CN106937598B - 大芦荟的原种制作方法 - Google Patents

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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques

Abstract

本发明涉及一种大芦荟的原种制作方法，包括：将母株置于20～30℃、相对湿度为15～20％、通风良好的环境中晾3～8天；将母株顶芽切下，剥除叶片，留顶芽15～20mm，用洗衣粉溶液漂洗5～6min，然后用清水冲洗干净；将外植体用升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用无菌水清洗干净，然后切除外植体被升汞腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上；控制培养时的温度为26±1℃，光照度为300～500lx。本发明方法适于采用叶片和顶芽作为外植体，顶芽萌动时间仅需5～8天，叶片长芽时间仅需8～13天，无真、细菌污染，顶芽成活率可达100％，而且制作周期短。

Description

大芦荟的原种制作方法
技术领域
本发明涉及植物栽培技术领域，具体说是一种大芦荟的原种制作方法。
背景技术
大芦荟，别名龙角花、龙角芦荟、鹿角芦荟、蜈蚣掌，百合科，喜温暖干燥和阳光充足环境，不耐寒，生长适温20～30℃，冬季不低于5℃，低温能促进花芽形成，耐旱力强。可用分株、扦插繁殖或组织培养法(即组培法)繁殖。分株繁殖于3～4月份结合换盆进行。取下母株周围的幼株，按其大小分别上盆，如幼株带根太少，可先在沙床中培养，待生根后上盆。扦插繁殖于5～6月开花后进行，插条约15cm，除去基部两片侧叶，晾置一天后插于细沙或珍珠岩中，约20天可生根。
目前，大芦荟的组培工艺通常包括：母本——原种制作——初代培养——初代切割与细菌检测——增殖切割——过渡培养——生根培养——出货。其中，原种制作是组培工艺中非常关键的一步。现有的大芦荟原种制作方法，通常采用以下步骤：
1、预处理：将选择好的母株置于干燥、通风良好的温室苗床上，制种前10～15d停止浇水、施肥，使其自然干燥，干燥程度由两个方面判断：1)基质土层干燥，用手捏呈散沙状，不粘手；2)植株萎蔫程度：整株呈重度萎蔫状。
2、采种：将整株植株取出，剥下叶片，将顶芽处理为约15～20mm大小；然后用棉花沾无菌水(加洗洁精)擦洗叶片表面，特别叶片着生部位擦干净；擦完再同顶芽用无菌水清洗一遍。
3、消毒：按叶片及顶芽的大小及老嫩程度进行分类，放置于无菌空瓶中，每瓶5～8个外植体，用浓度为1wt‰的升汞水溶液进行消毒(消毒时间：顶芽：15min；叶片：20min)，然后用无菌水清洗3～5遍(每次3～5min)，直至没有泡沫。
4、培养：切去顶芽两端被升汞腐蚀而变色部分(叶片不切)，接入培养基中(1个芽/瓶)进行培养。
采用上述的大芦荟原种制作方法，叶片经过培养后并没有芽的形成，说明该方法并不适合采用叶片作为外植体，而顶芽的成活率也只能达到80％左右，20％以上的顶芽在培养过程中会受到真、细菌污染而死亡，而且整个制作周期通常在3个月以上。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种适于采用叶片和顶芽作为外植体，无真、细菌污染，顶芽成活率可达100％，而且制作周期短的大芦荟的原种制作方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
大芦荟的原种制作方法，其特征在于，包括：
预处理：将母株置于20～30℃、相对湿度为15～20％、通风良好的环境中晾3～8天，期间停止浇水、施肥；
采种：将母株顶芽切下，剥除叶片，留顶芽15～20mm，得到的叶片和顶芽作为外植体用洗衣粉溶液漂洗5～6min，然后用清水冲洗干净，所述洗衣粉溶液由0.5～1重量份的洗衣粉与1000重量份的无菌水混合配制而成；
消毒：将外植体用升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用无菌水清洗干净，然后切除外植体被升汞腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上；
培养：控制培养时的温度为26±1℃，光照度为300～500lx。
本发明的有益效果在于：区别于现有技术，本发明加强了对母本的预处理和外植体的消毒，并优化培养工艺，整个制作周期可大大缩短至50～60天，顶芽萌动时间仅需5～8天，叶片长芽时间只需8～13天，顶芽和叶片均无真、细菌污染现象，顶芽的成活率为100％，叶片的成活率可达50％以上。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明最关键的构思在于：加强对母本的预处理和外植体的消毒，并优化培养工艺。
具体的，本发明提供的大芦荟的原种制作方法，包括：
预处理：将母株置于20～30℃、相对湿度为15～20％、通风良好的环境中晾3～8天，期间停止浇水、施肥；
采种：将母株顶芽切下，剥除叶片，留顶芽15～20mm，得到的叶片和顶芽作为外植体用洗衣粉溶液漂洗5～6min，然后用清水冲洗干净，所述洗衣粉溶液由0.5～1重量份的洗衣粉与1000重量份的无菌水混合配制而成；
消毒：将外植体用升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用无菌水清洗干净，然后切除外植体被升汞腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上；
培养：控制培养时的温度为26±1℃，光照度为300～500lx。
其中，所述升汞水溶液的浓度为1～1.5wt‰。
其中，用升汞水溶液消毒25～30min后，用无菌水清洗3～5次，每次3～5min。
其中，所述培养基为MS培养基，培养基中还加入有6-BA，所述6-BA的含量为0.8mg/L。
其中，所述培养基中还加入有ZT，所述ZT的含量为0.2mg/L。
其中，所述培养基中还加入有NAA，所述NAA的含量为0.3mg/L。
其中，所述培养基的pH值为6.0。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：区别于现有技术，本发明加强了对母本的预处理和外植体的消毒，并优化培养工艺，整个制作周期可大大缩短至50～60天，顶芽萌动时间仅需5～8天，叶片长芽时间只需8～13天，顶芽和叶片均无真、细菌污染现象，顶芽的成活率为100％，叶片的成活率可达50％以上。
实施例1
1、材料与方法
1.1试验材料
选取无病虫害，植株比较键壮，发育成熟，无变异同时具有母本基本生长性状的大芦荟作为母本。经预处理后，选取母株上出现轻度萎焉现象的顶芽和叶片作为外植体。
1.2试验方法
1.2.1试验步骤
制种前将引种的母本植株置于20～30℃、相对湿度为15～20％、通风良好的环境中晾3～8天，期间停止浇水、施肥，待其植株叶片呈现萎蔫状并且老叶出现黄化时便可进行原种制作。将母株顶芽切下，剥除叶片，留顶芽15～20mm左右，用质量浓度为0.5wt‰的洗衣粉溶液漂洗顶芽和叶片5～6分钟，清水冲洗干净，切口平滑。然后用质量浓度为1.5wt‰的升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用无菌水冲洗3～5次，每次3～5min，然后切除外植体被升汞腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上，1个/瓶。
1.2.2培养基
MS+6-BA0.8mg/L+ZT0.2mg/L+NAA0.3mg/L pH6.0
1.2.3培养条件
26±1℃300～500lx
1.2.4调查指标
顶芽萌动时间；叶片长芽时间；真、细菌污染率及死亡率；成活率
2结果与分析
2.1结果
该品种采用顶芽和叶片作为外植体，消毒时间为30min全部为顶芽，一共4个，无真、细菌污染以及死亡现象，成活率为100％；消毒时间为25min的全部为叶片，总共15个，无真、细菌污染，死亡5个，成活10个，成活率为67％。(具体见下表1)。
表1大芦荟原种制作试验结果数据表
从表1的记载可知，采用本发明的大芦荟的原种制作方法，顶芽萌动时间仅需5～8天，叶片长芽时间仅需8～13天，顶芽和叶片均无真、细菌污染现象，顶芽的成活率为100％，叶片的成活率为67％。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (3)

1.大芦荟的原种制作方法，其特征在于，包括：
预处理：将母株置于20～30℃、相对湿度为15～20％、通风良好的环境中晾3～8天，期间停止浇水、施肥；
采种：将母株顶芽切下，剥除叶片，留顶芽15～20mm，得到的叶片和顶芽作为外植体用洗衣粉溶液漂洗5～6min，然后用清水冲洗干净，所述洗衣粉溶液由0.5～1重量份的洗衣粉与1000重量份的无菌水混合配制而成；
消毒：将外植体用升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用无菌水清洗干净，然后切除外植体被升汞腐蚀的部分，使外植体露出新鲜组织再接种到培养基上；
所述培养基为MS+6-BA0.8mg/L+ZT0.2mg/L+NAA0.3mg/L，所述培养基的pH值为6.0；
培养：控制培养时的温度为26±1℃，光照度为300～500lx。
2.根据权利要求1所述的大芦荟的原种制作方法，其特征在于：所述升汞水溶液的浓度为1～1.5wt‰。
3.根据权利要求1所述的大芦荟的原种制作方法，其特征在于：用升汞水溶液消毒25～30min后，用无菌水清洗3～5次，每次3～5min。
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芦荟组织培养技术的研究;邓燕红;《凯里学院学报》;20090630;第27卷(第3期);第1.2、1.3、2.2节

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