CN107593446A - 一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，在晴天上午，取牡丹茎段，祛污剥根，浸泡冲洗消毒后，切成小段愈伤组织，在无菌条件下，接种到诱导培养基中进行诱导培育，生出丛生芽后分成单芽，转移到生根培养基上，进行增根，之后在氯化钙溶液中进行浸泡后组合移栽，移栽后全黑暗条件下进行前期培育，之后进行正常光照，展叶施肥。本发明采用牡丹外植体处理、愈伤组织诱导繁育、分株与增根、生根苗移栽、生根苗养护，可在短期内能够快速有效地将牡丹愈伤组织诱导出丛芽，并将诱导增根，移栽后成活率高，生产周期短、简便易行。

Description

一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法

技术领域

本发明属于牡丹的繁育领域，具体涉及一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法。

背景技术

我国是牡丹的故乡，种质资源很丰富，大都集中分布在我国西南高山区与中北部黄土高原及丘陵地带，是典型的温带树种。牡丹有着悠久的栽培史，在南北朝时期，牡丹以野生状态转为人工栽培，经过漫长的自然选择和人工选育，培育出了适应性广泛和花色、花型丰富的牡丹品种群。依据野生原种和牡丹栽培地区的不同，可将其分为中原品种群、江南品种群、西北品种群和西南品种群。其中最大的栽培品种群是中原品种群以洛阳和菏泽为代表，也是全国牡丹精品的聚集地，对全国以至世界牡丹栽培有深远的影响。

观赏性状极好的牡丹品种，雌雄蕊大都高度瓣化，无结实能力或种子发育不良。因此这些品种生产上大多采用传统繁殖的方法。但传统繁育方法扩繁系数低、成苗速度慢、受季节限制、新品种选育周期长等，从而造成牡丹名优品种繁殖率低，严重制约着牡丹优良品种的繁育进程及商品化、产业化生产。而组织培养技术是植物快繁最有效的方法，不仅能够克服传统繁殖方法的缺点，在短时间内获得大量优良品种，并能够在短期内使用遗传转化技术为定向改良、培育牡丹新品种建立再生体系。因此利用组培方法进行牡丹的繁育是其发展的必然趋势。

发明内容

本发明提供一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，本发明采用牡丹外植体处理、愈伤组织诱导繁育、分株与增根、生根苗移栽、生根苗养护，可在短期内能够快速有效地将牡丹愈伤组织诱导出丛芽，并将诱导增根，移栽后成活率高，生产周期短、简便易行。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，其特征在于，包括如下的步骤：牡丹外植体处理、愈伤组织诱导繁育、分株与增根、生根苗移栽、生根苗养护。

所述的牡丹外植体处理：在晴天上午，取粗壮牡丹新生幼嫩带芽茎段，用软刷刷去表面污垢，，剥除外层的老根，浸入含有洗涤剂的水中浸泡5-10分钟，流水冲洗1-2小时，然后置于超净工作台内，用70%酒精进行消毒，用无菌水冲洗3-5遍，用无菌滤纸吸干表面水分，在超净工作台切成0.5-1cm小段愈伤组织。

所述的愈伤组织诱导繁育:无菌条件下，将小段愈伤组织接种到愈伤组织诱导培养基中，温度25-30℃，全黑暗条件下，相对湿度为40%-70%培养至出愈，诱导的培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0 .1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，L，并添加精氨酸50-100mg/L、天冬氨酸50-100mg/L、谷氨酸50-100mg/L，pH5.7-5.8。

所述的分株与增根：当丛生芽长到1-3cm时，从基部切成单个芽后，将其转移到生根培养基上，使单芽的根部位于生根培养基上和基质材料相接部位，且不接触组培容器，然后于自然散射条件下光照时间12-16小时/天条件下培养至牡丹根系贴组培容器底部蔓延，生根培养基为：1/2MS+6mg/LIBA+0.1mg/LNAA+2g/L活性炭。

所述的生根苗移栽：将培育的生根苗使用无菌水冲洗3-5遍后在1.0-1.2%的氯化钙溶液中浸泡8-15小时后进行组合，组合后的生根苗的基部直径不大于20cm，将组合好的生根苗放入大棚种植穴中，用土：生物炭：尿素以质量比2:1:1混匀后的土壤进行回填并浇水，第一次浇水浇透。

所述的生根苗养护：移栽后的生根苗在温度25-30℃，相对湿度为40%-70%，全黑暗条件下，保持5-10天，进行增加光照，牡丹展叶之后，每7-15天，喷施一次400倍的磷酸二氢钾或其它叶面肥料，连续喷施3-5次。

本发明的优点是：

本发明在晴天上午，取牡丹茎段，祛污剥根，浸泡冲洗消毒后，切成小段愈伤组织，在无菌条件下，接种到诱导培养基中进行诱导培育，生出丛生芽后分成单芽，转移到生根培养基上，进行增根，之后在氯化钙溶液中进行浸泡后组合移栽，移栽后全黑暗条件下进行前期培育，之后进行正常光照，展叶施肥。本发明采用组织培养技术，克服传统繁殖方法的缺点，在短时间内获得大量优良品种，并能够在短期内使用遗传转化技术为定向改良、培育牡丹新品种建立再生体系。进行植株再生时采用的培养基，培养过程简单易行，采用的为愈伤组织进行繁育，无变异植株的产生，诱导培育时暗处理条件下，生长素的降解过程较慢，有助于调节外植体内生长素和细胞分裂素之间的比例，从而有助于愈伤组织的器官形成，生根后移栽后成活率高，氯化钙可显著提高灌木类植物的株高，移栽后暗处理可促进植株进行扎根与适应环境。本发明采用牡丹外植体处理、愈伤组织诱导繁育、分株与增根、生根苗移栽、生根苗养护，可在短期内能够快速有效地将牡丹愈伤组织诱导出丛芽，并将诱导增根，移栽后成活率高，生产周期短、简便易行。

具体实施方式

一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，其特征在于，包括如下的步骤：牡丹外植体处理、愈伤组织诱导繁育、分株与增根、生根苗移栽、生根苗养护。

所述的牡丹外植体处理：在晴天上午，取粗壮牡丹新生幼嫩带芽茎段，用软刷刷去表面污垢，，剥除外层的老根，浸入含有洗涤剂的水中浸泡8分钟，流水冲洗1.5小时，然后置于超净工作台内，用70%酒精进行消毒，用无菌水冲洗4遍，用无菌滤纸吸干表面水分，在超净工作台切成0.5-1cm小段愈伤组织。

所述的愈伤组织诱导繁育:无菌条件下，将小段愈伤组织接种到愈伤组织诱导培养基中，温度25-30℃，全黑暗条件下，相对湿度为40%-70%培养至出愈，诱导的培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0 .1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，L，并添加精氨酸50-100mg/L、天冬氨酸50-100mg/L、谷氨酸50-100mg/L，pH5.7-5.8。

所述的分株与增根：当丛生芽长到1-3cm时，从基部切成单个芽后，将其转移到生根培养基上，使单芽的根部位于生根培养基上和基质材料相接部位，且不接触组培容器，然后于自然散射条件下光照时间12-16小时/天条件下培养至牡丹根系贴组培容器底部蔓延，生根培养基为：1/2MS+6mg/LIBA+0.1mg/LNAA+2g/L活性炭。

所述的生根苗移栽：将培育的生根苗使用无菌水冲洗3-5遍后在1.0-1.2%的氯化钙溶液中浸泡12小时后进行组合，组合后的生根苗的基部直径不大于20cm，将组合好的生根苗放入大棚种植穴中，用土：生物炭：尿素以质量比2:1:1混匀后的土壤进行回填并浇水，第一次浇水浇透。

所述的生根苗养护：移栽后的生根苗在温度25-30℃，相对湿度为40%-70%，全黑暗条件下，保持7天，进行增加光照，牡丹展叶之后，每10天，喷施一次400倍的磷酸二氢钾或其它叶面肥料，连续喷施4次。

Claims (6)

1.一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，其特征在于，包括如下的步骤：牡丹外植体处理、愈伤组织诱导繁育、分株与增根、生根苗移栽、生根苗养护。

2.根据权利要求1所述的一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，其特征在于，所述的牡丹外植体处理：在晴天上午，取粗壮牡丹新生幼嫩带芽茎段，用软刷刷去表面污垢，，剥除外层的老根，浸入含有洗涤剂的水中浸泡5-10分钟，流水冲洗1-2小时，然后置于超净工作台内，用70%酒精进行消毒，用无菌水冲洗3-5遍，用无菌滤纸吸干表面水分，在超净工作台切成0.5-1cm小段愈伤组织。

3.根据权利要求1所述的一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，其特征在于，所述的愈伤组织诱导繁育:无菌条件下，将小段愈伤组织接种到愈伤组织诱导培养基中，温度25-30℃，全黑暗条件下，相对湿度为40%-70%培养至出愈，诱导的培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0 .1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，L，并添加精氨酸50-100mg/L、天冬氨酸50-100mg/L、谷氨酸50-100mg/L，pH5.7-5.8。

4.根据权利要求1所述的一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，其特征在于，所述的分株与增根：当丛生芽长到1-3cm时，从基部切成单个芽后，将其转移到生根培养基上，使单芽的根部位于生根培养基上和基质材料相接部位，且不接触组培容器，然后于自然散射条件下光照时间12-16小时/天条件下培养至牡丹根系贴组培容器底部蔓延，生根培养基为：1/2MS+6mg/LIBA+0.1mg/LNAA+2g/L活性炭。

5.根据权利要求1所述的一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，其特征在于，所述的生根苗移栽：将培育的生根苗使用无菌水冲洗3-5遍后在1.0-1.2%的氯化钙溶液中浸泡8-15小时后进行组合，组合后的生根苗的基部直径不大于20cm，将组合好的生根苗放入大棚种植穴中，用土：生物炭：尿素以质量比2:1:1混匀后的土壤进行回填并浇水，第一次浇水浇透。

6.根据权利要求1所述的一种牡丹的诱导与再生的快速繁育方法，其特征在于，所述的生根苗养护：移栽后的生根苗在温度25-30℃，相对湿度为40%-70%，全黑暗条件下，保持5-10天，进行增加光照，牡丹展叶之后，每7-15天，喷施一次400倍的磷酸二氢钾或其它叶面肥料，连续喷施3-5次。