CN106884013A - 一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和试剂盒，所述引物对是SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，所述引物对用于检测ApoM基因启动子区rs805396和‑724两个位点。所述检测方法包括提取基因组DNA,设计引物对，以全基因组为模板进行PCR扩增，回收PCR扩增产物并纯化；对纯化后的PCR扩增产物进行测序，分析测序结果并判断是否发生突变。该检测方法设计巧妙、操作简单、检测结果可靠准确，根据检测方法设计出的相关试剂盒使用简便可行。

Description

一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和 试剂盒

技术领域

本发明属于基因相关位点检测技术领域，具体涉及一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和试剂盒。

背景技术

目前全世界糖尿病患者的数量已达3.66亿，全球每7秒种就有一人死于糖尿病。糖尿病是指以血糖增高为主要临床表现的慢性代谢性疾病，主要分为1型糖尿病和2型糖尿病，2型糖尿病占糖尿病患者90％以上。1型糖尿病是一种自体免疫疾病，是由于免疫系统对分泌胰岛素的胰腺β细胞作出攻击导致胰腺不能分泌足够的胰岛素。而2型糖尿病是由于各种致病因素导致组织器官产生胰岛素抵抗，即胰岛素相对缺乏，故通常临床上用胰岛素释放实验来区别糖尿病的类型。患者试验空腹及进食75克葡萄糖后30分钟、60分钟、120分钟和180分钟分别抽血测定胰岛素及C肽水平。若空腹胰岛素及C肽低于正常，且进食后不增高考虑为1型糖尿病；若空腹胰岛素及C肽低于正常、增高或降低，且进食后增高，则考虑为2型糖尿病。

2型糖尿病具体的致病原因仍然未知，现在的研究发现其是由遗传因素和环境因素共同作用导致的，其中遗传因素约占30％,环境因素约占70％。2型糖尿病的遗传风险是由多个基因共同决定的，目前为止,公认的2型糖尿病易感基因已经增至20个,同时还发现了13个影响空腹血糖的基因以及5个影响餐后血糖的基因。临床常规检查例如空腹及餐后血糖、糖化血红蛋白、C肽水平只能判断2型糖尿病的发生发展情况，但无法找到致病根源，无法根据这些指标做出及时的预防和根本性的治疗，而基因检测通过对2型糖尿病相关易感基因进行检查，能够准确的发现致病基因，准确率达到99.9999％，真正做到快速诊断疾病，发现致病根源，提前预知2型糖尿病发病风险，可通过调节饮食结构和生活方式，有效的控制疾病的发生与发展，防止并发症，还具有缩短检查流程，提升检查准确性，精确药物用量，减少药物毒副作用，提高药物治疗效果等一系列的优势。对此，我们应该尽量多发现和研究一些与2型糖尿病相关的基因易感性位点，做到有病先来防，有病正确对待并及早调整和治疗。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提供一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和试剂盒，该检测方法设计巧妙、操作简单、检测结果可靠准确，试剂盒使用简便可行，为后续的检测手段以及进一步采取有针对性的健康管理、疾病预防提供参考依据。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种引物对，所述引物对是SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，所述引物对用于检测ApoM基因启动子区rs805396和-724两个位点。

一种用于检测ApoM启动子基因序列相关位点的检测方法，包括如下步骤：

A、提取全基因组DNA；

B、根据ApoM启动子基因序列及位点设计引物对，对提取的全基因组DNA进行PCR扩增，回收PCR产物并割胶纯化；

C、对纯化后的PCR产物进行测序，并分析测序结果来判断ApoM启动子基因是否发生突变。

一种用于检测ApoM启动子基因序列的试剂盒，所述试剂盒内包括基因组DNA抽提试剂盒、PCR扩增产物纯化试剂盒、PCR反应试剂盒、BigDye测序反应试剂盒、无水乙醇试剂瓶和盛放引物对的容器。

所述试剂盒内还设有控温装置。

所述试剂盒内设有托架，所述托架设有六个凹槽容纳腔，六个凹槽容纳腔内分别放置所述基因组DNA抽提试剂盒、PCR扩增产物纯化试剂盒、PCR反应试剂盒、BigDye测序反应试剂盒、无水乙醇试剂瓶和盛放引物对的容器。

所述凹槽容纳腔的内周向侧壁设有缓冲结构。

所述试剂盒包括盒体和盖合在盒体上的盒盖，所述盒盖与盒体铰接。

所述盒体与盒盖的盖合处设有密封垫。

本发明的有益效果：本发明首次发现了ApoM基因的启动子区-724位点是2型糖尿病相关位点，与已知的rs805396位置相近，设计特异性的一对引物，以来自人的组织、全血样本提取全基因组DNA模板进行PCR扩增，并对扩增产物进行测序，该检测方法设计巧妙、操作简单、检测结果可靠准确，根据检测方法设计出的相关试剂盒使用简便可行。使用本试剂盒检测这两个相关位点，并根据这两个相关位点的具体状况作为2型糖尿病健康管理的主线，监控疾病的发生发展。如果是2型糖尿病遗传倾向较高的人群，及时预防2型糖尿病的外在致病因素，并按时完善预防性的相关的检查，例如空腹、餐后血糖，做到及早预防，早发现，早治疗甚至避免疾病的发生。通过本发明试剂盒的设计，便于放置实施检测方法过程中所使用的试剂，更利于检测试验的进行，试剂盒内控温装置的设置，便于使试剂盒在运输过程，或者取出试剂做实验过程中保持试剂盒中的试剂基本维持在实验所需要的温度。缓冲结构的设置，使放置物能够较好的固定在凹槽容纳腔内，在运输过程中不易晃动，使试剂盒在移动过程中不会造成凹槽容纳腔内放置物易破损情况的发生。

附图说明

本说明书包括以下附图，所示内容分别是：

图1是本发明试剂盒的结构示意图。

图中标记为：

1、基因组DNA抽提试剂盒，2、PCR扩增产物纯化试剂盒，3、PCR反应试剂盒，4、BigDye测序反应试剂盒，5、无水乙醇试剂瓶，6、盛放引物对的容器，7、控温装置。

具体实施方式

下面对照附图，通过对实施例的描述，对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，目的是帮助本领域的技术人员对本发明的构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解，并有助于其实施。

1.基因组DNA提取:

1.1试剂和仪器:

1.1.1试剂和耗材：基因组DNA抽提试剂盒(TIANamp BLOOD DNA kit,DP318-03；TIANamp口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，DP322-03)含:细胞裂解液CL；缓冲液GA；缓冲液GS；缓冲液GB；缓冲液GD；漂洗液PW；洗脱缓冲液TB；Carrier RNA；RNase-free ddH2O；蛋白酶K(20mg/ml)；吸附柱；收集管(2ML)；1.5ML无菌收集管；无水乙醇。

1.1.2仪器:BECKMAN COULTER20R离心机；QilinbeierVORTEX-5旋涡混合器；HH-W600电热恒温水浴锅。

1.2提取步骤

从全血中提取基因组DNA

1.2.1取200u 1的抗凝全血至1.5m1的Eppendorf管中，如果样本的量少于200u 1，则加入缓冲液GS补充至200u1。如果样本量多于200u1，需要用细胞裂解液CL处理，具体步骤如下：在样品中加入1-2.5倍体积的细胞裂解液CL,颠倒混匀，10000rpm离心1分钟，吸取上清，留下细胞核沉淀(如果裂解不彻底，可重复以上步骤一次)，向离心收集到的细胞核沉淀中加200u 1缓冲液GS，振荡至彻底混匀。

1.2.2加入20u 1的蛋白酶K溶液，混匀，再加入200u的缓冲液GB，立刻充分颠倒混匀。56℃水浴样本10分钟，水浴过程中请每隔3分钟上下轻柔颠倒混匀样本，溶液应变清亮。(如溶液未彻底变清亮，可延长裂解时间至溶液变清亮为止)。

1.2.3加入200u 1无水乙醇，充分颠倒混匀，这时可能会出现絮状沉淀。

1.2.4将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm(～13,400X g)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。

1.2.5向吸附柱中加入500ul缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm(～13,400X g)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。

1.2.6向吸附柱中加入700ul漂洗液PW使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000rpm(～13,400X g)离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。

1.2.7向吸附柱中加入500ul漂洗液PW,12,000rpm(～13,400X g)离心30秒，倒掉收集管中的废液。

1.2.8将吸附柱放回收集管中，12,000rpm(～13,400X g)离心2分钟，倒掉废液。吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

1.2.9将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加50-200u 1洗脱缓冲液TB，室温放置2-5分钟，12,000rpm(～13,400X g)离心2分钟，将溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm～13,400X g)离心2分钟。洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

2.基因目的片段扩增:

2.1试剂和仪器:

2.1.1试剂和耗材：PCR反应试剂盒(TIANamp Taq PCR Mastermix(KT201)；TIANamp Marker I(MD101)。

2.1.2仪器:Applied Biosystems 2720Thermal cycler PCR仪；天能Tanon–4100凝胶成像系统。

2.2进行PCR反应，详见下表:

PCR反应体系如下：

PCR反应循环条件的设置：

PCR扩增后产物进行琼脂糖凝胶电泳，以2000bp mark为标尺，根据扩增片段大小，确定是否为检测目的片段，如是将目的片段的胶块割下，进行胶回收纯化。

3.胶回收纯化

3.1PCR扩增产物纯化试剂盒：大量琼脂糖凝胶回收试剂盒(TIANamp DP209-03)。

3.2.1Kit的组成：

3.2.2储存条件：该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

3.3.1制胶：用1m1TAE溶液溶解1.5g的琼脂糖粉，终浓度为1.5(质量体积比，1.5g琼脂糖粉/100m1TAE)。用微波炉加热溶解琼脂糖粉(可加热两次，每次一分钟，防止爆沸)。室温冷却至60℃。加入18u1的浓度为l0mg/ml的EB，混匀后，将胶倒入一茬好梳子的胶槽中。待胶彻底凝固，取出梳齿，切下取所需胶孔量用铲子将胶移至胶槽里后再放到电泳槽中，加入1X TAE电泳液。

3.3.2上样：l0uL样品；6u1DNA Marker。

3.3.3电泳：接通恒直流电源，110伏特电压电泳，电泳30分钟。

3.3.4割胶：在凝胶成像系统下，割下含DNA的琼脂糖胶块，使它尽可能小，尽可能薄的胶片，放入1.5m1离心管，称取重量。尽量去掉不含DNA的琼脂糖，这样对提高质量、简化操作均有利。(备注：将胶槽从电泳槽里拿出，放在吸水纸上将缓冲液吸干，在紫外台上垫上保鲜膜，用镊子固定胶块进行割胶，割胶完成后，用镊子将割好的胶转移到离心管中，注意:每转移一个胶块，镊子都要放到酒精溶液中清洗，以防污染。)

3.3.5向胶块中加入等倍体积溶液PN(如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100u1，则加入100u1PN溶液)，50℃水浴放置，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可继续放置几分钟或再补加一些溶胶液，直至胶块完全溶解。(备注：若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块。)

3.3.6柱平衡步骤：向吸附柱CA2中(吸附柱放入收集管中)加入500u1平衡液BL,12,000rpm(～13,400×g)离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。(备注：请使用当天处理过的柱子。)

3.3.7将上一步所得溶液加入一个吸附柱CA2中(吸附柱放入收集管中)，室温放置2min,12,000rpm(～13,400×g)离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。(备注：吸附柱容积为800u1，若样品体积大于800u1可分批加入。)

3.3.8向吸附柱CA2中加入600u1漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000rpm(～13,400×g)离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。(备注：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW加入后静置2-5min再离心。)

3.3.9重复操作步骤5。

3.3.10将吸附柱CA2放回收集管中，12,000rpm(～13,400×g)离心离心2min，尽量除尽漂洗液。将吸附柱CA2置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。(注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。)

将吸附柱CA2放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB，室温放置2min。12,000rpm(～13,400×g)离心2min收集DNA溶液。(注意:洗脱体积不应小于30ul，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。DNA也可以用缓冲液(10mM Tris-Cl，pH8.0)洗脱。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2min，12,000rpm(～13,400×g)离心2min，将DNA溶液收集到离心管中。

3.3.11回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

4.测序反应

4.1.1试剂：BigDye测序反应试剂盒(主要试剂是BigDye Mix，内含PE专利四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP，AmpliTaq DNA polymerase FS，反应缓冲液等)。pGEM-3Zf(+)双链DNA对照模板0.2g/L，试剂盒配套试剂。POP6测序胶ABI产品。模板抑制试剂(TSR)ABI产品。

4.1.2仪器：ABI PRISM 3730xl型全自动DNA测序仪。

4.2反应操作流程：

4.2.1引物用去离子水或ddH2O配成3.2pmol/μl。

4.2.2加样。按先加ddH2O，再加引物，最后加模板的顺序按体积从大到小将所有样品加好(引物lul，总体积4ul)。应分别将试剂加在反应管不同方向的管壁上(水加于下方，引物加在左边，模板加在上方)。注意要特别小心，严禁错加、漏加、多加任何其中的一项，每加完一个项，应目测检查有无加错。因所加样品及试剂均较少，防止时间太久，导致已加的试剂挥发，使整个反应体系失去平衡，操作时要快速准确。

4.2.3加完后，盖上封口膜，4℃离心，速度到4000rpm即可。将所有液体收集到管底。

4.2.4将96孔板的缺口置于左下角，加入1u 1BDT，BDT要加在管壁的左边，加完并检查无遗漏后，盖上封口膜，离心，盖上盖子，振荡，再离心。注意最后一步离心后不要将已收集到管底的液体再次振动。

4.2.5放入PCR仪中，进行扩增反应(96℃2min：96℃30s，50℃30s，60℃4min，25cycles；40℃∞)。

4.2.6PCR反应结束后离心(速度达到4000rpm即可)，揭开盖子(注意勿将管底液体振起，同时按顺序将盖子排好)，加入20u 1的乙醇和NaAc的混合溶液，盖上盖子，振荡后再低温(4℃)高速离心(4000rpm)30分钟。

4.2.7揭开盖子，盖上吸水纸，反向离心(小心速度决不能超过600rpm，严格控制离心时间，当速度达到600rpm即停止离心)。

4.2.8向上步得到沉淀中加入冷冻(-20℃)的70％乙醇100u 1，盖上盖子，充分振荡后，离心(4000rpm)15分钟。

4.2.9倒去上清液，盖上吸水纸，反向离心(同4.2.7)。

4.2.10将洗涤好的沉淀在室温下放置10分钟左右，让残留乙醇全部挥发。

4.2.11加入20u1ddH20，将反应管移至ABI PRISM 3730xl上样底座，离心(速度达到4000rpm即停止)抽检反应管，看是否样品溶液已经离心至管底。最后将上样底座小心放入3730xl仪器的上样平台上，开动仪器电泳。

5.结果分析:

将测序导出的ab1格式的测序文件导出后，使用ClustalX2软件进行分析。检测ApoM基因启动子区rs805396和-724两个位点，rs805396候检位点在人群中有三种基因型：T/T，T/C，C/C，其中携带C/C和T/C基因型的人群较携带T/T基因型的人患2型糖尿病的风险增加，患病风险几率大小C/C型>T/C型>T/T型。-724候检位点在人群中有三种基因型:C/C，C/del和del/del，其中携带C/del和del/del基因型的人群较携带C/C基因型的人患2型糖尿病的风险增加，患病风险几率大小del/del型>C/del型>C/C型。测序结果表明ApoM基因启动子区rs805396位点为C/C型，-724位点为del/del型，异常。根据上述检测结果，可以判断上述受检的ApoM基因异常，受检者较正常人患2型糖尿病的几率明显升高，但是是否已经患有2型糖尿病，还需要进行进一步的2型糖尿病检查，并进行专门的针对性的健康管理。

如图1所示，根据检测方法涉及出相应的试剂盒，试剂盒内包括基因组DNA抽提试剂盒1、PCR扩增产物纯化试剂盒2、PCR反应试剂盒3、BigDye测序反应试剂盒4、无水乙醇试剂瓶5和盛放引物对的容器6。试剂盒包括盒体和盖合在盒体上的盒盖，盒盖与盒体铰接。

作为进一步的改进，该试剂盒内还设有控温装置7，能够使试剂盒在运输过程，或者取出试剂做实验过程中保持试剂盒中的试剂基本维持在实验所需要的温度。控温装置包括采用半导体制冷片和温度传感器，温度传感器与半导体制冷片电连接，在试剂盒的侧面可以设置一个蓄电池容纳腔，用于放置提供电能的蓄电池，温度传感器与半导体制冷片通过蓄电池电提供电能。通过温度传感器检测试剂盒内的实际温度，通过将此温度信号传递到微处理控制单元，微处理控制单元处理后控制半导体制冷片的工作，当试剂盒内的温度高于预先设定的标准值时，微处理控制单元控制半导体制冷片工作，降低试剂盒内的温度。半导体制冷片的制冷侧设于试剂盒内侧面，热端侧设于试剂盒外侧面，设置时，试剂盒侧面设置通孔，通孔内安装半导体制冷片。

为了便于放置上述各需要使用的小试剂盒，并且便于统一取出或者统一放置于本发明试剂盒内部，较好的是，试剂盒内设有托架，托架设有六个凹槽容纳腔，六个凹槽容纳腔内分别放置所述基因组DNA抽提试剂盒1、PCR扩增产物纯化试剂盒2、PCR反应试剂盒3、BigDye测序反应试剂盒4、无水乙醇试剂瓶5和盛放引物对的容器6。每一个凹槽容纳腔下面最好设有一个对应的标明放置物名称的标签。

凹槽容纳腔的内周向侧壁设有缓冲结构。缓冲结构优选采用海绵垫，使放置物能够较好的固定在凹槽内，在运输过程中不易晃动，使试剂盒在移动过程中不会造成凹槽内放置物易破损情况的发生，并且还具有一定的保温效果。此外，瓶托与盒盖之间也可以加上一层海绵垫，也能够对瓶托中放置物起到缓冲和保温的效果。

另外，盒体与盒盖的盖合处设有密封垫。密封垫可以采用海绵垫，便于盒体与盒盖的密封连接，一方面避免盒盖由于意外情况自动盖合盒体时，造成较大撞击，对试剂盒两连接处造成损伤，另一方面增加盒体与盒盖的结合度，避免杂质通过两者的连接处进入试剂盒。

综上所述，本发明的检测方法设计巧妙、操作简单、检测结果准确可靠，设计的试剂盒使用简便可行，为是否进一步采取有针对性的健康管理以及后续的检测手段提供参考依据。

以上结合附图对本发明进行了示例性描述。显然，本发明具体实现并不受上述方式的限制。只要是采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进；或未经改进，将本发明的上述构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。

<110> 皖南医学院

<120> 一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和试剂盒

<130> 1

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

agtcacttgg tgctatcc 18

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gttggtgtca ggcagaat 18

Claims (8)

1.一种引物对，所述引物对是SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，其特征在于：所述引物对用于检测ApoM基因启动子区rs805396和-724两个位点。

2.一种用于检测ApoM启动子基因序列相关位点的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、提取全基因组DNA；

B、根据ApoM启动子基因序列及位点设计引物对，对提取的全基因组DNA进行PCR扩增，回收PCR产物并割胶纯化；

C、对纯化后的PCR产物进行测序，并分析测序结果来判断ApoM启动子基因是否发生突变。

3.一种用于检测ApoM启动子基因序列的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内包括基因组DNA抽提试剂盒、PCR扩增产物纯化试剂盒、PCR反应试剂盒、BigDye测序反应试剂盒、无水乙醇试剂瓶和盛放引物对的容器。

4.根据权利要求3所述用于检测ApoM启动子基因序列的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内还设有控温装置。

5.根据权利要求3所述用于检测ApoM启动子基因序列的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内设有托架，所述托架设有六个凹槽容纳腔，六个凹槽容纳腔内分别放置所述基因组DNA抽提试剂盒、PCR扩增产物纯化试剂盒、PCR反应试剂盒、BigDye测序反应试剂盒、无水乙醇试剂瓶和盛放引物对的容器。

6.根据权利要求5所述用于检测ApoM启动子基因序列的试剂盒，其特征在于：所述凹槽容纳腔的内周向侧壁设有缓冲结构。

7.根据权利要求3所述用于检测ApoM启动子基因序列的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括盒体和盖合在盒体上的盒盖，所述盒盖与盒体铰接。

8.根据权利要求7所述用于检测ApoM启动子基因序列的试剂盒，其特征在于：所述盒体与盒盖的盖合处设有密封垫。