CN106932347B - 一种美洛西林酸及其质量指标检测方法 - Google Patents

一种美洛西林酸及其质量指标检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106932347B
CN106932347B CN201710347177.2A CN201710347177A CN106932347B CN 106932347 B CN106932347 B CN 106932347B CN 201710347177 A CN201710347177 A CN 201710347177A CN 106932347 B CN106932347 B CN 106932347B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
mezlocillin
test
sample
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710347177.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106932347A (zh
Inventor
张世全
罗美玉
罗东红
李建伟
钟雪萍
王俊文
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suichang Zhejiang Limin Technology Co Ltd
Original Assignee
Suichang Zhejiang Limin Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suichang Zhejiang Limin Technology Co Ltd filed Critical Suichang Zhejiang Limin Technology Co Ltd
Priority to CN201710347177.2A priority Critical patent/CN106932347B/zh
Publication of CN106932347A publication Critical patent/CN106932347A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106932347B publication Critical patent/CN106932347B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/29—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands using visual detection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D499/00—Heterocyclic compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. penicillins, penems; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C07D499/21—Heterocyclic compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. penicillins, penems; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a nitrogen atom directly attached in position 6 and a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
    • C07D499/44—Compounds with an amino radical acylated by carboxylic acids, attached in position 6
    • C07D499/48—Compounds with an amino radical acylated by carboxylic acids, attached in position 6 with a carbon chain, substituted by hetero atoms or by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, attached to the carboxamido radical
    • C07D499/58—Compounds with an amino radical acylated by carboxylic acids, attached in position 6 with a carbon chain, substituted by hetero atoms or by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, attached to the carboxamido radical substituted in alpha-position to the carboxamido radical
    • C07D499/64—Compounds with an amino radical acylated by carboxylic acids, attached in position 6 with a carbon chain, substituted by hetero atoms or by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, attached to the carboxamido radical substituted in alpha-position to the carboxamido radical by nitrogen atoms
    • C07D499/68—Compounds with an amino radical acylated by carboxylic acids, attached in position 6 with a carbon chain, substituted by hetero atoms or by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, attached to the carboxamido radical substituted in alpha-position to the carboxamido radical by nitrogen atoms with aromatic rings as additional substituents on the carbon chain
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/02—Investigating particle size or size distribution
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/21—Polarisation-affecting properties
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种美洛西林酸及其质量指标检测方法，质量指标检测方法包含如下步骤：(1)抽样；(2)用目测法检验外观；(3)用液相色谱法进行含量测定；(4)水分测定；(5)比旋度测定；(6)检测溶液的澄清度与颜色；(7)有关物质测定；(8)细菌内毒素检查；(9)细度检测；(10)聚合物测定；(11)残留溶剂乙醇、乙酸乙酯测定。本发明公开了的美洛西林酸为新产品，本发明质量指标检测方法能够准确检测出美洛西林酸的各项质量指标，而且检测过程成本低、易操作。

Description

一种美洛西林酸及其质量指标检测方法
技术领域
本发明涉及一种美洛西林酸的质量指标检测方法。
背景技术
美洛西林钠是一种高效苯咪唑青霉素类抗生素，从胃肠道吸收困难，常用其钠盐供肠道外给药。本品抗菌作用类似于羧苄青霉素，但其作用范围更广，抗菌谱也较天然青霉素广泛。
但是有下列不良影响：
⒈血液学影响：少数患者用药后可引起白细胞总数减少、血小板减少、嗜酸粒细胞增多。2.心血管系统的影响：少数患者静脉给药时偶可出现血栓性静脉炎。
⒊中枢神经系统的影响：有报道美洛西林对中枢神经系统的潜在毒性为惊厥和神经肌肉应激性过高。这些毒性反应在肾功能下降的老年患者中尤易出现。偶见用药时导致癫痫发作的报道。
⒋内分泌/代谢系统的影响：偶有使用美洛西林治疗时出现低钾血症的报道，尤见于癌症患者用药中。
⒌胃肠道的影响：使用美洛西林治疗后，少数患者可出现食欲减退、腹泻等消化道症状。
⒍肾脏/泌尿生殖系统的影响：有报道在美洛西林治疗中，患者偶见出现间质性肾炎。
⒎肝脏的影响：有报道在美洛西林治疗中，患者可发生肝功能异常。出现血清转氨酶(天门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶)升高。
⒏皮肤的影响：有报道在美洛西林治疗期间，少数患者可出现多种皮肤反应，如全身性皮疹、发热、荨麻疹、瘙痒等。
发明内容
本发明提供一种美洛西林酸，其特征在于，
其化学名：(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-[(R)-2-{3-(甲磺酰-2-氧代-1-咪唑烷碳酰胺)-2-苯乙酰胺基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3,2,0]-庚烷-2-羧酸；
结构式：
分子式：C21H25N5O8S2
相对分子质量：539.6。
本发明还提供一种美洛西林酸的质量指标检测方法，包括如下步骤：
(1)抽样；
(2)用目测法检验外观；
(3)用液相色谱法进行含量测定；
(4)水分测定；
(5)比旋度测定；
(6)检测溶液的澄清度与颜色；
(7)有关物质测定；
(8)细菌内毒素检查；
(9)细度检测；
(10)聚合物测定；
(11)残留溶剂乙醇、乙酸乙酯测定。
具体步骤如下：
(1)抽样
当每批产品总件数n≤300时抽取n0.5+1件；总件数n≥300时，抽取n0.5/2+1件。取样量为六倍的检验量。把抽取样品混合均匀，迅速分成两份，分装于清洁干燥的具塞瓶(样品袋)中，贴上标签，注明产品名称、批号、取样日期，一份供产品检测用，另一份在样品室中密封保存备查。
(2)外观
用目测法检验待测物品的色泽为白色或类白色粉末。
(3)含量测定(液相色谱法)
色谱柱VP-ODS C18、GBD C18酸150mm×4.6mm
波长：210nm
柱温：30℃
流动相：磷酸盐缓冲液：乙腈＝80:20，(磷酸盐缓冲液：取无水磷酸二氢钾4.9g和无水磷酸氢二钾0.45g，加水溶解并稀释至1000ml)
速度：2ml/min
供试品：精密称定，加流动相溶解制成每1ml中含美洛西林酸1mg的溶液。
精密量取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取美洛西林酸对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品的含量。
(4)水分测定
用水分测定仪测定；打开机器，先将系统中的水分预滴定除去，精密称取纯化水10～30mg，用水分测定仪直接标定。精密称取供试品适量，除另外规定外，溶剂为无水甲醇，用水分测定仪直接测定。
(5)比旋度测定。
精密称定样品，加PH7.8～8.0的磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钾5.59g和磷酸二氢钾0.41g，加水溶解并稀释至1000ml)溶解，制成每1ml中含美洛西林酸10mg的溶液，将测定管用测试液冲洗数次，置于旋光仪内检测读数，即得测试液的旋光度，用同法读取旋光度3次，取3次的平均值，即得测试品的比旋度，依按下列公式计算：
(6)溶液的澄清度与颜色
称取样品2.0g，加1.6％碳酸氢钠溶液20ml溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，均不得更浓。本标准规定的“澄明”，系指供试品溶液的澄清度与所用溶剂相同，或不超过0.5号浊度标准的浊度。
浊度标准贮备液的制备称取于105℃干燥至恒重的硫酸肼1.00g,置100ml量瓶中，加水适量使溶解，必要时可在40℃的水浴中温热溶解，并用水稀释至刻度摇匀，放置4～6小时；取此溶液与等容量的10％乌洛托品溶液混合摇匀，于25℃避光静置24小时，即得。该溶液置冷处避光保存，可在2个月内使用，用前摇匀。
浊度标准溶液的制备取浊度标准贮备液15.0ml置1000ml量瓶中，加水稀释置刻度摇匀，取适量置1cm吸收池中，照紫外-可见分光光度法，在550nm的波长处测定，其吸光度应在0.12～0.15范围内。该溶液应在48小时内使用。用前摇匀。
浊度标准液的制备取浊度标准原液与水，按下表配制，即得。浊度标准溶液应临用时制备，使用前充分摇匀。
级号 0.5 1 2 3 4
浊度标准原液/ml 2.50 5.0 10. 30 50
水/ml 97.50 95.0 90.0 70.0 50.0
(7)有关物质测定
精密称取样品适量，加流动相溶解并制成每1ml中含美洛西林酸2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加水稀释成每1ml含美洛西林酸20μg的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件进行试验，取对照品溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测器的灵敏度，使主成分的峰高约为满量程的10％～15％，再取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍。供试品溶液如显杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰的峰面积的0.3倍(0.3％)，各杂质的峰面积总和不得大于对照溶液主峰的峰面积的0.8倍(0.8％)。
(8)细菌内毒素检查
精密称取0.5g样品于10ml无热源容量瓶中，加适量0.5mol/L氢氧化钠溶液溶解后用检查用水稀释，调节溶液PH值为6.5，制成10ml美洛西林钠溶液，每1mg美洛西林酸中含内毒素的量应小于0.06EU。
检查操作本实验使用0.125EU/ml规格的鲎试剂。取鲎试剂8支，折断安瓿瓶，其中2支作供试品检查管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。阴性对照管加入0.2ml检查用水，其余各管加入0.1ml检查用水；每支供试品检查管另加入0.1ml供试品；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ内毒素的供试品。封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37±1℃的恒温器中孵欲60±2分钟，然后取出观察结果。试管在孵育期间应避免任何的振动。
结果判断将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°时，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管滑脱者为阳性，记录为(+)；未形成凝胶或形成的凝胶不结实、变形并从壁管滑脱者为阴性，记录为(-)。保温和拿取试管应避免受到振动造成假阴性结果。阴性对照管必须是阴性，阳性对照管、供试品对照管必须是阳性，否则实验结果无效。若阴性对照管是阳性，表明鲎试剂或检查用水或试验器具受到污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确，或实验条件不满足；供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。
(9)细度检测
称取样品适量(准确至0.1g)，用60目分样筛进行过筛，通过部分产品的质量分数应不小于85％。
(10)聚合物测定
色谱柱：葡聚糖凝胶柱G10(40～120μm)300mm×10mm
流速：1.5ml/min
波长：254nm
柱温：室温
流动相A：PH8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸二氢钠——0.05mol/L磷酸氢二钠溶液(95：5)]
流动相B：水
精密称取美洛西林酸适量，加0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解澄明后，用水定量稀释制成每1ml中含0.3mg溶液，作为对照品溶液。精密称取0.3g样品，置10ml容量瓶中，加0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解澄明后，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液20μl进样，以流动相A为流动相依法测定(中国药典2015版四部通则0514——分子排阻色谱法)。另精密量取对照品溶液20μl进样，以流动相B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算，含美洛西林酸聚合物以美洛西林酸计，不得过0.08％。
(11)残留溶剂乙醇、乙酸乙酯测定
精密称取样品100mg，置于20ml顶空瓶中，精密量取2ml0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解，密封瓶口，作为供试品溶液。精密量取乙醇30μl，乙酸乙酯28μl，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置于20ml顶空瓶中，密封瓶口，作为对照品溶液。照中国药典2015版四部通则0861——残留溶剂测定法第一法测定，以6％氰丙基苯—94％二甲基硅氧烷(或极性相似)为固定液的毛细管色谱柱，柱温为100℃，检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为250℃；进样口温度为200℃；顶空进样，顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，进样体积为1ml。精密量取对照品溶液与供试品溶液，分别顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含乙醇不得过0.5％，含乙酸乙酯不得过0.5％。
美洛西林酸是一种十分重要的医药中间体，主要用于新型青霉素的合成，是第三代青霉素美洛西林的基础原料。本发明参照药典中美洛西林钠的要求及国内有关药厂反馈的数据，结合实际情况而制定，使用安全。
本发明产品对血液学影响：未发现引起白细胞总数减少、血小板减少、嗜酸粒细胞增多。对心血管系统的影响：未发现患者静脉给药时偶可出现血栓性静脉炎。胃肠道的影响：使用美洛西林酸治疗后，未发现患者可出现食欲减退、腹泻等消化道症状。皮肤的影响：未发现患者出现皮肤反应，如全身性皮疹、发热、荨麻疹、瘙痒等。
具体实施方式
本发明提供一种美洛西林酸，其特征在于，
其化学名：(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-[(R)-2-{3-(甲磺酰-2-氧代-1-咪唑烷碳酰胺)-2-苯乙酰胺基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3,2,0]-庚烷-2-羧酸；
结构式：
分子式：C21H25N5O8S2
相对分子质量：539.6。
本发明美洛西林酸的技术指标如表1。
表1
本发明还提供一种美洛西林酸的质量指标检测方法，包括如下步骤：
(1)抽样；
(2)用目测法检验外观；
(3)用液相色谱法进行含量测定；
(4)水分测定；
(5)比旋度测定；
(6)检测溶液的澄清度与颜色；
(7)有关物质测定；
(8)细菌内毒素检查；
(9)细度检测；
(10)聚合物测定；
(11)残留溶剂乙醇、乙酸乙酯测定。
具体步骤如下：
(1)抽样
当每批产品总件数n≤300时抽取n0.5+1件；总件数n≥300时，抽取n0.5/2+1件。取样量为六倍的检验量。把抽取样品混合均匀，迅速分成两份，分装于清洁干燥的具塞瓶(样品袋)中，贴上标签，注明产品名称、批号、取样日期，一份供产品检测用，另一份在样品室中密封保存备查。
(2)外观
用目测法检验待测物品的色泽为白色或类白色粉末。
(3)含量测定(液相色谱法)
色谱柱VP-ODS C18、GBD C18酸150mm×4.6mm
波长：210nm
柱温：30℃
流动相：磷酸盐缓冲液：乙腈＝80:20，(磷酸盐缓冲液：取无水磷酸二氢钾4.9g和无水磷酸氢二钾0.45g，加水溶解并稀释至1000ml)
速度：2ml/min
供试品：精密称定，加流动相溶解制成每1ml中含美洛西林酸1mg的溶液。
精密量取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取美洛西林酸对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品的含量。
(4)水分测定
用水分测定仪测定；打开机器，先将系统中的水分预滴定除去，精密称取纯化水10～30mg，用水分测定仪直接标定。精密称取供试品适量，除另外规定外，溶剂为无水甲醇，用水分测定仪直接测定。
(5)比旋度测定。
精密称定样品，加PH7.8～8.0的磷酸盐缓冲液(取无水磷酸氢二钾5.59g和磷酸二氢钾0.41g，加水溶解并稀释至1000ml)溶解，制成每1ml中含美洛西林酸10mg的溶液，将测定管用测试液冲洗数次，置于旋光仪内检测读数，即得测试液的旋光度，用同法读取旋光度3次，取3次的平均值，即得测试品的比旋度，依按下列公式计算：
(6)溶液的澄清度与颜色
称取样品2.0g，加1.6％碳酸氢钠溶液20ml溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，均不得更浓。本标准规定的“澄明”，系指供试品溶液的澄清度与所用溶剂相同，或不超过0.5号浊度标准的浊度。
浊度标准贮备液的制备称取于105℃干燥至恒重的硫酸肼1.00g,置100ml量瓶中，加水适量使溶解，必要时可在40℃的水浴中温热溶解，并用水稀释至刻度摇匀，放置4～6小时；取此溶液与等容量的10％乌洛托品溶液混合摇匀，于25℃避光静置24小时，即得。该溶液置冷处避光保存，可在2个月内使用，用前摇匀。
浊度标准溶液的制备取浊度标准贮备液15.0ml置1000ml量瓶中，加水稀释置刻度摇匀，取适量置1cm吸收池中，照紫外-可见分光光度法，在550nm的波长处测定，其吸光度应在0.12～0.15范围内。该溶液应在48小时内使用。用前摇匀。
浊度标准液的制备取浊度标准原液与水，按下表配制，即得。浊度标准溶液应临用时制备，使用前充分摇匀。
级号 0.5 1 2 3 4
浊度标准原液/ml 2.50 5.0 10. 30 50
水/ml 97.50 95.0 90.0 70.0 50.0
(7)有关物质测定
精密称取样品适量，加流动相溶解并制成每1ml中含美洛西林酸2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加水稀释成每1ml含美洛西林酸20μg的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件进行试验，取对照品溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测器的灵敏度，使主成分的峰高约为满量程的10％～15％，再取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍。供试品溶液如显杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰的峰面积的0.3倍(0.3％)，各杂质的峰面积总和不得大于对照溶液主峰的峰面积的0.8倍(0.8％)。
(8)细菌内毒素检查
精密称取0.5g样品于10ml无热源容量瓶中，加适量0.5mol/L氢氧化钠溶液溶解后用检查用水稀释，调节溶液PH值为6.5，制成10ml美洛西林钠溶液，每1mg美洛西林酸中含内毒素的量应小于0.06EU。
检查操作本实验使用0.125EU/ml规格的鲎试剂。取鲎试剂8支，折断安瓿瓶，其中2支作供试品检查管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。阴性对照管加入0.2ml检查用水，其余各管加入0.1ml检查用水；每支供试品检查管另加入0.1ml供试品；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ内毒素的供试品。封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37±1℃的恒温器中孵欲60±2分钟，然后取出观察结果。试管在孵育期间应避免任何的振动。
结果判断将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°时，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管滑脱者为阳性，记录为(+)；未形成凝胶或形成的凝胶不结实、变形并从壁管滑脱者为阴性，记录为(-)。保温和拿取试管应避免受到振动造成假阴性结果。阴性对照管必须是阴性，阳性对照管、供试品对照管必须是阳性，否则实验结果无效。若阴性对照管是阳性，表明鲎试剂或检查用水或试验器具受到污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确，或实验条件不满足；供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。
(9)细度检测
称取样品适量(准确至0.1g)，用60目分样筛进行过筛，通过部分产品的质量分数应不小于85％。
(10)聚合物测定
色谱柱：葡聚糖凝胶柱G10(40～120μm)300mm×10mm
流速：1.5ml/min
波长：254nm
柱温：室温
流动相A：PH8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸二氢钠——0.05mol/L磷酸氢二钠溶液(95：5)]
流动相B：水
精密称取美洛西林酸适量，加0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解澄明后，加水定量稀释制成每1ml中含0.3mg溶液，作为对照品溶液。精密称取0.3g样品，置10ml容量瓶中，加0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解澄明后，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液20μl进样，以流动相A为流动相依法测定(中国药典2015版四部通则0514——分子排阻色谱法)。另精密量取对照品溶液20μl进样，以流动相B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算，含美洛西林酸聚合物以美洛西林酸计，不得过0.08％。
(11)残留溶剂乙醇、乙酸乙酯测定
精密称取样品100mg，置于20ml顶空瓶中，精密量取2ml0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解，密封瓶口，作为供试品溶液。精密量取乙醇31μl，乙酸乙酯28μl，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置于20ml顶空瓶中，密封瓶口，作为对照品溶液。照中国药典2015版四部通则0861——残留溶剂测定法第一法测定，以稀释制成每1ml中含0.3mg溶液，作为对照品溶液。以6％氰丙基苯—94％二甲基硅氧烷(或极性相似)为固定液的毛细管色谱柱，柱温为100℃，检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为250℃；进样口温度为200℃；顶空进样，顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，进样体积为1ml。精密量取对照品溶液与供试品溶液，分别顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含乙醇不得过0.5％，含乙酸乙酯不得过0.5％。
美洛西林酸是一种十分重要的医药中间体，主要用于新型青霉素的合成，是第三代青霉素美洛西林的基础原料。本发明国内有关药厂反馈的数据，结合实际情况而发明制定。
本发明方法得到的数据见表1。
表一

Claims (7)

1.一种美洛西林酸的质量指标检测方法，所述美洛西林酸的化学名为：(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-[(R)-2-{3-(甲磺酰-2-氧代-1-咪唑烷碳酰胺)-2-苯乙酰胺基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3,2,0]-庚烷-2-羧酸；所述美洛西林酸的结构式为：
所述美洛西林酸的分子式：C21H25N5O8S2；所述美洛西林酸的相对分子质量：539.6，
美洛西林酸的技术指标包括：含量不少于98.5％、水分不多于5％、比旋度不小于+186、溶液应澄清无色、如显浑浊、应小于1号浊度标准液、聚合物不大于0.08％、乙酸乙酯不大于0.5％、乙醇不大于0.5％、通过60目筛的部分的质量分数应不小于85％；
所述检测方法包含如下步骤：
(1)抽样；(2)用目测法检验外观；(3)用HPLC外标法进行含量测定；(4)水分测定；(5)比旋度测定；(6)检测溶液的澄清度与颜色；(7)有关物质测定；(8)细菌内毒素检查；(9)细度检测；(10)聚合物测定；以及(11)残留溶剂乙醇、乙酸乙酯测定；
其中：
所述步骤(5)比旋度测定的方法为：取无水磷酸氢二钾5.59g和磷酸二氢钾0.41g，加水溶解并稀释至1000ml，制成PH7.8～8.0的磷酸盐缓冲液；精密称取样品，加所述PH7.8～8.0的磷酸盐缓冲液溶解，制成每1ml中含美洛西林酸10mg的溶液，将测定管用测试液冲洗数次，置于旋光仪内检测读数，即得测试液的旋光度，用同法读取旋光度3次，取3次的平均值，即得测试品的比旋度，按下列公式计算：
所述步骤(7)有关物质测定，精密称取样品适量，加流动相溶解并制成每1ml中含美洛西林酸2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加水稀释成每1ml含美洛西林酸20μg的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件进行试验，取对照品溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测器的灵敏度，使主成分的峰高为满量程的10％～15％，再取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍；供试品溶液如显杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰的峰面积的0.3倍，各杂质的峰面积总和不得大于对照溶液主峰的峰面积的0.8倍；
所述步骤(8)细菌内毒素检查的方法为，精密称取0.5g样品于10ml无热源容量瓶中，加适量0.5mol/L氢氧化钠溶液溶解后用检查用水稀释，调节溶液PH值为6.5，制成10ml美洛西林钠溶液，每1mg美洛西林酸中含内毒素的量应小于0.06EU；取0.125EU/ml规格的鲎试剂8支，折断安瓿瓶，其中2支作供试品检查管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管，所述阴性对照管加入0.2ml检查用水，其余各管加入0.1ml检查用水；每支供试品检查管另加入0.1ml供试品；所述阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ内毒素的供试品，封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37+1℃的恒温器中孵育60±2分钟，试管在孵育期间避免任何的振动；将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°时，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管滑脱者为阳性，记录为+；未形成凝胶或形成的凝胶不结实、变形并从壁管滑脱者为阴性，记录为-；
所述步骤(9)细度检测的方法为：称取样品适量，用60目分样筛进行过筛。
2.根据权利要求1所述的美洛西林酸的质量指标检测方法，其中所述步骤(6)检测溶液的澄清度与颜色的方法为：
称取样品2.0g，加1.6％碳酸氢钠溶液20ml溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，均不得更浓；
所述浊度标准溶液的制备方法为：取浊度标准原液与水配制，其中1号浊度标准液由5ml浊度标准原液与95ml水配制而得；
所述浊度标准原液的制备方法为：取浊度标准贮备液15.0ml置1000ml量瓶中，加水稀释置刻度摇匀，取适量置1cm吸收池中，照紫外-可见分光光度法，在550nm的波长处测定，其吸光度应在0.12～0.15范围内；
所述浊度标准贮备液的制备方法为：称取于105℃干燥至恒重的硫酸肼1g,置100ml量瓶中，加水适量使溶解，在40℃的水浴中温热溶解，并用水稀释至刻度摇匀，放置4～6小时；取此溶液与等容量的10％乌洛托品溶液混合摇匀，于25℃避光静置24小时。
3.根据权利要求1或2所述的美洛西林酸的质量指标检测方法，其中：所述步骤(1)抽样的方法为：当每批产品总件数n≤300时抽取n0.5+1件，总件数n≥300时，抽取n0.5/2+1件，取样量为六倍的检验量，把抽取样品混合均匀，迅速分成两份，分装于清洁干燥的具塞瓶或样品袋中，贴上标签，注明产品名称、批号、取样日期，一份供产品检测用，另一份在样品室中密封保存备查。
4.根据权利要求1或2所述的美洛西林酸的质量指标检测方法，其中：所述步骤(3)用HPLC外标法进行含量测定的方法为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液：乙腈＝80:20为流动相，其中磷酸盐缓冲液为：取无水磷酸二氢钾4.9g和无水磷酸氢二钾0.45g，加水溶解并稀释至1000ml；检测波长为210nm，流速为2ml/min，取供试品适量，加流动相溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品的含量。
5.根据权利要求1或2所述的美洛西林酸的质量指标检测方法，其中：所述步骤(4)水分测定的方法为：用水分测定仪测定；打开水分测定仪，先将系统中的水分预滴定除去，精密称取纯化水10～30mg，用水分测定仪直接标定，精称取供试品适量，溶剂为无水甲醇，用水分测定仪直接测定。
6.根据权利要求1或2所述的美洛西林酸的质量指标检测方法，其中所述步骤(10)聚合物测定的方法为：
色谱柱：40～120μm葡聚糖凝胶柱G10 300mm×10mm
流速：1.5ml/min
波长：254nm
柱温：室温
流动相A：PH8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液
流动相B：水
精密称取美洛西林酸适量，加0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解澄明后，用水定量稀释制成每1ml中含0.3mg溶液，作为对照品溶液；精密称取0.3g样品，置10ml容量瓶中，加0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解澄明后，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取20μl进样，以流动相A为流动相依法测定；另精密量取对照品20μl进样，以流动相B为流动相，同法测定。
7.根据权利要求1或2所述的美洛西林酸的质量指标检测方法，其中所述步骤(11)残留溶剂乙醇、乙酸乙酯测定为：精密称取样品100mg，置于20ml顶空瓶中，精密量取2ml0.5mol/L碳酸氢钠溶液溶解，密封瓶口，作为供试品溶液；精密量取乙醇30μl，乙酸乙酯28μl，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置于20ml顶空瓶中，密封瓶口，作为对照品溶液；以6％氰丙基苯—94％二甲基硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱，柱温为100℃，检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃；进样口温度为200℃；顶空进样，顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，进样体积为1ml；精密量取对照品溶液与供试品溶液，分别顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
CN201710347177.2A 2017-05-17 2017-05-17 一种美洛西林酸及其质量指标检测方法 Active CN106932347B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710347177.2A CN106932347B (zh) 2017-05-17 2017-05-17 一种美洛西林酸及其质量指标检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710347177.2A CN106932347B (zh) 2017-05-17 2017-05-17 一种美洛西林酸及其质量指标检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106932347A CN106932347A (zh) 2017-07-07
CN106932347B true CN106932347B (zh) 2019-04-12

Family

ID=59430200

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710347177.2A Active CN106932347B (zh) 2017-05-17 2017-05-17 一种美洛西林酸及其质量指标检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106932347B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109580414A (zh) * 2018-10-19 2019-04-05 江苏浦金药业有限公司 一种蟾酥注射液的检验方法
CN112903866A (zh) * 2021-02-02 2021-06-04 郑州泰丰制药有限公司 一种富马酸丙酚替诺福韦中三乙胺含量的测定方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1836666A (zh) * 2005-03-25 2006-09-27 山东绿叶制药股份有限公司 注射用水溶性维生素及其制备工艺和质量控制方法
CN101328187A (zh) * 2007-06-20 2008-12-24 瑞阳制药有限公司 美洛西林的制备工艺
CN101550144A (zh) * 2009-05-22 2009-10-07 菏泽睿昌化工有限责任公司 美洛西林酸的制备工艺
CN101585845A (zh) * 2009-05-08 2009-11-25 浙江金华康恩贝生物制药有限公司 美洛西林的制备方法
CN101696959A (zh) * 2009-02-11 2010-04-21 海南中和药业有限公司 一种醋酸阿托西班及其制剂的含量测定和有关物质测定的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1836666A (zh) * 2005-03-25 2006-09-27 山东绿叶制药股份有限公司 注射用水溶性维生素及其制备工艺和质量控制方法
CN101328187A (zh) * 2007-06-20 2008-12-24 瑞阳制药有限公司 美洛西林的制备工艺
CN101696959A (zh) * 2009-02-11 2010-04-21 海南中和药业有限公司 一种醋酸阿托西班及其制剂的含量测定和有关物质测定的方法
CN101585845A (zh) * 2009-05-08 2009-11-25 浙江金华康恩贝生物制药有限公司 美洛西林的制备方法
CN101550144A (zh) * 2009-05-22 2009-10-07 菏泽睿昌化工有限责任公司 美洛西林酸的制备工艺

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HPLC梯度洗脱法测定美洛西林钠有关物质;彭力 等;《药学进展》;20130430;第37卷(第4期);第177-181页
注射用美洛西林钠现行标准分析及质量评价;凌霄 等;《中国抗生素杂质》;20151231;第40卷(第12期);第933-937页

Also Published As

Publication number Publication date
CN106932347A (zh) 2017-07-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102440989A (zh) 复方氨基酸注射液及其制备方法、检测方法
CN104698106B (zh) 一种化学药物盐酸阿考替胺中有关物质的检测方法
CN106932347B (zh) 一种美洛西林酸及其质量指标检测方法
CN107907603A (zh) 一种测定氨基酸类注射液色氨酸有关物质的测定方法
EP3954371A1 (en) Anti-acetylcholinesterase active composition in caulis mahoniae and screening method therefor and application thereof
CN108169344A (zh) 一种检测美沙拉嗪特定杂质的方法
CN110398555A (zh) 一种卡培他滨有关物质的检测方法
CN106706789B (zh) 用高效液相色谱法测定盐酸屈他维林注射液中有关物质的方法
Schwartz et al. Kinetic analysis of penicilloic acid and penicilloamides in combination: Application to products of reaction of penicillin with tromethamine (Tris) and poly-l-lysine
CN105301127B (zh) 一种利巴韦林药物组合物及其有关物质检测方法
CN112666280B (zh) 一种青黛辐照前后主要成分的测定方法
CN109900830A (zh) 采用hplc分离测定塞来昔布中磺酰胺类杂质的方法及应用
CN108614052A (zh) 基于二维液相色谱同时检测生物样本中钩吻素甲、钩吻素子和钩吻素己的方法
CN108828085A (zh) 一种转移因子胶囊的总氨基酸定量检测方法
CN106525994A (zh) 一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法
CN110441421A (zh) 一种高效液相色谱法测定恩他卡朋片溶出度的方法
CN103901147B (zh) 一种穿心莲内酯滴丸溶出度的测定方法
CN104597157B (zh) 一种脂溶性铂配合物及其制剂有关物质的测定方法
CN110441424A (zh) 一种液相色谱法分析测定吡嗪酰胺中有关物质的方法
CN110118836A (zh) 高效液相色谱法测定利伐沙班中遗传毒性杂质的方法
Evgen’ev et al. Reversed-phase liquid chromatographic determination of isoniazide in human urine as a test of the genetically predetermined type of biotransformation by acetylation
CN108414636A (zh) 一种桂利嗪有关物质的检测方法
CN107525875A (zh) 一种加米霉素有关物质的检测方法
CN112946129A (zh) 一种止泻糖浆剂的质量检测方法
CN108303478B (zh) 高效液相色谱串联质谱测蜂王浆中硝基咪唑类残留的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Zhang Shiquan

Inventor after: Luo Meiyu

Inventor after: Luo Donghong

Inventor after: Li Jianwei

Inventor after: Zhong Xueping

Inventor after: Wang Junwen

Inventor before: Luo Meiyu

Inventor before: Luo Donghong

Inventor before: Li Jianwei

Inventor before: Zhang Shiquan

Inventor before: Zhong Xueping

Inventor before: Wang Junwen

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant