CN106811543A - 一种肺癌miRNA标志物的联合检测试剂盒 - Google Patents

一种肺癌miRNA标志物的联合检测试剂盒 Download PDF

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朱国念
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丁雨
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    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Abstract

本发明公开了一种肺癌miRNA标志物的联合检测试剂盒，它包括SEQ ID NO.1～2所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.3～4和SEQ ID NO.5～4所示引物对。本发明还公开了、SEQ ID NO.1～2所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.3～4和SEQ ID NO.5～4所示引物对在制备肺癌筛查用试剂中的用途。本发明方法可以筛查肺癌，检测灵敏度高，特异性好，可用于临床肺癌的辅助诊断，临床应用前景良好。

Description

一种肺癌miRNA标志物的联合检测试剂盒
技术领域
本发明涉及一种肺癌miRNA标志物的联合检测试剂盒。
背景技术
肺癌是一种常见的恶性肿瘤，目前在全世界的发病率和死亡率都高居其它恶性肿瘤之首。2015年在美国，大约有86380名男性和86380名女性死于肺癌。2015年在中国，肺癌的发病率和死亡率分别为0.0733％和0.061％，在癌症相关疾病中排名第一。由于早期肺癌患者的症状不明显，大多数病人确诊时已处于中晚期阶段，因此在肺癌的预防和治疗中，提高肺癌的早期诊断起着至关重要的作用。目前肺癌的早期诊断主要依赖影像技术和肿瘤标志物的检测。低剂量计算机断层扫描(LDCT)具有较高的灵敏度，是最常见的肺癌筛查和诊断手段。但CT假阳性较高、检测费用高，并且辐射对人体还有潜在的伤害。血清肿瘤标志物的检测因其安全无害，费用低且简单可行，在早期肺癌的筛查和诊断中具有重要的作用。
微小RNA(miRNA)是一类高度保守、内源性、非编码的单链小分子RNA,其长度约为19～25nt，主要参与基因转录和转录后水平的调控,可调节不同的生物学过程，如细胞增殖、分化、凋亡、黏附和死亡等，与癌症的形成和演变密切相关。miRNA会因为细胞的死亡或者细胞主动分泌进入到血液循环中，其作为肿瘤标志物检测具备以下优点：在癌症细胞中miRNA会异常表达，miRNA在血浆或血清中很稳定，因此可以通过实时定量PCR进行检测。miRNA在癌症疾病过程中可能发挥着促癌或抑癌基因的作用。大量研究表明，miRNA可以有效用于肺癌的早期诊断。
发明内容
为了解决上述问题，首次提供了mir-141和mir-193b联合检测用于肺癌筛查的试剂盒和检测方法。
本发明首先提供了一种肺癌的筛查试剂盒，它包括SEQ ID NO.1～2所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.3～4和SEQ ID NO.5～4所示引物对。
其中，所述试剂盒还包括SEQ ID NO.6所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.7～8所示引物对。
本发明还提供了SEQ ID NO.1～2所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.3～4和SEQ IDNO.5～4所示引物对在制备肺癌筛查用试剂中的用途。
其中，所述试剂还包括SEQ ID NO.6所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.7～8所示引物对。
本发明还提供了一种肺癌的筛查方法，它包括如下步骤：
a，提取样本RNA：提取待检样本中的RNA；
b，基因扩增：用权利要求1所述的试剂盒对待检样本中的RNA进行逆转录和DNA扩增；
c，结果检测：对扩增结果进行检测。
步骤a所述的样本为肺组织。
本发明选择联合检测了mir-141、mir-193b，并以U6为检测内参，通过设计茎环法逆转录引物，反复优化反应体系和条件，实现了用一份RNA同时完成以上两个miRNA和U6基因的混合逆转，用荧光定量PCR检测这两个miRNA指标后能显著区分肺癌组织和正常组织，并且通过测序验证，表明所得PCR产物均为特异性扩增，结果可靠。同时，本发明方法和试剂盒的检测灵敏度高，特异性好，可用于指征肺癌的发生发展，辅助临床早期肺癌的筛查，临床应用前景良好。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1荧光定量PCR溶解曲线
图2荧光定量PCR产物电泳鉴定
图3测序鉴定结果
图4不同组织的mir141以及mir193b的表达水平，A肺癌远端组织、C肺癌组织、F肺癌旁组织。
具体实施方式
实施例1本发明检测方法
一、实验方法
1材料
1.1样本
待测组织样本取自四川大学华西医院呼吸科收治病人，其中肺癌组织10个，肺癌远端正常组织10个，癌旁组织10个，已通过病理学确诊。
1.2主要仪器与试剂
Bio-Rad CFX96荧光定量PCR仪、analytikjena-scandrop100、EastepTMSuper总RNA提取试剂盒(Promega)、GoScriptTMReverse Transcription System(Promega)、Bia-RadEvagreen mix
1.3引物设计
根据miRNA序列进行引物设计，检测的miRNA包括miR-141(miRBase ReferenceSequence：MIMAT0000432-uaacacugucugguaaagaugg)、miR-193b(miRBase ReferenceSequence：MIMAT0002819-aacuggcccucaaagucccgcu)，选择U6(NCBI Reference Sequence：NR_004394.1)作为定量内参，使用茎环法设计以上miRNA逆转录引物，U6引物通过primer5软件设计，逆转录引物见表1，荧光定量PCR引物见表2，理论上荧光定量PCR扩增产物大小：U6为94bp，mir-141和mir-193b为34bp。
表1 cDNA合成引物序列表
表2荧光定量PCR引物序列表
2方法
2.1肺癌组织总RNA提取
组织样本采用液氮研磨的方式破碎，加入300uL组织裂解液后室温放置5min，再加入300uL稀释液继续室温放置5min，以最大转速离心5min，小心吸取上清，加入0.5倍上清体积的无水乙醇，用移液器吹打3-4次，混匀。将混合物转移至吸附柱中，过柱纯化，加600uLRNA洗液，离心弃废液；按照表3准备DNase I孵育液50uL并加入吸附柱膜中央，室温放置15min，加入RNA洗液洗涤2次后洗脱得到总RNA，存于-80℃。
表3 DNase I孵育液准备表
样品 每样本加入量(uL)
10XDNase I缓冲液 5
DNase I 5
无核酸酶水 40
2.2 RNA浓度及纯度鉴定
用Thermo Nano Drop 2000全波长酶标仪测定RNA浓度和纯度。
2.3 cDNA合成
采用混合逆转录的方法，用一份RNA同时逆转内参基因U6和2个miRNA,混合逆转录体系见表4，逆转录反应条件如下：42℃、15min；70℃、15min，具体操作参照GoScriptTMReverse Transcription System说明书。
表4混合反转录体系(20ul)
2.4荧光定量PCR
荧光定量PCR反应体系详见表5，在Bio-Rad CFX96荧光定量PCR仪进行扩增反应，反应程序详见表6，循环数为40个，用软件CFX Manager进行结果分析。
表5荧光定量PCR反应体系(10ul)
组分 体积(uL)
2X Evagreen Mix 5ul
Forward primer 0.5ul
Reverse primer 0.5ul
cDNA 2ul
Nuclease-free water 2ul
表6荧光定量PCR反应程序
2.5测序验证
2.5.1 T载体构建
将2.4所得的PCR产物用胶回收试剂(E.Z.N.A Gel Extraction Kit D2500-01)进行纯化回收，回收产物与pMD19-T Vector 16℃连接过夜，将连接产物转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，在含氨苄抗性的LB培养平板上进行培养。
2.5.2菌落PCR及测序
在培养过夜的LB培养平板上随机挑选6个克隆进行菌落PCR，反应体系及程序如下表：
表7菌落PCR反应体系
用琼脂糖凝胶电泳检测菌液PCR结果，观察条带片段大小鉴定重组子的正确性。条带大小正确的阳性克隆送至擎科公司测序。
3结果
3.1总RNA浓度及纯度检测
因为样本量的限制，所提取的总RNA浓度在12-195ng/μL，大多都只够一次逆转录的量，A260/A280比值在1.8—2.1之间，所提RNA纯度符合检测标准。
表8总RNA浓度
3.2荧光定量PCR特异性鉴定
3.2.1荧光定量PCR溶解曲线
对混合逆转录得到的cDNA进行单个目的miRNA和内参基因的扩增，从每个指标的溶解曲线上(图1)可看，所扩增PCR产物均很单一。
3.2.2荧光定量PCR产物电泳鉴定
随机挑选每个指标的几个PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，从图2表明，每个指标所扩增条带大小也和理论相符。
3.2.3 PCR产物测序鉴定
由于所扩得的miRNA PCR产物长度均只有30bp左右，无法直接用PCR产物测序来进行验证，因此我们通过将PCR产物和T载体连接后再进行测序验证。将菌落PCR鉴定结果为阳性的克隆子送测序，结果显示，T载体上连接序列均和理论的miRNA序列相符，结果详见图3。
3.3混合逆转录产物灵敏度检测
为了检测混合逆转录产物的灵敏度，随机选取了C3样品，其RNA浓度为45.08ng/ul，按逆转录体系，加7.6ul RNA，即342.6ng RNA进行混合逆转录，将逆转录得到的cDNA按10的倍比稀释，最终稀释至107倍，取不同稀释比例的cDNA做荧光定量PCR，分别检测mir-141，mir-193b和u6能检测到cq值的最大稀释倍数。从表9可见，mir-141和mir-193b直至稀释至105倍才检测不到cq值，而u6由于表达量较高，在稀释至107倍时仍能检测到cq值。按100％的逆转录效率换算，混合逆转录得到的cDNA检测mir-141和mir-193b的检测限为3.4x10-2ng/ul；u6的检测限小于3.4x10-5ng/ul，可见混合逆转录得到的cDNA灵敏度仍较高。
表9混合逆转录产物灵敏度检测
3.4待测样本的检测
根据法定量分析肺癌组织10例，肺癌远端正常组织10例，癌旁组织10例，结果见图4，联合检测mir-141和mir193b可以显著区分肺癌组织和正常远端和近端组织。
实验结果说明，本发明试剂盒和方法可以通过检测mir-141和mir193b
来筛查肺癌，检测灵敏度高，特异性好。
实施例2本发明检测试剂盒的组成及其使用方法
一、检测试剂盒
1、试剂盒的组成
逆转录试剂盒(50人份)：
其中，
荧光定量PCR反应逆转录试剂盒(50人份)：
组分 体积(uL)
2X Evagreen Mix 250ul
Forward primer 25ul
Reverse primer 25ul
cDNA 100ul
Nuclease-free water 100ul
其中，
2、试剂盒的使用方法
组织样本采用液氮研磨的方式破碎，加入300uL组织裂解液后室温放置5min，再加入300uL稀释液继续室温放置5min，以最大转速离心5min，小心吸取上清，加入0.5倍上清体积的无水乙醇，用移液器吹打3-4次，混匀。将混合物转移至吸附柱中，过柱纯化，加600uLRNA洗液，离心弃废液；按照表3准备DNase I孵育液50uL并加入吸附柱膜中央，室温放置15min，加入RNA洗液洗涤2次后洗脱得到总RNA，存于-80℃。
DNase I孵育液准备表
样品 每样本加入量(uL)
10XDNase I缓冲液 5
DNase I 5
无核酸酶水 40
2.2 RNA浓度及纯度鉴定
用Thermo Nano Drop 2000全波长酶标仪测定RNA浓度和纯度。
2.3 cDNA合成
采用混合逆转录的方法，用一份RNA同时逆转内参基因U6和3个miRNA,混合逆转录体系见下表，逆转录反应条件如下：42℃、15min；70℃、15min，具体操作参照GoScriptTMReverse Transcription System说明书。
混合反转录体系(20ul)
2.4荧光定量PCR
荧光定量PCR反应体系详见下表，在Bio-Rad CFX96荧光定量PCR仪进行扩增反应，反应程序详见下表，循环数为40个，用软件CFX Manager进行结果分析。
荧光定量PCR反应体系(10ul)
组分 体积(uL)
2X Evagreen Mix 5ul
Forward primer 0.5ul
Reverse primer 0.5ul
cDNA 2ul
Nuclease-free water 2ul
荧光定量PCR反应程序
综上，本发明试剂盒和方法通过同时检测组织的mir-141和mir193b来筛查肺癌，检测灵敏度高，特异性好，可用于临床肺癌的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供有效的依据，临床应用前景良好。
SEQUENCE LISTING
<110> 四川大学华西医院
<120> 一种肺癌miRNA标志物的联合检测试剂盒
<130> GY026-17P1117
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 50
<212> DNA
<213> mir141 Reverse Ttranscription primer
<400> 1
gtcgtatcca gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacccatct 50
<210> 2
<211> 50
<212> DNA
<213> mir193b Reverse Ttranscription primer
<400> 2
gtcgtatcca gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacagcggg 50
<210> 3
<211> 50
<212> DNA
<213> mir141 Forward primer
<400> 3
gtcgtatcca gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacccatct 50
<210> 4
<211> 16
<212> DNA
<213> miRNA Reverse primer
<400> 4
gtgcagggtc cgaggt 16
<210> 5
<211> 50
<212> DNA
<213> mir193b Forward primer
<400> 5
gtcgtatcca gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacagcggg 50
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> U6 Reverse Ttranscription primer
<400> 6
aacgcttcac gaatttgcgt 20
<210> 7
<211> 17
<212> DNA
<213> U6 Forward primer
<400> 7
ctcgcttcgg cagcaca 17
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> U6 Reverse primer
<400> 8
aacgcttcac gaatttgcgt 20

Claims (6)

1.一种肺癌的筛查试剂盒，其特征在于：它包括SEQ ID NO.1～2所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.3～4和SEQ ID NO.5～4所示引物对。
2.根据权利要求1所述的筛查试剂盒，其特征在于：它还包括SEQ ID NO.6所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.7～8所示引物对。
3.SEQ ID NO.1～2所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.3～4和SEQ ID NO.5～4所示引物对在制备肺癌筛查用试剂中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述试剂还包括SEQ ID NO.6所示逆转录引物，以及SEQ ID NO.7～8所示引物对。
5.一种肺癌的筛查方法，其特征在于：它包括如下步骤：
a，提取样本RNA：提取待检样本中的RNA；
b，基因扩增：用权利要求1所述的试剂盒对待检样本中的RNA进行逆转录和DNA扩增；
c，结果检测：对扩增结果进行检测。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤a所述的样本为肺组织。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111718993A (zh) * 2020-08-05 2020-09-29 中南大学湘雅二医院 一种人血清miR-146a双重荧光定量PCR检测试剂盒及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102782155A (zh) * 2009-12-24 2012-11-14 复旦大学 用于肺癌的血浆中微rna表达谱分析的组合物和方法
CN102892897A (zh) * 2009-12-24 2013-01-23 复旦大学 用于肺癌的微rna表达谱分析的组合物和方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102782155A (zh) * 2009-12-24 2012-11-14 复旦大学 用于肺癌的血浆中微rna表达谱分析的组合物和方法
CN102892897A (zh) * 2009-12-24 2013-01-23 复旦大学 用于肺癌的微rna表达谱分析的组合物和方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHENGCAO SUN等: "Long non-coding RNA NEAT1 promotes non-small cell lung cancer progression through regulation of miR-377-3p-E2F3 pathway", 《ONCOTARGET》 *
ERNEST NADAL等: "A Novel Serum 4-microRNA Signature for Lung Cancer Detection", 《SCIENTIFIC REPORTS》 *
NCBI: "NR_004394.1", 《GENBANK》 *
ZI-ZHEN ZHANG等: "Analysis of plasma MicroRNAs to identifying early diagnostic molecule for gastric cancer", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL MEDICINE》 *
刘亮伟等: "《基因工程原理与实验指导》", 30 September 2010, 中国轻工业出版社 *
张伟等: "血清miR-141和miR-145联合检测非小细胞肺癌", 《现代肿瘤医学》 *
陶永光主编: "《肿瘤分子生物学与细胞生物学实验手册》", 31 October 2014, 湖南科学技术出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111718993A (zh) * 2020-08-05 2020-09-29 中南大学湘雅二医院 一种人血清miR-146a双重荧光定量PCR检测试剂盒及其应用
CN111718993B (zh) * 2020-08-05 2021-07-13 中南大学湘雅二医院 一种人血清miR-146a双重荧光定量PCR检测试剂盒及其应用

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Application publication date: 20170609