CN109463283A - 黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，通过剪取黑果腺肋花楸枝条，对黑果腺肋花楸枝条进行清洗，将黑果腺肋花楸枝条转移至无菌环境并为黑果腺肋花楸进行无菌处理，并切成黑果腺肋花楸段，将黑果腺肋花楸段放置冷藏保存箱内，同时进行培养基的预制，将灭菌后的黑果腺肋花楸段放置于培养基内进行适当环境培养得到黑果腺肋花楸芽，本发明通过对黑果腺肋花楸进行系统化的清洗处理保证了黑果腺肋花楸进行培养时能够不受其它真菌影响，保证了黑果腺肋花楸的培养效率，通过本发明的培养液能够为黑果腺肋花楸段提供所需的营养，能够快速进行生芽长根，提高了黑果腺肋花楸苗的诱导速度，结果可重复性强，成本低，利于推广和投入生产。
Description
技术领域
本发明涉及苗木培养的技术领域，更具体地说，特别涉及黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法。
背景技术
黑果腺肋花楸(黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法roni黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法mel黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法noc黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法rp黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法)是引自美国东部的一种蔷薇科腺肋花楸属的落叶灌木，其具有药用、食用、及城市绿化于一体的优良树种，耐贫瘠、挂果早、经济效益高，有很大的市场前景。1990年以后陆续被引入我国东北，并定植于辽西地区。由于其树形优美、观赏期长，是春观叶、夏观花、秋观果的优质绿化树种，可孤植也可在公园、路旁等城市绿地中大量种植。黑果腺肋花楸鲜果中黄酮类物质较高，果实富含花青素、多酚、胡萝卜素等，对心血管疾病具有特殊疗效，且具有抗衰老功能，广泛应用于医药和功能食品工业；同时，黑果腺肋花楸抗性较强，如抗旱、抗寒，生长所需水分很少，故在降雨较少的干旱地区完全可以存活，极限低温-40℃以上的气候正常生长发育。黑果腺肋花楸根系为浅根性，水平根发达，枝条萌蘖能力强，对30cm～40cm土层的固定力强，病虫害极少，对风害、冰雹等自然灾害抗性强，具有较好的保持水土效果，生态能力强。
当前黑果腺肋花楸种苗的市场需要量大，但传统的播种繁殖和扦插育苗均较慢难，采用组织培养方法加可快其繁殖速度，能在短时间内获取大量组培苗，满足市场对其种苗的需求。国内有关黑果腺肋花楸组培快繁仅从原生质体、胚乳愈伤组织、组培苗瓶外生根、不定芽的诱导与增殖等方面的研究报道，对不同外植体诱导的筛选、增殖、组培苗生根和驯化移栽等系列研究鲜见研究报道。因此，本领域亟需开发出黑果腺肋花楸的组培和繁殖方法，该方法能够实现在短时间内获取大量组培苗，由此实现工厂化育苗的快速繁殖。
发明内容
在多年试验基础上，本发明提供了一种黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，提高了黑果腺肋花楸生产用苗的快速诱导培育，实现了工厂化黑果腺肋花楸苗的生产。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，包括以下步骤：
S1、剪取黑果腺肋花楸枝条；
S2、对黑果腺肋花楸枝条进行清洗；
S3、将黑果腺肋花楸枝条转移至无菌环境并为黑果腺肋花楸进行无菌处理，并切成黑果腺肋花楸段；
S4、将黑果腺肋花楸段放置冷藏保存箱内，同时进行培养基的预制；
S5、将灭菌后的黑果腺肋花楸段放置于培养基内进行适当环境培养得到黑果腺肋花楸芽；
S6、将培养得到的黑果腺肋花楸芽进行炼苗和移栽。
所述步骤S1的具体步骤如下：
S11、在春季早晨6：00-8：00时间内，选取根系强壮、枝干粗壮的黑果腺肋花楸；
S12、采用消毒后无菌的剪刀将黑果腺肋花楸枝干剪断，且剪断的黑果腺肋花楸枝干的直径不低于30mm；
S13、通过剪刀将黑果腺肋花楸枝干的枝叶剪断去掉，此过程避免损伤黑果腺肋花楸的枝干。
S14、将黑果腺肋花楸枝干采用保鲜膜包好，迅速移送至实验室。
优选地，所述步骤S2的具体步骤如下：
S22、将黑果腺肋花楸枝干放入流动的清水下，冲洗30秒钟；
S23、清洗后的黑果腺肋花楸枝干放入清洗盒内，清洗盒内装有纯净水；
S24、向清洗盒内的纯净水中倒入数滴洗涤灵，搅拌洗涤10min；
S25、将洗涤后的黑果腺肋花楸枝干通过镊子取出，然后在流动的清水下冲洗30秒钟；
S25、将冲洗后的黑果腺肋花楸枝干通过无菌手术刀切成至少三黑果腺肋花楸段。
优选地，所述步骤S3的具体步骤如下：
S31、将清洗后的黑果腺肋花楸枝干放入无菌盒中，向无菌盒倒入浓度为70％的酒精漂洗5秒钟；
S31、倒掉酒精，然后向无菌盒倒入3％NaClO3消毒液对黑果腺肋花楸枝干消毒处理。
优选地，所述步骤S4的具体步骤如下：
S41、将大量元素的培养液和微量元素的培养液按照1:10的比例倒入培养皿中；
S42、将黑果腺肋花楸段放入培养皿中，并且将培养皿盖与培养皿闭合。
优选地，所述步骤S5的具体步骤如下：
S51、将培养皿移送至培养箱中，调整培养箱温度、湿度和光照度，温度控制在(27±2℃)之间，湿度控制在60％-70％之间，光照度为1500-1800lx之间，光照时间为10H/d；
优选地，所述步骤S6的具体步骤如下：
S61、观察培养皿中的黑果腺肋花楸段生芽情况；
S62、当黑果腺肋花楸段的芽长至5厘米时，将培养皿从培养箱中拿出；
S63、将黑果腺肋花楸段的芽移栽至混合土中，混合土由2:1的腐殖土和河沙组成。
优选地，所述步骤S41中大量元素和微量元素培养液的成分如下：
所述大量元素培养液由0.36份硝酸铵(NH4NO)、0.4份硝酸钾(KNO3)、0.01 份氯化钙(CaCl2·2H2O)、0.08份硫酸镁(MgSO4·7H2O)、0.15份磷酸二氢钾 (KH2PO4)构成；
所述微量元素培养液由0.02份碘化钾(KI)、0.16份硼酸(H3BO3)、0.6 份硫酸锰(MNSO4·4H2O)、0.21份皓矾(ZnSO4·7H2O)、0.006份钼酸钠 (NA2MOO4·2H20)、0.002份五水硫酸铜(CUSO4·5H20)和0.002份 (COCL2\6H20)构成。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明通过对黑果腺肋花楸进行系统化的清洗处理保证了黑果腺肋花楸进行培养时能够不受其它真菌影响，保证了黑果腺肋花楸的培养效率，通过本发明的培养液能够为黑果腺肋花楸段提供所需的营养，使得黑果腺肋花楸能够在适合其培养的环境下，能够快速进行生芽长根，提高了黑果腺肋花楸苗的诱导速度，结果可重复性强，成本低，利于推广和投入生产。
具体实施方式
下面对本发明的优选实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
在多年试验基础上，本发明提供黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方，具有以下实施例。
实施例一
采用消毒后无菌的剪刀将黑果腺肋花楸枝干剪断，且剪断的黑果腺肋花楸枝干的直径不低于30mm，通过剪刀将黑果腺肋花楸枝干的枝叶剪断去掉，迅速移送至实验室，将黑果腺肋花楸枝干放入流动的清水下，冲洗30秒钟，清洗后的黑果腺肋花楸枝干放入清洗盒内，清洗盒内装有纯净水，向清洗盒内的纯净水中倒入数滴洗涤灵，搅拌洗涤10min，将洗涤后的黑果腺肋花楸枝干通过镊子取出，然后在流动的清水下冲洗30秒钟，将冲洗后的黑果腺肋花楸枝干通过无菌手术刀切成至少三黑果腺肋花楸段，将清洗后的黑果腺肋花楸枝干放入无菌盒中，向无菌盒倒入浓度为70％的酒精漂洗5秒钟，倒掉酒精，然后向无菌盒倒入3％NaClO3 消毒液对黑果腺肋花楸枝干消毒处理，将黑果腺肋花楸段放入培养皿中，并且将培养皿盖与培养皿闭合来进行培养黑果腺肋花楸段生芽。
实施例二
春季早晨6：00-8：00时间内，选取根系强壮、枝干粗壮的黑果腺肋花楸，该时间段内黑果腺肋花楸内组织细胞处于较活跃状态，用来培养的话其效果比其他时间段黑果腺肋花楸效果要好，采用消毒后无菌的剪刀将黑果腺肋花楸枝干剪断，且剪断的黑果腺肋花楸枝干的直径不低于30mm，通过剪刀将黑果腺肋花楸枝干的枝叶剪断去掉，此过程避免损伤黑果腺肋花楸的枝干，将黑果腺肋花楸枝干采用保鲜膜包好，将冲洗后的黑果腺肋花楸枝干通过无菌手术刀切成至少三黑果腺肋花楸段，将黑果腺肋花楸段放入培养皿中，将大量元素的培养液和微量元素的培养液按照1:10的比例倒入培养皿中，将培养皿移送至培养箱中，调整培养箱温度、湿度和光照度，温度控制在(27±2℃)之间，湿度控制在60％-70％之间，光照度为1500-1800lx之间，光照时间为10H/d，观察培养皿中的黑果腺肋花楸段生芽情况，一般在9d-10d时，黑果腺肋花楸段可见侧芽萌发，40d左右时其芽能够长至3厘米长，当黑果腺肋花楸段的芽长至5厘米时，将培养皿从培养箱中拿出，将黑果腺肋花楸段的芽移栽至混合土中，混合土由2:1的腐殖土和河沙组成，大量元素培养液由0.36份硝酸铵(NH4NO)、0.4份硝酸钾(KNO3)、 0.01份氯化钙(CaCl2·2H2O)、0.08份硫酸镁(MgSO4·7H2O)、0.15份磷酸二氢钾(KH2PO4)构成，微量元素培养液由0.02份碘化钾(KI)、0.16份硼酸(H3BO3)、0.6份硫酸锰(MNSO4·4H2O)、0.21份皓矾(ZnSO4·7H2O)、0.006份钼酸钠 (NA2MOO4·2H20)、0.002份五水硫酸铜(CUSO4·5H20)和0.002份 (COCL2\6H20)构成，能够保证黑果腺肋花楸段发芽生根过程中所需的营养元素。
虽然描述了本发明的实施方式，但是专利所有者可以在所附权利要求的范围之内做出各种变形或修改，只要不超过本发明的权利要求所描述的保护范围，都应当在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，其特征在于,包括以下步骤：
S1、剪取黑果腺肋花楸枝条；
S2、对黑果腺肋花楸枝条进行清洗；
S3、将黑果腺肋花楸枝条转移至无菌环境并为黑果腺肋花楸进行无菌处理，并切成黑果腺肋花楸段；
S4、将黑果腺肋花楸段放置冷藏保存箱内，同时进行培养基的预制；
S5、将灭菌后的黑果腺肋花楸段放置于培养基内进行适当环境培养得到黑果腺肋花楸芽；
S6、将培养得到的黑果腺肋花楸芽进行炼苗和移栽。
2.如权利要求1所述的一种黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，其特征在于，所述步骤S1的具体步骤如下：
S11、在春季早晨6：00-8：00时间内，选取根系强壮、枝干粗壮的黑果腺肋花楸；
S12、采用消毒后无菌的剪刀将黑果腺肋花楸枝干剪断，且剪断的黑果腺肋花楸枝干的直径不低于30mm；
S13、通过剪刀将黑果腺肋花楸枝干的枝叶剪断去掉，此过程避免损伤黑果腺肋花楸的枝干。
S14、将黑果腺肋花楸枝干采用保鲜膜包好，迅速移送至实验室。
3.如权利要求1所述的一种黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，其特征在于，所述步骤S2的具体步骤如下：
S22、将黑果腺肋花楸枝干放入流动的清水下，冲洗30秒钟；
S23、清洗后的黑果腺肋花楸枝干放入清洗盒内，清洗盒内装有纯净水；
S24、向清洗盒内的纯净水中倒入数滴洗涤灵，搅拌洗涤10min；
S25、将洗涤后的黑果腺肋花楸枝干通过镊子取出，然后在流动的清水下冲洗30秒钟；
S25、将冲洗后的黑果腺肋花楸枝干通过无菌手术刀切成至少三黑果腺肋花楸段。
4.如权利要求1所述的一种黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，其特征在于，所述步骤S3的具体步骤如下：
S31、将清洗后的黑果腺肋花楸枝干放入无菌盒中，向无菌盒倒入浓度为70％的酒精漂洗5秒钟；
S31、倒掉酒精，然后向无菌盒倒入3％NaClO3消毒液对黑果腺肋花楸枝干消毒处理。
5.如权利要求1所述的一种黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，其特征在于，所述步骤S4的具体步骤如下：
S41、将大量元素的培养液和微量元素的培养液按照1:10的比例倒入培养皿中；
S42、将黑果腺肋花楸段放入培养皿中，并且将培养皿盖与培养皿闭合。
6.如权利要求1所述的一种黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，其特征在于，所述步骤S5的具体步骤如下：
S51、将培养皿移送至培养箱中，调整培养箱温度、湿度和光照度，温度控制在(27±2℃)之间，湿度控制在60％-70％之间，光照度为1500-1800lx之间，光照时间为10H/d 。
7.如权利要求1所述的一种黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，其特征在于，所述步骤S6的具体步骤如下：
S61、观察培养皿中的黑果腺肋花楸段生芽情况；
S62、当黑果腺肋花楸段的芽长至5厘米时，将培养皿从培养箱中拿出；
S63、将黑果腺肋花楸段的芽移栽至混合土中，混合土由2:1的腐殖土和河沙组成。
8.如权利要求1所述的一种黑果腺肋花楸嫩芽诱导培养方法，其特征在于，所述步骤S41中大量元素和微量元素培养液的成分如下：
所述大量元素培养液由0.36份硝酸铵(NH4NO)、0.4份硝酸钾(KNO3)、0.01份氯化钙(CaCl2·2H2O)、0.08份硫酸镁(MgSO4·7H2O)、0.15份磷酸二氢钾(KH2PO4)构成；
所述微量元素培养液由0.02份碘化钾(KI)、0.16份硼酸(H3BO3)、0.6份硫酸锰(MNSO4·4H2O)、0.21份皓矾(ZnSO4·7H2O)、0.006份钼酸钠(NA2MOO4·2H20)、0.002份五水硫酸铜(CUSO4·5H20)和0.002份(COCL2\6H20)构成。
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