引を局所麻酔下に実施し、各ドナーから約100ml〜300mL吸引脂肪組織を得る。局所麻酔を、その後の脂肪吸引のための2〜4箇所の腹部皮膚に実施する。これらの孔を通して、点滴カニューレ(細針)を、注入液、例えば、麻酔剤および加乳酸緩衝液、重炭酸ナトリウム、アドレナリンおよびリドカインなどの脂肪組織をほぐすための薬剤を維持しながら、導入する。Bodyjet EVO(水流式脂肪吸引)(Human med, Germany)を使用する。吸引脂肪組織をBodyjet吸引カニューレから、無菌採取チャンバーに取り出す。吸引脂肪組織を無菌シリンジで無菌フラスコ/ビンに移す。
約1億SVF細胞を、ASC増殖のためにバイオリアクター(Quantum Cell Expansion System, Terumo, Belgium)に負荷する。Quantumバイオリアクターは、独立型インキュベーターに封入された使い捨て中空糸バイオリアクターからなる機能的に閉鎖されたシステムである。培地および試薬または細胞のための導入口を有する双循環ループから供給する。廃棄物を廃棄物バッグに除去する。
第一継代中間ASCの第二継代増殖への負荷4〜24時間前、新規バイオリアクターを第一継代増殖について記載のとおりプライムおよびコートする。システムに完全培地を負荷し、ガスをシステムに20%O2、5%CO2および残りがN2の予備混合物サプライとして提供する。5000万第一継代ASCを保持する1個のCellSealバイアルを窒素タンクから取り出す。細胞のアンプルを“ジップバッグ”に移し、37℃水浴で解凍する。バイアルの底からのシールを取り出し、アルコールで除菌する。配管の断片を通気孔から切断し、細胞に圧がかかりすぎるのを避ける。10ml シリンジおよび16G注射針で、予め決定した量の細胞(例えば、アンプルの1/4、アンプルの1/2またはアンプル全体)を吸引し、10ml 遠心管に移す。細胞を計数し、生存能をNucleoCounterで決定する。細胞を100ml 完全培地で希釈し、60ml シリンジを使用して細胞入口に移す。増殖および収集を第一継代増殖について記載のとおり実施する。
ASC生成物特徴付け − 細胞表面マーカー
免疫表現型検査を使用して、細胞品質を同定し、第一継代中間生成物および第二継代最終生成物で、実施例1に従い製造したASC生成物の凍結保存前後に実施した。
ASC生成物の特徴付け − 細胞生存能
生成物品質および最終生成物の効果は、ASCの生存能の対象である。従って、生存能は製造方法をとおして重要である。
生存能を、実施例1の製造過程中に数回決定し、SVFの生存能を、最初の増殖のためにバイオリアクターに負荷する前に決定し、第一継代増殖ASCの生存能を収集後ならびに第二継代のために解凍および負荷後に決定し、最終生成物の生存能を収集後ならびに凍結保存および解凍後に決定した。パーセンテージ生存能をNucleoCounter(登録商標)NC-100TMで決定した。NucleoCounterは、DNA結合蛍光色素であるヨウ化プロピジウム(PI)からの蛍光検出を利用するイメージサイトメーターである。
分化アッセイ
増殖添加剤としてStemulateを用い、Quantumバイオリアクターで増殖させた第二継代ASCの骨分化、脂肪細胞分化および軟骨分化能を、製造業者のプロトコルに従い、StemPro分化キット(Gibco, Life Technologies)を使用して決定した。
骨分化について、12ウェルプレート中10,000 ASC/ウェルを骨分化誘導培地(StemPro Adipocyte Differentiation Basal Medium, StemPro Adipocyte Supplement、ペニシリン/ストレプトマイシン)でインキュベートした。脂肪細胞分化について、12ウェルプレート中20,000 ASC/ウェルを、脂肪細胞分化誘導培地(StemPro Adipocyte Differentiation Basal Medium、ペニシリン/ストレプトマイシン)でインキュベートした。軟骨分化について、多数の5μl滴の80,000 ASCを軟骨形成誘導培地(StemPro Osteocyte/Chondrocyte Differentiation Basal Medium, StemPro Chondrogenesis Supplement、ペニシリン/ストレプトマイシン)でインキュベートした。細胞を21日、培地を3〜4日毎に交換しながら誘導した。対照細胞を、サプリメント無添加完全培地でコンフルエントまで培養した。
クリオ保護剤製剤の比較
臨床での解凍時の最終凍結保存生成物におけるASCの生存能および機能は、生成物有効性のために一番重要である。生存能および機能を、種々のクリオ保護剤製剤を用いる凍結保存ASCで決定した。
増殖添加剤の比較
SVFを、3名の健常女性ドナー(年齢32〜47歳;平均年齢40歳)から得た吸引脂肪組織から、実施例1に記載のように得た。SVFを、5%hPLまたは10%FBSを含む4つの異なるGMP遵守培地で培養した。ASC P0、P1およびP5を特徴付けし、分析に使用した。
1. 5%ヒト血小板ライセート(PLTMax, Mill Creek Life Sciences)、10IU ヘパリン
2. 5%ヒト血小板ライセート(Stemulate、hPL-S、Cook General Biotechnology)、10IU ヘパリン
3. 5%ヒト血小板ライセート(Stemulate、hPL-SP、Cook General Biotechnology)
4. 10%ウシ胎児血清(FBS、Gibco, Life Technologies)
バイオリアクターでの手動および自動化増殖の比較
SVFを腹部脂肪から単離し、ペニシリン/ストレプトマイシンおよび血清含有増殖添加剤添加基底培地に懸濁し、T75フラスコ上またはクリオ沈降物で被覆されているQuantumバイオリアクター内に播種した。SVFから継代したASCの培養物を、フラスコからフラスコ、フラスコからバイオリアクターおよびバイオリアクターからバイオリアクターの3段階で実施した。全例で、フローサイトメトリーにより決定する細胞数、生存能および免疫表現型決定に加えて、品質管理を、無菌性、マイコプラズマおよびエンドトキシンを試験することにより実施した。
Quantumバイオリアクターにおける増殖添加剤比較
QuantumバイオリアクターでのASC増殖のための増殖添加剤としてのHPL(Stemulate、hPL-SP、無ヘパリン、Cook General Biotechnology)およびウシ胎児血清(FBS)(Gibco, Life Technologies)の使用を比較した。
最終ASC生成物の免疫抑制性活性
本来虚血性、外傷性または自己免疫性である、何らかの原因の組織損傷中の顕在化は、炎症性細胞の迅速な出現であり、これは再生方法成功の間にゆっくり減少するが、慢性虚血性/外傷性創傷治癒および自己免疫反応中持続する。この浸潤は、単球/マクロファージの最初の、続くリンパ球の蓄積からなる。従って、特に単球/マクロファージ集団に対しASC生成物により発揮される免疫抑制が、再生に有利となるバランスを変えることが予測される。ASC免疫抑制性活性は、同様に同種移植生存およびそれにより多数の再生機構に必須である。
共培養物を、再懸濁し、上清を除去し、ウェルの底を曲がったピペットチップで擦り取ることにより採取した。採取細胞をFACS洗浄緩衝液(1.5%NaN3および1%熱不活性化FBS添加PBS)で2回洗浄した。サンプルをヒトIgG(Sigma)と氷上で15分インキュベートして、Fc受容体を遮断した。使用した一次抗体は、IgG−APC、CD11c−APC、IgG1k−PE、CD40−PE、CD80−PE、CD86−PE(BD Bioscience)およびHLA−DR−FITC(Beckman Coulter)であった。サンプルを抗体と30分氷上でインキュベートし、洗浄し、データをFACS Accuri(BD Bioscience)に収集した。データを、CD11c陽性およびサイズによるDC集団のゲート事象で獲得し、Flowlogicで分析した。平均蛍光強度(MFI)を測定し、陽性対照DCのMFIと比較した。
最終生成物/第二継代ASCの免疫調節性表現型検査
実施例1に従い製造した最終生成物CSCC_ASCの免疫調節性表面マーカーに基づく表現型特徴付けをフローサイトメトリーにより実施した。ASCをTrypleSelectで採取し、洗浄し、濾過し、抗体含有または非含有チューブに分配した。細胞を、表15に示す抗体と、30分、室温でインキュベートした。インキュベーション後、細胞を洗浄し、遠心分離し、フローサイトメトリーのためにPBSに再懸濁した。
LTβR:リンホトキシンベータ受容体
免疫調節性機能的能力;炎症誘発環境への表現型的適応
実施例10に記載する免疫調節性および免疫抑制性表現型が、実際の免疫抑制応答性に合致するか否かを試験すために、実施例1に従い製造した生成物CSCC_ASCからのASCを炎症誘発性サイトカインでインビトロで攻撃し、表現型的変化を試験した。
臨床試験
血行再建選択肢および最大耐容性医薬治療がない慢性虚血性心疾患および心不全、左室EF低下(≦45%)、ニューヨーク心不全(NYHA)クラスII〜IIIを有する、62.5±6.6歳(平均±SD)の10患者を、最終生成物CSCC_ASCで処置している。NOGA MYOSTAR(登録商標)カテーテル(Biological Delivery System, Cordis, Johnson & Johnson, USA)で、実施例1に従い製造した0.3mL CSCC_ASCの約15注射を、梗塞領域境界部において生存可能心筋に注入した。
320多検出器CTスキャナー(Aquilion One, 東芝メディカルシステムズ株式会社, 大田原、日本)を心臓CT走査実施のために使用した。R−R間隔およびマルチセグメント画像再構築をスキャナーソフトウェアで実施した。画像を前向きウィンドウで0.5mmスライス厚および2%間隔で0.25mm漸増で再構築した。
エコーは、胸骨傍断面および心尖部像で心機能および体積を測定した。
b:ウィルコクソンの符号順位検定
ASCの表面接着
ASC集団を規定する固有の特徴は、ASCが接着する能力である。加えて、接着する能力は、ASCが正常細胞機能を維持することを示す多くの性質の第一である。本実施例において、実施例1に記載のとおり製造した生成物CSCC_ASCからのASCが、乾式貯蔵液体窒素容器で−180℃、最大12ヶ月保存された後に接着する能力を試験した。簡単にいうと、実施例1に従い製造した3ドナーからのASCを1ヶ月、3ヶ月、6ヶ月および12ヶ月保存し、解凍し、計数し、5%HPL添加aMEMで100万生存可能細胞/フラスコで5時間、インビトロ培養した。5後、培養物を洗浄し、接着性集団をTrypleSelectで剥離し、計数した。
表面マーカー
実施例1に記載のとおり産生した細胞を、単色フローサイトメトリープロトコルを使用する以外実施例2に記載のとおり特徴付けし、第一継代ASC(8バッチ)および第二継代ASC(14バッチ)について下の表20に示す結果を得た。
Bourin P, et al. Cytotherapy. 2013 June; 15(6): 641-648.
Camilleri et al. Stem Cell Research & Therapy (2016) 7:107
Dominici M, et al. Cytotherapy (2006) Vol. 8, No. 4, 313-317.
Ekblond A. Presentation at the International Congress on Adipose Stem Cell Treatments 2015 (iCAST2015).
Follin B, et al. Cytotherapy. 2015 Aug; 17(8):1104-18).
Gebler A, et al. Trends in Molecular Medicine 18.2 (2012): 128-134.
Jensen SS and Gad M. J Inflamm (Lond) 2010;7:37.
Krampera et al., Cytotherapy, 2013; 15:1054-1061
Mathiasen AB, et al. Am Heart J. 2012 164(3):285-91.
Mathiasen AB, et al. Int J Cardiol. 2013 170(2):246-51.
Qayyum AA, et al. Regen Med. 2012 7(3):421-8.
Wang Y, et al. Nature Immunology 15.11 (2014): 1009-1016.
WO2014/203267A2号(Kaziak Research PVT Ltd.)
WO2006/037649A1号(Cellerix S.L.およびUniversidad Autonoma de Madrid)
WO00/02572A1号(Baust J.G.)
WO2010/064054A1号(Reneuron Ltd.)
Claims (19)
- 少なくとも1×107細胞/mLの濃度でプロテインフリークリオ保護剤中に実質的に均質かつ免疫抑制性の成人脂肪組織由来幹細胞(ASC)集団の懸濁液を含む、組成物。
- ASC集団の少なくとも約80%がCD90、CD73、CD13、CD105、CD29、CD166、CD10、CD140b、CD160、CD204、CD272、CD44、CD49a、CD54、CD9、ガレクチン3、ガレクチン9、HLA−GおよびLTβRを発現し、ASC集団の多くて約15%がCD45、CD19、CD14、CD106、CD31およびCD36を発現する、請求項1に記載の組成物。
- ASC集団において、
少なくとも90%がCD90、CD73、CD13、CD29およびCD166を発現し、多くて5%がCD45、CD19、CD14およびCD31を発現し、多くて10%がCD106を発現し、2〜15%がCD36を発現し、少なくとも10%がCD146を発現し、少なくとも80%がCD105を発現し、多くて40%がCD34を発現する;および/または
少なくとも90%がCD10、CD140b、CD160、CD204、CD272、CD44、CD54、CD9、ガレクチン3、ガレクチン9、HLA−GおよびLTβRを発現し、少なくとも80%がCD49aを発現し、少なくとも60%がCD258およびCD270を発現し、少なくとも5%がCD200を発現し、多くて15%がCD15、CD152、CD163、CD18、CD274、CD39、CD40、CD62L、CD80およびCD86を発現し、多くて30%がCXCR4を発現する、請求項1または2に記載の組成物。 - インターフェロン−ガンマ刺激により、CD274を発現するASC集団のパーセンテージが少なくとも80%に増加し、CD54陽性細胞におけるCD54の発現レベルが少なくとも25倍増加する、請求項1〜3の何れかに記載の組成物。
- 解凍直後、幹細胞集団の少なくとも80%が生存可能細胞であり、幹細胞集団が48時間培養したとき少なくとも1の集団倍加を有する、請求項1〜4の何れかに記載の組成物。
- クリオ保護剤がTrolox(6−ヒドロキシ−2,5,7,8−テトラメチルクロマン−2−カルボン酸)、Na+、K+、Ca2+、Mg2+1Cl−、H2PO4 −、HEPES、ラクトビオン酸、スクロース、マンニトール、グルコース、デキストラン−40、アデノシンおよびグルタチオンおよび約5%〜約15%DMSOを含む、請求項1〜5の何れかに記載の組成物。
- 医薬組成物である、請求項1〜6の何れかに記載の組成物。
- 凍結される、請求項1〜7の何れかに記載の組成物。
- 凍結条件下に保存される複数のバイアルを含み、各バイアルが約5mLの請求項7に記載の組成物を含み、ここで、細胞濃度が約2.0×107〜約2.5×107細胞/mL範囲である、細胞バンク。
- (i)ドナーから採取した吸引脂肪組織の間質血管細胞群(SVF)を、少なくとも一表面が成人幹細胞の接着が促進されるように前処理されているバイオリアクターに添加し;
(ii)バイオリアクターにおいて、接着細胞をヒト血小板ライセートを添加した無血清培養培地においてコンフルエントまで培養し;
(iii)接着細胞を剥離し;
(iv)剥離した細胞を、クリオ保護剤中少なくとも1×106細胞/mLの濃度で凍結させ;
(v)凍結細胞を解凍し、工程(ii)および(iii)および所望により(iv)を少なくとも1回繰り返し、
(vi)剥離した細胞を少なくとも1×107細胞/mLの濃度で凍結させ;そして
(vii)所望により、凍結組成物を解凍する
工程を含む、実質的に均質な成人幹細胞集団を含む組成物を製造する方法。 - a)バイオリアクターの少なくとも一表面タンパク質を、クリオ沈降物を含むまたはそれからなる組成物で前処理し;
b)培養培地が約2%〜約15%ヒト血小板ライセートを含み;
c)クリオ保護剤が約5%〜約15%DMSOおよびTrolox(6−ヒドロキシ−2,5,7,8−テトラメチルクロマン−2−カルボン酸)、Na+、K+、Ca2+、Mg2+1Cl−、H2PO4 −、HEPES、ラクトビオン酸、スクロース、マンニトール、グルコース、デキストラン−40、アデノシンおよびグルタチオンを含み;
d)工程(v)において、凍結細胞を解凍し、工程(ii)および(iii)を1回実施するか;または
e)(a)〜(d)の任意の2以上の組み合わせである、
請求項10に記載の方法。 - 請求項10または11に記載の方法により得たまたは得られる、クリオ保護剤中に実質的に均質な成人幹細胞集団の懸濁液を含む、組成物。
- 医薬として使用するための、請求項1〜8および12の何れかに記載の組成物。
- 組織再生、免疫抑制におよび/または抗炎症剤として使用する、請求項1〜8および12の何れかに記載の組成物。
- 対象における虚血性組織障害、組織機能不全または破壊障害、自己免疫性障害、移植片拒絶および炎症性疾患または障害から選択される疾患または障害の処置または予防に使用するための、請求項1〜8および12の何れかに記載の組成物。
- 疾患または障害が虚血性心疾患、急性心筋梗塞、虚血性脳卒中、重症虚血肢、虚血性創傷、虚血再灌流障害/原発臓器移植機能不全、椎間板修復、非虚血性拡張型心筋症、関節軟骨障害、クローン病、多発性硬化症、I型糖尿病、腎疾患、リウマチ性関節炎、移植臓器の拒絶、II型糖尿病、肺動脈性高血圧および敗血症からなる群から選択される、請求項15に記載の組成物。
- 疾患または障害が虚血性心疾患であり、多くて約5mL中約5×107〜約5×108細胞が心筋内注射により対象に投与される、請求項16に記載の組成物。
- 対象が脂肪組織のドナーではない、請求項15〜17の何れかに使用するための組成物。
- 患者への投与を少なくとも1回繰り返し、所望により脂肪組織が異なるドナーからである、請求項18に記載の組成物。
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CO2020012570A1 (es) | 2020-10-08 | 2022-04-08 | Inst Distrital De Ciencia Biotecnologia E Innovacion En Salud Idcbis | Método de estimulación de células mesenquimales para inducir expresión de factores inmunomoduladores |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002520290A (ja) * | 1998-07-09 | 2002-07-09 | バイオライフ・ソリュージョンズ・インコーポレイテッド | 低温での細胞保存用の溶液におけるアポトーシスレギュレーターの含有 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6492103B1 (en) * | 2000-01-31 | 2002-12-10 | Organ Recovery Systems, Inc. | System for organ and tissue preservation and hypothermic blood substitution |
TW200726474A (en) * | 2005-07-15 | 2007-07-16 | Cognate Therapeutics Inc | The immunophenotype and immunogenicity of human adipose derived cells |
US20090304654A1 (en) * | 2008-04-30 | 2009-12-10 | Regents Of The University Of California | Methods for isolating adipose-derived stem cells and therapeutic use thereof |
JP5726525B2 (ja) * | 2008-06-27 | 2015-06-03 | 株式会社バイオベルデ | 細胞および組織の凍結保存用組成物 |
KR101344719B1 (ko) * | 2011-07-19 | 2013-12-26 | 한국과학기술연구원 | 응력을 가하여 줄기세포를 평활근세포로 분화시키는 방법 및 평활근세포를 함유하는 조직공학용 복합체 |
KR20150084015A (ko) * | 2012-11-08 | 2015-07-21 | 인제네론 인코포레이티드 | 재생 세포의 배양, 보존, 및 투여용 배지 |
CN103074298B (zh) * | 2013-01-04 | 2015-10-21 | 冯文峰 | 一种人脂肪间充质干细胞库及其构建方法 |
WO2014203267A2 (en) * | 2013-06-17 | 2014-12-24 | Kasiak Research Pvt. Ltd. | Method for isolation, purification and industrial scale expansion of human adipose tissue derived mesenchymal stem cells |
CN104357382A (zh) * | 2014-10-08 | 2015-02-18 | 黑龙江天晴干细胞有限公司 | 人脂肪干细胞的获取方法及多级同种异体脂肪干细胞库的构建方法 |
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---|---|---|---|---|
JP2002520290A (ja) * | 1998-07-09 | 2002-07-09 | バイオライフ・ソリュージョンズ・インコーポレイテッド | 低温での細胞保存用の溶液におけるアポトーシスレギュレーターの含有 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
GINIS, I. ET AL.: "Evaluation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells after cryopreservation and hypothermic stor", TISSUE ENGINEERING. PART C, METHODS, vol. 18, no. 6, JPN6020046847, 2012, pages 453 - 463, XP055494599, ISSN: 0004630708, DOI: 10.1089/ten.tec.2011.0395 * |
MIYAGI-SHIOHIRA, C. ET AL.: "Cryopreservation of Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells", CELL MEDICINE, vol. 8, JPN6020046845, 26 August 2015 (2015-08-26), pages 3 - 7, ISSN: 0004630706 * |
OISHI K ET AL.: "Cryopreservation of mouse adipose tissue-derived stem/progenitor cells", CELL TRANSPLANTATION, vol. 17, JPN6020046848, 2008, pages 35 - 41, XP009181656, ISSN: 0004402015, DOI: 10.3727/000000008783906937 * |
YANEZ, R. ET AL.: "Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells have in vivo immunosuppressive properties applicable f", STEM CELLS, vol. 24, no. 11, JPN6020046846, 2006, pages 2582 - 2591, XP002620770, ISSN: 0004630707, DOI: 10.1634/stemcells.2006-0228 * |
YONG, K.W. ET AL.: "Phenotypic and functional characterization of long-term cryopreserved human adipose-derived stem cel", SCIENTIFIC REPORTS, vol. 5, JPN6020046844, 15 April 2015 (2015-04-15), pages 9596, ISSN: 0004630705 * |
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