CN107001386A - 用于治疗感染性疾病的化合物 - Google Patents

用于治疗感染性疾病的化合物 Download PDF

Info

Publication number
CN107001386A
CN107001386A CN201580053147.XA CN201580053147A CN107001386A CN 107001386 A CN107001386 A CN 107001386A CN 201580053147 A CN201580053147 A CN 201580053147A CN 107001386 A CN107001386 A CN 107001386A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino
oxathiolane
compound
bases
hydrogen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201580053147.XA
Other languages
English (en)
Inventor
冯松
刘海侠
吴国龙
贠红英
陈冬冬
李超
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of CN107001386A publication Critical patent/CN107001386A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Abstract

本发明涉及式(I)的化合物及其前药或其可药用盐、对映体或非对映体，以及包含所述化合物的组合物和该化合物的应用方法，其中R1、R2、R3、R4、R5和R6如本文中所述。

Description

用于治疗感染性疾病的化合物
本发明涉及具有Toll-样受体激动活性的新的3-取代的5-氨基-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮化合物及其前药、以及它们的制备方法、包含它们的药物组合物及其作为药物的潜在用途。
发明背景
Toll样受体(TLR)是一类进化上保守的模式识别受体(PRR)，其由多种类型的细胞、尤其是那些先天免疫系统的细胞如树突状细胞和单核细胞表达。先天免疫系统能够通过这些表达于某些类型的免疫细胞的细胞表面的TLR识别病原相关分子模式(PAMP)。对外来病原体的识别激活了细胞因子的生产和吞噬细胞上共刺激分子的上调。这导致T细胞调节和B细胞的行为(D.J Connolly和L.AJ O’Neill,Current Opinion in Pharmacology2012,12:510–518)。
Toll样受体7(TLR7)是该类受体中的一员，其主要见于浆细胞样树突状细胞(pDC)的内涵体内，所述细胞是干扰素-α(IFN-α)的主要来源。该受体也在B细胞中以显着水平表达。TLR7的天然配体是单链RNA，特别是病毒来源的单链RNA。在ssRNA与TLR7结合后，据信二聚体形式的受体发生结构变化，导致随后衔接蛋白(包括MyD88)募集在胞桨区并引发受体信号转导级联。这种改变导致细胞质中的转录因子(包括IRF-7和NF-κB)的激活，这些因子易位到细胞核并启动多种基因如IFN-α和其它抗病毒细胞因子基因的转录。浆细胞样树突状细胞的反应性改变可能与慢性病毒感染过程中天然免疫应答的下降有关。激动剂诱导的TLR7活化由此可能代表用于治疗慢性病毒感染的新方法(P.A.Roethle等人,J.Med.Chem.2013,56,7324-7333)。
TLR7的激动剂通过内源性干扰素和其它抗病毒细胞因子的产生以及通过诱导抗病毒免疫反应介导针对各种病毒的抗病毒活性。聚乙二醇化IFN-α(PEG-IFN-α)目前被用于治疗慢性HBV并且是潜在需要终生使用抗病毒核苷(酸)类似物治疗的可替代选择。在一小组慢性HBV患者中，PEG-IFN-α疗法可以在有限的治疗过程后诱导对病毒的持续性免疫控制。然而，使用干扰素疗法实现血清转化的HBV患者的百分比较低(对于HBeAg-阳性患者最高为27％)，且该治疗通常耐受性差。此外，功能性治愈(定义为HBsAg消失和血清转化)在使用PEG-IFN-α和核苷(酸)治疗时也是极不常见的。由于这些局限性，对于治疗和诱导慢性HBV功能性治愈的改良的治疗选择存在迫切需求。使用口服的小分子TLR7激动剂进行治疗是一种富有前景的方法，其有可能提供更高的效能和耐受性(T.Asselah等人,Clin LiverDis 2007,11,839-849)。
几种被确定的TLR7激动剂已显示出抗病毒特性。例如，TLR7激动剂咪喹莫特(ALDARATM)已被美国FDA批准为用于治疗由人乳头瘤病毒的某些毒株导致的皮肤损伤的局部治疗剂。正在对TLR7/8激动剂雷西莫特(R-848)作为用于治疗人生殖器疱疹的局部治疗剂进行评估。TLR7激动剂852A在癌症患者的I期临床试验中前景光明。该化合物还完成了用于治疗化疗顽固性转移性黑素瘤的II期临床试验。另一种化合物ANA773是一种口服的前药TLR7激动剂，研发它是为了治疗患有慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染和癌症的患者(A.X.Xiang等人,Nucleosides,Nucleotides,and Nucleic Acids,26:635–640,2007)。GS-9620是一种口服有效的TLR7激动剂。Ib期研究证实，使用GS-9620治疗是安全的、良好耐受的并且可在患有慢性乙型肝炎的患者中导致显著的剂量依赖性ISG15mRNA诱导(E.J.Gane等人,Annu Meet Am Assoc Study Liver Dis(11月1-5日,Washington,D.C.)2013,摘要946)。因此，对于研发高效和安全的TLR7激动剂作为新的HBV治疗方法以提供更多的治疗方案或替代现存的部分有效的治疗手段存在着远未满足的临床需求。
发明领域
本发明提供了一系列新的具有Toll-样受体激动活性的3-取代的5-氨基-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮化合物及其前药。本发明还提供了这类化合物通过活化Toll-样受体、例如TLR7受体来诱导SEAP水平增加的生物活性、前药在食蟹猴肝细胞和人肝细胞的存在下向母体化合物的代谢转化，以及这类化合物和包含这些化合物及其前药的药物组合物在治疗或预防感染性疾病如HBV或HCV或与Toll-样受体调节、例如TLR7受体有关的病症中的治疗或预防用途。
本发明涉及式(I)的化合物
和式(Ia)的前药，
其中R1至R11如下所述，或其可药用盐、对映体或非对映体。
发明概述
本发明涉及式(I)的新化合物，
其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、C2-6链烯基和C1-6烷基；
R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基C2-6
炔基、C2-6链烯基、C2-6炔基和2-噻吩基；
R6是氢或C1-6烷基羰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
本发明还涉及式(Ia)的前药，
其中
R7和R8是氢；
R9和R10彼此独立地选自氢、C2-6炔基和C3-7环烷基；
R11是氢或C1-6烷基羰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
本发明还涉及它们的制备方法、基于本发明化合物的药物及其生产方法以及式(I)化合物或其前药作为TLR7激动剂的用途。因此，式(I)化合物或式(Ia)的前药可用于利用Toll-样受体激动作用来治疗或预防HBV和/或HCV感染。
发明详述
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属技术领域普通技术人员通常所理解的含义。此外，列出下列定义是为了示例和定义用于描述本发明的各种术语的含义和范围。
定义
本文所用的术语“C1-6烷基”表示包含1-6个、特别是1-4个碳原子的饱和直链或支链烷基基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。具体的“C1-6烷基”基团是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基和异丁基。
术语“C2-6链烯基”表示包含2-6个、特别是2-4个碳原子的不饱和直链或支链链烯基基团，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基等。具体的“C2-6链烯基”基团是烯丙基。
术语“C2-6炔基”表示包含2-6个、特别是2-4个碳原子的不饱和直链或支链炔基基团，例如乙炔基、1-丙炔基、炔丙基、丁炔基等。具体的“C2-6炔基”基团是乙炔基、1-丙炔基和炔丙基。
单独的或在组合中的术语“C3-7环烷基”表示包含3-7个碳原子、特别是3-6个碳原子的饱和碳环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。具体的“C3-7环烷基”基团是环丙基、环丁基和环己基。
术语“C3-7环烷基炔基”表示被C3-7环烷基取代的炔基，其中的“C3-7环烷基”如上所定义。具体的“C3-7环烷基炔基”基团是2-环丙基乙炔基。
单独的或在组合中的术语“羰基”表示基团-C(O)-。
术语“C1-6烷基羰基”是指基团C1-6烷基-C(O)-，其中“C1-6烷基”如上所定义。具体的“C1-6烷基羰基”基团是乙酰基。
术语“对映体”表示彼此为不能重叠的镜像的化合物的两种立体异构体。
术语“非对映体”表示具有两个或多个手性中心且其分子彼此不为镜像的立体异构体。非对映体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。
术语“可药用盐”表示不在生物学或其它方面不期望的盐。可药用盐包括酸和碱加成盐。
术语“可药用酸加成盐”表示与无机酸和有机酸形成的那些可药用盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸，所述有机酸选自脂族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和有机磺酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。
术语“可药用碱加成盐”表示与有机碱或无机碱形成的那些可药用盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自可药用有机无毒碱的盐包括如下的盐：伯、仲和叔胺类；取代的胺类，包括天然存在的取代的胺类、环胺类和碱性离子交换树脂，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺(trimethamine)、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤类、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和聚胺树脂。
包含一个或多个手性中心的通式(I)的化合物及其前药可以以外消旋体、非对映体混合物或光学活性的单一异构体的形式存在。可以根据已知方法将外消旋体分离成对映体。具体地讲，通过与光学活性的酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应从外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映体盐。
本发明的化合物可以表现出互变异构现象。尽管结构式图不能明确地描绘出所有可能的互变异构体形式，但是应当理解，它们旨在表示所描绘的化合物的任意互变异构体形式，而不仅限于由结构式图所描绘的具体化合物。例如，对于式(II)应当理解，无论是否以其烯醇或其酮基的形式显示其取代基，它们都表示相同的化合物(如下实例中所示)。
Rx是指任意可行的取代基。
某些本发明的化合物可以作为单一立体异构体(即基本上不含其它立体异构体)、外消旋体和/或对映体和/或非对映体的混合物存在。所有这些单一立体异构体、外消旋体及其混合物都在本发明的范围内。优选地，旋光性的本发明化合物以光学纯的形式使用。正如本领域技术人员通常所理解的，具有一个手性中心(即一个不对称碳原子)的光学纯的化合物是基本上由两个可能的对映体之一组成的化合物(即，是对映体纯的)，具有一个以上手性中心的光学纯的化合物是既为非对映体纯的、又是对映体纯的化合物。优选地，本发明的化合物以至少90％光学纯的形式使用，即包含至少90％的单一异构体(80％对映体过量("e.e.")或非对映体过量("d.e."))、更优选至少95％(90％e.e.或d.e.)、甚至更优选至少97.5％(95％e.e.或d.e.)和最优选至少99％(98％e.e.或d.e.)的形式。另外，式(I)的化合物及前药以及本发明的其它化合物旨在涵盖所定义的结构的溶剂化和非溶剂化形式。例如，式(I)包括水合物和非水合物形式的所示结构的化合物。溶剂合物的其它实例包括与异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸或乙醇胺组合的结构。
术语“前药”表示在施用后在体内例如被个体的生物学液体或酶代谢成化合物的药理学活性形式以便产生期望的药理学作用的形式或化合物的衍生物。前药描述在例如“The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action”,Richard B.Silverman,Academic Press,San Diego,2004,第8章：Prodrugs and Drug Delivery Systems,497-558页中。
“药物活性代谢物”是指通过在体内代谢具体的化合物或其盐产生的药理学活性产物。在进入体内后，大部分药物是可以改变其物理性质和生物作用的化学反应的底物。这些代谢转化通常会影响本发明化合物的极性，改变药物在体内分布和从体内排出的方式。然而，在一些情况中，药物的代谢是产生治疗作用所需的。
术语“治疗有效量”表示本发明化合物或分子在施用于个体时产生如下作用的用量：(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍；(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状；或(iii)预防或延缓本文所述的特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作。治疗有效量将根据化合物、所治疗的疾病状态、所治疗的疾病的严重性、个体的年龄和相对健康状况、施用途径和形式、主治医师或兽医从业人员的判断和其它因素而改变。
术语“药物组合物”表示准备施用于有此需要的哺乳动物、例如人的包含治疗有效量的活性药物成分与可药用赋形剂的混合物或溶液。
TLR7激动剂和前药
本发明涉及(i)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体:
其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、C2-6链烯基、C3-7环烷基和C1-6烷基；
R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基C2-6
炔基、C2-6链烯基、C2-6炔基、苯基和噻吩基；
R6是氢、C1-6烷氧基羰基或C1-6烷基羰基。
本发明的另一个实施方案是(ii)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、甲基、环丙基和烯丙基；
R4和R5彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丁基、
环丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-环丙基乙炔基、烯丙基、苯基、3-噻吩
基和2-噻吩基；
R6是氢、乙氧基羰基或乙酰基。
本发明的另一个实施方案是(iii)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、C2-6链烯基和C1-6烷基；
R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基C2-6
炔基、C2-6链烯基、C2-6炔基和2-噻吩基；
R6是氢或C1-6烷基羰基。
本发明的另一个实施方案是(iv)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、甲基和烯丙基；
R4和R5彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丁基、
环丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-环丙基乙炔基、烯丙基和2-噻吩基；
R6是氢或乙酰基。
本发明的另一个实施方案是(v)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R2和R3彼此独立地选自氢和C1-6烷基。
本发明的另一个实施方案是(vi)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R2和R3彼此独立地选自氢和甲基。
本发明的另一个实施方案是(vii)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和2-噻吩基。
本发明的另一个实施方案是(viii)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R4和R5彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丁基、环丙基、乙炔基、1-丙炔基、烯丙基和2-噻吩基。
本发明的另一个实施方案是(ix)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R6是氢。
本发明的另一个实施方案是(x)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢和C1-6烷基；
R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6链烯基、C2-6
炔基和2-噻吩基；
R6是氢。
本发明的另一个实施方案是(xi)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢和甲基；
R4和R5彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、环丙基、
乙炔基、1-丙炔基、烯丙基和2-噻吩基；
R6是氢。
本发明的另一个实施方案是(xii)如下具体的式(I)化合物:
5-氨基-3-[2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[-环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯；
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯；
1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(3-环丙基-1-羟基-丙-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基乙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基-3-甲基-丁基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-3-烯基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基戊基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[羟基(2-噻吩基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(4S)-2-[(1S)-1-羟基丙基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-[环丙基(羟基)甲基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(4S)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
和3-[4-烯丙基-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-氨基-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
本发明的另一个实施方案是(xiii)如下更具体的式(I)化合物:
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基乙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-3-烯基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基戊基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[羟基(2-噻吩基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(4S)-2-[(1S)-1-羟基丙基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
和5-氨基-3-[(2S,4S)-2-[环丙基(羟基)甲基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
本发明的另一个实施方案是(xiv)式(Ia)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
其中
R7和R8彼此独立地选自氢、C2-6链烯基和C1-6烷基；
R9和R10彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基C2-6
炔基、C2-6链烯基、C2-6炔基和2-噻吩基；
R11是氢或C1-6烷基羰基。
本发明的另一个实施方案是(xv)式(Ia)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R7和R8彼此独立地选自氢、甲基和烯丙基；
R9和R10彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丁基、
环丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-环丙基乙炔基、烯丙基和2-噻吩基；
R11是氢或乙酰基。
本发明的另一个实施方案是(xvi)式(Ia)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R7和R8是氢；
R9和R10彼此独立地选自氢、C2-6炔基和C3-7环烷基；
R11是氢或C1-6烷基羰基。
本发明的另一个实施方案是(xvii)式(Ia)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R7和R8是氢；
R9和R10彼此独立地选自氢、1-丙炔基和环丙基；
R11是氢或乙酰基。
本发明的另一个实施方案是(xviii)式(Ia)的具体化合物是如下化合物:5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[-环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
和1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
本发明的另一个实施方案是:
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮,
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[-环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮,
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯,
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮,
和1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯；
或其可药用盐、对映体或非对映体是前药。
合成
本发明的化合物可以通过任何常规的方法制备。在如下的方案和实施例中提供了用于合成这些化合物的适宜方法及其原料。所有的取代基、特别是R1至R11如上所定义，除非另有指示。此外，除非另有清楚的描述，否则所有的反应、反应条件、缩写和符号均具有有机化学领域普通技术人员众所周知的含义。
方案1
Ry是氢或羟基。
将烯丙基醇用叔丁基二苯基氯硅烷在咪唑的存在下保护生成硅烷基醚III。将III用臭氧氧化得到醛IV。将中间体IV用巯基乙酸环化生成內酯V。将內酯V用还原剂例如二异丁基氢化铝还原生成半缩醛VI。将半缩醛VI用乙酸酐酰化生成中间体VII。将VII和VIII在一种适宜的硅醚化试剂例如N,O-二(三甲基硅烷基)乙酰胺和Lewis酸的存在下偶联生成中间体IX。将IX用氟化物试剂例如TBAF脱保护并通过制备型HPLC纯化得到化合物P1。
方案2
Ry是氢或羟基。
将1,4-二噻烷-2,5-二醇X用乙醛酸环化得到中间体XI。将中间体XI用乙酸酐酰化得到中间体XII。将中间体XII与L-(-)-薄荷醇在适宜的碱例如DMAP和缩合试剂例如二环己基碳二亚胺的存在下偶联得到酯XIII。将酯XIII通过超临界流体色谱法(SFC)进行手性分离得到光学纯的化合物XIV。将XIV和VIII在适宜的硅醚化试剂例如N,O-二(三甲基硅烷基)乙酰胺和Lewis酸的存在下偶联生成中间体XV。将XV用还原剂例如LiAlH4还原并通过制备型HPLC纯化得到化合物P2。
方案3
R是R4、R5、R9或R10。Ry是氢或羟基。
将中间体XV通过超临界流体色谱法(SFC)进行手性分离得到光学纯的化合物XVI。将化合物XVI用适宜的碱例如LiOH水解得到酸XVII。将酸XVII与N,O-二甲基羟胺(Weinreb胺)在适宜的碱例如LiOH和缩合试剂例如氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉的存在下偶联得到Weinreb酰胺XVIII。将Weinreb酰胺XVIII用亲核试剂例如格氏试剂处理，得到酮XIX。将酮XIX用还原剂例如NaBH4还原并通过制备型HPLC纯化得到化合物P3。
方案4
R是R4、R5、R9或R10。Ry是氢或羟基。
化合物P3还可以通过方案4制备。将Weinreb酰胺XVIII的氨基用1-(氯二苯基甲基)-4-甲氧基苯进行保护生成中间体XX。将中间体XX用格氏试剂或有机锂试剂处理生成酮XXI。将酮XXI用还原剂例如NaBH4还原得到醇XXII。将XXII用酸例如甲酸脱保护并通过制备型HPLC纯化得到化合物P3。将醇XXII用酰氯或酸酐酯化得到酯XXIII。将XXIII用酸例如甲酸脱保护并通过制备型HPLC纯化得到化合物P4。
方案5
R是R4、R5、R9或R10。Ry是氢或羟基。
将XXIV在[二苯基-[(2R)-吡咯烷-2-基]甲氧基]-三甲基-硅烷和过氧化苯甲酰的存在下苯甲酰化得到中间体XXV。将中间体XXV用取代或未取代的巯基乙酸在不存在溶剂或存在溶剂例如甲苯的条件下环化生成內酯XXVI。将內酯XXVI用还原剂例如三-叔丁氧基氢化锂铝还原生成半缩醛XXVII。将半缩醛XXVII用乙酸酐酰化生成中间体XXVIII。将XXVIII和VIII在适宜的硅试剂例如N,O-二(三甲基硅烷基)乙酰胺和Lewis酸的存在下偶联生成XXIX。将化合物XXIX用碱例如K2CO3水解并通过制备型HPLC纯化得到化合物P5。
本发明还涉及式I化合物的制备方法，包括如下反应:
(a)将式(IX)的化合物
与氟化物试剂反应；
(b)将式(XV)的化合物
与还原剂反应；
(c)将式(XIX)的化合物
与还原剂反应，其中R是R4、R5、R9或R10；(d)将式(XXII)的化合物
与酸反应，其中R是R4、R5、R9或R10；
(e)将式(XXIII)的化合物
与酸反应，其中R是R4、R5、R9或R10；或者
(f)将式(XXIX)的化合物
与碱反应，其中R是R4、R5、R9或R10；
其中Ry、R2、R3、R4、R5、R6、R9和R10如上所定义。
在步骤(a)中，氟化物试剂可以是例如TBAF。
在步骤(b)中，还原剂可以是例如LiAlH4。
在步骤(c)中，还原剂可以是例如NaBH4。
在步骤(d)和(e)中，酸可以是例如甲酸。
在步骤(f)中，碱可以是例如K2CO3。
按照上述方法生产的式(I)或(Ia)的化合物也是本发明的目的之一。
药物组合物和施用
另一个实施方案提供包含本发明化合物和治疗惰性载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药物以及使用本发明的化合物制备这类组合物和药物的方法。在一个实例中，可以通过在环境温度下、在适合的pH下和在期望的纯度下与生理学可接受的载体混合配制式(I)化合物或其前药，所述生理学可接受的载体是在用于盖仑施用形式的剂量和浓度下对接受者无毒的载体。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物的浓度，但在任何情况下的优选范围在约3－约8。在一个实例中，用pH 5的乙酸盐缓冲液配制式(I)化合物或其前药。在另一个实施方案中，式(I)化合物或其前药是无菌的。例如，可以将所述化合物以固体或无定形组合物的形式、以冻干制剂或以水溶液的形式储存。
以符合良好医疗实践的方式配制、调剂和施用组合物。在本文上下文中考量的因素包括待治疗的具体病症、待治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病情、病症的原因、活性剂的递送部位、施用方法、施用的计划安排和医务人员公知的其它因素。所施用的化合物的“有效量”应当根据这类考量来控制，并且是活化TLR7受体和导致产生INF-α和其它细胞因子所需的最小量，其可以用于、但不限于治疗或预防乙型肝炎和/或丙型肝炎病毒感染的患者。
在一个实例中，每个剂量通过胃肠外施用的本发明化合物的药学有效量在约0.1－50mg/kg，或者约0.1－30mg/kg患者体重/天的范围内，其中所用化合物的典型起始范围为0.3－15mg/kg/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型例如片剂和胶囊优选包含约20－约1000mg的本发明化合物。
本发明的化合物可以通过任意适合的方式施用，包括口服、局部(包括口含和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、真皮内、鞘内、硬膜外和鼻内，且如果期望局部治疗，还包括损伤内施用。胃肠外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。
本发明的化合物可以以任意便利的施用形式施用，例如片剂、散剂、胶囊、溶液、分散液、混悬液、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳剂、贴剂等。这类组合物可以包含药物制剂中常规的成分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和另外的活性剂。
通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂制备典型制剂。适合的载体和赋形剂是本领域技术人员众所周知的且具体描述在例如Ansel,Howard C.等人.,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia：Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.,等人.Remington：The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia：Lippincott,Williams&Wilkins,2000；和Rowe,Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,Pharmaceutical Press,2005中。所述制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它公知的添加剂，以便使药物(即本发明的化合物或其药物组合物)具有优美的外观或有助于制备药物产品(即药物)。
适合的口服剂型的实例是包含约20－1000mg本发明化合物和约30－90mg无水乳糖、约5－40mg交联羧甲基纤维素钠、约5－30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约1－10mg硬脂酸镁的片剂。首先将粉状成分彼此混合，然后与PVP溶液混合。可以干燥得到的组合物、制粒、与硬脂酸镁混合，并且使用常规设备压制成片剂形式。气雾剂的实例可以通过将例如20－1000mg本发明的化合物溶于适合的缓冲溶液例如磷酸盐缓冲液、添加张力调节剂例如盐如氯化钠(如果需要的话)来制备。例如，可以使用0.2微米滤膜过滤该溶液，以除去杂质和污染物。
因此，一个实施方案包括药物组合物，其包含式(I)化合物或其前药或其可药用盐或对映体或非对映体。
另一个实施方案包括药物组合物，其包含式(I)化合物或其前药或其可药用盐或对映体或非对映体与药学上可接受的载体或赋形剂。
另一个实施方案包括用于治疗乙型肝炎病毒感染的药物组合物，其包含式(I)化合物或其前药或其可药用盐或对映体或非对映体。
适应征和治疗方法
本发明提供用于在有需要的患者中治疗或预防乙型肝炎病毒感染和/或丙型肝炎病毒感染的方法。
本发明还提供将治疗有效量的式(I)化合物或其前药或本发明的其它化合物或这些化合物的组合导入患者血流以治疗和/或预防乙型肝炎和/或丙型肝炎病毒感染的方法。
式(I)化合物或其前药或本发明的其它化合物或其可药用盐、溶剂化物或水合物在急性或慢性治疗或预防感染中的预防性或治疗剂量的大小会随着感染的性质和严重程度以及活性成分的施用途径而变化。剂量以及某些情况下的给药频率也会根据所要治疗的感染、个体患者的年龄、体重和响应而变化。适当的给药方案可以很容易地由本领域技术人员在适当考虑这些因素的情况下进行选择。
本发明的方法特别适合于人类患者。具体地讲，本发明的方法和剂量可以用于免疫系统受损伤的患者、包括但不限于HBV和/或HCV感染的患者，以及患有免疫系统退化性疾病的患者。此外，该方法还可用于目前处于缓解状态的免疫系统受损伤的患者。本发明的方法和剂量还可用于进行其它抗病毒治疗的患者。本发明的预防方法特别适用于处于病毒感染风险的患者。这些患者包括、但不限于医护人员，例如医生、护士、临终关怀医疗给予者；军事人员；教师；儿童保健工作者；旅行至或生活在外国地区、特别是第三世界地区的患者，包括社会援助工作者、传教士和外交官。最终，这些方法和组合物包括治疗顽固性患者或对治疗有耐受的患者，例如耐受逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂等的患者。
本发明的另一个实施方案包括在需要所述治疗的哺乳动物中治疗或预防乙型肝炎病毒感染和/或丙型肝炎病毒感染的方法，其中该方法包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其对映体、非对映体、前药或可药用盐。
附图简要说明
图1:实施例4-A在HEK-Blue-mTLR7试验中活化鼠TLR7。将细胞与所示浓度的实施例4-A一起温育20小时。使用Quanti-Blue试验测定鼠TLR7的活化。
图2：用溶媒、30mg/kg的低剂量的实施例6-A和100mg/kg的高剂量的实施例6-A处理的AAV-HBV感染小鼠中的HBV DNA和HBsAg。治疗在使小鼠感染AAV-HBV 29天之后开始。给予它们治疗42天并且在所示时间点分别通过RT-qPCR和HBsAg CLIA测定小鼠血清中的HBVDNA和HBsAg。结果表示为平均值±SEM。LLQ：定量下限。
实施例
本发明可以通过参照下列实施例得到更完整地理解。然而，不应将它们视为限定本发明的范围。
缩写
ACN： 乙腈
MMTrCl: 1-(氯二苯基甲基)-4-甲氧基苯
DCE: 1,2-二氯乙烷
HATU: 1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-
氧化六氟磷酸酯
DMAP: 4-二甲基氨基吡啶
p-TsOH: 4-甲基苯磺酸
FBS: 胎牛血清
Hz: 赫兹
HPLC: 高效液相色谱
LiAlH4: 氢化锂铝
MS(ESI): 质谱(电喷雾离子化)
MHz: 兆赫
BSA: N,O-二(三甲基硅烷基)乙酰胺
obsd. 实测值
NaBH4: 硼氢化钠
TBAF: 四丁基氟化铵
EC50: 产生激动剂最大可能响应的50％的该激动剂摩尔浓度
TLC: 薄层色谱
TEA: 三乙胺
TMSI: 三甲基碘硅烷
TMSOTf: 三氟甲磺酸三甲基硅基酯
通用实验条件
通过使用下列仪器之一的快速色谱法纯化中间体和最终化合物：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25柱组件。ii)ISCO combi-快速色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL粒径：40-60μm；ii)CAS注册号：硅胶：63231-67-4,粒径：47-60微米硅胶；iii)来自青岛海洋化工有限公司的ZCX,孔：200-300或300-400。
通过使用反相柱的制备型HPLC、应用X BridgeTM Perp C18(5μm,OBDTM 30×100mm)柱或SunFireTM Perp C18(5μm,OBDTM 30×100mm)柱纯化中间体和最终化合物。
使用Waters UPLC-SQD Mass得到LC/MS光谱。标准LC/MS条件如下(运行时间3分钟)：
酸性条件：A：0.1％甲酸和1％乙腈的H2O溶液；B：0.1％甲酸的乙腈溶液；
碱性条件：A：0.05％NH3·H2O的H2O溶液；B：乙腈。
质谱(MS)：通常仅报告显示母体质量的离子，且除非另有描述，否则引述的质量离子都是正质量离子(M+H)+。
NMR光谱使用Bruker Avance 400MHz获得。
涉及空气敏感性试剂的所有反应均在氩气气氛中进行。除非另有注释，试剂在从商品供应商获得后不经进一步纯化直接使用。
实施例1
5-氨基-3-[2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
烯丙基氧基-叔丁基-二苯基-硅烷的制备
向烯丙基醇(35g,603mmol)和咪唑(82g,1.2mol)的DCM(560mL)溶液中在搅拌下滴加叔丁基二苯基氯硅烷(198g,723mmol)。在室温下搅拌16小时后，将得到的反应混合物过滤。将滤液真空浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用石油醚洗脱)得到143g无色液体状烯丙基氧基-叔丁基-二苯基-硅烷(化合物III)。
化合物III:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.60-7.62(m,4H),7.36-7.42(m,6H),5.85-5.95(m,1H),5.33(dd,J＝17.2,2.0Hz,1H),5.09(dd,J＝10.8,2.0Hz,1H),4.16-4.17(m,2H),0.98(s,9H)。
2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙醛的制备
向烯丙基氧基-叔丁基-二苯基-硅烷(20g,67mmol)的DCM(516mL)溶液中在-78℃下加入臭氧直至溶液变为蓝色。在-78℃下搅拌30分钟后，向反应混合物中加入氮气直至溶液变为无色，然后滴加二甲基硫醚(19.4mL,263mmol)。在室温下搅拌16小时，将溶液用盐水洗涤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到12g无色油状2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙醛(化合物IV)。
化合物IV:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.55(s,1H),7.61-7.66(m,4H),7.38-7.44(m,6H),4.38(s,2H),0.95-1.01(m,9H)。
2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮的制备
将2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙醛(6.5g,21.7mmol)和巯基乙酸(1.52mL,21.7mmol)的甲苯(87mL)溶液回流2小时。冷却至室温后，将形成的反应混合物用饱和NaHCO3溶液洗涤。将水相用乙醚(100mL)萃取两次。将合并的有机相用水(200mL)洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩得到无色油。将该油通过硅胶柱色谱纯化(用1:20乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到粗产物，将其用石油醚重结晶得到4.0g白色固体状2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(化合物V)。
化合物V:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.62-7.67(m,4H),7.44-7.50(m,6H),5.77(t,J＝3.6Hz,1H),3.91-3.94(m,1H),3.79-3.83(m,3H),1.00(s,9H)。
[2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]乙酸酯的制备
向2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(1g,2.7mmol)的溶液中滴加二异丁基氢化铝(2.8mL,1.0M的甲苯溶液,2.8mmol)并保持内部温度在-78℃。加料完成后，将反应混合物于-78℃继续搅拌30分钟，然后加入乙酸酐(1mL,10.6mmol)。在室温下搅拌16小时后，加入水(1mL)并将形成的反应混合物室温搅拌1小时。将混合物用甲基叔丁基醚稀释(60mL)，用硫酸镁干燥并过滤。将滤液真空浓缩并通过硅胶柱色谱纯化(用1:10乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到0.3g黄色油状[2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]乙酸酯(化合物VII)。
化合物VII:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.62-7.65(m,4H),7.42-7.48(m,6H),6.59-6.60(m,1H),5.42-5.46(m,1H),3.75-3.82(m,2H),3.26-3.34(m,1H),3.11-3.14(m,1H),2.04(s,2H),1.83(s,1H),1.00(s,9H)。
5-氨基-3-[2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向5-氨基-3,6-二氢噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(CAS#:30161-97-8,可从J&KScientific购买到,265mg,1.4mmol)的ACN(5mL)悬浮液中加入BSA(588mg,2.9mmol)。然后将形成的反应混合物在氩气氛下于70℃搅拌0.5小时以形成澄清的溶液。将溶液冷却至室温后，依次加入[2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]乙酸酯(400mg,0.96mmol)和TMSOTf(213mg,0.96mmol)。于70℃下搅拌加热14小时后，真空除去溶剂。将残余物在EtOAc和饱和NaHCO3溶液(30mL)之间进行分配。分出有机层并将水层用EtOAc(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化得到20mg白色固体状[2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]乙酸酯(化合物1e)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:539。
5-氨基-3-[2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向[2-[[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]乙酸酯(20mg,0.04mmol)的THF(5mL)溶液中加入TBAF(1M的THF溶液,1mL,1mmol)。在室温下搅拌2小时后，将形成的反应混合物真空浓缩并通过制备型HPLC纯化得到两组具有顺式和反式构型的非对映体，其中一组被确定为实施例1-A，另一组被确定为实施例1-B。
实施例1-A:1.8mg,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:6.09(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),5.08(t,J＝5.6Hz,1H),3.94-4.03(m,1H),3.66(dd,J＝11.4,6.1Hz,1H),3.51(dd,J＝11.4,5.1Hz,1H),3.11-3.23(m,1H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:301。
实施例1-B:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:6.54(s,1H),5.73(dd,J＝5.6,4.1Hz,1H),3.97(dd,J＝11.3,7.3Hz,1H),3.75-3.82(m,1H),3.69-3.74(m,1H),3.39-3.43(m,1H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:301。
实施例2
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
5-羟基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸的制备
向搅拌着的1,4-二噻烷-2,5-二醇(150g,0.98mol)的甲基叔丁基醚(500mL)和环己烷(150mL)溶液中加入乙醛酸(180g,1.96mol)。将形成的反应混合物在Dean-Stark条件下于80℃搅拌16小时。将形成的溶液真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:7乙酸乙酯的石油醚溶液至100％乙酸乙酯洗脱)得到220g粗产物5-羟基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸(化合物XI)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。
反式-5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸
向5-羟基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸(220g,1.5mol)的HOAc(1.5L)溶液中加入浓硫酸(1mL)和乙酸酐(50g,0.5mol)。在室温下搅拌16小时后，将形成的反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机相合并并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:10至1:7乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到粗产物，将其用甲苯重结晶得到10g反式-5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸(化合物2b)。(其合成亦可参见:J.Org.Chem.1995,60,2621-2623)
化合物2b:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.26(br,1H),6.66(d,J＝4.0Hz,1H),5.66(s,1H),3.30-3.37(m,1H),3.19-3.25(m,1H),2.04(s,3H)。
[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯的制备
将二环己基碳二亚胺(12g,57mmol)的DCM(50mL)溶液于0℃下加入到含有反式-5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸(10g,52mmol)、L-(-)-薄荷醇(8.9g,57mmol)和DMAP(0.6g,5.2mmol)的DCM(100mL)溶液的圆底烧瓶中。将反应混合物室温搅拌16小时，向上述混合物中加入甲醇(2mL)和冰乙酸(2mL)。继续搅拌10分钟后，将反应混合物用己烷(250mL)稀释，用硅藻土过滤并将滤液浓缩得到粗产物(J.Org.Chem.1995,60,2621-2623)。将粗产物重新溶于己烷(250mL)，过滤并将滤液真空浓缩。将残余物通过超临界流体色谱法(SFC)纯化得到3.2g无色油状[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(化合物XIII)，非对映体过量85％。化合物XIII的非对映体过量值通过HPLC(Agilent 1260HPLC)分析利用手性柱(CHIRALPAK IA-3ODH(4.6mm×250mm,5μm))测得。手性分析的移动相为20:80乙腈的MeOH溶液。
化合物XIII:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:6.81(d,J＝4.0Hz,1H),5.63(s,1H),4.76(dt,J＝10.9,4.5Hz,1H),3.44(dd,J＝11.7,4.1Hz,1H),3.17(d,J＝11.8Hz,1H),2.11(s,3H),2.00(d,J＝12.0Hz,1H),1.85(dt,J＝6.9,2.5Hz,1H),1.69(d,J＝11.0Hz,2H),1.55-1.26(m,3H),1.11-1.00(m,2H),0.91(dd,J＝6.8,9.8Hz,6H),0.76(d,J＝7.0Hz,3H)。
[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯的制备
向5-氨基-3,6-二氢噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(736mg,4mmol)的ACN(25mL)悬浮液中加入BSA(2.44g,12mmol)。将反应混合物在氩气氛下于70℃搅拌加热0.5小时以形成澄清的溶液。浓缩后，将白色固体重新溶于DCM(25mL)。向形成的DCM溶液中依次加入[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(660mg,2mmol)和TMSI(800mg,4mmol)，将混合物于40℃继续搅拌14小时。反应完成后，将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(30mL)终止反应。分出有机层并将水层用DCM(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并过滤。浓缩后，将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:50至1:10甲醇的DCM溶液洗脱)得到620mg黄色固体状[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(化合物2d)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:453。
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
在氩气氛下，向[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(454mg,1mmol)的THF(25mL)溶液中于0℃下加入LiAlH4溶液(2.4M的THF溶液,0.8mL,2mmol)。于0℃继续搅拌0.5小时后，加入Na2SO4·10H2O(644mg,2mmol)并将反应混合物继续室温搅拌0.5小时。将悬浮液过滤并将滤液真空浓缩得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化得到白色固体状5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(实施例2-A)12.4mg和5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(实施例2-B)。实施例2-A和实施例2-B的构型通过NOESY确定。
实施例2-A:13.1mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.31(dd,J＝5.5,9.4Hz,1H),5.22(dd,J＝4.3,5.3Hz,1H),4.06-4.15(m,1H),3.69-3.89(m,2H),3.11(dd,J＝5.5,10.4Hz,1H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:301。
实施例2-B:16.9mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.58-6.51(m,1H),5.75-5.70(m,1H),4.02-3.95(m,1H),3.81-3.69(m,2H),3.42-3.37(m,1H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:301。
对于实施例2-A，观察到1’-H和3’-H的NOESY相关；对于实施例2-B，未观察到1’-H和3’-H的NOESY相关。
实施例3
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮
[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯的制备
向5-氨基-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(CAS#:848691-22-5,可从Shanghai ShaoYuan Co.Ltd.购买到,672mg,4mmol)的乙腈(25mL)悬浮液中加入BSA(2.44g,12mmol)。将反应混合物在氩气氛下于70℃搅拌0.5小时以形成澄清的溶液。浓缩后，将白色固体重新溶于DCM(25mL)并向该DCM溶液中依次加入[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(660mg,2mmol)和TMSI(800mg,4mmol)。于40℃搅拌加热14小时后，将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(30mL)终止反应。分出有机层并将水相用DCM(30mL)萃取两次。将有机层合并并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并过滤。浓缩后，将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化得到277mg白色固体状[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(化合物3a)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:439。
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮的制备
向[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(277mg,0.68mmol)的MeOH(40mL)溶液中在0℃下加入NaBH4(160mg,4mmol)。于0℃继续搅拌0.5小时后，将反应溶液用NH4Cl溶液(1mL)终止反应。将形成的混合物真空浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(实施例3-A)和5-氨基-3-[(2S,5S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(实施例3-B)。实施例3-A和实施例3-B的构型通过NOESY确定。
实施例3-A:11.2mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.24(s,1H),6.41(dd,J＝9.3,5.5Hz,1H),5.25(dd,J＝5.5,4.3Hz,1H),4.14(dd,J＝10.4,9.3Hz,1H),3.76-3.87(m,2H),3.15(dd,J＝10.4,5.5Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:287。
实施例3-B:13.7mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.22(s,1H),6.64(t,J＝7.0Hz,1H),5.76(dd,J＝4.3,5.5Hz,1H),4.04-3.97(m,1H),3.77(dd,J＝4.8,15.3Hz,2H),3.47-3.40(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:287。
对于实施例3-A，观察到1’-H和3’-H的NOESY相关；对于实施例3-B，未观察到1’-H和3’-H的NOESY相关。
实施例4
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯和[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯的制备
将[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(4.0g,7.3mmol)进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(化合物4a-R)2.0g和[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(化合物4a-S)。化合物4a-R和化合物4a-S的构型通过NOESY按照与实施例2-A和2-B类似的方法确定。
化合物4a-R:2.0g,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.20-11.40(br.s.,1H),6.83-7.19(br.s.,2H),6.18(dd,J＝5.71,8.22Hz,1H),5.66(s,1H),4.63(d,J＝4.39Hz,1H),4.18(dd,J＝8.34,10.35Hz,1H),3.35-3.42(m,1H),1.78-1.95(m,2H),1.63(dd,J＝2.95,10.10Hz,2H),1.30-1.56(m,2H),0.77-1.14(m,9H),0.70(d,J＝6.90Hz,3H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:453。
化合物4a-S:530mg,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.27(br.s.,1H),6.99(br.s.,2H),6.55(t,J＝6.84Hz,1H),5.86-5.97(m,1H),4.67(dt,J＝4.39,10.92Hz,1H),3.90(dd,J＝7.09,10.85Hz,1H),3.49(dd,J＝6.71,10.85Hz,1H),1.79-1.94(m,2H),1.64(d,J＝11.42Hz,2H),1.32-1.56(m,2H),0.81-1.13(m,9H),0.72(d,J＝6.90Hz,3H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:453。
(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺的制备
向[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(0.60g,1.3mmol)在THF(15mL)和MeOH(5mL)的混合物中的溶液中加入LiOH·H2O(0.13g,3.3mmol)。于0℃搅拌2小时后，加入N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(0.32g,3.3mmol)和氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉(0.91g,3.3mmol)。将溶液室温搅拌过夜。浓缩后，将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:20甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到0.45g白色固体状(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(化合物4b)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:358。
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(环丙烷羰基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(450mg,1.2mmol)的THF(20mL)溶液中通过滴液漏斗在室温及氩气氛下滴加环丙基溴化镁(0.7M的THF溶液,7mL,4.9mmol)。反应完成后，用饱和NH4Cl溶液终止反应，用EtOAc(30mL)萃取3次。将合并的有机层浓缩得到粗产物，将其进一步通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:20甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到340mg白色固体状5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(环丙烷羰基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(化合物4c)。
化合物4c:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.31(s,1H),6.90-7.09(m,2H),6.25(dd,J＝9.2,5.3Hz,1H),5.48(s,1H),4.16(t,J＝9.7Hz,1H),3.40(dd,J＝10.3,5.4Hz,1H),2.58-2.65(m,1H),0.93-1.11(m,3H),0.81(d,J＝4.4Hz,1H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:339。
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(实施例4)的制备
向5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(环丙烷羰基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(600mg,0.3mmol)的MeOH(15mL)溶液中在0℃下加入NaBH4(38mg,1mmol)。将形成的反应混合物于0℃搅拌直至反应完成。用HOAc(102mg,1.7mmol)调至pH7.0后，将反应液真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例4-A(非对映体1)和实施例4-B(非对映体2)。
实施例4-A:73mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.30(dd,J＝9.3,5.8Hz,1H),5.20(d,J＝5.5Hz,1H),3.99-4.06(m,1H),3.12-3.17(m,2H),0.93-1.02(m,1H),0.38-0.58(m,4H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:343。
实施例4-B:18mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.32(dd,J＝9.7,5.4Hz,1H),5.26(d,J＝3.5Hz,1H),3.86-3.98(m,1H),3.25(dd,J＝8.3,3.8Hz,1H),3.08-3.16(m,1H),0.89-0.99(m,1H),0.32-0.58(m,4H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:343。
实施例5
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[-环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮
[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯和[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯的制备
将5-氨基-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(6.0g,36mmol)和BSA(24.0g,118mmol)在DCE(250mL)中的悬浮液于85℃加热1小时。将反应混合物冷却至0℃，向上述混合物中加入[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(9.0g,27mmol)的DCE(10mL)溶液，然后滴加TMSI(14g,70mmol)。将反应混合物于60℃搅拌5小时，用NaHCO3水溶液终止反应，然后用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并浓缩得到油状的粗产物，将其通过硅胶柱色谱纯化(用1:100至1:50甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到7.7g两种异构体的混合物形式的[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(化合物3a)，将其进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状所需的β异构体[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(化合物5a-R)和[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5S)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(化合物5a-S)。化合物5a-R和化合物5a-S的构型通过NOESY按照与实施例2-A和2-B类似的方法确定。
化合物5a-R:2.8g,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.17(s,1H),6.44(m,1H),5.51(s,1H),5.12(bs,2H),4.78(m,1H),4.47(m,1H),3.16(m,1H),2.00(m,1H),1.79(m,1H),1.62(m,2H),1.38(m,2H),0.98(m,2H),0.9-0.72(m,10H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:439。
化合物5a-S:1.5g,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.17(s,1H),6.90(t,J＝4.8Hz,1H),5.79(s,1H),5.13(bs,2H),4.80(m,1H),4.02(m,1H),3.42(m,1H),2.04(m,1H),1.87(m,1H),1.69(m,2H),1.47(m,2H),0.96(m,2H),0.90-0.75(m,7H),0.77(d,J＝8.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:439。
(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺的制备
将[(1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己基](2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酸酯(3.0g,7.5mmol)在80％TFA水溶液(20mL)中的溶液于50℃搅拌16小时，然后浓缩得到白色固体状的粗品酸，将其重新溶于THF(40mL)。向上述混合物中室温加入N-甲氧基甲基胺盐酸盐(2.1g,22mmol)、DIPEA(14.5g,112mmol)和HATU(8.36g,22mol)。在室温下搅拌16小时后，将反应混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并浓缩得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱纯化(用1:100至1:50甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到2.1g白色固体状(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(化合物5b)。
化合物5b:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.16(s,1H),6.42(m,1H),5.83(s,1H),5.14(bs,2H),4.46(t,J＝9.6Hz,1H),3.72(s,3H),3.23(s,3H),3.15(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:344。
(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺的制备
向(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(2.1g,6.1mmol)的DCM(30mL)溶液中在室温下加入三甲基吡啶(1.45g,12mmol)、AgNO3(2.04g,12mmol)和MMTrCl(3.8g,12mmol)。在室温下搅拌16小时后，将反应混合物用DCM稀释，过滤除去固体。将滤液用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并浓缩得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱纯化(用1:100至2:1乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到3.6g黄色固体状(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(化合物5c)。(ESI+)[(M+H)+]:616。
3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮的制备
向(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(3g,5mmol)的THF(40mL)溶液中在0℃下加入格氏试剂环丙基溴化镁(0.5M,25mL)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟。用饱和NH4Cl溶液终止反应并用EtOAc萃取。将有机层干燥并浓缩得到粗产物，将其重新溶于MeOH(50mL)。向上述混合物中于0℃下加入NaBH4(2.0g,540mmol)。将反应混合物室温搅拌30分钟。用饱和NH4Cl溶液终止反应并用DCM萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥并浓缩得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱纯化(用1:100至1:1乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到1.8g黄色固体状3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物5d)。(ESI+)[(M+H)+]:599。
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮的制备
将3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(1g,1.67mmol)在50％HCOOH水溶液中的溶液室温搅拌1小时。将反应混合物浓缩得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状实施例5-A(非对映体1)和实施例5-B(非对映体2)。
实施例5-A:120mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.23(s,1H),6.36(m,1H),5.21(d,J＝5.6Hz,1H),4.04(t,J＝10.0Hz,1H),3.16(m,2H),0.97-0.39(m,5H)。MS实测值(ESI+)[(M+Na)+]:349。
实施例5-B:81mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.25(s,1H),6.38(m,1H),5.27(d,J＝3.6Hz,1H),3.96(t,J＝10.0Hz,1H),3.26(m,1H),3.13(m,1H),0.94-0.32(m,5H)。MS实测值(ESI+)[(M+Na)+]:349。
实施例6
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯
[环丙基-[(2S,5R)-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基]乙酸酯的制备
向3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(1.2g,2mmol)的DCM(10mL)溶液中于0℃下加入TEA(800mg,8mmol)、DMAP(30mg,0.2mmol)和Ac2O(400mg,4mmol)。将反应混合物室温搅拌48小时。反应完成后，用水终止反应，用DCM萃取。将有机层干燥并浓缩得到1.3g白色固体状[环丙基-[(2S,5R)-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基]乙酸酯(化合物6a)的粗产物，其不经进一步纯化直接用于下一步骤。(ESI+)[(M+H)+]:641。
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯的制备
将[环丙基-[(2S,5R)-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基]乙酸酯(1.3g,2mmol)在90％HCOOH水溶液(25mL)中的溶液室温搅拌1小时。将反应混合物浓缩并将残余物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状实施例6-A(非对映体1)和实施例6-B(非对映体2)。
实施例6-A:114mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.20(s,1H),6.34(m,1H),5.34(d,J＝6.4Hz,1H),4.54(t,J＝6.0Hz,1H),4.18(t,J＝8.4Hz,1H),3.31(t,J＝6.0Hz,1H),2.02(s,3H),1.13(m,1H),0.65-0.42(m,4H)。MS实测值(ESI+)[(M+Na)+]:391。
实施例6-B:87mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.21(s,1H),6.38(m,1H),5.30(d,J＝6.0Hz,1H),4.87(t,J＝7.2Hz,1H),4.19(t,J＝10.0Hz,1H),3.31(t,J＝5.6Hz,1H),2.10(s,3H),1.04(m,1H),0.56-0.33(m,4H)。MS实测值(ESI+)[(M+Na)+]:391。
实施例7
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯
(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺的制备
向(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-N-甲氧基-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(粗品1.4g,2.2mmol)的DCM(10mL)溶液中在室温下加入三甲基吡啶(750mg,6mmol)、AgNO3(1.08g,6mmol)和MMTrCl(1.85g,6mmol)。在室温下搅拌16小时后，将反应混合物用DCM稀释，过滤除去固体。将滤液用水和盐水洗涤，干燥并浓缩得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱纯化(用1:100至2:1乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到1.2g黄色固体状(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(化合物7a)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:632。
3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向(2S,5R)-N-甲氧基-5-[5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-N-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-甲酰胺(140mg,0.2mmol)的THF(2mL)溶液中在0℃下加入格氏试剂环丙基溴化镁(0.5M的THF溶液,1mL)。将反应混合物于0℃搅拌30分钟。用饱和NH4Cl溶液终止反应并用EtOAc萃取。将有机层干燥并浓缩得到粗产物，将其重新溶于MeOH(5mL)。向上述混合物中于0℃下加入NaBH4(41mg,1mmol)。将反应混合物室温搅拌30分钟。用饱和NH4Cl溶液终止反应并用DCM萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱纯化(用1:100至1:1乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到150mg黄色固体状3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(化合物7b)粗品。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:615。
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯的制备
标题化合物按照与实施例6类似的方式，通过用3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(化合物7b)代替3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物5d)进行制备。将实施例7的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例7-A(非对映体1)和实施例7-B(非对映体2)。
实施例7-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.23(m,1H),5.30(d,J＝6.4Hz,1H),4.54(m,1H),4.15(t,J＝10.0Hz,1H),3.15(m,1H),2.04(s,3H),1.16-0.42(m,5H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:385。
实施例7-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.29(m,1H),5.28(d,J＝6.4Hz,1H),4.79(m,1H),4.15(t,J＝10.0Hz,1H),3.04(m,1H),2.10(s,3H),1.07-0.38(m,5H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:385。
实施例8
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用乙基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例8的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例8-A(非对映体1)和实施例8-B(非对映体2)。
实施例8-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.28(dd,J＝9.3,5.5Hz,1H),5.10(d,J＝5.3Hz,1H),4.02(t,J＝9.8Hz,1H),3.64(dt,J＝9.0,4.5Hz,1H),3.12(dd,J＝10.0,5.5Hz,1H),1.60-1.75(m,1H),1.44-1.56(m,1H),1.02(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:331。
实施例8-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.30(dd,J＝9.5,5.3Hz,1H),5.12(d,J＝4.3Hz,1H),3.92-4.00(m,1H),3.76-3.82(m,1H),3.09(dd,J＝10.7,5.4Hz,1H),1.56-1.67(m,1H),1.42-1.53(m,1H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:331。
实施例9
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用丙基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例9的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例9-A(非对映体1)和实施例9-B(非对映体2)。
实施例9-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.28(dd,J＝9.3,5.5Hz,1H),5.08(d,J＝5.3Hz,1H),4.03(t,J＝9.8Hz,1H),3.73(m,1H),3.09-3.16(m,1H),1.40-1.61(m,4H),0.93-1.01(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:345。
实施例9-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.30(dd,J＝9.5,5.5Hz,1H),5.09-5.12(m,1H),3.86-3.98(m,2H),3.05-3.16(m,1H),1.37-1.62(m,4H),0.97(t,J＝7.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:345。
实施例10
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用1-丙炔基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例10的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例10-A(非对映体1)和实施例10-B(非对映体2)。
实施例10-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.35(dd,J＝9.4,5.6Hz,1H),5.09(d,J＝7.0Hz,1H),4.47-4.51(m,1H),4.08-4.13(m,1H),3.07-3.16(m,1H),1.85(d,J＝2.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:341。
实施例10-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.33(dd,J＝9.5,5.5Hz,1H),5.18(d,J＝4.5Hz,1H),4.57(dd,J＝4.6,2.4Hz,1H),3.97-4.03(m,1H),3.05-3.17(m,1H),1.85(d,J＝2.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:341。
实施例11
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮
3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮的制备
标题化合物按照与化合物5d类似的方式，通过用1-丙炔基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。(ESI+)[(M+H)+]:597。
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮的制备
标题化合物按照与实施例5类似的方式，通过用3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物11a)代替3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物5d)进行制备。将实施例11的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例11-A(非对映体1)和实施例11-B(非对映体2)。
实施例11-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.24(s,1H),6.40(m,1H),5.18(d,J＝4.4Hz,1H),4.49(m,1H),4.12(t,J＝9.6Hz,1H),3.11(m,1H),1.83(d,J＝2.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+Na)+]:347。
实施例11-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.25(s,1H),6.38(m,1H),5.27(d,J＝3.6Hz,1H),4.59(m,1H),4.03(t,J＝10.0Hz,1H),3.10(m,1H),1.82(d,J＝2.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+Na)+]:347。
实施例12
1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯
标题化合物按照与实施例6类似的方式，通过用3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物11a)代替3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物5d)进行制备。将实施例12的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例12-A(非对映体1)和实施例12-B(非对映体2)。
实施例12-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.20(s,1H),6.43(m,1H),5.54(d,J＝7.6Hz,1H),5.28(d,J＝8.0Hz,1H),4.19(t,J＝10.0Hz,1H),3.15(m,1H),2.00(s,3H),1.84(s,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:367。
实施例12-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.22(s,1H),6.42(m,1H),5.94(m,1H),5.26(d,J＝6.4Hz,1H),4.21(t,J＝10.0Hz,1H),3.10(m,1H),2.11(s,3H),1.79(d,J＝2.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:367。
实施例13
1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯
3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
标题化合物按照与化合物7b类似的方式，通过用1-丙炔基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:613。
1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯的制备
标题化合物按照与实施例6类似的方式，通过用3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(化合物13a)代替3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-[[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲基]氨基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(化合物5d)进行制备。将实施例13的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例13-A(非对映体1)和实施例13-B(非对映体2)。
实施例13-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.33(m,1H),5.52(m,1H),5.24(d,J＝8.0Hz,1H),4.16(t,J＝10.0Hz,1H),3.11(m,1H),2.02(s,3H),1.83(d,J＝2.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:383。
实施例13-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.32(m,1H),5.85(m,1H),5.23(d,J＝6.0Hz,1H),4.16(t,J＝10.0Hz,1H),3.06(m,1H),2.11(s,3H),1.81(d,J＝2.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:383。
实施例14
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(3-环丙基-1-羟基-丙-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用(2-环丙基乙炔基)溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例14的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例14-A(非对映体1)和实施例14-B(非对映体2)。
实施例14-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.34(dd,J＝9.4,5.6Hz,1H),5.06(d,J＝7.0Hz,1H),4.49(dd,J＝7.0,1.8Hz,1H),4.04-4.16(m,1H),3.09(dd,J＝10.4,5.6Hz,1H),1.26-1.35(m,1H),0.74-0.86(m,2H),0.57-0.71(m,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:367。
实施例14-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.33(dd,J＝9.7,5.4Hz,1H),5.18(d,J＝4.0Hz,1H),4.60(d,J＝2.3Hz,1H),3.97(t,J＝10.0Hz,1H),3.08(dd,J＝10.4,5.4Hz,1H),1.20-1.37(m,1H),0.74-0.88(m,2H),0.61-0.71(m,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:367。
实施例15
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用乙炔基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例15的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例15-A(非对映体1)和实施例15-B(非对映体2)。
实施例15-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.37(dd,J＝9.5,5.5Hz,1H),5.16(d,J＝6.5Hz,1H),4.55(dd,J＝6.7,2.1Hz,1H),4.00-4.21(m,1H),3.04-3.17(m,1H),2.89(d,J＝2.3Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:327。
实施例15-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.35(dd,J＝9.7,5.4Hz,1H),5.21(d,J＝5.0Hz,1H),4.63(dd,J＝4.8,2.0Hz,1H),4.03(t,J＝10.0Hz,1H),3.10(dd,J＝10.4,5.6Hz,1H),2.89(d,J＝2.3Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:327。
实施例16
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基乙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用甲基碘化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例16的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例16-A(非对映体1)和实施例16-B(非对映体2)。
实施例16-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.29(dd,J＝9.3,5.5Hz,1H),5.03(d,J＝5.8Hz,1H),4.02-4.09(m,1H),3.96(q,J＝6.2Hz,1H),3.08-3.16(m,1H),1.24(d,J＝6.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:317。
实施例16-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.30(dd,J＝9.5,5.3Hz,1H),5.07(d,J＝4.0Hz,1H),4.03(dd,J＝6.3,4.0Hz,1H),3.91-3.99(m,1H),3.08(dd,J＝10.4,5.4Hz,1H),1.21(d,J＝6.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:317。
实施例17
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基-3-甲基-丁基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用异丁基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例17的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例17-A(非对映体1)和实施例17-B(非对映体2)。
实施例17-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.28(dd,J＝9.4,5.6Hz,1H),5.05(d,J＝5.3Hz,1H),3.98-4.08(m,1H),3.80(ddd,J＝7.8,5.1,2.6Hz,1H),3.12(dd,J＝10.0,5.5Hz,1H),1.79-1.97(m,1H),1.48(ddd,J＝14.1,10.0,4.3Hz,1H),1.26-1.38(m,1H),0.96(dd,J＝7.9,6.7Hz,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:359。
实施例17-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.30(dd,J＝9.5,5.3Hz,1H),5.09(d,J＝4.0Hz,1H),3.92-4.01(m,2H),3.08(dd,J＝10.3,5.5Hz,1H),1.79-1.93(m,1H),1.37-1.47(m,1H),1.25-1.35(m,1H),0.96(dd,J＝12.3,6.5Hz,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:359。
实施例18
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-3-烯基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用烯丙基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例18的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例18-A(非对映体1)和实施例18-B(非对映体2)。
实施例18-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.29(dd,J＝9.5,5.3Hz,1H),5.92(ddt,J＝17.2,10.2,7.0Hz,1H),5.16(d,J＝4.3Hz,1H),5.10-5.15(m,1H),5.05-5.09(m,1H),4.00(t,J＝9.9Hz,1H),3.78(dt,J＝8.2,4.3Hz,1H),3.07-3.16(m,1H),2.38-2.46(m,1H),2.26-2.37(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:343。
实施例18-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.30(dd,J＝9.7,5.4Hz,1H),5.90(dd,J＝17.2,10.4Hz,1H),5.14-5.17(m,1H),5.10-5.14(m,1H),5.08(d,J＝10.0Hz,1H),3.92-4.00(m,2H),3.08(dd,J＝10.5,5.3Hz,1H),2.31(dd,J＝16.4,7.7Hz,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:343。
实施例19
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基戊基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用1-丁基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例19的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例19-A(非对映体1)和实施例19-B(非对映体2)。
实施例19-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.28(dd,J＝9.3,5.5Hz,1H),5.09(d,J＝5.0Hz,1H),4.02(t,J＝9.8Hz,1H),3.67-3.76(m,1H),3.12(dd,J＝10.2,5.6Hz,1H),1.27-1.67(m,6H),0.86-1.03(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:359。
实施例19-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.30(dd,J＝9.5,5.5Hz,1H),5.09-5.15(m,1H),3.95(t,J＝9.9Hz,1H),3.84-3.90(m,1H),3.08(dd,J＝10.3,5.3Hz,1H),1.44-1.59(m,3H),1.32-1.43(m,3H),0.94(t,J＝7.0Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:359。
实施例20
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[羟基(2-噻吩基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
标题化合物按照与实施例4类似的方式，通过用2-噻吩基溴化镁代替环丙基溴化镁进行制备。将实施例20的化合物进一步通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例20-A(非对映体1)和实施例20-B(非对映体2)。
实施例20-A:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:7.32-7.39(m,1H),7.05-7.16(m,1H),6.96-7.03(m,1H),6.31-6.40(m,1H),5.28-5.34(m,1H),5.09(d,J＝6.3Hz,1H),4.04-4.12(m,1H),3.08-3.17(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:385。
实施例20-B:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:7.35(dd,J＝5.0,1.3Hz,1H),7.07(d,J＝3.5Hz,1H),6.99(dd,J＝5.1,3.6Hz,1H),6.36(dd,J＝9.5,5.3Hz,1H),5.25-5.36(m,2H),4.00-4.13(m,1H),3.11(dd,J＝10.4,5.4Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:385。
实施例21
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
实施例21的合成方案:
(2R)-2-氯丙酸的制备
0℃及剧烈搅拌下，在2.5小时内向D-丙氨酸(35.6g,400mmol)在HCl水溶液(6N,500mL)中的溶液中分成小份加入NaNO2(44g,640mmol)。加料完成后，将反应液于0℃继续搅拌4小时。然后将溶液用乙醚(200mL)萃取3次，用无水Na2SO4干燥然后真空浓缩。将浅黄色的残余物进行分馏得到21.4g黄色油状的(2R)-2-氯丙酸(化合物21a)。
化合物21a:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:13.08-13.39(m,1H),4.58(d,J＝6.90Hz,1H),1.57(d,J＝6.78Hz,3H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:107。
硫代乙酸铯(化合物21b)的制备
向硫代乙酸(10.7g,140mmol)的甲醇(100mL)溶液中加入Cs2CO3(22.9g,70mmol)并将反应混合物室温搅拌7小时。将混合物真空浓缩。将残余物用干燥的丙酮研磨3次并再次蒸发得到33g棕色固体状硫代乙酸铯(化合物21b)。
(2S)-2-巯基丙酸的制备
向硫代乙酸铯(42.8g,206mmol)的DMF(250mL)溶液中在室温下加入(2R)-2-氯丙酸(21.4g,197mmol)。在室温下搅拌过夜，将反应混合物用乙醚稀释，用水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后真空浓缩。将残余物溶于1N NH3水(400mL)并室温搅拌过夜。用HCl水溶液(4N)酸化至pH 4至5后，将溶液用乙醚(200mL)萃取3次，用无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物分馏得到11.9g浅黄色油状(2S)-2-巯基丙酸(化合物21c)。
化合物21c:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:12.45-12.70(m,1H),3.42-3.59(m,1H),3.00-3.18(m,1H),1.38(d,J＝7.03Hz,3H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:105。
(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮和(2R,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮的制备
将2-苄氧基乙醛(4mL,28mmol)在室温下滴加到(2S)-2-巯基丙酸(2g,19mmol)中。将混合物于50℃搅拌过夜，用乙酸乙酯(150mL)稀释，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到无色油状(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(化合物21d-S)和(2R,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(化合物21d-R)。化合物21d-S和化合物21d-R的构型通过NOESY确定。
化合物21d-S:0.88g,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:7.23-7.41(m,5H),5.58-5.60(m,1H),4.59(s,2H),4.06-4.13(m,1H),3.77-3.82(m,1H),3.66-3.72(m,1H),1.49(d,J＝7.03Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:239。
化合物21d-R:1.2g,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:7.25-7.42(m,5H),5.65(dd,J＝5.27,4.02Hz,1H),4.62(d,J＝1.25Hz,2H),4.11(d,J＝7.03Hz,1H),3.73(t,J＝4.64Hz,2H),1.52(d,J＝7.03Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:239。
对于化合物21d-S，观察到了3’-H和4’-H的NOESY相关，未观察到2’-H和4’-H的NOESY相关；对于化合物21d-R，未观察到3’-H和4’-H的NOESY相关，观察到了2’-H和4’-H的NOESY相关。
[(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]乙酸酯的制备
-78℃下，向(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(0.4g,1.7mmol)的无水THF(5mL)溶液中滴加三-叔丁氧基氢化锂铝(1M的THF溶液,2.5mL,2.5mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌至(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮完全还原。向反应液中加入吡啶(0.68mL,8.4mmol)、乙酸酐(0.8mL,8.4mmol)和DMAP(0.62g,5.1mmol)。在室温下搅拌过夜，用饱和NH4Cl溶液(25mL)终止反应并用DCM萃取(50mL x 3)。将有机层合并，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到0.4g无色油状的[(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]乙酸酯(化合物21e)。
化合物21e:1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:7.23-7.44(m,5H),6.19-6.27(m,1H),5.58-5.64(m,1H),4.54-4.66(m,2H),3.67-3.75(m,1H),3.47-3.64(m,2H),1.95(s,3H),1.35(d,J＝7.03Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+NH4)+]:300。
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向5-氨基-7-羟基-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(244mg,1.3mmol)的无水ACN(20mL)悬浮液中加入BSA(1.2mL,4.7mmol)。将混合物于60℃加热直至溶液变清澈。除去溶剂并将残余物重新溶于无水DCM(20mL)。向溶液中加入[(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]乙酸酯(300mg,1.1mmol)和TMSI(0.41mL,2.9mmol)。将反应混合物室温搅拌过夜然后用饱和NaHCO3溶液终止反应。将混合物用DCM(50mL)萃取3次并用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到140mg无色油状5-氨基-3-[(2S,4S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(化合物21f)的混合物。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:407。
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向5-氨基-3-[(2S,4S,5R)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮和5-氨基-3-[(2S,4S,5S)-2-(苄氧基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的混合物(120mg,0.3mmol)的无水DCM(5mL)溶液中在-78℃下加入三氯化硼溶液(1.0M的庚烷溶液,1.2mL,1.2mmol)。将反应混合物于-78℃搅拌2小时，然后用甲醇(5mL)终止反应。将混合物升温至室温并浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化和分离得到白色粉末状实施例21-A(非对映体1)和实施例21-B(非对映体2)。
实施例21-A:6mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:5.84(d,J＝9.03Hz,1H),5.26(dd,J＝5.27,4.27Hz,1H),4.57-4.64(m,1H),3.71-3.82(m,2H),1.30(d,J＝6.53Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:317。
实施例21-B:3.2mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.39(d,J＝6.27Hz,1H),5.30-5.36(m,1H),4.03(dt,J＝13.49,6.81Hz,1H),3.84-3.95(m,2H),1.25-1.39(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:317。
实施例22
5-氨基-3-[(4S)-2-[(1S)-1-羟基丙基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
[(1S)-1-甲酰基丙基]苯甲酸酯的制备
向丁醛(3.6g,50mmol)、[[二苯基-[(2S)-吡咯烷-2-基]甲氧基]-三甲基-硅烷(1.6g,5.0mmol)和氢醌(0.55g,5.0mmol)的THF(60mL)溶液中在室温下滴加过氧化苯甲酰(14.5g,60mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应液用EtOAc(100mL)稀释，依次用1N HCl(25mL)、水、饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。然后将有机层浓缩并将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:10乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到3.8g[(1S)-1-甲酰基丙基]苯甲酸酯(化合物22a)，对映体过量80％。化合物22a的对映体过量值在转化成相应的伯醇后通过HPLC(Agilent 1260HPLC)分析用手性柱(Diacel Chiralpak AZ-H(4.6mm×250mm,5μm))测得。手性分析的流动相为20:80乙醇的己烷溶液(合成方法参见:J.AM.CHEM.SOC.2009,131,3450–3451)
化合物22a:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.67(d,J＝0.8Hz,1H),8.17-8.13(m,2H),7.63(s,1H),7.51(d,J＝7.8Hz,2H),5.20(ddd,J＝7.8,5.0,0.8Hz,1H),2.12-1.91(m,2H),1.12(t,J＝7.4Hz,3H)。
[(1S)-1-[(4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯的制备
将[(1S)-1-甲酰基丙基]苯甲酸酯(1.15g,6.0mmol)、(2S)-2-巯基丙酸(0.53g,5.0mmol)和p-TsOH(5mg)的甲苯(50mL)溶液于130℃加热共沸脱水2小时，然后浓缩并通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:20乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到1.3g浅黄色油状[(1S)-1-[(4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯(化合物22b)。[(M+NH4)+]:298。
[(1S)-1-[(4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯的制备
向[(1S)-1-[(4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯(0.62g,3.0mmol)的THF(25mL)溶液中于-5℃下加入三-叔丁氧基氢化锂铝(0.99g,3.9mmol)。然后将溶液于-5℃搅拌2小时并通过TLC监测直至[(1S)-1-[(4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯完全还原。向反应液中加入乙酸酐(1.0g,10mmol)和TEA(2.0g,20mmol)。在室温下搅拌14小时后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(25mL)终止反应，用EtOAc(30mL)萃取3次。将合并的有机层浓缩并将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:10乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到600mg黄色油状[(1S)-1-[(4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯(化合物22c)。MS实测值(ESI+)[(M+NH4)+]:342。
[(1S)-1-[(4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯的制备
向5-氨基-3,6-二氢噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮(460mg,2.5mmol)的乙腈(30mL)悬浮液中加入BSA(1.5g,7.5mmol)。将混合物在氩气氛下于70℃搅拌0.5小时形成清澈的溶液。将溶液真空浓缩形成白色固体，将其重新溶于DCM(20mL)。向上述DCM溶液中加入[(1S)-1-[(4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯(460mg,1.5mmol)和TMSI(1.0g,5.0mmol)。于30℃搅拌14小时后，将反应混合物浓缩并将残余物在乙酸乙酯(25mL)和饱和NaHCO3溶液(15mL)之间进行分配。将有机层分离并将水相用EtOAc(25mL)萃取两次。将有机层合并并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥。将有机相浓缩并将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:10甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到110mg黄色固体状[(1S)-1-[(4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯(化合物22d)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:447。
5-氨基-3-[(4S)-2-[(1S)-1-羟基丙基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向[(1S)-1-[(4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丙基]苯甲酸酯(150mg,0.33mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入K2CO3(276mg,2.0mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应液用HOAc(240mg,4.0mmol)调至pH7.0，浓缩并通过制备型HPLC纯化和分离得到白色固体状的实施例22-A(非对映体1)、实施例22-B(非对映体2)、实施例22-C(非对映体3)和实施例22-D(非对映体4)。
实施例22-A:2.4mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:5.82(d,J＝9.0Hz,1H),5.16(d,J＝4.9Hz,1H),4.50-4.56(m,1H),3.58-3.64(m,1H),1.65(ddd,J＝13.9,7.5,3.6Hz,1H),1.46-1.53(m,1H),1.29(d,J＝6.5Hz,3H),1.02(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:345。
实施例22-B:5.8mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.64(d,J＝6.4Hz,1H),5.75(d,J＝4.9Hz,1H),4.18-4.10(m,1H),3.50(s,1H),1.67-1.49(m,2H),1.29(d,J＝6.9Hz,3H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:345。
实施例22-C:1.9mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:5.98(d,J＝7.9Hz,1H),5.66(d,J＝5.6Hz,1H),4.59-4.51(m,1H),3.70-3.63(m,1H),1.72-1.65(m,1H),1.46-1.40(m,1H),1.36(d,J＝6.7Hz,3H),1.01(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:345。
实施例22-D:2.5mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.40(d,J＝6.5Hz,1H),5.25(d,J＝4.1Hz,1H),4.04-3.99(m,1H),3.97-3.92(m,1H),1.68-1.61(m,1H),1.52-1.46(m,1H),1.30(d,J＝7.0Hz,3H),1.03(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:345。
实施例23
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-[环丙基(羟基)甲基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
2-环丙基乙醛的制备
向草酰氯(7.4mL,87mmol)的DCM(100mL)溶液中于-78℃滴加DMSO(12.4mL,174mmol)并将溶液于-78℃搅拌15分钟，然后向反应溶液中加入环丙基乙基醇(5g,58mmol,溶于DCM 10mL)。于-78℃搅拌1小时后，向反应溶液中加入TEA(40.4ml,290mmol)。将反应溶液升温至室温并继续搅拌30分钟。用水(50ml)终止反应并用DCM(50mL)萃取3次。将有机相合并，用饱和NH4Cl溶液、水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥。将有机层浓缩并将残余物分馏得到1.3g无色油状2-环丙基乙醛(化合物23a)。
化合物23a:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.64-9.76(m,1H),2.28-2.37(m,2H),0.89-0.98(m,1H),0.51(dd,J＝8.16,1.63Hz,2H),0.14(dd,J＝4.83,1.44Hz,2H)。
2-环丙基-2-羟基-乙醛的制备
将2-环丙基乙醛(1.3g,15.5mmol)、(S)-(-)-α,α-二苯基-2-吡咯烷甲醇三甲基硅烷基醚(0.5g,1.5mmol)和氢醌(0.17g,1.6mmol)在THF(100mL)中的混合物于0℃下搅拌。向反应液中加入过氧化苯甲酰(4.2g,17.1mmol)。于0℃至25℃搅拌4小时后，将反应混合物倒入1N HCl并用乙酸乙酯(50mL)萃取3次。将有机层合并并用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到1.6g棕色油状2-环丙基-2-羟基-乙醛(化合物23b)。
化合物23b:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.68(s,1H),7.99-8.08(m,2H),7.72(s,1H),7.50-7.63(m,2H),4.75(d,J＝9.16Hz,1H),1.22-1.33(m,1H),0.62-0.80(m,3H),0.48-0.57(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:205。
[环丙基-[(2S,4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基]苯甲酸酯和[环丙基-[(2R,4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基]苯甲酸酯的制备
将2-环丙基-2-羟基-乙醛(1.6g,7.8mmol)和(2S)-2-巯基丙酸(0.83g,7.8mmol)的混合物于50℃搅拌过夜。反应完成后，将反应溶液用乙酸乙酯(50mL)稀释，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到[环丙基-[(2S,4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基]苯甲酸酯(化合物23c-S)和[环丙基-[(2S,4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基]苯甲酸酯(化合物23c-R)。化合物23c-S和23c-R的构型按照与化合物21d-S和21d-R类似的方式确定。
化合物23c-S:0.6g,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.03-8.11(m,2H),7.58-7.67(m,1H),7.43-7.55(m,2H),5.68-5.74(m,1H),4.72(dd,J＝9.29,3.26Hz,1H),3.94(q,J＝7.07Hz,1H),1.54-1.59(m,3H),1.35-1.42(m,1H),0.70-0.79(m,1H),0.59-0.70(m,2H),0.47-0.59(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:293。
化合物23c-R:0.9g,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.01-8.14(m,2H),7.57-7.65(m,1H),7.43-7.52(m,2H),5.67-5.75(m,1H),4.90(dd,J＝8.53,4.39Hz,1H),4.02(q,J＝7.03Hz,1H),1.63(d,J＝6.90Hz,3H),1.13-1.24(m,1H),0.71-0.81(m,1H),0.52-0.70(m,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:293。
[[(2S,4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]苯甲酸酯的制备
向[环丙基-[(2S,4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基]苯甲酸酯(0.6g,2.1mmol)的干燥THF(15mL)溶液中于-78℃及氮气氛下滴加三-叔丁氧基氢化锂铝(1.0M的THF溶液,3.1mL,3.1mmol)。将反应混合物于0℃搅拌2小时。然后向反应液中加入吡啶(0.83mL,10.3mmol)、乙酸酐(0.97mL,10.3mmol)和DMAP(0.75g,6.2mmol)。将反应混合物室温搅拌过夜并用饱和NH4Cl溶液终止反应。将溶液用DCM(50mL)萃取3次。将有机层合并并用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到0.5g无色油状的[[(2S,4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]苯甲酸酯(化合物23d)。MS实测值(ESI+)[(M+NH4)+]:354。
[[(2S,4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]苯甲酸酯的制备
向5-氨基-7-羟基-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(340mg,1.86mmol)的CH3CN(10mL)溶液中加入BSA(1.6mL,6.5mmol)。将混合物于60℃搅拌直至形成清澈的溶液。真空除去溶剂。将残余物重新溶于DCM(20mL)。向溶液中加入[(S)-[(2S,4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]苯甲酸酯(500mg,1.5mmol)和三甲基碘硅烷(0.57mL,4.1mmol)。将反应混合物室温搅拌过夜，用饱和NaHCO3溶液终止反应。将溶液用DCM(50mL)萃取3次。将有机层合并并用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:3甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到0.15g无色油状的[[(2S,4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]苯甲酸酯(化合物23e)(4种异构体,比例8:12:2:3)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:461。
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-[环丙基(羟基)甲基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向[[(2S,4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]苯甲酸酯(150mg,0.33mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入K2CO3(180mg,1.3mmol)。在室温下搅拌5小时后，将反应混合物用HOAc(0.16g,2.6mmol)中和至pH 7。将反应溶液浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化和分离得到白色粉末状的实施例23-A(非对映体1)、实施例23-B(非对映体2)、实施例23-C(非对映体3)和实施例23-D(非对映体4)。
实施例23-A:6mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:5.83(d,J＝8.78Hz,1H),5.26(d,J＝5.02Hz,1H),4.49-4.60(m,1H),3.13(dd,J＝7.84,5.08Hz,1H),1.26-1.38(m,3H),0.91-1.01(m,1H),0.46-0.57(m,2H),0.33-0.46(m,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:357。
实施例23-B:1mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:5.83-5.88(m,1H),5.28-5.32(m,1H),4.41-4.47(m,1H),3.21-3.24(m,1H),1.24-1.35(m,3H),0.90-0.95(m,1H),0.47-0.58(m,2H),0.39-0.47(m,1H),0.31-0.36(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:357。
实施例23-C:12mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.66(d,J＝6.27Hz,1H),5.85(d,J＝4.89Hz,1H),4.16(q,J＝6.74Hz,1H),2.96(dd,J＝8.53,4.89Hz,1H),1.30(d,J＝6.90Hz,3H),1.01-1.09(m,1H),0.49-0.60(m,2H),0.35-0.45(m,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:357。
实施例23-D:4mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.67(d,J＝6.27Hz,1H),5.85(d,J＝3.64Hz,1H),4.13-4.21(m,1H),3.15-3.19(m,1H),1.28(d,J＝6.90Hz,3H),0.92(dt,J＝8.13,4.91Hz,1H),0.49-0.58(m,2H),0.33-0.42(m,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:357。
实施例24
5-氨基-3-[(4S)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
实施例29的合成方案:
1-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]丁-2-炔基苯甲酸酯的制备
在0℃及氮气氛下，向2-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基乙醛(3.48g,20mmol)的无水THF(20mL)溶液中滴加丙炔基溴化镁(0.5M的THF溶液,48mL,20mmol)。将反应混合物于0℃搅拌2小时。然后向反应液中加入TEA(4.04g,40mmol)和苯甲酸酐(6.0g,25mmol)。将反应混合物室温搅拌过夜并用饱和NH4Cl溶液(50mL)终止反应。将溶液用EtOAc(50mL)萃取3次。将有机层合并并用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱纯化(用1:20乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到5.05g无色油状1-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]丁-2-炔基苯甲酸酯(化合物24a)。
化合物24a:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.06-8.15(m,2H),7.56-7.62(m,1H),7.43-7.52(m,2H),5.64-5.73(m,1H),3.89-3.98(m,2H),1.87(d,J＝2.13Hz,3H),0.88(s,9H),0.09(d,J＝12.30Hz,6H)。
1-(羟基甲基)丁-2-炔基苯甲酸酯的制备
向1-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]丁-2-炔基苯甲酸酯(954mg,3mmol)在THF(15mL)和MeOH(5mL)的混合物中的溶液中加入盐酸(1N,3mL,3mmol)。将溶液室温搅拌4小时并向溶液中加入KHCO3(378mg,3mmol)。将反应液真空浓缩并将残余物在EtOAc和H2O之间进行分配。将有机层分离并将水相用EtOAc(30mL)萃取两次。将有机层合并并用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩得到670mg黄色固体状1-(羟基甲基)丁-2-炔基苯甲酸酯(化合物24b)，将其直接用于下一步骤。
化合物24b:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.05-8.19(m,2H),7.59(m,1H),7.43-7.52(m,2H),5.63-5.73(m,1H),3.93(d,J＝5.14Hz,2H),1.89(d,J＝2.13Hz,3H)。
1-甲酰基丁-2-炔基苯甲酸酯的制备
向1-(羟基甲基)丁-2-炔基苯甲酸酯(224mg,1.1mmol)的DCM(15mL)溶液中加入戴斯-马丁试剂(466mg,1.1mmol)。将混合物室温搅拌1小时并将溶液用硅藻土垫过滤。将滤液浓缩并通过快速硅胶色谱纯化(用1:20乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到202mg黄色油状1-甲酰基丁-2-炔基苯甲酸酯(化合物24c)。
化合物24c:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.50-9.59(m,1H),8.13-8.17(m,2H),7.61-7.67(m,1H),7.47-7.53(m,2H),5.83-5.96(m,1H),1.97(d,J＝2.51Hz,3H)。
1-[(4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯的制备
将1-甲酰基丁-2-炔基苯甲酸酯(2.02g,10.0mmol)、(2S)-2-巯基丙酸(1.06g,10mmol)和p-TsOH(5mg)的甲苯(50mL)溶液于130℃下加热共沸脱水2小时，然后将反应混合物浓缩并通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:20乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到1-[(4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯化合物24d-1(非对映体1)60mg、化合物24d-2(非对映体2)200mg、化合物24d-3(非对映体3)200mg、化合物24d-4(非对映体4)50mg。
化合物24d-1:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.08(dd,J＝1.13,8.41Hz,2H),7.62(m,1H),7.48-7.53(m,2H),5.81-5.89(m,1H),5.58-5.67(m,1H),4.08(d,J＝7.28Hz,1H),1.91(d,J＝2.01Hz,3H),1.62(d,J＝7.28Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:291。
化合物24d-2:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.10-8.17(m,2H),7.62-7.69(m,1H),7.50-7.53(m,2H),5.79-5.86(m,1H),5.68(d,J＝6.53Hz,1H),4.01-4.10(m,1H),1.91(d,J＝2.26Hz,3H),1.65(d,J＝7.03Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:291。
化合物24d-3:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.15(dd,J＝1.13,8.16Hz,2H),7.62-7.67(m,1H),7.49-7.53(m,3H),5.79-5.87(m,1H),5.70(s,1H),4.02-4.13(m,1H),1.91(d,J＝2.26Hz,3H),1.70(d,J＝7.03Hz,3H).MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:291。
化合物24d-4:MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:291。
1-[(4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯的制备
向1-[(4S)-4-甲基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯(300mg,1.0mmol,化合物24d-1和化合物24d-2的混合物)的干燥THF(15mL)溶液中于-78℃下加入三-叔丁氧基氢化锂铝(300mg,1.2mmol)。将反应混合物于0℃搅拌2小时。然后向反应液中加入TEA(0.8mL,6.7mmol)、乙酸酐(0.5mL,5.2mmol)。将反应混合物室温搅拌过夜并用饱和NH4Cl溶液终止反应。将混合物用EtOAc(50mL)萃取3次。将有机层合并并用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到300mg无色油状1-[(4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯(化合物24e)。MS实测值(ESI+)[(M+NH4)+]:352。
1-[(4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯的制备
向5-氨基-7-羟基-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(368mg,2mmol)的CH3CN(30mL)溶液中加入BSA(1.2g,6mmol)。将混合物于70℃下加热形成清澈的溶液。真空除去溶剂。将残余物溶于DCM(15mL)。向上述溶液中加入1-[(4S)-5-乙酰氧基-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯(300mg,0.9mmol)和三甲基碘硅烷(800mg,4mmol)。将反应混合物于40℃搅拌过夜，然后用饱和NaHCO3溶液终止反应。将溶液用DCM(50mL)萃取3次。将合并的有机层用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥然后浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(用1:20甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到54mg无色油状1-[(4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯(化合物24f)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:457。
5-氨基-3-[(4S)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向1-[(4S)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基苯甲酸酯(54mg,0.12mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入K2CO3(138mg,1.0mmol)。将反应液室温搅拌2小时并将反应溶液用HOAc(120mg,2.0mmol)中和至pH 7。将反应溶液浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化和分离得到白色粉末状的实施例24-A(非对映体1)、实施例24-B(非对映体2)、实施例24-C(非对映体3)和实施例24-D(非对映体4)。
实施例24-A:1.4mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:5.87(d,J＝9.03Hz,1H),5.12(d,J＝6.78Hz,1H),4.57-4.65(m,1H),4.46-4.52(m,1H),1.84(d,J＝2.13Hz,3H),1.29(d,J＝6.53Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:355。
实施例24-B:1.6mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.69(d,J＝6.02Hz,1H),5.77(d,J＝3.51Hz,1H),4.40-4.46(m,1H),4.22(s,1H),1.86(d,J＝2.26Hz,2H),1.25(d,J＝7.03Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:355。
实施例24-C:1.3mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.67(d,J＝6.27Hz,1H),5.73(d,J＝6.02Hz,1H),4.34-4.39(m,1H),4.16-4.24(m,1H),1.86(d,J＝2.26Hz,3H),1.27(d,J＝6.78Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:355。
实施例24-D:1.2mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:5.85(d,J＝9.03Hz,1H),5.22(d,J＝4.27Hz,1H),4.56(dd,J＝2.07,4.33Hz,1H),4.49(dd,J＝6.46,9.10Hz,1H),1.85(d,J＝2.26Hz,3H),1.28(d,J＝6.53Hz,3H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:355。
实施例25
3-[4-烯丙基-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-氨基-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮
实施例25的合成方案:
2,2-二甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮的制备
于0℃及剧烈搅拌下，向巯基乙酸(12mL,172.8mmol)中滴加2-甲氧基丙烷(64.8mL,691.2mmol)。加料完成后，将混合物于70℃搅拌过夜。将混合物冷却至室温。然后将反应混合物用乙醚稀释，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后真空浓缩。将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:10至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到黄色油。将该黄色油分馏得到5.8g浅黄色油状的2,2-二甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(化合物25a)。
化合物25a:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:3.84(s,2H),1.73-1.83(m,6H)。
4-烯丙基-2,2-二甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮的制备
-78℃下，向2,2-二甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(1.6g,11mmol)的THF(20mL)溶液中滴加LiHMDS(1.3M的THF溶液,10mL,13mmol)并在加料后将反应溶液在该温度下保持1小时。向溶液中加入烯丙基溴(1.2mL,13.2mmol)。于-78℃搅拌2小时后，将反应溶液用饱和NH4Cl溶液终止反应。将混合物用乙酸乙酯(50mL)萃取3次。将有机层合并，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:20至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到0.8g无色油状的4-烯丙基-2,2-二甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(化合物25b)。
化合物25b:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:5.76-5.86(m,1H),5.09-5.26(m,2H),4.17-4.25(m,1H),2.97(dddt,J＝14.68,5.99,4.36,1.41,1.41Hz,1H),2.50-2.61(m,1H),1.73-1.82(m,6H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:173。
2-巯基戊-4-烯酸的制备
向4-烯丙基-2,2-二甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-酮(0.8g,4.6mmol)的THF(5mL)溶液中加入5ml 1M LiOH水溶液。将混合物室温搅拌过夜，然后小心地加入HCl水溶液(1N)调至pH 4至5。将溶液用乙醚(50mL)萃取3次，用无水硫酸钠干燥然后浓缩得到0.6g 2-巯基戊-4-烯酸(化合物25c)。
化合物25c:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:5.75-5.90(m,1H),5.11-5.25(m,2H),3.44-3.53(m,1H),2.63-2.77(m,1H),2.48-2.60(m,1H)。MS实测值(ESI-)[(M-H)-]:131。
(4-烯丙基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基)甲基苯甲酸酯的制备
将2-巯基戊-4-烯酸(0.6g,4.5mmol)和2-氧代乙基苯甲酸酯(0.9g,5.4mmol)在DCM(10mL)中的混合物于50℃搅拌6小时。将混合物冷却至室温。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:10至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到0.6g浅黄色油状(4-烯丙基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基)甲基苯甲酸酯(化合物25d)。
化合物25d:1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.07(ddd,J＝9.35,8.22,1.00Hz,2H),7.61(dd,J＝7.40,1.13Hz,1H),7.43-7.52(m,2H),5.78-5.90(m,1H),5.70-5.78(m,1H),5.14-5.28(m,2H),4.52-4.64(m,2H),4.07-4.17(m,1H),2.86-2.99(m,1H),2.49-2.64(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:279。
4-烯丙基-5-羟基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基苯甲酸酯的制备
-78℃下，向(4-烯丙基-5-氧代-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基)甲基苯甲酸酯(460mg,1.7mmol)的无水THF(5mL)溶液中滴加三-叔丁氧基氢化锂铝(1M的THF溶液,2.5mL,2.5mmol)。在室温下搅拌2小时后，加入吡啶(0.66mL,8.3mmol)、乙酸酐(0.8mL,8.4mmol)和DMAP(0.6g,5mmol)。将反应混合物室温搅拌过夜然后用饱和NH4Cl溶液终止反应。将溶液用DCM(50mL)萃取3次。将有机层合并，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:10至1:5乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到0.5g无色油状4-烯丙基-5-羟基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基苯甲酸酯(化合物25e)。MS实测值(ESI+)[(M+NH4)+]:340。
[4-烯丙基-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基苯甲酸酯的制备
向5-氨基-7-羟基-3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮(200mg,1.1mmol)的CH3CN(12mL)溶液中加入BSA(1mL,4mmol)。将混合物于60℃加热直至形成清澈的溶液。真空除去溶剂。将残余物溶于DCM(10mL)。向上述溶液中加入4-烯丙基-5-羟基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基苯甲酸酯(354mg,1.1mmol)和三甲基碘硅烷(0.34mL,2.4mmol)。在室温下搅拌过夜，将反应混合物用饱和NaHCO3溶液终止反应。将溶液用DCM(50mL)萃取3次。将有机层用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后浓缩。将残余物通过快速硅胶柱色谱纯化(用1:20甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到90mg无色油状的[4-烯丙基-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基苯甲酸酯(化合物25f)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:447。
3-[4-烯丙基-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-氨基-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮的制备
向[4-烯丙基-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]甲基苯甲酸酯(90mg,0.2mmol)的甲醇(5ml)溶液中加入K2CO3(111mg,0.8mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应液用HOAc中和至pH 7并浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色粉末状的实施例25-A(非对映体1)、实施例25-B(非对映体2)、实施例25-C(非对映体3)和实施例25-D(非对映体4)。
实施例25-A:3.3mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:5.91(d,J＝8.78Hz,1H),5.71-5.79(m,1H),5.26(t,J＝4.52Hz,1H),5.10(dd,J＝17.07,1.51Hz,1H),5.00(d,J＝10.29Hz,1H),4.62-4.69(m,1H),3.77(d,J＝4.52Hz,2H),2.34-2.47(m,2H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:343。
实施例25-B:6.3mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.69(d,J＝6.27Hz,1H),5.86(t,J＝4.52Hz,1H),5.70-5.82(m,1H),4.96-5.09(m,2H),4.11-4.19(m,1H),3.69(dd,J＝4.52,2.76Hz,2H),2.51-2.59(m,1H),2.21-2.32(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:343。
实施例25-C:4.8mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.07(d,J＝7.53Hz,1H),5.71-5.83(m,2H),5.14(dd,J＝17.07,1.51Hz,1H),5.03(d,J＝10.29Hz,1H),4.60-4.67(m,1H),3.74-3.81(m,1H),3.66-3.72(m,1H),2.50-2.59(m,1H),2.39(dt,J＝14.93,7.34Hz,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:343。
实施例25-D:3.0mg,1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:6.41(d,J＝6.53Hz,1H),5.68-5.77(m,1H),5.32(s,1H),4.96-5.07(m,2H),3.98-4.04(m,1H),3.89(t,J＝4.39Hz,2H),2.47-2.55(m,1H),2.34-2.42(m,1H)。MS实测值(ESI+)[(M+H)+]:343。
实施例26
HEK293-Blue-hTLR-7细胞试验：
稳定的HEK293-Blue-hTLR-7细胞系购自InvivoGen(Cat.#：hkb-htlr7,SanDiego,California,USA)。这些细胞被设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR7的刺激。将SEAP(分泌型胚胎碱性磷酸酶)报道基因置于与5个NF-κB和AP-1-结合位点融合的IFN-β最小启动子控制下。通过经用TLR7配体刺激HEK-Blue hTLR7细胞活化NF-κB和AP-1来诱导SEAP。因此，在刺激人TLR7时，NF-κB启动子将调节报道基因表达20小时。用QUANTI-BlueTM试剂盒(目录号#：rep-qb1,Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长处测定细胞培养物上清液的SEAP报道基因活性，这是一种在碱性磷酸酶的存在下变成紫色或蓝色的检测培养液。
将HEK293-Blue-hTLR7细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度在96-孔板中的Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)中以180μL的体积温育24小时，所述Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)包含4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mLNormocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活胎牛血清。然后将HEK293-Blue-hTLR-7细胞与添加的20μL系列稀释的测试化合物一起在最终浓度为1％的DMSO的存在下温育，并且在37℃下、在CO2温育箱中温育20小时。然后将来自每个孔的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液一起在37℃下温育2小时，然后在620～655nm下用分光光度计读取吸光度。TLR7活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广为接受，因此类似的报道基因试验也被广泛地应用于评价TLR7激动剂(Tsuneyasu Kaisho和Takashi Tanaka,Trends inImmunology,第29卷，第7期，2008年7月，329页.sci；Hiroaki Hemmi等人,NatureImmunology 3,196-200(2002)。
本发明化合物在HEK293-hTLR-7试验中的TLR7激动活性列于表1中。发现实施例1-25的化合物具有约4.5μM至约180μM的EC50。
表1：化合物在HEK293-hTLR-7试验中的活性
实施例27
式(I)的前药的代谢：
进行研究以评价本发明的式(Ia)的前药向式(I)化合物的代谢转化。如果作为前药，式(Ia)的前药在体内可以被代谢成式(I)的活性化合物和本发明的其它化合物。通常用肝细胞来评价前药在动物或人体内的代谢转化程度。
进行研究以评价前药实施例5-A、实施例6-A、实施例11-A和实施例12-A在人肝细胞的存在下代谢转化成相应的活性形式实施例4-A和实施例10-A。在本研究中监测活性形式实施例4-A和实施例10-A的形成。为了比较，还评价了泛昔洛韦向喷昔洛韦的代谢转化。
肝细胞混悬液
冷藏保存的肝细胞铺板培养液(目录号#：PY-HMD-01)购自RILD ResearchInstitute for Liver Diseases(Shanghai)Co.Ltd，冷藏保存的人肝细胞(目录号#：X008005,批号#：VRR)购自In Vitro Technologies(Baltimore,MD)。
由在铺板培养液中的浓度为1.8×106细胞/mL的冷藏保存的肝细胞制备肝细胞储备混悬液。
化合物的工作溶液
将化合物溶于DMSO制成50mM储备溶液。将10μL储备溶液稀释到5mL铺板培养液中得到100μM工作溶液。
温育
在24-孔细胞培养板中，通过混合200μL肝细胞混悬液(犬或人)和200μL工作溶液制备反应混悬液。最终温育物包含0.9×106细胞/mL和50μM化合物。将上述混合物在37℃下、在加湿的5％CO2气氛中温育，以150rpm振摇。
分析样品的制备
在温育180min后，将200μL温育混合物转入1.5mL试管并用400μL终止溶液(含有0.2μM甲苯磺丁脲作为内标的冰冷乙腈)猝灭。将样品以12000rpm离心10分钟，并且将得到的上清液进行LC-MS/MS分析。
按照如下方式制备校准曲线。向200μL细胞混悬液(细胞密度为180万细胞/mL)中加入198μL肝细胞铺板培养液和2μL在DMSO中的适当浓度的化合物。充分混合样品，并且将200μL该混合物转移到400uL终止溶液(参见上文)中。标准曲线范围为1μM-25μM。
生物分析
用API5500LC-MC/MC仪器以ESI-正MRM模式定量化合物。前药转化和代谢物生成的结果概述在表2中。
表2：与50μM前药温育3小时后在人肝细胞中形成的代谢物浓度
在人肝细胞中，实施例5-A、实施例6-A、实施例11-A和实施例12-A的化合物以及泛昔洛韦分别被代谢成实施例4-A、实施例10-A的相应的活性代谢物和喷昔洛韦。
实施例28
TLR7激动剂实施例4-A活化鼠TLR7
使用购自InvivoGen(目录号#：hkb-mtlr7,San Diego,California,USA)的稳定的HEK293-Blue-mTLR7细胞系评价TLR7激动剂实施例4-A活化鼠TLR7的效能。与实施例26中所述的HEK293-Blue-hTLR7类似，HEK293-Blue-mTLR7被设计用于通过监测NF-κB活化来研究鼠TLR7的刺激。将SEAP报道基因置于与5个NF-κB和AP-1-结合位点融合的IFN-β最小启动子控制下。通过用TLR7配体刺激鼠TLR7时NF-κB和AP-1活化来诱导SEAP表达。用QUANTI-BlueTM试剂盒(目录号#：rep-qb1,Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长处测定细胞培养物上清液中的SEAP表达，这是一种在碱性磷酸酶的存在下变成紫色/蓝色的检测培养液。
将HEK293-Blue-mTLR7细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度在96-孔板中的Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)中以180μL的体积温育24小时，所述Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)包含4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mLNormocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活胎牛血清。然后将HEK293-Blue-mTLR7细胞与20μL系列稀释的测试化合物一起在最终浓度为1％的DMSO的存在下在37℃下、在CO2温育箱中温育20小时。将来自每个孔的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液一起在37℃下温育2小时，然后在640nm下用分光光度计读取吸光度。
如图1中所示，实施例4-A以剂量依赖性方式活化鼠TLR7，EC50为7.8μM。
实施例29
实施例6-A减少AAV-HBV模型中的HBV DNA和HBsAg
使用AAV-HBV小鼠模型评价实施例6-A的体内抗病毒效能。通过给C57BL/6小鼠注射携带可复制HBV(乙型肝炎病毒)基因组的重组腺相关病毒(AAV)(AAV-HBV)生成这种HBV感染的小鼠模型。在感染后3周内，在感染小鼠的血清中检测到高水平的HBV病毒标志物，例如HBV基因组DNA和HBsAg(HBV表面抗原)。由于具有持续的HBV病毒血症和完全有效的免疫系统，因此AAV-HBV模型适合于研究实施例6-A的体内效能。
为了建立AAV-HBV模型，从中国科学院上海实验动物中心(SLAC)购买总共15只4周龄的无特异病原体的雄性C57BL/6小鼠，并且按照机构动物保护指南(InstitutionalAnimal Care guidelines)将它们圈养在动物护理设施中的单独通风的温度和光照条件受控的笼中。AAV-HBV病毒储备溶液可购自北京五加和分子医学研究所有限公司(中国,北京)。通过尾静脉注射给C57BL/6小鼠注射200μL在盐水缓冲液中的重组病毒。在注射后的第14天从小鼠取血以监测血清中HBsAg、HBeAg和HBV基因组DNA。在注释后的第29天，将15只小鼠根据它们的HBV生物标志物水平随机分成3组，然后如表3中所示开始接受治疗。
表3.AAV-HBV小鼠模型中的体内研究
用溶媒安慰剂(2％Klucel LF、0.1％聚山梨醇酯80和0.1％对羟苯甲酸水溶液)治疗第1组小鼠；第2和第3组的小鼠分别用30mg/kg和100mg/kg的实施例6-A进行治疗，隔天1次(QOD)。将全部小鼠口服给药总计6周。每周2次收集血清样品以便监测HBV生物标志物水平。使用CLIA试剂盒(Autobio Diagnostics Co.,Ltd,中国郑州)，根据制造商的说明书测定血清HBsAg。HBsAg的检测下限为0.1ng/mL。使用500倍血清稀释液(对于HBsAg)获得标准曲线的线性范围内的值。使用MagNA纯96DNA和病毒NA小体积试剂盒(Roche)，按照制造商的说明书提取血清HBV DNA。通过实时定量PCR(qPCR)，使用用于特异性扩增和检测来自核苷酸2969-3096的128bp HBV基因组区的HBV-特异性引物和探针组分析DNA样品。
如图2中所示，在6周的治疗后，30mg/kg的实施例6-A诱导超过2-log的HBV DNA减少和0.8-log的HBsAg减少。在100mg/kg的较高剂量下，在治疗结束时，实施例6-A将HBV DNA减少了3-log以上并且将HBsAg减少了2.4-log。本研究结果清楚地证实了实施例6-A的体内抗病毒效能并且进一步印证了本发明化合物在开发用于感染性疾病的新疗法中的潜能。

Claims (29)

1.式(I)的化合物,
其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、C2-6链烯基、C3-7环烷基和C1-6烷基；
R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基C2-6炔基、C2-6链烯基、C2-6炔基、苯基和噻吩基；
R6是氢、C1-6烷氧基羰基或C1-6烷基羰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
2.根据权利要求1的化合物，其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、甲基、环丙基和烯丙基；
R4和R5彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丁基、环丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-环丙基乙炔基、烯丙基、苯基、3-噻吩基和2-噻吩基；
R6是氢、乙氧基羰基或乙酰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
3.根据权利要求1或2的化合物，其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、C2-6链烯基和C1-6烷基；
R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基C2-6炔基、C2-6链烯基、C2-6炔基和2-噻吩基；
R6是氢或C1-6烷基羰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
4.根据权利要求1至3任意一项的化合物，其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢、甲基和烯丙基；
R4和R5彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丁基、环丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-环丙基乙炔基、烯丙基和2-噻吩基；
R6是氢或乙酰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
5.根据权利要求1至4任意一项的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R2和R3彼此独立地选自氢和C1-6烷基。
6.根据权利要求1至5任意一项的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R2和R3彼此独立地选自氢和甲基。
7.根据权利要求1至6任意一项的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和2-噻吩基。
8.根据权利要求1至7任意一项的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R4和R5彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、环丙基、乙炔基、1-丙炔基、烯丙基和2-噻吩基。
9.根据权利要求1至8任意一项的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R6是氢。
10.根据权利要求1至9任意一项的化合物，其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢和C1-6烷基；
R4和R5彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基和2-噻吩基；
R6是氢；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
11.根据权利要求10的化合物，其中
R1是羟基；
R2和R3彼此独立地选自氢和甲基；
R4和R5彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、环丙基、乙炔基、1-丙炔基、烯丙基和2-噻吩基；
R6是氢；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
12.根据权利要求1的化合物，选自:
5-氨基-3-[2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[-环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯；
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯；
1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2,7-二氧代-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(3-环丙基-1-羟基-丙-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基乙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基-3-甲基-丁基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-3-烯基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基戊基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[羟基(2-噻吩基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(4S)-2-[(1S)-1-羟基丙基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-[环丙基(羟基)甲基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(4S)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
和3-[4-烯丙基-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-5-氨基-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
13.根据权利要求12的化合物，选自:
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丙-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基乙基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-3-烯基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基戊基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[羟基(2-噻吩基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
5-氨基-3-[(4S)-2-[(1S)-1-羟基丙基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
和5-氨基-3-[(2S,4S)-2-[环丙基(羟基)甲基]-4-甲基-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]-6H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
14.式(Ia)的化合物,
其中
R7和R8彼此独立地选自氢、C2-6链烯基和C1-6烷基；
R9和R10彼此独立地选自氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、C3-7环烷基C2-6炔基、C2-6链烯基、C2-6炔基和2-噻吩基；
R11是氢或C1-6烷基羰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
15.根据权利要求14的化合物，其中
R7和R8彼此独立地选自氢、甲基和烯丙基；
R9和R10彼此独立地选自氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丁基、环丙基、乙炔基、1-丙炔基、2-环丙基乙炔基、烯丙基和2-噻吩基；
R11是氢或乙酰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
16.根据权利要求14或15的化合物，其中
R7和R8是氢；
R9和R10彼此独立地选自氢、C2-6炔基和C3-7环烷基；
R11是氢或C1-6烷基羰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
17.根据权利要求14至16任意一项的化合物，其中
R7和R8是氢；
R9和R10彼此独立地选自氢、1-丙炔基和环丙基；
R11是氢或乙酰基；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
18.根据权利要求14至17任意一项的化合物，选自:
5-氨基-3-[(2S)-2-(羟基甲基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-[-环丙基(羟基)甲基]-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
[[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]-环丙基-甲基]乙酸酯；
5-氨基-3-[(2S,5R)-2-(1-羟基丁-2-炔基)-1,3-氧硫杂环戊烷-5-基]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮；
和1-[(2S,5R)-5-(5-氨基-2-氧代-噻唑并[4,5-d]嘧啶-3-基)-1,3-氧硫杂环戊烷-2-基]丁-2-炔基乙酸酯；
或其可药用盐、对映体或非对映体。
19.制备根据权利要求1至18任意一项的化合物的方法，包括如下步骤:(a)将式(IX)的化合物
与氟化物试剂反应，其中Ry是氢或羟基；
(b)将式(XV)的化合物
与还原剂反应，其中Ry是氢或羟基；
(c)将式(XIX)的化合物
与还原剂反应，其中Ry是氢或羟基；R是R4、R5、R9或R10；
(d)将式(XXII)的化合物,
与酸反应，其中Ry是氢或羟基；R是R4、R5、R9或R10；
(e)将式(XXIII)的化合物,
与酸反应，其中Ry是氢或羟基；R是R4、R5、R9或R10；或者
(f)将式(XXIX)的化合物,
与碱反应，其中Ry是氢或羟基；R是R4、R5、R9或R10；
其中R2、R3、R4、R5、R6、R9和R10如权利要求1至18中任意一项所定义。
20.用作治疗活性物质的权利要求1至18任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
21.包含权利要求1至18任意一项的化合物和治疗惰性载体的药物组合物。
22.权利要求1至18任意一项的化合物在治疗或预防乙型肝炎病毒感染中的用途。
23.权利要求1至18任意一项的化合物在制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物中的用途。
24.权利要求1至18任意一项的化合物作为TLR7激动剂的用途。
25.权利要求1至18任意一项的化合物在诱导干扰素-α产生中的用途。
26.用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的权利要求1至18任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
27.根据权利要求19的方法制备的权利要求1至18任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
28.用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括施用治疗有效量的权利要求1至18任意一项所定义的化合物。
29.如上所述的本发明。
CN201580053147.XA 2014-10-11 2015-10-08 用于治疗感染性疾病的化合物 Withdrawn CN107001386A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2014088404 2014-10-11
CNPCT/CN2014/088404 2014-10-11
CNPCT/CN2015/085653 2015-07-31
CN2015085653 2015-07-31
PCT/EP2015/073202 WO2016055553A1 (en) 2014-10-11 2015-10-08 Compounds for use in the treatment of infectious diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107001386A true CN107001386A (zh) 2017-08-01

Family

ID=54266570

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580053147.XA Withdrawn CN107001386A (zh) 2014-10-11 2015-10-08 用于治疗感染性疾病的化合物

Country Status (5)

Country Link
US (1) US10000512B2 (zh)
EP (1) EP3204392A1 (zh)
JP (1) JP2017531655A (zh)
CN (1) CN107001386A (zh)
WO (1) WO2016055553A1 (zh)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107743491B (zh) * 2015-05-08 2020-08-21 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗和预防病毒感染的新的氧硫杂环戊烷甲酸及其衍生物
WO2017211791A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of an hbsag inhibitor and a tlr7 agonist
EP3970750A1 (en) * 2016-09-13 2022-03-23 F. Hoffmann-La Roche AG Combined treatment with a tlr7 agonist and an hbv capsid assembly inhibitor
PE20191353A1 (es) 2016-10-14 2019-10-01 Prec Biosciences Inc Meganucleasas disenadas especificamente para el reconocimiento de secuencias en el genoma del virus de la hepatitis b
AU2018392213B2 (en) 2017-12-20 2021-03-04 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the STING adaptor protein
CA3084582A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
PL3759109T3 (pl) 2018-02-26 2024-03-04 Gilead Sciences, Inc. Podstawione związki pirolizyny jako inhibitory replikacji hbv
US10870691B2 (en) 2018-04-05 2020-12-22 Gilead Sciences, Inc. Antibodies and fragments thereof that bind hepatitis B virus protein X
TW202005654A (zh) 2018-04-06 2020-02-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 ２，２，─環二核苷酸
TWI818007B (zh) 2018-04-06 2023-10-11 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 2'3'-環二核苷酸
CN111954675A (zh) 2018-04-06 2020-11-17 捷克共和国有机化学与生物化学研究所 3’3’-环二核苷酸
TW201945388A (zh) 2018-04-12 2019-12-01 美商精密生物科學公司 對b型肝炎病毒基因體中之識別序列具有特異性之最佳化之經工程化巨核酸酶
WO2019211799A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide
WO2020028097A1 (en) 2018-08-01 2020-02-06 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of (r)-11-(methoxymethyl)-12-(3-methoxypropoxy)-3,3-dimethyl-8-0x0-2,3,8,13b-tetrahydro-1h-pyrido[2,1-a]pyrrolo[1,2-c] phthalazine-7-c arboxylic acid
TWI721623B (zh) 2018-10-31 2021-03-11 美商基利科學股份有限公司 經取代之6-氮雜苯并咪唑化合物
CA3116347A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds having hpk1 inhibitory activity
BR112021015577A2 (pt) 2019-02-08 2021-10-05 Research & Business Foundation Sungkyunkwan University Complexo-colesterol agonista do receptor toll-like 7 ou 8 e uso do mesmo
KR20210137518A (ko) 2019-03-07 2021-11-17 인스티튜트 오브 오가닉 케미스트리 앤드 바이오케미스트리 에이에스 씨알 브이.브이.아이. 3'3'-사이클릭 다이뉴클레오티드 및 이의 프로드럭
CN113543851A (zh) 2019-03-07 2021-10-22 捷克共和国有机化学与生物化学研究所 2’3’-环二核苷酸及其前药
WO2020178768A1 (en) 2019-03-07 2020-09-10 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide as sting modulator
TWI751516B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
TWI751517B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
EP3972695A1 (en) 2019-05-23 2022-03-30 Gilead Sciences, Inc. Substituted exo-methylene-oxindoles which are hpk1/map4k1 inhibitors
EP4017476A1 (en) 2019-08-19 2022-06-29 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations of tenofovir alafenamide
AR120096A1 (es) 2019-09-30 2022-02-02 Gilead Sciences Inc Vacunas para vhb y métodos de tratamiento de vhb
US20230031465A1 (en) 2019-12-06 2023-02-02 Precision Biosciences, Inc. Optimized engineered meganucleases having specificity for a recognition sequence in the hepatitis b virus genome
TW202137987A (zh) 2019-12-24 2021-10-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於治療ｈｂｖ之靶向ｈｂｖ的治療性寡核苷酸及ｔｌｒ７促效劑之醫藥組合
CN114828852A (zh) 2019-12-24 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗hbv的靶向hbv的抗病毒药剂和/或免疫调节剂的药物组合
WO2021177679A1 (ko) 2020-03-02 2021-09-10 성균관대학교산학협력단 병원균 외벽 성분 기반 생병원체 모방 나노 입자 및 그 제조 방법
AU2021237718B2 (en) 2020-03-20 2023-09-21 Gilead Sciences, Inc. Prodrugs of 4'-C-substituted-2-halo-2'-deoxyadenosine nucleosides and methods of making and using the same
US20230355750A1 (en) 2020-08-04 2023-11-09 Progeneer Inc. Kinetically acting adjuvant ensemble
JP2023536954A (ja) 2020-08-04 2023-08-30 プロジェニア インコーポレイテッド 活性化部位が一時的に不活性化したトール様受容体７または８作用薬と機能性薬物の結合体およびその用途
WO2022031021A1 (ko) 2020-08-04 2022-02-10 성균관대학교산학협력단 동력학적 제어가 가능한 아주번트를 포함하는 mrna 백신
KR20240006683A (ko) 2021-05-13 2024-01-15 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 TLR8 조절 화합물과 항-HBV siRNA 치료제의 조합물
US11932634B2 (en) 2021-06-23 2024-03-19 Gilead Sciences, Inc. Diacylglycerol kinase modulating compounds
US11926628B2 (en) 2021-06-23 2024-03-12 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CA3222439A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
WO2022271684A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CA3234478A1 (en) 2021-11-11 2023-05-19 Souphalone LUANGSAY Pharmaceutical combinations for treatment of hbv

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101212968A (zh) * 2004-12-17 2008-07-02 安那迪斯药品股份有限公司 3,5-二取代的和3,5,7-三取代的-3H-噁唑并以及3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮化合物及其前药

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2525567T3 (es) * 2004-12-17 2014-12-26 Anadys Pharmaceuticals, Inc. Compuestos de 3H-oxazolo y 3H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-ona 3,5-disustituidos y 3,5,7-trisustituidos y profármacos de los mismos
EP2040712B1 (en) 2006-07-18 2011-03-02 Anadys Pharmaceuticals, Inc. Carbonate and carbamate prodrugs of thiazolo [4,5-d] pyrimidines
EP2358397B1 (en) 2008-10-24 2020-01-01 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5' and 2' bis-substituted nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
KR20110128947A (ko) 2009-03-20 2011-11-30 앨리오스 바이오파마 인크. 치환된 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드 유사체
US9408863B2 (en) 2011-07-13 2016-08-09 Merck Sharp & Dohme Corp. 5′-substituted nucleoside analogs and methods of use thereof for the treatment of viral diseases

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101212968A (zh) * 2004-12-17 2008-07-02 安那迪斯药品股份有限公司 3,5-二取代的和3,5,7-三取代的-3H-噁唑并以及3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮化合物及其前药

Also Published As

Publication number Publication date
US10000512B2 (en) 2018-06-19
JP2017531655A (ja) 2017-10-26
WO2016055553A1 (en) 2016-04-14
EP3204392A1 (en) 2017-08-16
US20170217990A1 (en) 2017-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107001386A (zh) 用于治疗感染性疾病的化合物
CN107592864A (zh) 用于治疗和预防病毒感染的新的取代的氨基噻唑并嘧啶二酮
EP2907802B1 (en) Cyclopropanamine compound and use thereof
CN106164079B (zh) 用于治疗和预防病毒感染的3‑取代的5‑氨基‑6H‑噻唑并[4,5‑d]嘧啶‑2,7‑二酮化合物
CN102325753B (zh) 用作激酶抑制剂的咔唑甲酰胺化合物
JP2021185177A (ja) オキサジアゼピノン誘導体及びｂ型肝炎感染症の治療におけるその使用
AU2017382360B2 (en) Compounds, compositions and methods of use
CN105001225B (zh) 脂质合成的杂环调节剂
CN102822165B (zh) 芳基甲氧基异吲哚啉衍生物和包括其的组合物及它们的使用方法
MX2015002954A (es) Nuevas 6-aminoacido-heteroarilhidropirimidinas para el tratamiento y profilaxis de la infeccion del virus de la hepatitis b.
WO2012121939A2 (en) Aminopyrazine compounds
EA035500B1 (ru) Производные сульфамоилтиофенамида и их применение в качестве медикаментов для лечения гепатита b
KR20130098269A (ko) 테트라히드로카르볼린 유도체
EP2424368A1 (en) Pyrrolotriazine compounds
JPWO2005105743A1 (ja) 含窒素複素環化合物およびその医薬用途
US5889003A (en) Flavone compounds
US20220048884A1 (en) Nrf2 activator
WO2012103113A1 (en) Pyrazine and imidazolidine derivatives and their uses to treat hepatitis c
CN107743491A (zh) 用于治疗和预防病毒感染的新的氧硫杂环戊烷甲酸及其衍生物
BR112021002565A2 (pt) composto, sal farmaceuticamente aceitável, tautômero ou estereoisômero do mesmo, composição farmacêutica, processo para a síntese e uso do dito composto
JP2021529188A (ja) ジヒドロピリミジン誘導体及びｈｂｖ感染又はｈｂｖ誘導性疾患の治療におけるその使用
JP2021523160A (ja) ジヒドロピリミジン誘導体及びｈｂｖ感染又はｈｂｖ誘導性疾患の治療におけるその使用
CN102316871B (zh) [1，2，4]噻二嗪1，1-二氧化合物
EP4317153A1 (en) Abhd6 antagonist
EP2154139A1 (en) Bicyclic heterocyclic compound

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1240922

Country of ref document: HK

WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20170801

WW01 Invention patent application withdrawn after publication
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1240922

Country of ref document: HK