CN106929451A - 一株猪链球菌及其应用 - Google Patents

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徐引弟
张青娴
王治方
郎利敏
李海利
朱文豪
焦文强
张立宪
游
游一
王克领
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Abstract

本发明公开了一株猪链球菌及其应用，所述的猪链球菌为猪链球菌(Streptococcus suis)HNSS1，保藏编号：CGMCC NO：13334，保藏日期：2016年11月22日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明中的菌株HNSS1分离自发生典型呼吸道症状及神经症状死亡的保育猪的脑组织，在TSA固体培养基上分离时无其它细菌生长，只有猪链球菌生长，在TSB液体培养基中增殖滴度高，达109CFU/mL以上。本发明中的菌株HNSS1对保育猪具有较强的致病力，引起保育猪发病死亡，具有良好的免疫原性。

Description

一株猪链球菌及其应用
技术领域
本发明涉及分子生物技术领域，特别涉及一株猪链球菌及其应用。
背景技术
猪链球菌(Streptococcus Suis,SS)是国家规定的一种二类动物疫病，它是一类人畜共患的急性、热性的传染性疾病，是引起猪链球菌病的主要病原，主要引起猪脑膜炎以及败血症等疫病。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原可将之分为35个血清型，即1～34型和1/2型。对猪致病性较强的是1型、2型、1/2型、7型和9型。其中猪链球菌2型是流行最广、致病性最强的血清型，其次是9型、7型、1型。近几年来，猪2型链球菌引起的猪链球菌病呈上升趋势。该病以急性败血症为主，发病急，死亡快，给养猪业造成巨大的经济损失，并且猪2型链球菌可以引起了人的感染和死亡。另外，该病经常与猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征、猪的附红细胞体病以及非典型猪瘟混合感染，所以一旦发生此病将很难控制，从而给养殖户造成重大经济财产损失，给我国养猪业的发展带来巨大的困难。因此该病的研究对畜牧业及公共卫生业上均有重要意义。
国内外研究认为猪链球菌的致病性与其毒力因子有密切关系，目前研究较多的猪链球菌主要毒力因子有荚膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)、溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein，MRP)、胞外因子(extracellular protein fateror，EF)和溶血素(suilysin，SLY)。在先研发的很多药物对猪链球菌病都能起到很好的治疗效果，但是随着养殖规模发展，大量抗菌药物的使用，休药期药物的不合理使用，都造成病原菌的耐药现象越来越严重，越来越不利于临床疾病的预防和治疗。因此亟需研发一种新的具有较好免疫原性的菌株制备的疫苗。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的是提供一株猪链球菌及其应用，该菌株毒力强，制备的疫苗免疫性好。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一株猪链球菌，所述的猪链球菌为猪链球菌(Streptococcus suis)HNSS1，保藏编号：CGMCC NO：13334，保藏日期：2016年11月22日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述的猪链球菌为猪链球菌2型。
一种猪链球菌在制备猪链球菌灭活疫苗方面的应用。
所述的猪链球菌灭活疫苗中，猪链球菌菌量为1×109CFU/mL。
所述的猪链球菌灭活疫苗的制备方法为：将所述的猪链球菌依次经过培养、收获和灭活得到疫苗原液后，加入佐剂即得疫苗。
所述的佐剂为氢氧化铝佐剂。
所述的猪链球菌灭活疫苗的制备方法为：将猪链球菌接种到TSB液体培养基，置于37℃摇床中培养，18h后收取培养物，测定浓度，调整培养物中的菌数为2×109CFU/mL，加入甲醛至终浓度为0.2％，于37℃灭活12h；灭活后的培养物按体积比1:1加入氢氧化铝佐剂，混合制得猪链球菌灭活疫苗。
本发明的有益效果：
1、本发明中的菌株HNSS1分离自发生典型呼吸道症状及神经症状死亡的保育猪的脑组织，在TSA固体培养基上分离时无其它细菌生长，只有猪链球菌生长，在TSB液体培养基中增殖滴度高，达109CFU/mL以上。
2、本发明中的菌株HNSS1对保育猪具有较强的致病力，引起保育猪发病死亡，具有良好的免疫原性。
3、根据本发明中的菌株HNSS1制备的疫苗对猪的猪链球菌病具有较好的保护效果。
附图说明
图1为菌株HNSS1菌落形态。
图2为菌株HNSS1菌体革兰氏染色100×显微镜下形态。
图3为菌株HNSS1的PCR鉴定结果，图中的Marker为DL 2000bp，从上到下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp，100bp；1为引物SS1，SS2扩增gdh基因结果；2为引物SS3，SS4扩增cps2J基因结果；3为引物mrp1，mrp2扩增mrp基因结果；4为引物sly1，sly2扩增sly基因结果；5为引物epf1，epf2扩增epf基因结果。从图可以看出，所分离株鉴定为2型猪链球菌，并且毒力因子的基因型为sly+mrp+epf+。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1、猪链球菌的分离和鉴定
1.1病料采集
病料来自于2016年11月在河南省浚县某大型养猪场发生重症肺炎呼吸困难及神经症状死亡的2月龄保育猪。
1.2培养基的制备
TSB液体培养基：将TSB肉汤粉(Tryptic Soy broth，胰蛋白胨大豆肉汤)30g，溶于1000mL超纯水中，115℃灭菌15min，加胎牛血清50mL、无菌1％NAD(Nicotinamide adeninedinucleotide，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，辅酶Ⅰ)1mL。
TSA固体培养基：将TSA琼脂粉(Tryptic Soy Agar，胰蛋白胨大豆琼脂)40g，溶于1000mL超纯水中，115℃灭菌15min，加胎牛血清50mL、无菌1％NAD 1mL；于4℃保存备用。
1.3菌株的分离培养
无菌采集病猪的脑组织接种于含有NAD的TSA固体培养基上，37℃恒温培养箱中培养24h，长出一致的针尖状大小、在血平板上单个菌落0.5～1mm、灰白色半透明，圆形、光滑、边缘整齐的呈α溶血(见图1)。纯化接种后，进行革兰氏染色(见图2)，该菌为革兰氏阳性菌，圆形或卵圆形，链状排列或成双，链的长短不一，命名为菌株HNSS1。
1.4菌株的鉴定
1.4.1设计引物
根据猪链球菌gdh基因的序列设计一对通用引物，用于猪链球菌的扩增，引物序列如下：
SS1：5’-GCAGCGTATTCTGTCAAACG-3’(SEQ ID NO.1)
SS2：5’-CCATGGACAGATAAAGATGG-3’(SEQ ID NO.2)
扩增片段大小为689bp。
根据猪链球菌cps2J基因的序列设计一对猪链球菌2型的特异性引物，用于猪链球菌2型的扩增，引物序列如下：
SS3：5’-TGATAGTGATTTGTCGGGAGGG-3’(SEQ ID NO.3)
SS4：5’-GAGTA TCTAAAGAATGCCTATTG-3’(SEQ ID NO.4)
扩增片段大小为557bp。
根据猪链球菌胞外因子(epf)基因的序列设计一对引物，用于猪链球菌胞外因子(epf)基因的扩增，引物序列如下：
epf1：5’-GCTACGACGGCCTCAGAAATC-3’(SEQ ID NO.5)
epf2：5’-TGGA TCAACCACTGGTGTTAC-3’(SEQ ID NO.6)
扩增片段大小为626bp。
根据猪链球菌溶菌酶释放蛋白(mrp)基因的序列设计一对引物，用于猪链球溶菌酶释放蛋白(mrp)基因的扩增，引物序列如下：
mrp1：5’-ATCAGAATCACCACTTTTGG-3’(SEQ ID NO.7)
mrp2：5’-TCA TACCCA GTAAATACACG-3’(SEQ ID NO.8)
扩增片段大小为885bp。
根据猪链球菌溶血素(sly)基因的序列设计一对引物，用于猪链球溶血素(sly)基因的扩增，引物序列如下：
sly1：5’-ATGAGAAAAAGTTCGCACTTGATT-3’(SEQ ID NO.9)
sly2：5’-TT GCCAGATTACTCTATCA-3’(SEQ ID NO.10)
扩增片段大小为1502bp。
1.4.2 PCR鉴定
按照DNA提取试剂盒的操作步骤提取出菌株HNSS1的DNA，分光光度计测定浓度为100μg/mL，进行PCR鉴定。
PCR扩增反应体系为25μL：10×缓冲液2.5μL，2.5mM(each)dNTPs Mix 0.5μL，10μM/L通用引物SS1，SS2各1μL，5U/μL rTaq 1μL，100μg/mL DNA模板1μL，加入ddH2O至25μL。
反应条件：95℃预变性5min，进入循环：95℃1min，57℃1min，72℃30s，共35个循环，最后72℃延伸10min，PCR产物4℃保存。
扩增产物分别进行电泳，每孔加样10μL，1％琼脂糖凝胶电泳，紫外光下观察结果(见图3)。结果扩增出689bp片段，测序与猪链球菌SS2-1株(GenBank NO：CP018908)100％同源，测序结果如下，证明菌株HNSS1为猪链球菌(Streptococcus suis)。
GCAGCGTATTCTGTCAAACGAGCGCGGCGTTTTTCTTTGATGTCCACCAAGAGGTCGAAGTCGATACCAGTTTCGTCAATGATGTAACCATTTGAGTCTGAAACAGAAATAACTTTTGCACCAAGTTCAGTCGCTTTTTGAACAGCATATTGGGCAACGTTACCAGAACCTGAGATAAGGACAGTTTGGTCTTTGAAGGATTTACCGTTTGCTGCCAACATGTTATCAGTGAAGTAAACCAAACCGTAACCAGTTGCTTCTGGGCGGATCAATGAACCACCGAAGCCAAGAGGTTTACCAGTCAAGACACCTGCATCAAACTGGCGGAGGCGTTTGTATTGACCGTACATGTAACCGATCTCACGACCACCGACACCGATGTCACCAGCAGGGACGTCAAGTGAAGGTCCGATGTGTTTTTGCAATTCAGTCATGAAGCTTTGGCAGAAGCGCATGATTTCAGCATCAGTTTTTCCTTTAGGATCAAAGTCTGAACCACCTTTACCACCGCCGATTGGAAGACCAGTCAAGACGTTTTTGAAGATTTGCTCAAAACCGAGGAACTTCAAGATGGATTGGTTTACAGTTGGGTGGAAGCGAAGACCGCCTTTATAAGGACCTACAGCTGAGTTGAACTGAACACGGTAGCCACGGTTGACTTGAACATTTCCATCTTTATCTGTCCATGG(SEQID NO.11)
1.4.3血清型鉴定
参照1.4.2方法，用猪链球菌2型的特异性引物SS3，SS4扩增，结果扩增出557bp大小片段(见图3)，测序与猪链球菌SS2-1株(GenBank NO:CP018908)100％同源，证明菌株HNSS1为2型猪链球菌。
1.4.4毒力因子鉴定
参照1.4.2方法，用猪链球菌猪链球菌胞外因子(epf)基因、溶菌酶释放蛋白(mrp)基因、溶血素(sly)基因引物扩增，结果分别扩增出626bp、885bp、1502bp大小片段，测序与猪链球菌SS2-1株(GenBank NO：CP018908)100％同源，证明所分离的2型猪链球菌的毒力因子的基因型为sly+mrp+epf+。
1.5毒力试验
试验动物为4～7周龄断奶健康的保育猪10只。试验动物分为两组，对照组5只，试验组5只。将HNSS1接种TSB液体培养基，37℃摇床培养18h后，测定菌体浓度，连续10倍稀释涂布固体平板，低倍镜下活菌计数，计算原液菌体浓度，为2.5×109CFU/mL，再调整至108CFU/mL，试验组动物通过颈部肌肉注射接种3mL猪链球菌液体培养物，对照组动物通过颈部肌肉注射接种3mL灭菌的TSB液体培养基。注射后连续观察2周，观察并记录其发病数和死亡数等情况。
试验组动物在接种猪链球菌24h后表现出明显高热、关节肿、角弓反张、四肢划水、呼吸困难、鼻孔流血等症状，3天内全部死亡。对照组动物在试验期间体温正常且无明显的呼吸道症状。试验结束后剖杀试验组动物，同时剖杀4头对照组动物。采集病料，进行猪链球菌分离。试验组剖检肺出血肿大，关节积液，脑部出血。对照组剖检均未发生明显的病理变化，对照组的4份病料均未分离到猪链球菌，试验组的4份病料中均分离到猪链球菌，PCR鉴定结果与HNSS1一致。
实施例2、疫苗的制备、安全性和效力试验
2.1疫苗的制备
将猪链球菌菌株HNSS1接种到TSB液体培养基，置于37℃摇床中培养，18h后收取培养物，测定浓度，调整培养物中的菌数为2×109CFU/mL，加入甲醛至终浓度为0.2％，于37℃灭活12h。灭活后的培养物按体积比1:1加入氢氧化铝佐剂，混合制得猪链球菌灭活疫苗。
2.2疫苗的安全性试验
选取14日龄健康保育猪10头，分为2组，每组5头。疫苗组：颈部肌肉注射4mL本疫苗；对照组：颈部肌肉注射4mL灭菌生理盐水。测定动物体温，观察临床表现，共观察2周。观察期间，疫苗组和对照组的保育猪在整个观察期间呼吸、食欲、精神状态都正常，说明本发明的灭活疫苗安全。
2.3疫苗的效力试验
选取2周龄健康仔猪30头，分为6组，每组5头。具体为：疫苗1-4组：每组分别注射本疫苗0.5ml、1ml、1.5ml和2ml，第5组为未免疫组，第6组为健康对照组，注射2mL灭菌生理盐水。疫苗组和健康对照组3周后二免注射同等剂量的疫苗或灭菌生理盐水。二免后14天各组用109CFU的HNSS1菌液采取滴鼻攻毒。观察仔猪的临床表现，并每日测定体温，共观察2周。对死亡猪肺脏等器官进行传染性胸膜肺炎放线杆菌分离培养。
观察结果：疫苗组与未免疫组有明显的差异，攻毒后第二天，未免疫组开始出现临床症状，体温升高，呼吸困难，角弓反张，第三天开始出现死亡，1周内5头全部死亡。剖检死亡猪肺脏肿大淤血或出血，关节积液，脑膜出血。健康对照组的仔猪均未发病。而疫苗组中，0.5ml疫苗组的5头仔猪中有3头出现临床症状和病例变化；1ml疫苗组的5头仔猪中有2头出现临床症状和病例变化；1.5ml疫苗组的5头仔猪中有1头出现临床症状和病例变化；2ml疫苗组的5头仔猪没有发病。免疫攻毒保护情况见下表。
注：“—”表示不适用。
由上表可以看出，本疫苗的最小免疫保护剂量为0.5ml含菌量为1×109CFU/mL。说明本发明的灭活苗具有良好的保护效果。
以上所述仅为本发明最佳的实施例，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 河南省农业科学院畜牧兽医研究所
<120> 一株猪链球菌及其应用
<160> 11
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gcagcgtatt ctgtcaaacg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ccatggacag ataaagatgg 20
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
tgatagtgat ttgtcgggag gg 22
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gagtatctaa agaatgccta ttg 23
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gctacgacgg cctcagaaat c 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
tggatcaacc actggtgtta c 21
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
atcagaatca ccacttttgg 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
tcatacccag taaatacacg 20
<210> 9
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
atgagaaaaa gttcgcactt gatt 24
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
ttgccagatt actctatca 19
<210> 11
<211> 689
<212> DNA
<213> 猪链球菌（Streptococcus suis）
<400> 11
gcagcgtatt ctgtcaaacg agcgcggcgt ttttctttga tgtccaccaa gaggtcgaag 60
tcgataccag tttcgtcaat gatgtaacca tttgagtctg aaacagaaat aacttttgca 120
ccaagttcag tcgctttttg aacagcatat tgggcaacgt taccagaacc tgagataagg 180
acagtttggt ctttgaagga tttaccgttt gctgccaaca tgttatcagt gaagtaaacc 240
aaaccgtaac cagttgcttc tgggcggatc aatgaaccac cgaagccaag aggtttacca 300
gtcaagacac ctgcatcaaa ctggcggagg cgtttgtatt gaccgtacat gtaaccgatc 360
tcacgaccac cgacaccgat gtcaccagca gggacgtcaa gtgaaggtcc gatgtgtttt 420
tgcaattcag tcatgaagct ttggcagaag cgcatgattt cagcatcagt ttttccttta 480
ggatcaaagt ctgaaccacc tttaccaccg ccgattggaa gaccagtcaa gacgtttttg 540
aagatttgct caaaaccgag gaacttcaag atggattggt ttacagttgg gtggaagcga 600
agaccgcctt tataaggacc tacagctgag ttgaactgaa cacggtagcc acggttgact 660
tgaacatttc catctttatc tgtccatgg 689

Claims (7)

1.一株猪链球菌，其特征在于：所述的猪链球菌为猪链球菌(Streptococcus suis)HNSS1，保藏编号：CGMCC NO：13334，保藏日期：2016年11月22日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.根据权利要求1所述的猪链球菌，其特征在于：所述的猪链球菌为猪链球菌2型。
3.一种猪链球菌在制备猪链球菌灭活疫苗方面的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的猪链球菌灭活疫苗中，猪链球菌菌量为1×109CFU/mL。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的猪链球菌灭活疫苗的制备方法为：将所述的猪链球菌依次经过培养、收获和灭活得到疫苗原液后，加入佐剂即得疫苗。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的佐剂为氢氧化铝佐剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的猪链球菌灭活疫苗的制备方法为：将猪链球菌接种到TSB液体培养基，置于37℃摇床中培养，18h后收取培养物，测定浓度，调整培养物中的菌数为2×109CFU/mL，加入甲醛至终浓度为0.2％，于37℃灭活12h；灭活后的培养物按体积比1:1加入氢氧化铝佐剂，混合制得猪链球菌灭活疫苗。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110075289A (zh) * 2019-04-19 2019-08-02 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗及其应用
CN110124022A (zh) * 2019-04-19 2019-08-16 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及其应用
CN110710493A (zh) * 2019-09-27 2020-01-21 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种猪链球菌9型感染豚鼠动物模型的构建及其应用
CN112063561A (zh) * 2020-09-22 2020-12-11 江苏省农业科学院 猪链球菌3型疫苗株及其应用
CN112694988A (zh) * 2020-12-15 2021-04-23 武汉市农业科学院 一种鸡源猪链球菌弱毒株及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101745105A (zh) * 2009-11-13 2010-06-23 广东永顺生物制药有限公司 猪链球菌病、多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗及其制备方法
CN101780274A (zh) * 2009-11-13 2010-07-21 广东永顺生物制药有限公司 猪链球菌病、多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗及其制备方法
CN104984336A (zh) * 2015-08-07 2015-10-21 山东华宏生物工程有限公司 一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101745105A (zh) * 2009-11-13 2010-06-23 广东永顺生物制药有限公司 猪链球菌病、多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗及其制备方法
CN101780274A (zh) * 2009-11-13 2010-07-21 广东永顺生物制药有限公司 猪链球菌病、多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗及其制备方法
CN104984336A (zh) * 2015-08-07 2015-10-21 山东华宏生物工程有限公司 一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨球 等: "猪链球菌病灭活疫苗（2型，HA9801株）的研制（二）——疫苗免疫效力的研究", 《广东畜牧兽医科技》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110075289A (zh) * 2019-04-19 2019-08-02 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗及其应用
CN110124022A (zh) * 2019-04-19 2019-08-16 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及其应用
CN110124022B (zh) * 2019-04-19 2023-01-31 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及其应用
CN110710493A (zh) * 2019-09-27 2020-01-21 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种猪链球菌9型感染豚鼠动物模型的构建及其应用
CN110710493B (zh) * 2019-09-27 2022-04-05 广东省农业科学院动物卫生研究所 一种猪链球菌9型感染豚鼠动物模型的构建及其应用
CN112063561A (zh) * 2020-09-22 2020-12-11 江苏省农业科学院 猪链球菌3型疫苗株及其应用
CN112694988A (zh) * 2020-12-15 2021-04-23 武汉市农业科学院 一种鸡源猪链球菌弱毒株及其应用
CN112694988B (zh) * 2020-12-15 2022-12-06 武汉市农业科学院 一种鸡源猪链球菌弱毒株及其应用

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