CN107050456A

CN107050456A - 治疗代谢综合征相关疾病的gaba激动剂和治疗或预防i型糖尿病的gaba组合

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Publication number: CN107050456A
Application number: CN201610831898.6A
Authority: CN
Inventors: D·考夫曼; 田季德
Original assignee: University of California
Current assignee: University of California
Priority date: 2010-09-28
Filing date: 2011-09-28
Publication date: 2017-08-18
Anticipated expiration: 2031-09-28
Also published as: US20200030272A1; US9820955B2; US20160081956A1; US11872200B2; CN107050456B; DK2621282T3; EP3753410A3; CN103228142A; EP2621282A2; EP2621282B1; US10434078B2; WO2012050907A2; US10952980B2; WO2012050907A3; EP3753410A2; EP2621282A4; US20130251671A1; US9089531B2; US20210205248A1; US20180193295A1

Abstract

在某些实施方式中，提供了缓解代谢综合征相关的一种或多种症状或紊乱的治疗或预防方法。在各种实施方式中，所述方法包括给予有此需要的对象缓解所述一种或多种症状有效量的GABA受体激动剂。在某些实施方式中，提供了预防或治疗I型糖尿病和相关病理性状态的方法，所述方法包括联用GABA或GABA激动剂与某些其它化合物(例如，对I型糖尿病具有治疗作用的一种或多种抗原(例如，GAD)和/或抗‑CD3抗体、抗‑CD20抗体、醋酸艾塞那肽和/或胰岛素原治疗剂)。

Description

治疗代谢综合征相关疾病的GABA激动剂和治疗或预防I型糖尿病的GABA组合

本申请是申请日为2011年09月28日、申请号为201180057204.3、发明名称为“治疗代谢综合征相关疾病的GABA激动剂和治疗或预防I型糖尿病的GABA组合”的发明申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求2010年9月28日提交的USSN 61/387,398和2011年1月14日提交的USSN61/433,089的权益和优先权，二者出于所有目的通过引用全文纳入本文。

政府资助的声明

本项工作部分受到国立卫生研究院授予的第DK075070号基金的资助。政府对本发明享有一定权力。

发明背景

I型(糖尿病)，或称胰岛素依赖性糖尿病，已知是在人、大鼠和小鼠中自发产生的(Castao和Eisenbarth(1990)Ann.Rev.Immunol.8:647-679)。主要组织相容性复合物(MHC)II类抗原的某些单倍型相关的I型糖尿病有遗传易感性，所述抗原即是，人中的HLA-DR3、-DR4和-DQ3.2(参见，例如Platz等.(1981)Diabetologia 21:108-115；Todd等.(1987)Nature 329:599-604)；生物选育大鼠(Bio-Breeding(BB)rat)中的RT1u(参见，例如Colle(1990)Clin.Immunol.&Immunopathol.57:1-9；Parfrey等.(1989)Crit.Rev.Immunol.9:45-65)和非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠中的H-2g7(参见，例如Kikutani和Makino刊于Adv.Immunol.(Dixon,F.J.编),第285-323页,纽约,纽约(州).:学术出版社(AcademicPress,Inc.)1992)。I型糖尿病的发病机理涉及渐进的胰岛炎性细胞浸润(即，胰腺炎)，包括专门靶向分泌胰岛素的β-细胞的免疫细胞(参见，例如Bottazzo等.(1985)N.Eng.J.Med.313:353-360；Foulis等.(1991)J.Pathol.165:97-103；Hanenberg等.(1991)Diabetologia 32:126-134)。该病理过程的进展时间并不确定(数月到数年)。

全美有超过150万人罹患胰岛素依赖性糖尿病。1921年之前，患上I型糖尿病的人在确诊后预计活不过1年。由于碳水化合物代谢异常，患病的个体深受慢性高血糖症的临床体征之苦(例如，多饮和多尿、体重快速减轻)。随着胰岛素得到纯化和应用，糖尿病患者的期望寿命极大增加。然而，I型糖尿病是需要终身治疗的慢性疾病，以防止急性发病和降低长期并发症的风险。限制饮食和每日注射胰岛素成为患者的负担，因此会减少(患者的)依从性，并且即使作了治疗，诸如白内障、视网膜病变、青光眼、肾病和循环系统疾病等并发症仍是普遍现象。

代谢综合征是以葡萄糖耐受受损、胰岛素敏感性降低、高血压、高脂血症、肥胖和慢性炎症为特征的一组风险因子。炎症被认为涉及其中，因为许多炎性分子，例如IL-6、TNFα和C-反应蛋白(C-reactive protein)会增加。患有代谢疾病的个体对于心血管疾病、心脏病发作、中风、2型糖尿病(T2D)和非酒精性肝病的风险会更高。

发明概述

在某些实施方式中，提供了缓解代谢综合征相关的一种或多种症状或紊乱的方法。所述方法通常包括给予或促使给予有此需要的哺乳动物缓解所述一种或多种症状有效量的GABA和/或GABA受体激动剂和/或GABA增效剂和/或GABA前药和/或GABA激动剂前药。在某些实施方式中，所述症状或紊乱包括胰岛素抵抗，和/或葡萄糖不耐受，和/或高血压，和/或脂肪肝疾病，和/或巨噬细胞浸润脂肪组织，和/或慢性肾病，和/或肥胖症。

在某些实施方式中，提供了减缓或终止哺乳动物从糖尿病前期征兆(pre-diabetic condition)，或有II型糖尿病风险的哺乳动物从非糖尿病征兆向II型糖尿病发展的方法。所述方法通常包括给予所述哺乳动物减缓或终止哺乳动物从糖尿病前或非糖尿病征兆发展为II型糖尿病有效量的GABA，和/或GABA受体激动剂，和/或GABA增效剂，和/或GABA前药和/或GABA激动剂前药。

还提供了包含GABA，和/或GABA受体激动剂，和/或GABA增效剂，和/或GABA前药和/或GABA激动剂前药受体激动剂的组合物以用于：改善一种或多种代谢综合征相关的症状或紊乱；和/或减缓或终止哺乳动物从糖尿病前期征兆或有II型糖尿病风险的哺乳动物从非糖尿病征兆向II型糖尿病发展。

在某些实施方式中，在任一上述方法和/或组合物中，所述组合物包含GABA和/或给予的组合物是GABA。在某些实施方式中，在任一上述方法和/或组合物中，所述GABA激动剂是GABA_A-特异性激动剂和/或GABA_A优先的和/或GABA_B-特异性的和/或GABA_B优先的激动剂。在某些实施方式中，在任一上述方法和/或组合物中，所述GABA受体激动剂包括选自下组的化合物：硫喷妥钠、硫戊比妥钠、戊巴比妥钠、司可巴比妥、环己烯巴比妥、丁巴比妥、异戊巴比妥、巴比妥、甲基苯巴比妥、苯巴比妥、扑米酮、咪达唑仑、三唑仑、氯甲西泮、氟他唑仑、硝西泮、氟硝西泮、硝甲西泮、地西泮、美达西泮、恶唑仑、普拉西泮、托非索泮、利马扎封、劳拉西泮、替马西泮、奥沙西泮、氟地西泮、氯氮卓、氯恶唑仑、氟托西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、溴西泮、氟西泮、氯卓酸钾、卤噁唑仑、氯氟卓乙酯、夸西泮、氯硝西泮、美沙唑仑、依替唑仑、嗅替唑仑、氯噻西泮、丙泊酚、磷丙泊酚、唑吡坦、佐匹克隆和艾司佐匹克隆。在某些实施方式中，在任一上述方法和/或组合物中，所述GABA受体激动剂包括选自下组的化合物：蝇蕈醇、THIP/加波沙朵、异去甲槟榔次碱、曲酸胺、GABA、高牛磺酸、高亚牛磺酸、反式-氨基环戊烷-3-羧酸、反式-氨基-4-巴豆酸、β-胍基丙酸、高-β-脯氨酸、4-哌啶甲酸、3-((氨基亚氨基甲基)硫)-2-丙烯酸(ZAPA)、咪唑乙酸、和哌啶-4-磺酸(P4S)。在某些实施方式中，所述GABA受体激动剂不是巴比妥类药物，和/或不是苯二氮卓，和/或不是噻吩并二氮杂草，和/或不是二烷基苯酚。在某些实施方式中，所述化合物(活性剂)不是GABA。在某些实施方式中，在任一上述方法和/或组合物中，所述哺乳动物是诊断为肥胖症或前期肥胖症或具有肥胖症风险的哺乳动物。在某些实施方式中，在任一上述方法和/或组合物中，所述哺乳动物是诊断为糖尿病或糖尿病前期的哺乳动物。在某些实施方式中，在任一上述方法和/或组合物中，所述哺乳动物是诊断为患有II型糖尿病或具有II型糖尿病风险的哺乳动物。在某些实施方式中，所述哺乳动物是人或非人哺乳动物。在某些实施方式中，所述化合物不是GABA_B受体的激动剂。在某些实施方式中，所述化合物不是GABA_A受体的激动剂。在某些实施方式中，在任一上述方法和/或组合物中，所述哺乳动物不是诊断患有或具有选自下组的一种或多种病症风险的哺乳动物：睡眠障碍或失眠、CNS紊乱(例如，脊柱痉挛状态中的肌肉松弛)、心血管疾病、哮喘、胃肠动力障碍(例如，肠易激综合征)、用促胃肠动力药和/或止咳剂治疗的对象、治疗呕吐的对象、诊断为患有或具有自身免疫疾病风险(例如，类风湿性关节炎)的对象、诊断为患有或具有神经生理性或神经精神性疾病风险的对象、患有或具有精神病(例如，焦虑症和/或抑郁症)风险的对象、诊断为患有或具有痉挛/肌肉痉挛风险的对象、诊断为患有或具有亨廷顿症和/或帕金森病风险的对象、和/或患有或具有MS风险的对象。

在某些实施方式中，考虑了涉及共同给予GABA和/或GABA激动剂与第二活性剂的组合的方法。在某些实施方式中，提供了延迟哺乳动物中I型糖尿病的发作和/或减缓哺乳动物中I型糖尿病的进展和/或减轻哺乳动物中I型糖尿病的严重程度和/或逆转哺乳动物中I型糖尿病的方法。该方法通常包括共同给予所述哺乳动物第一化合物(或组合物)和第二化合物(或组合物)，所述第一化合物(或组合物)包括GABA、GABA类似物/激动剂、和/或GABA前药和/或GABA激动剂前药；所述第二化合物(或组合物)包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂；其中所述第一化合物和第二化合物的给药量足以延迟所述哺乳动物中I型糖尿病的发作和/或减缓所述哺乳动物中I型糖尿病的进展和/或减轻所述哺乳动物中I型糖尿病的严重程度和/或逆转所述哺乳动物中的I型糖尿病。在某些实施方式中，提供了延迟哺乳动物中高血糖症的发作、和/或减缓哺乳动物中高血糖症的进展、和/或减轻哺乳动物中高血糖症的严重程度、和/或逆转哺乳动物中高血糖症的方法。该方法通常包括共同给予所述哺乳动物第一化合物(或组合物)和第二化合物(或组合物)，所述第一化合物(或组合物)包括GABA、GABA类似物、GABA激动剂、和/或GABA或GABA激动剂前药，所述第二化合物(或组合物)包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂；其中所述第一化合物和第二化合物的给药量足以延迟所述哺乳动物中高血糖症的发作和/或减缓所述哺乳动物中高血糖症的进展和/或减轻所述哺乳动物中高血糖症的严重程度和/或逆转所述哺乳动物中的高血糖症。在某些实施方式中，提供了促进哺乳动物中移植的胰岛细胞存活的方法，所述哺乳动物患有I型糖尿病或具有I型糖尿病风险，并且是所移植胰岛细胞的接受体。该方法通常包括共同给予所述哺乳动物第一化合物(或组合物)和第二化合物(或组合物)，所述第一化合物(或组合物)包括GABA、GABA类似物、GABA激动剂、和/或GABA或GABA激动剂前药，所述第二化合物(或组合物)包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂；其中所述第一化合物(或组合物)和第二化合物(或组合物)的给药量足以促进所述哺乳动物中移植的胰岛细胞存活。

在某些实施方式中，提供了延迟哺乳动物中免疫反应的发作、和/或减缓哺乳动物中免疫反应的进展、和/或减轻哺乳动物中免疫反应的严重程度、和/或抑制哺乳动物中的免疫反应的方法。该方法通常包括共同给予所述哺乳动物第一化合物(或组合物)和第二化合物(或组合物)，所述第一化合物(或组合物)包括GABA、GABA类似物、GABA激动剂、GABA或GABA激动剂前药、和/或GABA增效剂，所述第二化合物(或组合物)包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂；其中所述第一化合物和第二化合物的给药量足以延迟所述哺乳动物中免疫反应的发作、和/或减缓所述哺乳动物中免疫反应的进展、和/或减轻所述哺乳动物中免疫反应的严重程度、和/或抑制所述哺乳动物中的免疫反应。

在某些实施方式中，提供了保护哺乳动物的β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡的方法。该方法通常包括共同给予含有所述β-细胞的哺乳动物第一化合物(或组合物)和第二化合物(或组合物)，所述第一化合物(或组合物)包括GABA、GABA类似物、GABA激动剂、GABA或GABA激动剂前药、和/或GABA增效剂，所述第二化合物(或组合物)包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂；其中所述第一化合物和第二化合物的给药量足以部分或完全保护所述β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡。

在各种实施方式中，提供了化合物的组合以便用于上述(以及下文)的各种情况。因此，在某些实施方式中，提供了第一化合物和第二化合物，所述第一化合物包括GABA、GABA类似物、GABA激动剂、和/或GABA或GABA激动剂前药，所述第二化合物包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂，以便彼此联用以延迟哺乳动物中I型糖尿病的发作、和/或减缓哺乳动物中I型糖尿病的进展、和/或减轻哺乳动物中I型糖尿病的严重程度、和/或逆转哺乳动物中的I型糖尿病；和/或促进哺乳动物中移植的胰岛细胞存活；和/或延迟哺乳动物中高血糖症的发作、和/或减缓哺乳动物中高血糖症的进展、和/或减轻哺乳动物中高血糖症的严重程度、和/或逆转哺乳动物中高血糖症；和/或促进哺乳动物中移植的胰岛细胞存活，所述哺乳动物患有I型糖尿病或具有I型糖尿病风险，并且是所移植胰岛细胞的接受体；和/或延迟哺乳动物中免疫反应的发作、和/或减缓哺乳动物中免疫反应的进展、和/或减轻哺乳动物中免疫反应的严重程度、和/或抑制哺乳动物中的免疫反应；和/或保护哺乳动物的β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡。

(本发明)还提供了具有第一容器和第二容器的试剂盒，所述第一容器装有第一化合物，所述第一化合物包括GABA、和/或GABA类似物、和/或GABA激动剂、和/或GABA或GABA激动剂前药，所述第二容器装有治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂。

此外，提供了“组合”药物制剂。在某些实施方式中，该制剂包含GABA、GABA类似物、GABA激动剂、和/或GABA或GABA激动剂前药；和治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂。

在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，GABA类似物或GABA激动剂是GABA_A受体特异性或优先激动剂。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，GABA类似物或GABA激动剂是GABA_B受体特异性或优先激动剂。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，GABA类似物或GABA激动剂基本上不穿过血脑屏障。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第一化合物是GABA。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第一化合物选自下组：GABA、蝇蕈醇、THIP/加波沙朵、异去甲槟榔次碱、曲酸胺、高牛磺酸、高亚牛磺酸、反式-氨基环戊烷-3-羧酸、反式-氨基-4-巴豆酸、β-胍基丙酸、高-β-脯氨酸、4-哌啶甲酸、3-((氨基亚氨基甲基)硫)-2-丙烯酸(ZAPA)、咪唑乙酸、和哌啶-4-磺酸(P4S)。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第一化合物选自下组：硫喷妥钠、硫戊比妥钠、戊巴比妥钠、司可巴比妥、环己烯巴比妥、丁巴比妥、异戊巴比妥、巴比妥、甲基苯巴比妥、苯巴比妥、扑米酮、咪达唑仑、三唑仑、氯甲西泮、氟他唑仑、硝西泮、氟硝西泮、硝甲西泮、地西泮、美达西泮、恶唑仑、普拉西泮、托非索泮、利马扎封、劳拉西泮、替马西泮、奥沙西泮、氟地西泮、氯氮卓、氯恶唑仑、氟托西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、溴西泮、氟西泮、氯卓酸钾、卤噁唑仑、氯氟卓乙酯、夸西泮、氯硝西泮、美沙唑仑、依替唑仑、嗅替唑仑、氯噻西泮、丙泊酚、磷丙泊酚、唑吡坦、佐匹克隆、和艾司佐匹克隆。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第一化合物不是巴比妥类药物、和/或不是苯二氮卓、和/或不是噻吩并二氮杂草、和/或不是二烷基苯酚。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第一化合物不是GABA。

在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物是β-细胞抗原和/或编码β-细胞抗原的核酸和/或免疫细胞特异性免疫抑制剂。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括一种或多种β-细胞抗原或编码一种或多种所述抗原的核酸，其中所述抗原包括选自下组的抗原：GAD(GAD65)、GAD67、hsp65或其免疫原性片段、胰岛素b-链或其免疫原性片段、HSPp277或其免疫原性片段、胰岛供体细胞的MHC分子或其免疫原性片段、前胰岛素或其免疫原性片段、前胰岛素原或其免疫原性片段、胰岛-特异性葡萄糖6磷酸酶催化亚基-相关蛋白(IGRP)或其免疫原性片段、嗜铬粒蛋白A或其免疫原性片段、胰岛素瘤抗原-2或其免疫原性片段、和ZnT8或其免疫原性片段。在各种实施方式中，所述抗原与佐剂(例如，明矾)组合。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括选自下组的组合物：对I型糖尿病有治疗作用的抗原、抗-CD3抗体、醋酸艾塞那肽(exendin-4)和前胰岛素治疗剂。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括非激活性抗-CD3单克隆抗体。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括hOKT3γ1(Ala-Ala)单克隆抗体或抗-CD3F(ab')₂。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括选自下组的组合物：α-1抗胰蛋白酶(AAT)、康纳单抗(Canakinumab)、迪亚迈得(Diamyd)、易可速林(Exsulin)、LCT、利索茶碱、利妥昔单抗、Xoma 052、DiaPep277、普罗卡美(Prochymal)、雷帕克星(Reparixin)、抗胸腺细胞球蛋白、伊拉利斯(Ilaris，康纳单抗)、捷诺维和普托平、α-抗胰蛋白酶、和阿米维(阿法赛特)。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括刺激调控和/或免疫反应的因子(例如，白介素-2或其类似物、TGFβ或其类似物、IL-10或其类似物、IL-6拮抗剂、IL-23拮抗剂、CD25拮抗剂、抗-IL-6抗体、抗-IL-23抗体和抗-CD25抗体)。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物具有抗炎活性和/或是免疫反应的调节剂。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括选自下组的化合物：抗-CD3抗体、抗-TNF、抗-IFN、融合于Ig的CTLA-4、抗-胸腺细胞球蛋白、抗-CD3抗体(莫罗单抗或奥昔珠单抗)、西罗莫司和霉酚酸酯。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括选自下组的化合物：硫唑嘌呤、霉酚酸、来氟米特、特立氟胺、甲氨蝶呤、FKBP/亲环素/钙神经素、他克莫司、环孢霉素、匹美克莫司、阿贝莫司、古斯利姆、沙利度胺、雷利度胺、西罗莫司、特弗洛利莫司、依维莫司、替西罗莫司、佐他莫司、柏莫司A9和阿那白滞素。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第二化合物包括选自下组的化合物：抗-补体组分5(伊库珠单抗)、抗-TNF(英夫利昔单抗、阿达木单抗、赛妥珠单抗、阿非莫单抗、戈利木单抗、奈瑞莫单抗)、抗-白介素5(美泊利单抗)、抗-免疫球蛋白E(奥马珠单抗)、抗-干扰素(法拉莫单抗)、抗-IL-6(艾西莫单抗)、抗-IL-12和抗-IL-23(乐比珠单抗、优特克单抗)、抗-CD3(莫罗单抗-CD3、奥昔珠单抗、特利珠单抗、维西珠单抗)、抗-CD4(克立昔单抗、凯立昔单抗、扎木单抗)、抗-CD11a(依法利珠单抗)、抗-CD18(厄利珠单抗)、抗-CD20(阿福图珠单抗、利妥昔单抗、奥利珠单抗、帕考珠单抗)、抗-CD23(鲁昔单抗)、抗-CD40(替奈昔单抗、托利珠单抗)、抗-CD62L/L-选择蛋白(阿塞珠单抗)、抗-CD80(加利昔单抗)、抗-CD147/巴斯金(Basigin，加维莫单抗)、抗-CD154(卢利珠单抗)、抗-BLyS(贝利木单抗)、CTLA-4(匹利莫单抗、特利莫单抗)、CAT(柏替木单抗、乐德木单抗、美替木单抗)、抗-整联蛋白(那他珠单抗)、抗-白介素-6受体(托珠单抗)、抗-LFA-1(奥度莫单抗)、抗-IL-2受体/CD25(巴利昔单抗、达利珠单抗、伊诺莫单抗)、抗-T-淋巴细胞(阿佐莫单抗)、阿托木单抗、西利珠单抗、多利昔珠单抗、芳妥珠单抗、干特努单抗、高利昔单抗、马司莫单抗、莫罗木单抗、培克珠单抗、瑞利珠单抗、罗维珠单抗、希普利珠单抗、他利珠单抗、他利莫单抗、伐利昔单抗、维帕莫单抗、抗-胸腺细胞球蛋白、抗-淋巴细胞球蛋白、CTLA-4(阿贝西普、贝拉西普)、TNF抑制剂(依那西普、培那西普)、阿柏西普、阿法赛特和列洛西普。在某些实施方式中，第二化合物对GABA受体(例如，GABA_A受体和/或GABA_B受体，和/或GABA_C受体)没有激动活性。在某些实施方式中，第二化合物对GABA_B受体有激动活性。在某些实施方式中，第二化合物对GABA_B受体有激动活性，其选自下组：巴氯芬、(3-氨基-2(S)-羟丙基)甲基次膦酸(CGP 44532)、3-氨基丙基(甲基)次膦酸(SKF 97541)、和3-氨基丙基膦酸(3-APA)、(3-氨基-2-氟丙基)次膦酸；(2R)-(3-氨基-2-氟丙基)次膦酸；(2S)-(3-氨基-2-氟丙基)次膦酸；(3-氨基-2-氟-1-甲基丙基)次膦酸；(3-氨基-2-氧代丙基)次膦酸；(2S)-(3-氨基-2-羟丙基)次膦酸；(R)-(3-氨基-2-羟丙基)次膦酸；和(3-氨基-1-氟-2-羟丙基)次膦酸。式III的示范性种类包括：(3-氨基-2-氟丙基)亚磺酸、(2S)-(3-氨基-2-氟丙基)亚磺酸、(2R)-(3-氨基-2-氟丙基)亚磺酸、(2S)-(3-氨基-2-羟丙基)亚磺酸、和(2R)-(3-氨基-2-羟丙基)亚磺酸和(3-氨基-2-氧代丙基)亚磺酸。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第一化合物在所述第二化合物之前给予；或者第一化合物在所述第二化合物之后给予。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第一化合物与所述第二化合物同时给予(例如，可将所述第一化合物和所述第二化合物组合在单一制剂中，或简单地基本上同时给予)。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述第一化合物和第二化合物的组合是协同的。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述哺乳动物是人。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述哺乳动物(例如，人)诊断为患有I型糖尿病或确定具有I型糖尿病的风险。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述哺乳动物(例如，人)被诊断为患有高血糖症或确定具有高血糖症的风险。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述哺乳动物(例如，人)含有移植的胰岛细胞。在某些实施方式中，在上述(和下文)各种“组合”方法、化合物、试剂盒或制剂中，所述哺乳动物不是被诊断患有或具有选自下组的一种或多种病症风险的哺乳动物：睡眠障碍或失眠、CNS紊乱(例如，脊柱痉挛状态中的肌肉松弛)、心血管疾病、哮喘、胃肠动力障碍(例如，肠易激综合征)、用促胃肠动力药和/或止咳剂治疗的对象、治疗呕吐的对象、诊断为患有或具有自身免疫疾病风险(例如，类风湿性关节炎)的对象、诊断为患有或具有神经生理性或神经精神性疾病风险的对象、患有或具有精神病(例如，焦虑症和/或抑郁症)风险的对象、诊断为患有或具有痉挛/肌肉痉挛风险的对象、诊断为患有或具有亨廷顿病和/或帕金森病风险的对象、和/或患有或具有MS风险的对象。

定义

本文所用的“受体激动剂”指该受体(例如，GABA受体)的天然配体至其类似物，或类似地“激活”该受体的其它配体，和/或该受体的正变构调节剂。

“GABA_A受体特异性激动剂”指对GABA_A受体具有激动活性，而对GABA_B和/或GABA_C受体基本上无激动活性的物质。“GABA_A受体优先激动剂”指对GABA_A受体的激动活性高于对GABA_B和/或GABA_C受体的物质。在某些实施方式中，采用GABA受体激动剂活性的常规试验测定到，GABAB_A受体优先激动剂对GABA_A受体的活性比对GABA_B和/或GABA_C受体的高至少1.2-倍，更优选至少1.5倍，还要优选至少2倍，最优选至少3-倍、至少5-倍或至少10-倍。

“GABA_B受体特异性激动剂”指对GABA_B受体具有激动活性，而对GABA_A和/或GABA_C受体基本上无激动活性的物质。“GABA_B受体优先激动剂”指对GABA_B受体的激动活性高于对GABA_A和/或GABA_C受体的物质。在某些实施方式中，采用GABA受体激动剂活性的常规试验测定到，GABAB_B受体优先激动剂对GABA_B受体的活性比对GABA_A和/或GABA_C受体的高至少1.2-倍，更优选至少1.5倍，还要优选至少2倍，最优选至少3-倍、至少5-倍或至少10-倍。

本文所用的“给予”指局部和全身性给药，例如，包括经肠、胃肠外、肺部和局部/透皮给药。可用于本文所述方法的化合物(例如GABA、GABA激动剂、β-细胞自身抗原、免疫调节剂、抗炎药，等等)的给药途径包括，例如口服(经口(口))给药、鼻部或吸入给药、作为栓剂给药、局部接触、透皮递送(例如，经透皮贴剂)、鞘内(IT)给药、静脉内(“iv”)给药、腹膜内(“ip”)给药、肌肉内(“im”)给药、病灶内给药或皮下(“sc”)给药，或将缓释装置，例如微型渗透泵、长效制剂等等植入对象。可通过任何途径给药，包括胃肠外和经粘膜(例如，口服、鼻部、经阴道、直肠或透皮)。胃肠外给药包括，例如静脉内、肌肉内、动脉内、真皮内、皮下、腹膜内、心室内、离子电泳作用(ionophoretic)和颅内。其它递送方式包括但不限于利用脂质体制剂、静脉内输注、透皮贴剂，等等。

术语“全身性给药”和“全身性给予”指将化合物或组合物给予哺乳动物的方法，从而所述化合物或组合物经循环系统而递送至体内的部位，包括药学作用的目标部位。全身性给药包括但不限于口服、鼻内、直肠和胃肠外(例如，消化道之外的，如肌肉内、静脉内、动脉内、透皮和皮下)给药。

短语“待给予的事由”指控制和/或允许将所述的一种或多种药剂/化合物给予对象的，由医学专业人员(例如，医师)采取的行为，或该对象的个人控制医疗看护。待给予的事由可包括为对象诊断和/或确定合适的治疗或预防方案，和/或开出一种或多种具体药剂/化合物的处方。此类开处方包括，例如撰写处方、注释医疗记录，等等。

本文所用的术语“治疗的”和“治疗”指延迟该术语所应用的疾病或病症发作，减缓或逆转所述疾病或病症的进展，减轻所述疾病或病症的严重程度，或减轻或预防所述疾病或病症，或此类疾病或病症的一种或多种症状。

术语“缓解”指降低或消除病理性状态或疾病的一种或多种症状，和/或降低速度或延迟病理性状态或疾病的一种或多种症状的发作或严重程度，和/或预防该病理性状态或疾病。在某些实施方式中，降低或消除病理性状态或疾病的一种或多种症状可包括但不限于：降低或消除该病理性状态的一种或多种特征性标志物和/或降低、稳定或逆转一种或多种诊断指标。

本文所用的短语“基本上由…组成”指方法或组合物中述及的活性药学试剂的种属或种类，还可包括就述及的适应症或目的而言，本身不改变或最好不降低实质活性的其它试剂。在一些实施方式中，短语“基本上由…组成”明确表示不包括具有与所述化合物相同或相似活性的一种或多种其它试剂。

术语“对象”、“个体”和“患者”可互换指代哺乳动物，优选人或非人灵长类，但还指家养哺乳动物(例如，犬或猫)，实验室哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、家兔、仓鼠、豚鼠)和农业哺乳动物(例如，马、牛、猪、羊)。在各种实施方式中，所述对象可以是医院中在医师或其它卫生员看护下的人(例如，成年男性、成年女性、男性青少年、女性青少年、男性儿童、女性儿童)，例如门诊患者或其它临床情况。在某些实施方式中，所述对象可以不在医师或其它卫生员看护下或由他们开处方。

肽的“免疫原性片段”指给予哺乳动物时诱导免疫反应的肽片段。免疫原性片段的长度通常大于10个氨基酸、优选大于约15或约20个氨基酸。

当术语“共同给予”或“与…组合给予”或“联合用药”用于指代共同给予第一化合物(例如，GABA或GABA激动剂)和第二化合物(例如，GAD和本文所述的其它第二化合物)时，表明所述第一化合物和所述第二化合物的给药使得在给予它们的生物体内，第一化合物和第二化合物的生物学活性至少有一些时间上的重叠。共同给药可以是同时给药或顺次给药。在顺次给药中，在第一化合物和第二化合物的给药之间甚至可以有一些实质性的延迟(例如，数分钟或甚至数小时)，只要它们的生物学活性重叠。在某些实施方式中，所述共同给药在一定时间框架上进行，从而第一化合物和第二化合物对生物体产生增强的作用(例如，治疗或预防作用)。在某些实施方式中，所述增强的作用是协同作用。

本文所用的术语“抗体”(例如，抗-CD3抗体)指基本上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段编码的一个或多个多肽构成的蛋白质。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、Δ、ε和μ恒定区基因，以及无数的免疫球蛋白可变区基因。轻链分类为κ或λ。重链分类为γ、μ、α、Δ，或ε，进而分别确定了免疫球蛋白种类，IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。

已知典型的免疫球蛋白(抗体)结构单元包括一四聚物。各四聚物由相同的两对多肽链构成，各对具有一个"轻链"(约25kD)和一个"重链"(约50-70kD)。各链的N末端限定出主要负责识别抗原的约100至110或更多氨基酸的可变区。这些术语可变轻链(V_L)和可变重链(V_H)分别指这些轻链和重链。

抗体是完整的免疫球蛋白形式或是用各种肽酶消化产生的若干良好表征的片段形式。因此，例如，胃蛋白酶在绞链区的二硫键下消化抗体，从而产生Fab的二聚体-F(ab)'₂，其本身是通过二硫键结合于V_H-C_H1的轻链。可在温和条件下还原F(ab)'₂以使绞链区的二硫键断裂，从而将(Fab')₂二聚体转换成Fab'单体。Fab'单体实质上是Fab与一部分绞链区(其它抗体片段的更详细描述参见，《基础免疫学》(Fundamental Immunology),W.E.Paul编.,雷文出版社(Raven Press),纽约(1993))。虽然是根据完整抗体的消化定义了各种抗体片段，但技术人员应知道此类Fab’片段可以通过化学方法或采用重组DNA方法从头合成。因此，本文所用的术语抗体还包括通过修饰完整抗体产生的或采用重组DNA方法从头合成的抗体片段。优选的抗体包括单链抗体(以单一多肽链存在的抗体)，更优选单链Fv抗体(sFv或scFv)，其中可变重链和可变轻链结合在一起(直接或通过肽接头)形成连续的多肽。单链Fv抗体是共价连接的V_H-V_L异源二聚体，其可从包含V_H-和V_L-编码序列的核酸表达，所述编码序列可直接连接或通过肽编码接头连接。Huston等,(1988)Proc.Nat.Acad.Sci.USA,85:5879-5883。虽然V_H和V_L彼此连接成单一多肽链，但V_H和V_L结构域是非共价结合。要在丝状噬菌体表面表达的第一个功能抗体分子是单链Fv's(scFv)，然而，其它表达策略也成功了。例如，如果链之一(重链或轻链)融合于g3衣壳蛋白，Fab分子可以展示在噬菌体上，而互补链作为可溶分子输出至周质。可以在同一或不同复制子上编码两条链；关键在于各Fab分子中的两条抗体链经翻译后装配，而二聚体通过其中一条链与，例如g3p相连而掺入噬菌体颗粒(参见，例如美国专利第5733743号)。本领域技术人员已知scFv抗体和许多其它结构，通过化学方法将抗体V区的天然凝聚的轻和重多肽链分开，转化成某种分子，该分子能折叠成基本上类似于抗原结合位点的结构的三维结构(参见，例如美国专利号5,091,513、5,132,405和4,956,778)。特别优选的抗体应包括已在噬菌体上展示的所有抗体(例如，scFv、Fv、Fab和二硫键连接的Fv(Reiter等(1995)Protein Eng.8:1323-1331))。

本文所用的术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体(完全或部分人源化)、动物抗体(例如，衍生自哺乳动物，包括非灵长类动物(例如，牛、猪、骆驼、美洲驼、马、山羊、家兔、绵羊、仓鼠、豚鼠、猫、狗、大鼠、小鼠)，非人灵长类动物(例如，猴，如食蟹猴、黑猩猩等))、重组抗体、嵌合抗体、单链Fvs(scFv)、单链抗体、单域抗体、Fab片段、F(ab')₂片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、化学偶联的Fv(ccFv)和抗独特型(抗-Id)抗体(包括，例如本发明抗体的抗-Id抗体)和以上任一种功能上具有活性的表位结合片段。在某些实施方式中，抗体还包括亲和抗体(affibody)、纳米抗体(nanobody)和一体式抗体(unibody)。在某些具体的实施方式中，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性片段，即，含有抗原结合位点的分子。免疫球蛋白分子可以是任何型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂)或亚类。

附图简述

图1显示了GABA对喂食HFD小鼠的食物摄取的影响。

图2显示了GABA对喂食HFD小鼠的水摄取的影响。

图3显示了GABA改善喂食HFD小鼠的糖耐量。

图4显示了GABA改善喂食HFD(小鼠)的胰岛素敏感性。

图5显示了GABA降低喂食HFD小鼠的空腹血糖水平。

图6显示了空腹体重与GABA治疗HFD(小鼠)的关系。

图7显示了GABA抑制巨噬细胞浸润白色脂肪组织(上图)和GABA治疗显著降低脂肪细胞体积(下图)。

图8A-8D显示了接受胰岛移植后小鼠的血液葡萄糖水平。图8A：无治疗。图8B：接种GAD的小鼠。图8C：给予GABA的小鼠。图8D：给予GABA和GAD的小鼠。

图9A-9C显示了共同给予GAD和GABA对于逆转新发糖尿病NOD小鼠中高血糖症的能力。两次(测定)血液葡萄糖>250mgs/dL后认为小鼠具有糖尿病。基于抗原的治疗，利用GAD，胰岛素B链或HSPp277的单一疗法未逆转新发糖尿病NOD小鼠的高血糖症(数据未显示)。显示的数据是未给予治疗(图9A)、仅给予GABA(6mg/ml，饮用水配制)(图9B)或GABA+GAD/明矾(在第1和14天100μg，皮下)(图9C)的各小鼠的血液葡萄糖水平。小鼠是交错的，因为它们在不同时间自发产生糖尿病，我们变换它们所处的治疗组，我们还将小鼠加入研究并监测它们。

图10A-10D显示GABA能防止氧化应激诱导的β-细胞凋亡。图10A显示水配制的GABA(2mg/ml和6mg/ml均如此)和巴氯芬显著抑制STZ介导的氧化应激诱导凋亡。10B显示每100个胰岛细胞中表达胰岛素的细胞数。图10C显示胰岛总面积中胰岛素+细胞的相对面积。图10D显示胰岛胰岛素染色的强度。

图11显示用GABA和IL-2联合用药对I型糖尿病的作用，以血液葡萄糖水平表示。

详述

在某些实施方式中，提供了治疗和预防代谢综合征的新方法。具体地说，在某些实施方式中，考虑了利用GABA、GABA类似物、GABA受体激动剂、和/或GABA前药、和/或GABA受体激动剂前药、和/或GABA受体增效剂来缓解代谢综合征的一种或多种症状或病理性状态或预防此类症状或病理性状态。

在某些实施方式中，提供了治疗和/或预防I型糖尿病的新方法。具体地说，在某些实施方式中，GABA和/或GABA激动剂与其它药剂(例如，化合物/组合物/药剂，包括治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂，和/或抗炎化合物，和/或刺激调控或免疫反应的因子，和/或GABA_B受体激动剂)的组合用于治疗和/或预防I型糖尿病。在某些实施方式中，可采用这些多组分方法缓解哺乳动物中代谢综合征相关的一种或多种症状或病症，和/或延迟哺乳动物中I型糖尿病的发作，和/或减缓哺乳动物中I型糖尿病的进展，和/或减轻哺乳动物中I型糖尿病的严重程度，和/或逆转哺乳动物中的I型糖尿病；和/或促进哺乳动物中移植的胰岛细胞存活；和/或延迟哺乳动物中高血糖症的发作，和/或减缓哺乳动物中高血糖症的进展，和/或减轻哺乳动物中高血糖症的严重程度，和/或逆转哺乳动物中的高血糖症；和/或促进患有I型糖尿病或具有I型糖尿病风险的哺乳动物中移植的胰岛细胞存活，所述哺乳动物是所移植胰岛细胞的接受体；和/或延迟哺乳动物中免疫反应的发作，和/或减缓哺乳动物中免疫反应的进展，和/或减轻哺乳动物中免疫反应的严重程度，和/或抑制哺乳动物中的免疫反应；和/或保护哺乳动物的β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡。

代谢综合征(例如，II型糖尿病)的治疗和/或预防

代谢综合征是以糖耐量受损、胰岛素敏感性降低、高血压高脂血症、肥胖症和慢性炎症未特征的一组风险因子。炎症被认为涉及其中，因为许多炎性分子，例如IL-6、TNFα和C-反应蛋白会升高。患有代谢疾病的个体对于心血管疾病、心脏病发作、中风、2型糖尿病(T2D)和非酒精性肝病的风险较高。

已证实T细胞表达GABA_A受体，给予GABA能抑制小鼠中自身免疫疾病、1型糖尿病的进展并延迟I型超敏反应。本文显示的数据(参见，例如实施例1)与GABA能下调非自身免疫情况中的炎症相关。在产生肥胖症的小鼠饮食中含有GABA显示能够降低它们的胰岛素抵抗，改善它们的糖耐量，降低免疫细胞(例如，巨噬细胞)浸润它们的脂肪组织，减少脂肪细胞的体积并减轻肥胖。因此，GABA治疗与缓解代谢综合征、心血管疾病和T2D的风险因子有关。不想受到具体理论的束缚，据信，该机制可能包括(但不限于)：1)GABA与免疫细胞上的GABA_A-受体结合，限制它们的炎性反应，或促进它们的抗炎反应，和/或2)GABA与β-细胞上的GABA_B-受体结合并促进它们的健康或复制，和/或3)GABA与脂肪细胞上的GABA受体结合，藉此调节葡萄糖和脂质代谢。

在喂食通常导致体重增加、肥胖症、葡萄糖不耐受、胰岛素抵抗和代谢综合征的“西方饮食”的小鼠中证实，给予GABA能改善糖耐量、提高胰岛素敏感性(即，降低胰岛素抵抗)、降低空腹血糖水平、缓解HFD-诱导的肥胖症(体重)、抑制巨噬细胞浸润白色脂肪组织并显著减小脂肪细胞的体积。

因此，即便两组小鼠的食物和水消耗情况相似，两组之间在糖耐量、胰岛素敏感性、脂肪组织中的炎症和肥胖症方面依然有非常重要的差异。

因此，据信，给予GABA、其它GABA受体激动剂或部分激动剂、或调节细胞表面上的GABA-受体表达或时机的药物是用于治疗或预防代谢综合征和相关高血压、心血管疾病、胰岛素抵抗相关肥胖症、T2D、非酒精性肝病和其它疾病的优秀药剂。

因此，在某些实施方式中，考虑了治疗和/或预防代谢疾病相关的一种或多种症状和/或状况的方法。在各种实施方式中，所述方法包括给予有此需要的对象治疗或预防有效量的GABA、和/或GABA类似物(例如，GABA受体激动剂/配体)、GABA受体激动剂前药、和/或GABA增效剂(例如，GABA_A受体增效剂)。在某些实施方式中，GABA，在某些实施方式中，GABA激动剂是GABA_A受体特异性或GABA_A受体优先激动剂。这些方法为胰岛素抵抗、和/或葡萄糖不耐受、和/或高血压、和/或脂肪肝疾病、和/或降低巨噬细胞浸润脂肪组织，和/或缓解慢性肾病、和/或肥胖症提供治疗或预防方法。

在某些实施方式中，提供了减缓或终止哺乳动物中糖尿病前期状态的进展，或减缓具有II型糖尿病风险的哺乳动物从非糖尿病前期状态向II型糖尿病进展的方法。在某些实施方式中，所述方法包括给予有此需要的对象足以减缓或终止糖尿病前期状态进展或从非糖尿病前期状态向II型糖尿病进展用量的GABA、和/或GABA类似物(例如，GABA_A受体激动剂/配体)、GABA或GABA受体激动剂前药、和/或GABA增效剂(例如，GABA_A受体增效剂)。

治疗和/或预防I型糖尿病的组合疗法

(本发明)还检测了GABA与其它治疗性或潜在治疗性部分的组合对于糖尿病。特别是I型糖尿病和相关的病理性状态的疗效(参见，实施例2-4)。

在一个实施方式中，检验了包含GAD疫苗与GABA的疫苗的用途，测定到该组合疗法具有协同效应。因此，据信，与单一治疗相比，组合使用时各组分剂量较低即可有效，与单用各组分相比，组合给药能提高疗效。因此。在某些实施方式中，提供了治疗和/或预防I型糖尿病的方法。在某些实施方式中，提供了延迟哺乳动物中I型糖尿病的发作，和/或减缓哺乳动物中I型糖尿病的进展，和/或减轻哺乳动物中I型糖尿病的严重程度，和/或逆转哺乳动物中I型糖尿病的方法。该方法通常包括共同给予该哺乳动物第一化合物或组合物和第二化合物或组合物，所述第一化合物或组合物包括GABA、和/或GABA类似物(例如，GABA受体激动剂/配体)、GABA前药或GABA激动剂前药、和/或GABA增效剂(例如，GABA_A受体增效剂)，所述第二化合物或组合物包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂。在某些实施方式中，所述第二化合物或组合物包括治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂，其中所述第一化合物或组合物和所述第二化合物或组合物的给药量足以延迟所述哺乳动物中I型糖尿病的发作，和/或减缓所述哺乳动物中I型糖尿病的进展，和/或减轻所述哺乳动物中I型糖尿病的严重程度，和/或逆转所述哺乳动物中的I型糖尿病。在某些实施方式中，所述治疗I型糖尿病的非(GABA)治疗剂包括免疫细胞特异性或免疫细胞优先的免疫抑制剂和/或方法、β-细胞抗原和/或编码β-细胞抗原的核酸(例如，本文所述的)。

利用胰岛移植模型证明，GABA和GAD疫苗接种单一治疗均对保护糖尿病NOD小鼠中的同系胰岛移植物产生有益作用。具体地说，GAD/佐剂(例如，GAD/明矾)和GABA单一治疗各自显示能延长糖尿病NOD小鼠中同系胰岛移植物存活数周。但一起使用，GABA+GAD/明矾治疗具有明显协同的长期有益作用。糖尿病NOD小鼠中同系胰岛的长期保护作用在某种程度上是显著的，因为没用任何强免疫抑制剂。此外，采用胰岛移植模型，即便与以前公布的组合疗法相比，GABA+GAD/明矾治疗的疗效依然非常有前景。

因此，在某些实施方式中，提供了促进患有I型糖尿病或具有I型糖尿病风险的哺乳动物中移植的胰岛细胞存活的方法，所述哺乳动物是所移植胰岛细胞的接受体，所述方法包括。所述方法一般包括共同给予所述哺乳动物第一化合物或组合物和第二化合物或组合物，所述第一化合物或组合物包括GABA、和/或GABA类似物(例如，GABA受体激动剂/配体)、GABA前药或GABA受体激动剂前药、和/或GABA增效剂(例如，GABA_A受体增效剂)，所述第二化合物或组合物包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂。在某些实施方式中，所述第二化合物或组合物包括治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂(例如，β-细胞抗原和/或编码β-细胞抗原的核酸)。所述第一化合物或组合物和所述第二化合物或组合物的给药量足以促进所述哺乳动物中移植的胰岛细胞存活。在某些实施方式中，所述治疗I型糖尿病的非(GABA)治疗剂包括免疫细胞特异性或免疫细胞优先的免疫抑制剂和/或方法、β-细胞抗原和/或编码β-细胞抗原的核酸(例如，本文所述的)。

(本发明)还证明了GAD+GABA在新发糖尿病小鼠中具有协同作用，能逆转高血糖症。虽然通常相信基于抗原的疗法不能逆转新发糖尿病NOD小鼠中的高血糖症，但我们证明GABA+GAD(例如GAD/明矾)具有协同作用，能有效逆转NOD小鼠中的T1D。GABA+GAD/明矾治疗再次令人印象深刻。因此，在某些实施方式中，提供了治疗和/或预防高血糖症(例如，糖尿病前期或已有的I型糖尿病状态相关的高血糖症)的方法。在某些实施方式中，提供了延迟哺乳动物中高血糖症的发作，和/或减缓哺乳动物中高血糖症的进展，和/或减轻哺乳动物中高血糖症的严重程度，和/或逆转哺乳动物中高血糖症的方法。所述方法一般包括共同给予所述哺乳动物第一化合物或组合物和第二化合物或组合物，所述第一化合物或组合物包括GABA、和/或GABA类似物(例如，GABA受体激动剂/配体)、GABA前药或GABA受体激动剂前药、和/或GABA增效剂(例如，GABA_A受体增效剂)，所述第二化合物或组合物包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂。在某些实施方式中，所述第二化合物或组合物包括治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂。所述第一化合物或组合物和所述第二化合物或组合物的给药量足以延迟所述哺乳动物中高血糖症的发作，和/或减缓哺乳动物中高血糖症的进展，和/或减轻哺乳动物中高血糖症的严重程度，和/或逆转哺乳动物中的高血糖症。在某些实施方式中，所述治疗I型糖尿病的非(GABA)治疗剂包括免疫细胞特异性或免疫细胞优先的免疫抑制剂和/或方法、β-细胞抗原和/或编码β-细胞抗原的核酸(例如，本文所述的)。

此外，(本发明)还证明了GABA和巴氯芬(GABA-B受体激动剂)治疗能保护β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡。我们也在下文示出了该数据。因此，在某些实施方式中，提供了保护β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡的方法，所述方法包括向含有所述β-细胞的哺乳动物进行给药。所述方法一般包括共同给予所述哺乳动物第一化合物或组合物和第二化合物或组合物，所述第一化合物或组合物包括GABA、和/或GABA类似物(例如，GABA受体激动剂/配体)、GABA前药或GABA受体激动剂前药、和/或GABA增效剂(例如，GABA_A受体增效剂)，所述第二化合物或组合物包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂。在某些实施方式中，所述第二化合物或组合物包括对GABA_B受体具有激动活性的化合物(例如，巴氯芬)。所述第一化合物或组合物与所述第二化合物或组合物的给药量足以部分或完全保护所述哺乳动物中β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡。

(本发明)还检测了GABA和GABA激动剂以及免疫系统调节剂的组合。确定此类组合也可用于治疗或预防高血糖症(例如，糖尿病前期或已有的I型糖尿病状态相关的高血糖症)。在某些实施方式中，提供了延迟哺乳动物中高血糖症的发作，和/或减缓哺乳动物中高血糖症的进展，和/或减轻哺乳动物中高血糖症的严重程度，和/或逆转哺乳动物中高血糖症的方法。所述方法一般包括共同给予所述哺乳动物第一化合物或组合物和第二化合物或组合物，所述第一化合物或组合物包括GABA、和/或GABA类似物(例如，GABA受体激动剂/配体)、GABA前药或GABA受体激动剂前药、和/或GABA增效剂(例如，GABA_A受体增效剂)，所述第二化合物或组合物包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂。在某些实施方式中，所述第二化合物或组合物包括刺激调控和/或免疫反应的因子(例如，白介素-2或其类似物，TGFβ或其类似物，IL-10或其类似物，IL-6拮抗剂，IL-23拮抗剂，CD25拮抗剂，抗-IL-6抗体，抗-IL-23抗体，和抗-CD25抗体，等等)。

在某些实施方式中，提供了延迟哺乳动物中免疫反应的发作，和/或减缓哺乳动物中免疫反应的进展，和/或减轻哺乳动物中免疫反应的严重程度，和/或抑制哺乳动物中免疫反应的方法。所述方法一般包括共同给予所述哺乳动物第一化合物或组合物和第一化合物及第二化合物或组合物，所述第一化合物或组合物包括GABA、和/或GABA类似物(例如，GABA受体激动剂/配体)、GABA前药或GABA受体激动剂前药、和/或GABA增效剂(例如，GABA_A受体增效剂)，所述第一化合物包括GABA、GABA类似物、GABA激动剂、GABA或GABA激动剂前药、和/或GABA增效剂，所述第二化合物或组合物包括用于治疗I型糖尿病的非GABA治疗剂、和/或抗炎化合物、和/或刺激调控或免疫反应的因子、和/或GABA_B受体激动剂。在某些实施方式中，所述第二化合物或组合物具有抗炎活性(例如，抗-CD3抗体、抗-TNF、抗-IFN、融合于Ig的CTLA-4、抗-胸腺细胞球蛋白、抗-CD3抗体(莫罗单抗或奥昔珠单抗)、西罗莫司和霉酚酸酯)。

注意到GABA治疗不仅能通过作用于免疫细胞上的GABA-A受体来抑制自身免疫反应，还能通过β-细胞的GABA-B受体促进它们存活。我们还具有GABA能促进Treg反应的基础数据(在体外培养系统中利用IL-2和抗-CD3)。

鉴于这些数据，据信，基于GABA(例如，基于GABA受体激动剂)的疗法具有转化至临床的优秀潜能。GABA治疗不限于和GAD/明矾组合，它还可与基于胰岛素原的疗法、抗-CD3、醋酸艾塞那肽(exendin-4)或其它候选治疗剂组合。由于GABA治疗的多种有益效果及其对人的安全性，组合GABA治疗非常令人感兴趣。

就此而言，应该注意到医药公司投入大量精力开发能穿过血脑屏障来调节CNS神经元上GABA受体的GABA-受体配体，而忽略了不穿过血脑屏障的配体。不想受具体理论的束缚，据信，就调节免疫细胞和β-细胞GABA-受体(例如，本文所述方法中)而不产生CNS影响而言，停留在外围的此类药物是优秀的。

应该注意，在各种实施方式中，本文所述的组合药剂产生协同活性。

GABA和GABA受体激动剂、增效剂和前药

在各种实施方式中，本文所述的方法包括给予哺乳动物(例如，诊断具有一种或多种本文所述病理性状态或具有一种或多种本文所述病理性状态的风险的人)GABA，和/或GABA类似物，和/或GABA受体激动剂(或部分激动剂)，和/或GABA增效剂，和/或GABA前药。在某些实施方式中，所述GABA受体激动剂同时作用于GABA_A和GABA_B受体。在某些实施方式中，所述GABA受体激动剂优先或排他地作用于GABA_A和GABA_B受体。

本领域技术人员熟知GABA受体激动剂。示范性的GABA受体激动剂包括但不限于某些巴比妥类药物(例如，硫喷妥钠、硫戊比妥钠、戊巴比妥钠、司可巴比妥、环己烯巴比妥、丁巴比妥、异戊巴比妥、巴比妥、甲基苯巴比妥、苯巴比妥、扑米酮等)、某些苯二氮卓(例如，咪达唑仑、三唑仑、氯甲西泮、氟他唑仑、硝西泮、氟硝西泮、硝甲西泮、地西泮、美达西泮、恶唑仑、普拉西泮、托非索泮、利马扎封、劳拉西泮、替马西泮、奥沙西泮、氟地西泮、氯氮卓、氯恶唑仑、氟托西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、溴西泮、氟西泮、氯卓酸钾、卤噁唑仑、氯氟卓乙酯、夸西泮、氯硝西泮、美沙唑仑等)、某些噻吩并二氮卓(例如，依替唑仑、嗅替唑仑、氯噻西泮等)、某些二烷基苯酚(例如，丙泊酚、磷丙泊酚，等等)、某些非-苯二氮卓类(例如，唑吡坦、佐匹克隆、艾司佐匹克隆等)，等等。

GABA和某些GABA激动剂穿过血脑屏障(参加，例如表1)，而其它不是如此。据信，任一种均可用于本文所述的方法。

表1.穿过BBB的示范性GABA_A受体激动剂

然而，不想受具体理论的束缚，据信，本文所述的方法利用GABA激动剂对细胞和除大脑以外组织的活性。因此，不要求穿过血脑屏障的能力，该能力可以是不优选的。例如，利用不穿过血脑屏障的化合物可避免许多神经学副作用。因此，在某些优选的实施方式中，考虑了GABA和不穿过血脑屏障的某些GABA激动剂(参见，例如表2).

表2.不有效穿过BBB的示范性GABA_A受体激动剂

除GABA或GABA类似物之外，考虑了利用GABA_A和/或GABA_B受体增效剂(例如，GABA的正变构调节剂)。在某些实施方式中，所述增效剂结合GABA或GABA类似物结合位点以外的位点，但仍具有GABA效应。现已鉴定了增加GABA效应的许多化合物。此类化合物通常主要结合GABA结合位点以外的位点，例如苯二氮卓位点、巴比妥类药物或类固醇结合位点。此类增效剂包括但不限于三唑并哒嗪衍生物(参见，例如WO 99/37649,WO 99/37648和WO 99/37644),吡唑并吡啶衍生物(参见，例如WO 99/48892),烟碱羧酰胺化合物(参见，例如WO99/43661和美国专利第5,723,462号),神经活性类固醇(参见，例如WO 98/05337)，例如雄激素衍生物和孕烷衍生物(参见，例如美国专利第5,925,630号),三唑并酞嗪衍生物(参见，例如WO 99/25353,和WO/98/04560),三环吡唑并哒嗪酮类似物(参见，例如WO 99/00391),和芬那酯类(美国专利第5,637,617号),抗焦虑药苯二氮卓类和/或戊巴比妥钠。

其它GABA类似物(激动剂)包括但不限于以下：

Bryans等(参见，例如PCT公布号:WO 01/90052；英国申请GB 2,362,646；欧洲申请EP 1,178,034等)考虑了加巴喷丁的肽前药衍生物和其它GABA类似物药物。这些申请公开了加巴喷丁衍生物，其中氨基被特定的α-氨基酰基或二肽部分封闭。更具体地说，构成这些肽前药衍生物的α-氨基酸包括20种天然编码的α-氨基酸，加上苯基甘氨酸。

Gallop等(国际申请WO 02/28881,WO 02/28883,WO 02/28411和WO 02/32376)公开了加巴喷丁的前药衍生物和其它GABA类似物药物。其中公开的化合物包括GABA类似物的胆酸偶连物，它们设计这些偶连物通过与回肠胆汁酸转运体互相作用而被主动转运并穿过肠粘膜。这些偶联物还进一步设计成经历肠肝循环，并将母体GABA类似物缓慢释放入全身循环。Gallop等(参见，例如PCT公布WO 02/42414)公开了加巴喷丁的其它前药衍生物和其它GABA类似物药物。其中公开的化合物包括GABA类似物的α-氨基酰基和β-氨基酰基偶连物，它们设计成通过与肠中表达的肽转运蛋白相互作用而被主动吸收穿过肠粘膜。

为用于本文所述方法还考虑了配制成用于口服给药的GABA类似物，如通过引用纳入本文的美国专利公布号2008/0226716所述，其中提供了GABA类似物的前药和GABA类似物的前药的组合物及制备GABA类似物的前药的方法。所述前药包括哺乳动物胃肠道中表达的肽转运蛋白(PEPT1和/或PEPT2)的底物。利用此类制剂最大程度降低治疗需要GABA类似物治疗的患者所需的给药频率。

Yogeeswari等(2006)Recent Patents on CNS Drug Discovery 1:113-119中还描述了许多GABA类似物，其中描述的GABA类似物通过引用纳入本文。

前述的GABA激动剂和前药应是示范性而非限制性的。利用本文提供的教导，本领域技术人员可利用许多其它GABA激动剂。

与GABA、GABA类似物、GABA前药或GABA增效剂联用的第二活性剂

如上所述，考虑了联用GABA、GABA类似物、GABA前药和/或GABA增效剂与第二活性剂的许多组合物、制剂和方法。在各种实施方式中，所述第二活性剂可以是治疗I型糖尿病的非-GABA治疗剂(例如，β-细胞抗原疫苗、免疫细胞特异性免疫抑制剂，等等)，刺激调控和/或免疫反应的因子，具有抗炎活性的化合物，GABA_B受体激动剂或部分激动剂，等等。

β-细胞抗原

在某些实施方式中，第二活性化合物/药剂包括β-细胞抗原(自身抗原)。就此而言，β-细胞抗原提供基于抗原的治疗(antigen-based therapy，ABT)，从而通过诱导调控T-细胞反应(主动耐受)或使病理性T-细胞无应答/消除病理性T-细胞(被动耐受)来防止或抑制自身免疫反应(针对β-细胞)。该方法据信能促进耐受性，而对免疫系统的衰弱作用很小。

认为可用的示范性β-细胞抗原包括但不限于：谷氨酸脱羧酶(GAD)或其免疫原性片段、GAD65同种型(GAD65)或其免疫原性片段、GAD67同种型或其免疫原性片段、hsp65或其免疫原性片段、胰岛素b-链或其免疫原性片段、HSPp277或其免疫原性片段、胰岛供体细胞的MHC分子或其免疫原性片段、胰岛素原或其免疫原性片段、前胰岛素原或其免疫原性片段、胰岛-特异性葡萄糖6磷酸酶催化亚基-相关蛋白(IGRP)或其免疫原性片段、嗜铬粒蛋白A或其免疫原性片段、胰岛素瘤抗原-2或其免疫原性片段、和ZnT8或其免疫原性片段。在各种实施方式中，特别是就给予人而言，可用人形式的β-细胞抗原(或其片段)。

这些β-细胞抗原的氨基酸和核酸序列是熟知的，可在，例如GenBank中找到(参见，例如GAD,登录号:CAA01913.1,GI:1247492；GAD65同种型登录号:AAB28987.1,GI:456803；GAD67同种型登录号:NP_000808.2,GI:58331246；GAD25同种型登录号:NP_038473.2,GI:15451889,等等)。

利用已知的序列，可采用重组表达方法常规表达或化学合成这些抗原。就此而言，应该注意，例如Bu等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,89:2115-2119描述了GAD抗原的克隆和表达。抗原通常与佐剂一起配制和/或给予以增加产生的免疫反应。示范性的佐剂包括但不限于铝盐/基于凝胶(明矾)的佐剂、角鲨烯、QS21、1018免疫刺激序列(ISS)等。可以从各种商业供应商广泛获得佐剂(参见，例如表4)。

表4.示范性的市售可得的疫苗佐剂(来自IG公司(InvivoGen)).

类型/名称	描述
		明矾和乳剂
AddaVax^TM	疫苗佐剂:水包角鲨烯-油
		氢氧化铝凝胶2％	疫苗佐剂:氢氧化铝凝胶
IFA	疫苗佐剂:不完全弗氏佐剂油包水
		PRR配体
鞭毛蛋白FliC	TLR5激动剂–鼠伤寒沙门菌(S.typhimurium)的重组鞭毛蛋白
		加迪莫特(Gardiquimod)	TLR7激动剂–咪唑并喹啉(Imidazoquinoline)化合物
咪喹莫特	TLR7激动剂-咪唑并喹啉化合物
		MPLA VacciGrade^TM	TLR4激动剂–单磷酰脂质A
N-乙醇酰-MDP	NOD2激动剂-N-乙醇酰化胞壁酰二肽
		ODN 1826	TLR9激动剂-CpG ODN,B型(小鼠)
ODN 2006	TLR9激动剂-CpG ODN,B型(人)
		多聚(I:C)	TLR3激动剂–聚肌苷-聚胞苷酸
R848	TLR7/8激动剂-咪唑并喹啉化合物

按照本领域技术人员熟知的标准方法将β-细胞抗原(含或不含佐剂)给予对象。

近年来出现了一种新型免疫方法，广义称为遗传免疫法。在该方法中，将编码感兴趣抗原(例如，β-细胞自身抗原)的基因操作性插入待免疫对象的细胞。转化经处理的细胞，其产生病原体的抗原蛋白。这些体内产生的抗原随后在宿主中触发所需的免疫反应。此类遗传免疫法中利用的遗传材料可以是DNA或RNA构建物。经常将编码抗原的多核苷酸与其它启动子多核苷酸序列组合引入以便增强该基因的插入、复制或表达。

可通过各种表达系统将编码β-细胞抗原的DNA(或RNA)疫苗引入对象的宿主细胞。可通过许多方法递送DNA(或RNA)，所述方法包括但不限于：注射入接受体的组织，口服或肺部给药和通过粒子轰击(即，基因枪)接种。可采用这些方法中的任一种递送核酸(例如，DNA)，只要在细胞中所述核酸得到表达，所需(β-细胞)抗原能够产生。

递送DNA疫苗的一种常规方法是粒子轰击(例如，利用PCT公布WO 95/19799所述的基因枪)。本领域技术人员可采用且知晓其它仪器。该仪器通过高速粒子轰击将DNA包被的金珠直接递送入表皮细胞。

加速粒子基因递送或粒子轰击的技术是基于将待递送入细胞的DNA包被到极小的载体粒子上，相当于想要通过该过程转化的细胞，所述粒子设计成较小的。可在惰性小粒子上简单干燥含有所需基因的DNA序列。粒子可由任何惰性材料制成，例如惰性金属(金、银、铂、钨等)或惰性塑料(聚苯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯等)。粒子优选由金、铂、钨制成。粒子最优选由金制成。粒子宜是球形的，直径在0.5-5微米，优选1-3微米。

可在金或钨裸粒上简单干燥含有所需基因，其形式适于导入基因的DNA序列。然而，此类形式的DNA分子的稳定期较短，可能因与粒子本身的金属或氧化物基材发生化学反应而快速降解。因此，如果先用包封剂包被载体粒子，DNA链的稳定性极大提高，即便在数周的时期内也不会显著降解。合适的包封剂是聚赖氨酸(分子量200,000)，它可以在施加DNA分子之前施加于载体粒子。其它包封剂，聚合物等也可用作类似的包封剂，包括亚精胺。在0.02％聚赖氨酸溶液中清洗金粒子，然后空气干燥或加热干燥该粒子从而将聚赖氨酸施加于粒子，因此粒子得到包被。一旦包被有聚赖氨酸的金属粒子适当干燥后，可将DNA链加载到粒子上。

在某些实施方式中，DNA在粒子上的加载率是每毫克金珠球0.5-30微克DNA。在某些实施方式中，DNA与金(粒子)的优选比例是每毫克金(粒子)0.5-5.0μg DNA。示范性过程首先以γ射线照射(优选约30kGy)乙烯-四氟乙烯共聚物管(tefzel tubing)。将金称重加入微量离心管，加入约0.05M亚精胺(游离碱(free base))并混合，然后加入DNA。将10％CaCl溶液与DNA温育约10分钟以提供精细钙沉淀物。该沉淀物在珠上携带DNA。离心各管，将沉淀团块重悬并用100％乙醇清洗，最终的产品以0.0025mg/ml PVP重悬在100％乙醇中。然后将含DNA的金施加于管上并干燥。

加速粒子基因转染技术的通用方案描述于授予Sanford的美国专利第4,945,050号。基于该方案的改进形式的仪器可从威斯康星州麦迪逊市PJ疫苗公司(PowderJectVaccines,Inc.,Madison Wis.)商品化购得，WO 95/19799中也有描述。上文和下文述及的所有文件通过引用全文纳入本文。简言之，DNA-包被的粒子沉积在塑料管的内表面上，所述塑料管切割成合适的长度以便形成样品柱。将样品柱置于压缩气体的通路中(例如，压力足以将粒子从柱中排出的氦气，例如350-400psi)。颗粒夹带在气流中，以足够的作用力向靶组织递送，以便进入该组织的细胞。

包被的载体颗粒向待转化的细胞物理加速，从而载体颗粒加载在靶细胞内。该技术可在体外或体内与细胞一起使用。已包被在载体颗粒上的DNA在靶细胞中以一定频率表达。该基因表达技术已证明能在原核细胞和真核细胞，细菌和酵母菌到高级植物和动物中起作用。因此，加速粒子方法为将基因递送入各种类型组织的细胞中提供了方便的方法，还能将那些基因原位和体内递送至细胞而不对受治疗的个体产生任何不利影响或作用。

DNA疫苗的给药量通常是每剂约1-5μg DNA，给药量取决于待治疗的对象、对象的免疫系统产生所需免疫反应的能力和所需的保护程度。疫苗的精确给药量取决于实施者的判断，对于各对象和抗原可能是特定的。

可采用单剂量表，优选多剂量表给予疫苗，其中所述多剂量表中疫苗接种的基本过程可以是1-10个独立剂量，然后以维持和/或加强免疫反应所需的后续时间间隔给予其它剂量，例如第二剂在1-4个月，如果需要，数个月后有一个或多个后续剂量。合适的免疫时间表的例子包括：(i)0,1个月和6个月，(ii)0,7天和1个月，(iii)0和1个月，(iv)0和6个月，或者足以引发预计可赋予保护性免疫力、或减少疾病症状、或减轻疾病严重程度的所需免疫反应的其它时间表。

前述方法是示范性而非限制性的。蛋白质疫苗接种的方法和DNA疫苗及其使用方法是本领域技术人员熟知的(参见，例如Robinson和Pertmer(2000)Adv.Virus Res.55:1–74；Alarcon等.(1999)Adv.Parasitol.42:343–410；Tang等.(1992)Nature 356(6365):152–154；等等)。

刺激调控和/或免疫反应的因子或作为免疫细胞特异性免疫抑制剂的因子

在某些实施方式中，第二活性化合物/活性剂包含用于“免疫调控”的一种或多种化合物，即，用于控制不良的免疫反应。在各种实施方式中，用于免疫调控的化合物包括某些免疫抑制剂、免疫刺激剂和耐受原。

在某些实施方式中，用于免疫调控的一种或多种化合物包括抑制基于细胞的免疫反应的药剂(例如，抑制T和/或B细胞)。

在某些实施方式中，用于免疫调控的一种或多种化合物包括但不限于对I型糖尿病有治疗效果的抗原。

在某些实施方式中，用于免疫调控的一种或多种化合物包括但不限于抗-CD3抗体、醋酸艾塞那肽和/或胰岛素原治疗剂。在某些实施方式中，所述抗-CD3抗体包括非激活性抗-CD3单克隆抗体(或其片段)(例如，包含hOKT3γ1(Ala-Ala)单克隆抗体或抗-CD3F(ab')₂)。

在某些实施方式中，用于免疫调控的一种或多种化合物包括但不限于选自下组的一种或多种化合物：α-1抗胰蛋白酶(AAT)、康纳单抗、迪亚迈得(Diamyd)、易可速林(Exsulin)、LCT、利索茶碱、利妥昔单抗、Xoma 052、DiaPep277、普罗卡美(Prochymal)、雷帕克星、抗胸腺细胞球蛋白、伊拉利斯(康纳单抗)、捷诺维和普托平、α-抗胰蛋白酶、和/或阿米维(阿法赛特)。

在某些实施方式中，用于免疫调控的一种或多种化合物包括但不限于选自下组的一种或多种化合物：白介素-2或其类似物、TGFβ或其类似物、IL-10或其类似物、IL-6拮抗剂、IL-23拮抗剂、CD25拮抗剂、抗-IL-6抗体、抗-IL-23抗体和抗-CD25抗体。

在某些实施方式中，用于免疫调控的一种或多种化合物包括但不限于选自下组的一种或多种化合物：抗-CD3抗体、抗-TNF、抗-IFN、融合于Ig的CTLA-4、抗-胸腺细胞球蛋白、抗-CD3抗体(莫罗单抗或奥昔珠单抗)、西罗莫司和霉酚酸酯。

在某些实施方式中，用于免疫调控的一种或多种化合物包括但不限于选自下组的一种或多种化合物：硫唑嘌呤、霉酚酸、来氟米特、特立氟胺、甲氨蝶呤、FKBP/亲环素/钙神经素、他克莫司、环孢霉素、匹美克莫司、阿贝莫司、古斯利姆、沙利度胺、雷利度胺、西罗莫司、特弗洛利莫司、依维莫司、替西罗莫司、佐他莫司、柏莫司A9和阿那白滞素。

在某些实施方式中，用于免疫调控的一种或多种化合物包括但不限于选自下组的一种或多种化合物：抗-补体组分5(伊库珠单抗)、抗-TNF(英夫利昔单抗、阿达木单抗、赛妥珠单抗、阿非莫单抗、戈利木单抗、奈瑞莫单抗)、抗-白介素5(美泊利单抗)、抗-免疫球蛋白E(奥马珠单抗)、抗-干扰素(法拉莫单抗)、抗-IL-6(艾西莫单抗)、抗-IL-12和抗-IL-23(乐比珠单抗、优特克单抗)、抗-CD3(莫罗单抗-CD3、奥昔珠单抗、特利珠单抗、维西珠单抗)、抗-CD4(克立昔单抗、凯立昔单抗、扎木单抗)、抗-CD11a(依法利珠单抗)、抗-CD18(厄利珠单抗)、抗-CD20(阿福图珠单抗、利妥昔单抗、奥利珠单抗、帕考珠单抗)、抗-CD23(鲁昔单抗)、抗-CD40(替奈昔单抗、托利珠单抗)、抗-CD62L/L-选择蛋白(阿塞珠单抗)、抗-CD80(加利昔单抗)、抗-CD147/巴斯金(加维莫单抗)、抗-CD154(卢利珠单抗)、抗-BLyS(贝利木单抗)、CTLA-4(匹利莫单抗、特利莫单抗)、CAT(柏替木单抗、乐德木单抗、美替木单抗)、抗-整联蛋白(那他珠单抗)、抗-白介素-6受体(托珠单抗)、抗-LFA-1(奥度莫单抗)、抗-IL-2受体/CD25(巴利昔单抗、达利珠单抗、伊诺莫单抗)、抗-T-淋巴细胞(阿佐莫单抗)、阿托木单抗、西利珠单抗、多利昔珠单抗、芳妥珠单抗、干特努单抗、高利昔单抗、马司莫单抗、莫罗木单抗、培克珠单抗、瑞利珠单抗、罗维珠单抗、希普利珠单抗、他利珠单抗、他利莫单抗、伐利昔单抗、维帕莫单抗、抗-胸腺细胞球蛋白、抗-淋巴细胞球蛋白、CTLA-4(阿贝西普、贝拉西普)、TNF抑制剂(依那西普、培那西普)、阿柏西普、阿法赛特和列洛西普。

GABA_B受体激动剂或部分激动剂

在某些实施方式中，第二活性化合物/活性剂包含对GABA_B受体具有激动活性的化合物(药剂)。在某些实施方式中，所述GABA_B受体活性是GABA_B受体特异性的。

GABA_B受体激动剂巴氯芬((RS)-4-氨基-3-(4-氯苯基)丁酸)(商品名和)是最多研究的GABA类似物。

已知其它GABA_B受体激动剂，包括，例如(3-氨基-2(S)-羟丙基)甲基次膦酸(CGP44532),3-氨基丙基(甲基)次膦酸(SKF 97541),3-氨基丙基膦酸(3-APA)3-(氨基丙基)甲基次膦酸(参见，例如EP 0356128)和3-氨基丙烷亚膦酸，如美国专利第5,04,826号(EP0181833)描述的。在某些实施方式中，3-氨基丙烷亚膦酸如下式所示或其药学上可接受的盐：

其中，基团R¹、R²和R³之一表示氢、C_1-8烷基、C_3-6-环烷基、未取代或被卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基和/或三氟甲基取代的苯基、或未取代的或被卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基和/或三氟甲基在苯基部分取代的苯基-C_1-4烷基，而另外两个是氢，Q表示式--C(C_1-4烷基)(OR^a)OR^b所示的基团，其中R^a和R^b各自是C_1-4烷基，R^c是C_1-4烷基，Z表示--NH₂。在某些实施方式中，3-氨基丙烷亚膦酸如下式所示：

其中R¹、R²和R³如表5所示。

表5.示范性3-氨基丙烷亚膦酸.

其它合适的GABAB激动剂包括但不限于EP 0399949所述的经取代的氨基烷基膦酸，和EP 0463969(美国专利7,319,095)中式I、II或III所示化合物。后者的某些示范性种类包括(3-氨基-2-氟丙基)次膦酸；(2R)-(3-氨基-2-氟丙基)次膦酸；(2S)-(3-氨基-2-氟丙基)次膦酸；(3-氨基-2-氟-1-甲基丙基)次膦酸；(3-氨基-2-氧代丙基)次膦酸；(2S)-(3-氨基-2-羟丙基)次膦酸；(R)-(3-氨基-2-羟丙基)次膦酸；和(3-氨基-1-氟-2-羟丙基)次膦酸(式I)或(3-氨基-2-氟丙基)亚磺酸、(2S)-(3-氨基-2-氟丙基)亚磺酸、(2R)-(3-氨基-2-氟丙基)亚磺酸、(2S)-(3-氨基-2-羟丙基)亚磺酸、(2R)-(3-氨基-2-羟丙基)亚磺酸和(3-氨基-2-氧代丙基)亚磺酸(式III)。

GABA_B调节剂的化学性质的综述可参见Forest,W.和Mickel,S.J.刊于:《GABA受体》(The GABA Receptors),第271-296页(S.J.Enna和N.G.Bowery编,休玛娜出版社(Humana Press Inc.),托托瓦(Totowa),新泽西州,美国1997)。

这些GABA_B激动剂应是示范性而非限制性的。利用本文提供的教导，本领域技术人员可利用许多其它GABA_B激动剂。

药物制剂

本文所述的活性剂(例如，“第一”活性剂包括GABA、GABA类似物、GABA激动剂、GABA或GABA激动剂前药、和/或GABA增效剂和存在的其它治疗剂(“第二活性剂”))通常以药物组合物的形式给予。在某些实施方式中，所述第一活性剂和第二活性剂分别给予(特别是当需要不同递送方式时)。在某些实施方式中，所述第一活性剂和第二活性剂一起给予，在某些实施方式中，作为组合制剂给予。因此，在各种实施方式中，考虑了包含本文所述任一种或多种“第一活性剂”(第一化合物)和本文所述任一种或多种“第二活性剂”(第二化合物)的组合制剂。

本文所述的各种活性剂可通过各种途径给予，包括但不限于：口服、直肠、皮下、静脉内、肌肉内和鼻内。在某些实施方式中，尤其优选口服给予这些化合物和组合物。此类组合物采用药学领域熟知的方式制备，它们包含至少一种活性化合物。

在各种实施方式中，考虑了如下的药物组合物，其包含第一活性剂作为活性成分(例如，GABA、GABA类似物、GABA激动剂、GABA或GABA激动剂前药、和/或GABA增效剂)。在某些实施方式中，GABA激动剂或前药是GABA_A受体特异性或优先激动剂或前药。在某些实施方式中，组合物包含本文所述的第一活性剂和/或一种或多种第二活性剂。

制备本发明组合物时，可将一种或多种活性成分与赋形剂混合，用赋形剂稀释或包封在此类载体中，可以是胶囊、小袋、纸片或其它容器的形式。当赋形剂用作稀释剂时，其可以是用作一种或多种活性成分的运载体、载体或介质的固体、半固体或液体材料。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉末剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬液、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气溶胶(例如固体或在液体介质中)、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装粉末的形式。

制备制剂时，可能需要先研磨一种或多种活性化合物以提供合适的粒径，再与其它成分组合。如果一种或多种活性化合物是基本上不可溶的，可以将它们，例如研磨至小于200目的粒径。如果一种或多种活性化合物是基本上水溶性的，一般通过研磨调节粒径以便在制剂中提供基本上均一的分布，例如约40目。

合适的赋形剂的例子包括但不限于：乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄原胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、无菌水、糖浆和甲基纤维素。制剂还可包含：润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，例如甲基和丙基羟基苯甲酸酯；甜味剂；和调味剂。采用本领域已知的工艺，可将组合物配制成在给予患者后快速释放、缓释或延迟释放活性成分。

在某些实施方式中，组合物配制成单位剂型，各剂量含有，例如约0.1到约5000mg，更常见约10到约2000mg的一种或多种活性成分。术语“单位剂型”指适合作为用于人对象和其它动物的单位剂量的物理上不连续单位，各单位含有经计算产生所需疗效的预定量的活性材料并与合适的药物赋形剂结合。

在各种实施方式中，一种或多种所述活性化合物(例如，GABA受体激动剂)是在较宽的剂量范围上有效，通常以药学有效量给予。然而，应该知道，化合物的实际给予量由医师根据相关情况决定，包括待治疗的病症，选择的给药途径，实际给予的化合物，各患者的年龄、体重和反应，患者症状的严重程度，等等。

为制备固体组合物，例如片剂，将一种或多种主要活性成分与药物赋形剂混合以形成含有本发明化合物的均匀混合物的固体前制剂组合物(preformulationcomposition)。将这些前制剂组合物描述为均匀的，表示活性处方均匀分散在整个组合物中，从而该组合物不难再分成相等的有效单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊剂。然后该固体前制剂再分成上述类型的单位剂型，其含有，例如0.1mg到约2g的本发明活性成分。

可将片剂或丸剂包衣或配制成复合制剂以提供赋予有利的延长作用的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内部剂量组分和外部剂量组分，后者是在前者上的外壳形式。该两种组分可由肠衣隔开，该层用于防止内部组分在胃中崩解并使得内部组分完整地进入十二指肠或延迟释放。各种材料可用于此类肠衣或包衣，此类材料包括许多高分子酸和高分子酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素等材料的混合物。

本发明的新型组合物可掺入液体形式以便口服给予或通过注射给予，所述液体形式包括水溶液、适当调味的糖浆、水性或油性混悬液和含可食用油，例如棉籽油、芝麻油、椰油或花生油的调味乳剂，以及酏剂和类似的药学运载体。

吸入或吹入的组合物包括但不限于药学上可接受的、水性或有机溶剂或它们的混合物配制的溶液和混悬液，和粉末。液体或固体组合物可含有上述合适的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方式中，所述组合物通过口服或经鼻呼吸途径给予。利用惰性气体可对药学上可接受的溶剂配制的组合物进行喷雾。喷雾溶液可以直接从喷雾装置吸入，或者喷雾装置可以连接于面具式面罩，或间歇式正压呼吸机。可从以适当方式递送制剂的装置给予溶液、混悬液、或粉末组合物，优选口服或经鼻。

在某些实施方式中，可通过持续释放系统，优选口服持续释放系统递送GABA，更优选一种或多种GABA受体激动剂。下文更详细描述了用于口服给药的持续释放剂型。

可利用许多不同剂型实施本文所述的本发明方法，可改进这些剂型以在口服给药后缓释药物或前药。

在一示范性实施方式中，所述剂型包括珠(剂)，其溶解或分散后在延长的数小时期间，优选在至少6小时、更优选至少8小时、最优选至少12小时的时期释放前药。释放前药的珠剂可具有包含前药和药学上可接受的运载体的中心组合物或核心，所述药学上可接受的运载体包括任选的润滑剂、氧化剂和缓冲剂。所述珠剂可以是直径为，例如约1到2mm的医学制品。各珠剂可包含各种剂量的药物或前药，例如，剂量最多约40毫克的药物或前药。在一个实施方式中，所述珠剂由非交联的材料形成，以增强它们从胃肠道排出。可采用释放速度控制聚合物对所述珠剂进行包衣以产生定时释放的特性。

在某些实施方式中，可将定时释放珠剂制造成片剂以便给予治疗有效的药物或前药。可通过直接压缩包覆有以下物质的珠剂以制得骨架片(matrix tablet)：例如将丙烯酸树脂与赋形剂，如羟丙基甲基纤维素掺混。现有技术已经公开了珠剂的制备方法(参见，例如Lu(1994)Int.J.Pharm.,112:117-124；《药物科学》(Pharmaceutical Sciences)Remington,第14版,第1626-1628页(1970)；Fincher(1968)Pharm.Sci.57:1825-1835,等等)，也公开了片剂的制备方法和其它递送模式(参见，例如《药物科学》,Remington,第17版,第90章,第1603-1625页(1985))。

在某些实施方式中，可利用口服持续释放泵(参见Langer,同上；Sefton(1987)CRCCrit Ref Biomed Eng.14:201；Saudek等(1989)N.Engl.J Med.321:574,等等)。

在另一实施方式中，可利用聚合材料(参见"控释的医学应用(MedicalApplications of Controlled Release)"Langer和Wise(编),CRC出版社,Boca Raton,Fla.(1974)；"调控药物的生物利用度(Controlled Drug Bioavailability)"《药物产品设计与性能》(Drug Product Design and Performance),Smolen和Ball(编),Wiley,纽约(1984)；Ranger和Peppas(1983)J Macromol.Sci.Rev.Macromol Chem.23:61；Levy等(1985)Science 228:190；During等.(1989)Ann.Neurol.25:351；Howard等(1989)J.Neurosurg.71:105,等等)。在某些示范性实施方式中，聚合材料可用于口服持续释放递送。合适的聚合物包括但不限于羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟乙基纤维素，最优选羟丙基甲基纤维素，等等。现已描述了其它合适的纤维素醚(参见，例如Alderman(1984)Int.J.Pharm.Tech.&Prod.Mfr.,5(3)1-9)。影响药物释放的因素是技术人员熟知的，本领域已有所描述(参见，例如Bamba等(1979)Int.J.Pharm.,2:307)。

在另一示范性实施方式中，肠包衣的制品可用于口服持续释放给药。合适的包衣材料包括具有pH依赖性溶解度的聚合物(即，pH-控制的释放)、具有缓慢或pH-依赖性溶胀、溶解或侵蚀率的聚合物(即，时间控制的释放)，酶降解的聚合物(即，酶控制释放)和形成随压力增加而破坏的膜层的聚合物(即，压力控制释放)。

在某些实施方式中，药物释放脂质基质可用于口服持续释放给药。一个示范性例子是在药物或前药的固体微粒包衣有控释脂质薄层之时(例如，山嵛酸甘油酯和/或棕榈酰硬脂酸甘油酯)(参见，例如美国专利6,375,987和6,379,700)。脂质包衣的颗粒可任选压缩形成片剂。适合持续释放口服给药的另一种控释脂质基材包括聚乙醇酰化甘油酯(参见，例如美国专利6,171,615)。

在还有另一示范性实施方式中，前药释放蜡可用于口服持续释放给药。合适的持续药物或前药释放蜡的例子见美国专利3,402,240(巴西蜡棕蜡、坎地里拉蜡(candedillawax)、茅草蜡和小冠巴西棕蜡)；美国专利4,820,523(氢化植物油、蜂蜡、巴西蜡棕蜡、石蜡、坎地里拉蜡、地蜡和它们的混合物)；和美国专利4,421,736(石蜡与小脚轮蜡的混合物)。

在还有另一实施方式中，渗透递送系统可用于口服持续释放给药(参见，例如Verma等(2000)Drug Dev.Ind.Pharm.,26:695-708)。在某些实施方式中，加利福尼亚州山景城阿尔扎公司(Alza Corporation,Mountain View,Calif.)制备的OROSa系统可用于口服持续释放递送装置(参见，例如美国专利3,845,770和3,916,899)。

在还有另一实施方式中，可将控释系统置于GABA激动剂前药的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见，例如Goodson,刊于"控释的医学应用"同上,第2卷,第115-138页(1984))。Langer,1990,Science 249:1527-1533中讨论的其它控释系统也可使用。

在某些实施方式中，所述剂型包含包衣在聚合物基材上的GABA_A受体激动剂类似物的前药。聚合物可以是可侵蚀的或非可侵蚀的聚合物。包衣的基材本身可折叠以提供双层聚合物药物剂型。例如，GABA_A受体激动剂的前药可包衣在聚合物上，例如多肽、胶原、明胶、聚乙烯醇、聚原酸酯、聚乙酰基或聚原碳酸酯，包衣的聚合物本身折叠以提供双层剂型。操作时，生物可侵蚀的剂型以受控速度侵蚀，从而在持续释放期分散前药。示范性的生物可降解聚合物包括选自下组的一员：生物可降解的聚(酰胺)、聚(氨基酸)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(碳水化合物)、聚(原酸酯)、聚(原碳酸酯)、聚(乙酰基)、聚(酐)、生物可降解的聚(脱氢吡喃)、和聚二氧六环己烯酮(dioxinones)，它们是本领域熟知的(Rosoff,《药物的控释》(Controlled Release of Drugs),第2章,第53-95页(1989)；和美国专利号3,811,444；3,962,414；4,066,747；4,070,347；4,079,038；和4,093,709)。

在某些实施方式中，剂型包含加载入聚合物的前药，通过聚合物扩散，或通过经孔的流通或通过聚合物基质的破裂来释放前药。药物递送聚合物剂型在聚合物中或聚合物内均匀包含10mg-2500mg的浓度。该剂型在剂量递送开始时包括至少一个暴露表面。如果存在，非暴露表面包衣有前药不可透过的药学上可接受的材料。可通过现有技术中已知的方法制备该剂型。提供剂型的例子包括在较高温度，例如37℃下掺混药学上可接受的运载体，例如聚乙二醇与已知剂量的前药，加入具有交联剂(例如辛酸酯)的硅橡胶医学级弹性体，然后在模具中成形。为各任选的连续层重复该步骤。该体系静置1小时以提供该剂型。制备该剂型的代表性聚合物包括选自下组的一员：烯烃、和乙烯聚合物、加成聚合物、缩合聚合物、碳水化合物聚合物和硅聚合物，例如，聚乙烯、聚丙烯、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸异丁酯、聚藻酸盐、聚酰胺和多晶硅。聚合物及其制备方法在现有技术中已有描述(参见，例如Coleman等.,Polymers 1990,31,1187-1231；Roerdink等.(1989)DrugCarrier Systems,9:57-10；Leong等.(1`987)Adv.Drug Delivery Rev.1:199-233；Roff等.(1971)《普通聚合物手册》(Handbook of Common Polymers),CRC出版社；美国专利第3,992,518号)。

在某些实施方式中，该剂型包括多个微丸。定时释放微丸提供多个单独的剂量，从而能提供各种定时剂量，进而在较长时期内，例如最多24小时上实现持续释放药物或前药递送特征。基质包括亲水性聚合物(例如，多糖、琼脂、琼脂糖、天然树胶、碱性藻酸盐，包括海藻酸钠，卡拉胶、岩藻聚糖硫酸酯、帚叉藻胶、海带多糖、沙菜、阿拉伯胶、茄替胶、梧桐树胶、黄蓍胶、刺槐豆胶、果胶、支链淀粉、明胶)和亲水性胶体。亲水性基质包含多个(例如，4-50或100个)微丸，各微丸包含，例如10ng、0.5mg、1mg、1.2mg、1.4mg、1.6mg、5.0mg等的剂量群体(dose population)。在某些实施方式中，所述微丸包含0.001到最多1.0mm厚度的释放速度-控制壁(release rate-controlling wall)以定时释放药物/前药。示范性的壁成形材料包括但不限于选自下组的甘油三酯：三硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二棕榈酸甘油酯、月桂酸甘油酯、二癸酸甘油酯和三癸酸甘油酯(glyceryl tridenoate)。其它示范性的壁成形材料包括聚乙酸乙烯酯、邻苯二甲酸酯、邻苯二甲酸甲基纤维素酯和微孔烯烃。制备微丸的方法公开于美国专利号4,434,153；4,721,613；4,853,229；2,996,431；3,139,383和4,752,470。

在某些实施方式中，剂型包括渗透剂型，其包含围绕含有药物或前药的治疗组合物的半透壁。用于患者时，包含均匀组合物的所述渗透剂型对跨越所述半透壁的浓度梯度起反应，从而通过所述半透壁将液体吸入所述剂型。该剂型中的治疗组合物产生渗透能，导致在最长24小时的时期中(在一些情况中，甚至可以最长30小时)，治疗组合物经该剂型的出口进行给药，从而能提供受控和持续的前药释放。与立即释放剂型的棘波式曲线相反，这些递送平台能提供基本上零阶递送曲线。

在某些实施方式中，所述剂型包括另一种渗透剂型，其包含围绕隔室的壁，所述壁包含液体可透过而隔室中存在的药物/前药基本上不能透过的半透聚合组合物；隔室中的含前药层组合物；隔室中的水凝胶推动层组合物，包含渗透制剂以便吸取和吸收液体，从而在体积膨胀后推动剂型的前药组合物层；和壁中的至少一个通道以便释放前药组合物。该方法通过经半透壁吸收液体来递送药物/前药，液体吸收速度由该半透壁的渗透性和跨该半透壁的渗透压决定，从而导致推动层膨胀，藉此在较长时期内(例如，最长24，甚至30小时)将剂型中的前药经出口通道递送至患者。在某些实施方式中，所述水凝胶层组合物可包含10mg到1000mg的水凝胶，例如选自1,000,000到8,000,000的聚烯化氧的一员：重均分子量为1,000,000的聚氧化乙烯、分子量为2,000,000的聚氧化乙烯、分子量为4,000,000的聚氧化乙烯、分子量为5,000,000的聚氧化乙烯、分子量为7,000,000的聚氧化乙烯和重均分子量为1,000,000到8,000,000的聚环氧丙烷；或10mg到1000mg重均分子量为10,000到6,000,000的羧甲基纤维素碱金属盐，例如羧甲基纤维素钠或羧甲基纤维素钾。在某些实施方式中，水凝胶膨胀层包含0.0mg到350mg，例如0.1mg到250mg重均分子量为7,500到4,500,00的羟基烷基纤维素(例如，羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丁基纤维素或羟基戊基纤维素)；例如，1mg到50mg的渗透剂(osmagent)，选自：氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾(potassium acid phosphate)、酒石酸、柠檬酸、棉子糖、硫酸镁、氯化镁、脲、肌醇、蔗糖、葡萄糖和山梨醇；0到5mg的着色剂，例如氧化铁；0mg到30mg，在目前的产品中，0.1mg到30mg数均分子量为9,000到225,000的羟丙基烷基纤维素，其选自下组：羟丙基乙基纤维素、羟丙基戊基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟丙基丁基纤维素；0.00到1.5mg的抗氧化剂，其选自下组：抗坏血酸、丁基羟基苯甲醚、丁基化的羟基醌、丁基羟基茴香醚、羟基香豆素、丁基羟基甲苯、赛法姆(cephalm)、没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸月桂酯、羟基苯甲酸丙酯、三羟基丁基苯基酮(trihydroxybutylrophenone)、二甲基苯酚、二丁基苯酚、维生素E、卵磷脂和乙醇胺；和0.0mg到7mg的润滑剂，选自下组：硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸锌、油酸镁、棕榈酸钙、辛二酸钠、月桂酸钾、脂肪酸的盐、脂环酸的盐、芳香酸的盐、硬脂酸、油酸、棕榈酸，脂肪酸、脂环酸或芳香酸的盐和脂肪酸、脂环酸或芳香酸的混合物。

在某些渗透剂型中，半透壁包含对液体可透过而对药物/前药不可透过的组合物。所述壁是无毒的，可包含选自下组的聚合物：丙烯酸纤维素(cellulose acylate)、二丙烯酸纤维素(cellulose diacylate)、三丙烯酸纤维素(cellulose triacylate)、乙酸纤维素、二乙酸纤维素和三乙酸纤维素。在某些实施方式中，所述壁包含75wt％(重量百分比)到100wt％的纤维素壁成形聚合物；或者，所述壁额外包含0.01wt％到80wt％的聚乙二醇，或1wt％到25wt％选自下组的纤维素醚：羟丙基纤维素或羟丙基烷基纤维素，例如羟丙基甲基纤维素。在某些实施方式中，构成所述壁的所有组分的总重量百分比等于100wt％。内部隔室仅包含含有药物/前药的组合物或在分层位置含有可膨胀水凝胶组合物。隔室中的可膨胀水凝胶组合物经半透壁吸收液体，导致水凝胶膨胀并占据隔室的空间，从而使得体积增加，藉此推动剂型中的药物组合物。在该剂型的操作期间，治疗层和可膨胀层可一起起作用以便在一定时期内将前药释放至患者。在某些实施方式中，该剂型在壁中包含连接剂型外部与内部隔室的通道。在某些实施方式中，渗透推动的剂型可以零阶释放速度，在最长约24小时的时期中将药物/前药自该剂型递送至患者。

在某些实施方式中，术语“通道”包括适合计量药物/前药从该剂型的隔室中释放的器件和方法。出口器件可包括至少一个通道，包括喷嘴、孔、缝隙、孔隙、多孔元件、中空纤维、毛细管、管道、多孔盖片或提供药物/前药的渗透控释的多孔元件。所述通道包括在使用的液体环境中侵蚀或浸出以产生至少一个控释尺寸通道的材料。适合形成一个或多个通道的代表性材料包括壁中可浸出的聚乙醇酸或聚乳酸聚合物、胶凝状细丝、聚(乙烯醇)、可浸出多糖、盐和氧化物。从壁中浸出可浸出的化合物，例如山梨醇可用于形成一个或多个孔通道。为从所述剂型计量释放前药，所述通道具有(多种)控释维度，例如圆形、三角形、正方形和椭圆形。所述剂型可在壁的一个或多个表面上构造一定空间间隔的一个或多个通道。术语“液体环境”指，例如人患者，包括胃肠道中的水性或生物液体。美国专利号3,845,770；3,916,899；4,063,064；4,088,864和4,816,263公开了通道和用于形成通道的设备。美国专利号4,200,098和4,285,987公开了通过浸出形成的通道。

无论所用的持续释放口服剂型的具体形式，在某些实施方式中，药物/前药优选在至少约6小时，更优选至少约8小时，最优选至少约1.2小时的时期内从该剂型释放。此外，在某些实施方式中，剂型优选在0至2小时释放0至20％的药物/前药，在2至12小时释放20至50％的前药，在3至20小时释放50至85％的前药和在5至18小时释放大于75％的前药。在某些实施方式中，持续释放口服剂型还在一定时期在患者的血浆中提供一定浓度的，例如GABA_A受体激动剂以及最高浓度Cmax，该曲线的曲线下面积(AUC)与给予的GABA_A受体激动剂前药的剂量成比例。在某些实施方式中，C_max小于给予等剂量的即释型口服剂型的药物/前药所得C_max的75％，优选小于60％，AUC与给予等剂量的即释型口服剂型的前药获得的AUC基本上一样。

在某些实施方式中，所述剂型每天给予两次(更优选一天一次)。

应该注意，尤其是就抗原而言，如上所述，抗原无需在典型疫苗接种制剂中提供。例如，“抗原”可以通过指导蛋白质表达的DNA质粒载体递送。DNA疫苗及其使用方法本领域技术人员熟知的(参见，例如Robinson和Pertmer(2000)Adv.Virus Res.55:1–74；Alarcon等(1999)Adv.Parasitol.42:343–410；Tang等(1992)Nature 356(6365):152–154；等等)。

试剂盒

在另一实施方式中，本发明提供实施本文所述的任何方法的方法。在某些实施方式中，试剂盒包括装有GABA或GABA受体激动剂(一种或多种第一活性剂)的容器，和含有本文所述第二活性剂(例如，GAD或其它β-细胞抗原)的容器。在某些实施方式中，一种或多种活性剂可在一个或多个单位剂量制剂(例如，栓剂、片剂、囊片、贴剂等等)中提供和/或可任选与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合。

此外，所述试剂盒任选包括标记和/或提供说明(即，方案)的指导材料以便实施本发明的方法。某些标记或指导材料描述了利用本文所述的一种或多种活性剂缓解哺乳动物中代谢综合征相关的一种或多种症状或病症，和/或延迟哺乳动物中I型糖尿病的发作，和/或减缓哺乳动物中I型糖尿病的进展，和/或减轻哺乳动物中I型糖尿病的严重程度，和/或逆转哺乳动物中的I型糖尿病；和/或促进哺乳动物中移植的胰岛细胞存活；和/或延迟哺乳动物中高血糖症的发作，和/或减缓哺乳动物中高血糖症的进展，和/或减轻哺乳动物中高血糖症的严重程度，和/或逆转哺乳动物中的高血糖症；和/或促进患有I型糖尿病或具有I型糖尿病风险的哺乳动物中移植的胰岛细胞存活，所述哺乳动物是所移植胰岛细胞的接受体；和/或延迟哺乳动物中免疫反应的发作，和/或减缓哺乳动物中免疫反应的进展，和/或减轻哺乳动物中免疫反应的严重程度，和/或抑制哺乳动物中的免疫反应；和/或保护哺乳动物的β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡。所述标记或指导材料还可任选教导优选的剂量/治疗方案，禁忌症，等等。

虽然指导材料通常包括书面的或打印材料，它们不局限于这些。本发明考虑了能够存储此类说明并将它们传达到终端用户的任何介质。此类介质包括但不限于电子存储介质(例如，磁盘、录音带、盒式磁带、芯片)、光学介质(例如，CD ROM)，等等。此类介质可包括提供此类指导材料的Internet站点的地址。

实施例

提供以下实施例是为了说明，而非限制本发明。

实施例1

肥胖前期哺乳动物中的GABA降低胰岛素抵抗、提高糖耐量并减轻肥胖症

本实施例证明在产生肥胖症的小鼠的饮食中包含GABA降低它们的胰岛素抵抗、改善它们的糖耐量、减少免疫细胞(例如，巨噬细胞)浸润它们的脂肪组织、减小脂肪细胞的体积并减轻肥胖症。因此，GABA治疗与减轻代谢综合征、心血管疾病和T2D的风险因素具有关联性。

给小鼠喂食高脂肪饮食(HFD)或“西方饮食”使得它们体重增加、变得肥胖、产生糖耐量差、胰岛素抵抗和代谢综合征。为小鼠提供普通水，或含有GABA(6mg/ml)的水。在5个月的时间上监测小鼠的体重、食物摄取、水摄取、葡萄糖耐受、胰岛素敏感性和血糖水平。

观察到实验组和对照组的食物和水的消耗量没有差异(图1和2)。然而，还发现：

1)GABA改善HFD-喂食小鼠的糖耐量(图3)；

2)GABA改善HFD-喂食小鼠的胰岛素敏感性(图4)；

3)GABA减轻HFD-喂食小鼠的空腹血糖水平(图5)；

4)GABA减轻HFD-诱导的肥胖症(体重)(图6)；

5)GABA抑制巨噬细胞浸润白色脂肪组织(图7，上图)；和

6)GABA治疗显著降低脂肪细胞的体积(图7，下图)。

实施例2

GAD/明矾+GABA组合治疗在维持糖尿病NOD小鼠中同系胰岛移植物存活的协同作用

高血糖症发作后(连续两天血糖>300mg/dL)，用GAD/明矾免疫或不免疫小鼠并给予含或不含GABA的饮用水，共28天。视需要给予小鼠胰岛素。28天后，小鼠在它们的肾包膜(kidney capsule)下接受NOD.scid胰岛，并停止胰岛素治疗。显示的数据是移植后各小鼠的血糖水平(图8A-8D)。小鼠是交错的，因为它们在不同时间自发产生糖尿病，我们变换它们所处的治疗组，我们还将(新的)小鼠加入研究并监测它们。虚线标出的血糖为250mg/dL。

如预期的那样，未经治疗的移植物接受体在接受移植物后约1周再次出现糖尿病。给予GAD/明矾单一治疗的小鼠在接受移植物后约3周再次出现糖尿病。仅仅给予GABA的小鼠在接受胰岛后约3周再次出现糖尿病。重要的是，给予GAD/明矾+GABA的所有小鼠在10周观察期中维持血糖正常。以前在糖尿病NOD小鼠中，利用相同的同系胰岛移植模型研究组合EGF+促胃液素，观察到高血糖症复发的中值时间是约8周(Suarez-Pinzon和Rabinovitch(2008)Transplant Proc.,40:529-532)。所有GAD+GABA-治疗的胰岛接受体维持血糖正常(的时间)长于该值。

实施例3

GAD+GABA逆转新发糖尿病NOD小鼠中的高血糖症

单用基于抗原的治疗(利用GAD、胰岛素B-链或HSPp277)不能逆转新发糖尿病NOD小鼠的高血糖症。基于GAD+GABA治疗延长胰岛移植物存活的能力，我们检验了该治疗是否能逆转新发糖尿病NOD小鼠的高血糖症。我们还在这些研究中加入新的小鼠，但方式是清楚的。GABA单一治疗延长中等高血糖症状态的时间较短，然后小鼠进展为严重的高血糖症。相反，给予GAD+GABA的所有小鼠中高血糖症均逆转(图9A-9C)。因此，ABT与GABA的组合具有明显的协同作用。即使与以下所述利用远为强大的免疫调节剂的组合治疗相比，GAD+GABA治疗的效力依然非常有前景：例如抗-CD3在约37％-80％的新发糖尿病NOD小鼠中逆转T1D(Sherry等(2007)Endocrinology,148:5136-5144；Chatenoud等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,91:123-127；Turvey等(2005)J.Clin.Invest.,115:2454-2461)，组合的抗-CD3+醋酸艾塞那肽在40到70天的观察期具有44％的消退率(Sherry等(2007)Endocrinology,148:5136-5144)，抗-淋巴细胞血清(ALG)在200天的观察期，在57％的治疗小鼠中逆转高血糖症(Maki等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,89:3434-3438)，ALG+GCSF在180天的观察期，在75％的小鼠中逆转T1D(Parker等(2009)Diabetes,58:2277-2284)和IL-2在56天的观察期，在60％的小鼠中逆转T1D(Grinberg-Bleyer等(2010)J.Exp.Med.,207:1871-1878)。因此，GAD+GABA具有协同作用和强大的疗效。

实施例4

GABA能防止氧化应激诱导的β-细胞凋亡

C57Bl/6小鼠接受中等剂量的STZ，然后给予空白水(对照)，水+GABA，或水+巴氯芬(GABA_B-R激动剂)。48小时后，取出它们的胰脏，切片用TUNNEL和抗-胰岛素共染色。

图10A显示水配制的GABA(2mg/ml和6mg/ml均如此)和巴氯芬显著抑制STZ介导的氧化-应激-诱导的凋亡。*P<0.05,#P<0.01.N＝4只小鼠/组，每组分析至少100个胰岛。

图10B显示了每100各胰岛细胞中表达胰岛素的细胞数。该数据表明调节GABA-R受体能保持胰岛中产胰岛素的细胞。

图10C显示了相比于胰岛总面积的胰岛素+细胞相对面积。该数据再次显示GABA治疗能保留产生胰岛素的β-细胞的面积。巴氯芬治疗也能导致更大的β-细胞面积，但未达到统计学显著的水平。

图10D显示胰岛胰岛素染色的强度中各组之间相似，这是未预料到的。这意味着经历STZ处理仍存活的β-细胞表达胰岛素的程度相似，而无论是否存在GABA治疗。因此，GABA的主要作用看来是保护β-细胞免于凋亡。

我们的结论是，调节β-细胞GABA–R能保护它们免遭氧化应激诱导的β-细胞凋亡，从而中GABA-治疗小鼠中保持表达胰岛素的β-细胞。

实施例5

与GABA联合用药能增强IL-2逆转T1D的能力

用IL-2治疗已显示具有逆转新发糖尿病NOD小鼠的高血糖症的中等能力。现在，我们有数据显示给予IL-2与GABA能增强其疗效，能更有效逆转高血糖症。在图11中，用IL-2治疗的3只新发糖尿病NOD小鼠中仅有1只变得血糖正常(血糖低于250mg/dl)(各小鼠由黑色标志表示)。相反，用IL-2+GABA治疗的2只新发糖尿病NOD小鼠中有2只变得血糖正常(空心标志)。

应该理解本文描述的实施例和实施方式仅是为说明目的，鉴于它们，本领域技术人员有提示作出各种改进或改变，这些改进或改变应包括中本申请的构思和权限以及随附权利要求的范围内。本文述及的所有出版物、专利和专利申请出于所有的目的通过引用全文纳入本文。

Claims

1.GABA或GABA激动剂在制备与第二化合物联用的药物中的应用，

所述第二化合物选自下组：前胰岛素原或其免疫原性片段、谷氨酸脱羧酶(GAD)、白介素-2(IL-2)、巴氯芬和抗-CD3；

所述药物用于：

延迟哺乳动物中I型糖尿病的发作、和/或减缓所述哺乳动物中I型糖尿病的进展、和/或减轻所述哺乳动物中I型糖尿病的严重程度；和/或

延迟高血糖症的发作、和/或减缓高血糖症的进展、和/或减轻高血糖症的严重程度；和/或

促进哺乳动物中移植的胰岛细胞存活，所述哺乳动物患有I型糖尿病或具有I型糖尿病风险，并且是所移植胰岛细胞的接受体；和/或

保护哺乳动物的β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第二化合物与所述GABA或GABA激动剂在所述药物中组合。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述GABA或GABA激动剂和所述第二化合物协同起作用。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述GABA或GABA激动剂是GABA。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第二化合物是前胰岛素原或其免疫原性片段。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述第二化合物是前胰岛素原。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述第二化合物是前胰岛素。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第二化合物是谷氨酸脱羧酶(GAD)。

9.如权利要求1-8中任一项所述的应用，其特征在于，所述GABA或GABA激动剂和所述第二化合物协同起作用以延迟哺乳动物中I型糖尿病的发作、和/或减缓所述哺乳动物中I型糖尿病的进展、和/或减轻所述哺乳动物中I型糖尿病的严重程度。

10.如权利要求1-8中任一项所述的应用，其特征在于，所述GABA或GABA激动剂和所述第二化合物协同起作用以延迟高血糖症的发作、和/或减缓高血糖症的进展、和/或减轻高血糖症的严重程度。

11.如权利要求1-8中任一项所述的应用，其特征在于，所述GABA或GABA激动剂和所述第二化合物协同起作用以促进哺乳动物中移植的胰岛细胞存活，所述哺乳动物患有I型糖尿病或具有I型糖尿病风险，并且是所移植胰岛细胞的接受体。

12.如权利要求1-8中任一项所述的应用，其特征在于，所述GABA或GABA激动剂和所述第二化合物协同起作用以保护哺乳动物的β-细胞免于氧化应激诱导的凋亡。