CN106943378B - 红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒及其制备方法 - Google Patents

红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷(ATO)纳米粒及其制备方法，所述纳米粒以红细胞膜为外壳，聚酯类材料为核心；所述聚酯类材料负载有三氧化二砷。该制备的纳米粒粒径在200nm左右，形状圆整，分布均匀，且具有清晰的壳‑核结构；且稳定性良好，不会引起红细胞溶血和凝集，可用于静脉注射。该递药系统与游离药物相比具有显著的缓释作用，可以解决三氧化二砷静脉注射后，血药浓度快速升高的问题，因3～400nm大小物质一般不会从肾脏或排异系统排出，有利于在血液系统的循环，达到被动靶向的效果，有利于减小毒性药物的血药浓度，从而减轻毒性，为毒性抗肿瘤药物制剂的开发提供了新的策略。

Description

红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒及其制备方法
技术领域
本发明涉及制药技术领域，具体涉及一种红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒及其制备方法。
背景技术
三氧化二砷(Arsenic trioxide,ATO)是一种已被FDA批准的治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的矿物药，它可通过诱导细胞分化和凋亡、降解PML-RARα、清除LIC、抑制肿瘤细胞增殖和抑制血管生成等多条途径发挥抗肿瘤作用。其用于治疗APL已有20余年，临床研究表明完全缓解率可达90％，与常用药之间无交叉耐药性，因此，As2O3已成为复发难治APL的首选药物。已上市的针对APL的As2O3剂型有“亚砷酸氯化钠注射液”、“三氧化二砷注射剂”、“注射用三氧化二砷冻干粉针剂”。但现存的剂型具有以下不足：三氧化二砷直接静脉注射毒性较大，主要表现为消化道不适、肝肾功能损害、心脏毒性、浆膜腔积液、末梢神经炎、皮肤色素沉着和皮疹等。毒副作用的产生主要是因为静脉注射治疗时血浆砷含量会快速升高，作用到各个器官上产生不良反应。近年来，出现了一些针对三氧化二砷的纳米剂型研究，如Letizia Da Sacco(Letizia Da Sacco,Andrea Masotti.Mar.Drugs.8,2010)使用甲壳素和壳聚糖作为纳米载体包封三氧化二砷，Zi-Yu Wang(Zi-Yu Wang,Jian Song,Dong-Sheng Zhang.World J Gastroenterol.15,24,2009.)使用Fe2O3磁性纳米粒载三氧化二砷实现靶向给药，Xuecheng Xiao(Xuecheng Xiao,Yangyang Liu,Manman Guo,Nanotechnology in Biomaterials,31,1,2016)使用纳米介孔硅封装三氧化二砷，以pH触发药物缓释，Haimei Chen(Haimei Chen,Robert C,MacDonald.J.AM.CHEM.SOC,128,2006.)将三氧化二砷包载于脂质体中的研究。
上述研究都在一定程度上降低了三氧化二砷的瞬时血药浓度，从而毒性得到一定的降低，但同时也存在着制备过程复杂，使用的载体材料生物相容性不佳等不足。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒及其制备方法。将生物相容性良好的红细胞膜和聚酯类可降解载体材料相结合，提供具有缓释作用的红细胞膜-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(RBCM-PLGA-NP)、聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇共聚物(RBCM-PLGA-PEG-NP)、聚己内酯-聚乙二醇共聚物(RBCM-PCL-PEG-NP)、聚乳酸-聚乙二醇共聚物(RBCM-PLA-PEG-NP)纳米递药系统，对这些纳米粒进行粒径、PDI和包封率、载药量表征。并对红细胞膜-聚乳酸羟基乙酸共聚物(RBCM-PLGA-NP)进行TEM、Confocal、体外释放、体外红细胞毒性研究。通过红细胞膜的包裹作用，可提高小分子水溶性药物在高聚物纳米粒中的包封率，且制得的红细胞膜-聚乳酸羟基乙酸共聚物(RBCM-PLGA-NP)在体外释放实验中与游离药物相比释放时间显著延长，无静脉注射毒性。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒，所述纳米粒以红细胞膜为外壳，聚酯类材料为核心；所述聚酯类材料负载有三氧化二砷。
优选地，所述纳米粒的粒径为160-250nm。
优选地，所述聚酯类材料包括聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇共聚物(PLGA-PEG)、聚己内酯-聚乙二醇共聚物(PCL-PEG)、聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PLA-PEG)中的至少一种。
本发明还提供了一种红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
将聚酯类材料溶解在有机溶剂中，形成有机相；将三氧化二砷溶于水形成内水相；
S2、将内水相加入到有机相中，超声或高速匀浆机搅拌至形成均相；
S3、将上述均相在磁力搅拌的条件下缓慢加入到含乳化剂的外水相中，磁力搅拌或高速匀浆机搅拌乳化后，除去有机溶剂，形成纳米乳；
S4、低渗透析法制备红细胞膜；
S5、在纳米乳中加入制备好的红细胞膜，超声，得纳米液；
S6、将纳米液进行透析，即得所述红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒。
优选地，所述有机溶剂包括二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯中的至少一种；所述的乳化剂包括泊洛沙姆188、聚乙烯醇、聚乙二醇中的至少一种。
优选地，所述的聚酯类材料、三氧化二砷、乳化剂的质量比为20-75:1-10:15-50。
优选地，所述红细胞膜的制备方法包括以下步骤：心脏穿刺取大鼠全血，分离血清和白细胞，低渗EDTA溶液破壁多次，离心、清洗后即得所述红细胞膜。
优选地，所述红细胞膜与聚酯类材料的用量为：1mL所述大鼠全血提取的红细胞膜对应1-8mg聚酯类材料。
优选地，所述内水相与有机相的体积比为：1:10-1:15，有机相与外水相的体积比为1:5-1:10。
优选地，所述的超声条件为功率70-100w，时间1-10min；高速匀浆机搅拌条件为20000-80000r/min，2-15min；磁力搅拌条件为100-500r/min，2-5h。
本发明还提供了一种红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒在制备毒性抗肿瘤药物制剂中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1)本发明制备得到的红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒分布均匀，粒径在200nm左右，球形圆整，且该纳米粒具有明显体外缓释作用，没有溶血作用，可用于静脉注射。
2)本发明的递药系统与游离药物相比具有显著的缓释作用，可以解决毒性药物如三氧化二砷静脉注射后，血药浓度快速升高的问题，因3～400nm大小物质一般不会从肾脏或排异系统排出，有利于其在血液系统的循环，达到被动靶向的效果，有利于减小毒性药物的血药浓度，从而减轻毒性。为毒性抗肿瘤药物制剂的开发提供了新的策略。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为本发明实施例制备的纳米粒粒径图；其中：图1A为实施例3制备的纳米粒；图1B为实施例4制备的纳米粒；图1C为实施例5制备的纳米粒；图1D为实施例6制备的纳米粒；
图2本发明实施例制备的纳米粒的稳定性实验图；其中：图2A为粒径变化图；图2B为PDI变化图；
图3为RBCM-PLGA-ATO-NP纳米粒的共聚焦显微镜图；其中：图3A为细胞核荧光标记图；图3B为红细胞膜荧光标记图；图3C为PLGA荧光标记图；图3D为各部分荧光重叠图；
图4为不同放大倍数的RBCM-PLGA-ATO-NP透射电镜图；
图5为ATO、PLGA-ATO-NP、RBCM-PLGA-ATO-NP体外释放曲线；
图6为RBCM-PLGA-ATO-NP溶血性试验图；其中：图6A为孵育3小时后的溶血结果；图6B为静置48小时后的溶血结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变化和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1.红细胞膜制备(制备出的红细胞膜对应等体积的全血)：
(1)取大鼠，称体重，按照100g/0.7mL腹腔注射水合氯醛麻醉，心脏穿刺取全血；
(2)将血液分装至含有0.05mL肝素钠的EP管中，每管1mL，3800r/min，10min，4℃离心去掉上清和白细胞层，并用PBS溶液定容至1mL，混匀,3800r/min，7min，4℃重复清洗两次，最后用PBS定容至1mL。
(3)将上述步骤(2)定容得到的混液每管分装到4个含有0.01mL肝素钠的EP管中，再加入0.9mL EDTA溶液，混匀。轻轻吹打破壁，加入0.1mL 10倍浓度PBS混匀,13200r/min，10min，4℃离心清洗，去掉上清液，重复此过程三遍以上，直至上清液无色；
(4)去上清后加入0.9mL EDTA溶液，混匀，13200r/min，10min，4℃清洗；
(5)去上清后，将两管细胞合为一管，并用EDTA溶液定容至0.5mL，装入自封袋，注明日期、血量、细胞膜体积、名字等，-80℃保存。
实施例2.纳米粒材料、油相溶剂筛选
复乳法制备：取1mL 10mg/mL聚酯类材料溶液，磁力搅拌的条件下缓慢加入到10mL含乳化剂的外水相中，超声2min，磁力搅拌3h挥去有机溶剂，形成纳米乳。制得的纳米乳装入透过分子量为30000的透析袋中，透析2h去掉游离药物，得到纳米粒悬液。用马尔文激光粒度仪测定粒径大小和多分散性指数(PDI)。按以上相同的制备方法，分别按下表1考察各材料的型号和溶剂：
表1
Figure BDA0001226940450000051
从表1的单因素法筛选结果可知，PLGA与PLGA-PEG的分子量对PDI影响不大,粒径随分子量增大而增大，但均在要求范围内，因分子量越大黏性越大,因此最好是选择分子量较大的PLGA和PLGA-PEG，有利于药物的物理包封，二氯甲烷作为油相溶剂时，PDI过大，因此选择丙酮作为油相溶剂。PCL-PEG分子量对PDI影响不大,粒径随分子量增大而增大，但均在要求范围内，二氯甲烷作为溶剂时PDI较大，因此选用乙酸乙酯作为溶剂。PLA分子量对PDI影响不大，粒径随分子量增大而增大，但均在要求范围内，丙酮作为溶剂时PDI较大，因此选用二氯甲烷作为溶剂。
实施例3.RBCM-PLGA-ATO-NP制备
在PLGA丙酮溶液中加入2mL的三氧化二砷水溶液，超声至形成均相，磁力搅拌的条件下缓慢加入到含有乳化剂的外水相中，磁力搅拌挥去有机溶剂，形成纳米乳。旋转蒸发至1-2mL，加入制备好的红细胞膜，超声，将纳米液装入透析袋(MW 3000),透析2h去掉游离药物，得到红细胞膜包封的纳米粒悬液。
所述PLGA分子量为3000-95000，乳酸:羟基乙酸聚合比例为50:50；PLGA用量为10mg；PLGA丙酮溶液的体积为1mL；
所述三氧化二砷的用量为1mg，内水相体积0.1mL；
所述乳化剂为帕洛沙姆188，用量为3mg，所述含有乳化剂的外水相的体积为10mL；
所述红细胞膜的加入量为：1mL实施例1大鼠全血提取的红细胞膜对应0.5mg聚酯类材料。
所述的超声条件为功率70-100w，时间1-10min；磁力搅拌条件为100-500r/min，2-5h。
用马尔文激光粒度仪测定粒径大小和多分散性指数(PDI)。另测定不包封红细胞膜的PLGA-As2O3-NP纳米粒的粒径和PDI，各测定10批样品，由图1A的数据，粒径仪测得的RBCM-PLGA-ATO-NP的平均粒径为233.59nm，PLGA-ATO-NP平均粒径为216.36nm，相差17.23nm，红细胞膜厚度7-8nm，直径之差与红细胞膜相符。
实施例4.RBCM-PLGA-PEG-ATO-NP制备
在PLGA-PEG丙酮溶液中加入三氧化二砷溶液，超声至形成均相，磁力搅拌的条件下缓慢加入到含有乳化剂的外水相中，磁力搅拌挥去有机溶剂，形成纳米乳。旋转蒸发至1-2mL，加入制备好的红细胞膜，超声，将纳米液装入透析袋(MW 3000),透析2h去掉游离药物，得到红细胞膜包封的纳米粒悬液。
所述PLGA-PEG分子量为30000-70000，乳酸:羟基乙酸聚合比例为50:50-5000；PLGA-PEG用量为15mg；PLGA-PEG丙酮溶液的体积为1.5mL；
所述三氧化二砷的用量为2mg，内水相体积0.1mL；
所述乳化剂为聚乙烯醇，用量为10mg，所述含有乳化剂的外水相的体积为15mL；
所述红细胞膜的加入量为：1mL实施例1大鼠全血提取的红细胞膜对应0.5mg聚酯类材料。
所述的超声条件为功率70-100w，时间1-10min；磁力搅拌条件为100-500r/min，2-5h。
用马尔文激光粒度仪测定粒径大小和多分散性指数(PDI)。另测定不包封红细胞膜的纳米粒PLGA-PEG-ATO-NP的粒径和PDI，各测定10批样品，由图1B的数据，粒径仪测得的RBCM-PLGA-PEG-ATO-NP的平均粒径为207.53nm，PLGA-PEG-ATO-NP平均粒径为192.45nm，相差15.08nm，直径之差与红细胞膜相符。
实施例5.RBCM-PCL-PEG-ATO-NP制备
在PCL-PEG乙酸乙酯溶液中加入三氧化二砷溶液，高速匀浆机搅拌至形成均相，磁力搅拌的条件下缓慢加入到含有乳化剂的外水相中，高速匀浆机搅拌乳化后，磁力搅拌挥去有机溶剂，形成纳米乳。旋转蒸发至1-2mL，加入制备好的红细胞膜，超声，将纳米液装入透析袋(MW 3000),透析2h去掉游离药物，得到红细胞膜包封的纳米粒悬液。
所述PCL-PEG分子量为15000-95000，PCL-PEG用量为15mg；PCL-PEG乙酸乙酯溶液的体积为3mL；
所述三氧化二砷的用量为3mg，内水相体积0.3mL
所述乳化剂为帕洛沙姆188，用量为10mg，所述含有乳化剂的外水相的体积为30mL；
所述红细胞膜的加入量为：1mL实施例1大鼠全血提取的红细胞膜对应0.5mg聚酯类材料。
所述的超声条件为功率70-100w，时间1-10min；高速匀浆机搅拌条件为20000-80000r/min，2-15min；磁力搅拌条件为100-500r/min，2-5h。
用马尔文激光粒度仪测定粒径大小和多分散性指数(PDI)。另测定不包封红细胞膜的纳米粒PCL-PEG-ATO-NP的粒径和PDI，各测定10批样品，由图1C的数据，粒径仪测得的RBCM-PCL-PEG-ATO-NP的平均粒径为255.51nm，PCL-PEG-ATO-NP平均粒径为241.74nm，相差13.77nm，直径之差与红细胞膜相符。
实施例6.RBCM-PLA-PEG-ATO-NP制备
在PLA-PEG二氯甲烷溶液中加入三氧化二砷溶液，高速匀浆机搅拌至形成均相，磁力搅拌的条件下缓慢加入到含有乳化剂的外水相中，高速匀浆机搅拌乳化后，后磁力搅拌挥去有机溶剂，形成纳米乳。旋转蒸发至1-2mL，加入制备好的红细胞膜，超声，将纳米液装入透析袋(MW 3000),透析2h去掉游离药物，得到红细胞膜包封的纳米粒悬液。
所述PLA-PEG分子量为17000-55000，PLA-PEG用量为4mg；PLA-PEG二氯甲烷溶液的体积为2mL；
所述三氧化二砷的用量为0.2mg，内水相体积为0.2mL；
所述乳化剂为聚乙烯醇，用量为10mg，所述含有乳化剂的外水相的体积为15mL；
所述红细胞膜的加入量为：1mL实施例1大鼠全血提取的红细胞膜对应0.5mg聚酯类材料。
所述的超声条件为功率70-100w，时间1-10min；高速匀浆机搅拌条件为20000-80000r/min，2-15min；磁力搅拌条件为100-500r/min，2-5h。
用马尔文激光粒度仪测定粒径大小和多分散性指数(PDI)。另测定不包封红细胞膜的纳米粒PLA-PEG-ATO-NP的粒径和PDI，各测定10批样品，由图1D的数据，粒径仪测得的RBCM-PLA-PEG-ATO-NP的平均粒径为237.92nm，PLA-PEG-ATO-NP平均粒径为222.66nm，相差15.25nm，直径之差与红细胞膜相符。
实施例7.纳米粒稳定性考察
将制备好的纳米粒悬液常温储存，每隔一天定时用马尔文激光粒度仪测定粒径和多分散性指数，测量半个月，考察纳米悬液稳定性。由图2可看出,15天以内纳米粒的粒径和PDI变动均不大,且PDI均小于0.3。
实施例8.纳米粒包封率、载药量测量
使用电感耦合等离子体法测量透析液中砷浓度，按照式子：包封率＝(投入砷量-透析液中砷量)/投入砷量x100％；载药量＝(投入砷量-透析液中砷量)/(投入砷量-透析液中砷量+PLGA质量)计算包封率和载药量，计算得到实施例3制备的RBCM-PLGA-As2O3-NP纳米粒的包封率为6.31％，载药量2.87％；实施例4制备的RBCM-PLGA-PEG-As2O3-NP纳米粒的包封率为10.56％，载药量为4.80％；实施例5制备的RBCM-PCL-PEG-As2O3-NP纳米粒的包封率为12.78％，载药量为5.81％；实施例6制备的RBCM-PLA-PEG-As2O3-NP纳米粒的包封率为5.74％，载药量为2.61％。
电感耦合等离子体仪器参数如下：
ICP仪器条件：高频发生器频率：27.12MHz；RF功率：1150W；冷却气流量：1.0L/min；辅助气流量：0.5L/min；载气流量：0.5L/min；垂直观测高度：15.0mm；冲洗泵速：50rmp/min；分析泵速：50rmp/min；泵稳定时间：5s；冲洗时间30s；积分时间：短波15s；长波5s。标准溶液为美国SPEX多元素混标液(1000μg/mL)。
实施例9：共聚焦显微镜验证红细胞膜包封效果
(1)人胚肾细胞293t培养：于-80℃冰箱中取一管细胞，37℃水浴快速融化，1000r/min离心10min，去上清液；加入1mL培液(基础培养基+12％胎牛血清)，吹打后加入培养皿中，培养24h；弃掉培液，用2mL PBS清洗一遍，用1.5mL胰酶消化1min，在倒置相差显微镜下观察细胞变圆后即可；加入1.5mL培液终止消化，吹打后转移至离心管中，1500r/min，3min，离心去上清液；在离心管中加入适量培液，并转移至培养皿中，轻微摇晃后放入培养箱。
(2)红细胞膜染色：取适量DiD储备液，用甲醇乙醇混合液稀释10倍作为工作液(浓度为1μM)，取0.5mL红细胞膜，解冻后加入0.5mLDiD工作液，37℃，避光，恒温孵育40min，用0.5mLPBS洗4次，离心4000r/min 4℃8min，最后沉淀用0.5mLPBS溶解备用。
(3)PLGA染色：取1mL 10mg/mL PLGA丙酮溶液，加0.02mLDiO工作液(浓度为1μM)，混匀备用。
(4)纳米制备：用染色后的红细胞膜和PLGA依实施例3的方法制备RBCM-PLGA-As2O3-NP。
(5)细胞给药：取一个培养皿的传代293t细胞，胰酶消化，培液终止，离心去上清后，加入2mL培液，吹打后接种于24孔板，24孔板中放置细胞爬片，一孔40μL细胞悬液，再加500μL培液，放入孵箱孵育约24h。一孔给0.12mL RBCM-PLGA-ATO-NP液，再加0.38mL培液，孵育4h；弃掉培液，PBS洗两次；0.5mL 4％多聚甲醛固定15min后PBS洗三次；0.5mLDAPI染核5min后PBS洗三次；将爬片倒置在载玻片上，缓冲甘油封片后再共聚焦显微镜下观察。
(6)由图3可看出，红细胞膜(B)和纳米粒(C)在细胞核(A)周围基本重合(D)，说明细胞膜成功包裹纳米粒。
实施例10：透射电镜观察纳米粒形态，膜核结构
取实施例3制得的RBCM-PLGA-ATO-NP液，稀释至PLGA的浓度为0.1mg/mL，将铜网置于一片放于带盖培养皿的定量滤纸上，取10μL于铜网上，室温干燥2min，再滴10μL 1％磷钨酸，室温干燥2min，再滴一滴超纯水，至于照灯下干燥后，在透射电镜下观察。图4显示，纳米粒粒径分布均匀，形状圆整，具有明显的膜壳结构。
实施例11：体外释放曲线
配置浓度为As2O3 1mg/mL的游离药物As2O3溶液(ATO)、PLGA-ATO-NP悬液、RBCM-PLGA-ATO-NP悬液，作为待测物。分别取1mL待测物，装入透析袋(MW 3000)中，封口后放于50ml溶出介质中，样品置于恒温震荡箱(37℃)中，分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12、14h在溶出介质中取1ml液体作为待测溶液，同时添加等量的PBS溶液。采用电感耦合等离子法(ICP)测量待测液中药物浓度。药物释放率结果如图5所示，由图5可知，红细胞膜包封的纳米粒的释放时间明显比载药纳米粒和药物溶液的释放时间长，说明红细胞膜的包封起到了缓释作用，缓释时间为65h。
实施例12：体外溶血与凝聚试验
取无菌脱纤维绵羊血2mL，生理盐水离心洗涤4次，2000r/min，5min，再配制成2％(v/v)的红细胞悬液，在试管中加入不同浓度等体积的RBCM-PLGA-As2O3-NP纳米粒，并以生理盐水组作为阴性对照，超纯水作为阳性对照，37℃孵育3小时，观察现象。由图6A可看出，给药组(药物浓度：1,0.035mg/mL；2,0.07mg/mL；3,0.14mg/mL)上清液无色澄明，与阴性对照组(阴)无明显差异，溶液中无棕红色絮状沉淀，进一步在倒置相差显微镜下观察，无红细胞聚集现象。因此说明该药物RBCM-PLGA-ATO-NP纳米粒不会引起红细胞的溶血和凝集，可以用于静脉注射。且由图6B可知，静置48h后，1，2号均出现溶血和凝聚，因此，3号的0.14mg/mL剂量最安全，对红细胞的毒性可以忽略不计。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。

Claims (6)

1.一种红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒，其特征在于，所述纳米粒以红细胞膜为外壳，聚酯类材料为核心；所述聚酯类材料负载有三氧化二砷；
所述聚酯类材料为聚己内酯-聚乙二醇共聚物；
所述的红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒的制备方法包括以下步骤：
S1、将聚酯类材料溶解在有机溶剂中，形成有机相；将三氧化二砷溶于水形成内水相；
S2、将内水相加入到有机相中，超声或高速匀浆机搅拌至形成均相；
S3、将上述均相在磁力搅拌的条件下缓慢加入到含乳化剂的外水相中，磁力搅拌或高速匀浆机搅拌乳化后，除去有机溶剂，形成纳米乳；
S4、低渗透析法制备红细胞膜；
S5、在纳米乳中加入制备好的红细胞膜，超声，得纳米液；
S6、将纳米液进行透析，即得所述红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒；
所述有机溶剂包括丙酮、乙酸乙酯中的至少一种；所述的乳化剂为泊洛沙姆188；
所述的聚酯类材料、三氧化二砷、乳化剂的质量比为15:3:10。
2.根据权利要求1所述的红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒，其特征在于，所述纳米粒的粒径为160-250nm。
3.根据权利要求1所述的红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒，其特征在于，所述红细胞膜的制备方法包括以下步骤：心脏穿刺取大鼠全血，分离血清和白细胞，低渗EDTA溶液破壁多次，离心、清洗后即得所述红细胞膜。
4.根据权利要求3所述的红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒，其特征在于，所述红细胞膜与聚酯类材料的用量为：1mL所述大鼠全血提取的红细胞膜对应0.5mg聚酯类材料。
5.根据权利要求1所述的红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒，其特征在于，所述内水相与有机相的体积比为：1:10-1:15，有机相与外水相的体积比为1:5-1:10。
6.根据权利要求1所述的红细胞膜包封聚酯类载三氧化二砷纳米粒，其特征在于，所述的超声条件为功率70-100w，时间1-10min；高速匀浆机搅拌条件为20000-80000r/min，2-15min；磁力搅拌条件为100-500r/min，2-5h。
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