CN106754540A - 一种改良肝浸液培养基的制备方法 - Google Patents

一种改良肝浸液培养基的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种改良肝浸液培养基的制备方法，步骤如下：称取猪肝500g，洗净、绞碎，加水500ml，加热30分钟，冷却后绒布过滤，高压灭菌115℃20分钟，然后再用脱脂棉过滤，滤液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，赤藓醇4g，氯化钠5g，甘油20ml，血清20ml，琼脂粉17g，另称取硝酸镧2g，加热溶解到10ml蒸馏水中，待高压灭菌后的培养基和加热溶解的硝酸镧冷却至50℃时，将硝酸镧倒入培养基中，余量加蒸馏水至1000ml；优点为：培养基不加琼脂粉可用于布鲁氏杆菌增菌；加入琼脂粉可用于布鲁氏杆菌分离，而且与血平板培养基相比较，更易观察结果。

Description

一种改良肝浸液培养基的制备方法
技术领域
本发明涉及微生物培养基领域，尤其涉及一种改良肝浸液培养基的制备方法。
背景技术
苛养菌是一大类对环境、营养要求较苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长，体外培养需添加特殊因子或其他营养成分。布鲁氏菌即属于苛养菌，也是人畜共患病菌。
目前，布鲁菌现增菌用肝浸液培养基和胰眎肉汤，分离用血平板，还没有一种用于布鲁杆菌增菌培养和分离培养的专用培养基。
发明内容
本发明的目的在于为解决现有技术的不足，而提供一种改良肝浸液培养基的制备方法。
本发明新的技术方案是：一种改良肝浸液培养基的制备方法，包括以下组分组成：猪肝400-600g，蛋白眎3-7g, 胨3-7g，酵母浸粉3-7g，葡萄糖6-14g，硝酸镧1-3g，赤藓醇3-6g，甘油10-30ml，氯化钠3-7g，血清10-30ml，琼脂12-22g，余量加蒸馏水至800-1100ml。
所述质量配比为：猪肝500g，蛋白眎5g，胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，硝酸镧2g,赤藓醇4g,甘油20ml，氯化钠5g，血清20ml，琼脂17g，余量加蒸馏水至1000ml。
步骤如下：称取猪肝500g，洗净、绞碎，加水500ml,加热30分钟，冷却后绒布过滤，高压灭菌115℃20分钟，然后再用脱脂棉过滤，滤液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，赤藓醇4g,氯化钠5g，甘油20ml，血清20ml，琼脂粉17g，另称取硝酸镧2g,加热溶解到10ml蒸馏水中，待高压灭菌后的培养基和加热溶解的硝酸镧冷却至50℃时，将硝酸镧倒入培养基中，余量加蒸馏水至1000ml。
本发明的有益效果是：培养基不加琼脂粉可用于布鲁氏杆菌增菌；加入琼脂粉可用于布鲁氏杆菌分离，而且与血平板培养基相比较，无论是从颜色上、还是从菌落大小上都有明显变化，更易观察结果。
具体实施方式
下面对本发明作进一步的说明。
一种改良肝浸液培养基的制备方法，包括以下组分组成：猪肝400-600g，蛋白眎3-7g, 胨3-7g，酵母浸粉3-7g，葡萄糖6-14g，硝酸镧1-3g，赤藓醇3-6g，甘油10-30ml，氯化钠3-7g，血清10-30ml，琼脂12-22g，余量加蒸馏水至800-1100ml。
一种改良肝浸液培养基的制备方法，所述质量配比为：猪肝500g，蛋白眎5g，胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，硝酸镧2g,赤藓醇4g,甘油20ml，氯化钠5g，血清20ml，琼脂17g，余量加蒸馏水至1000ml。
一种改良肝浸液培养基的制备方法，步骤如下：称取猪肝500g，洗净、绞碎，加水500ml,加热30分钟，冷却后绒布过滤，高压灭菌115℃20分钟，然后再用脱脂棉过滤，滤液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，赤藓醇4g,氯化钠5g，甘油20ml，血清20ml，琼脂粉17g，另称取硝酸镧2g,加热溶解到10ml蒸馏水中，待高压灭菌后的培养基和加热溶解的硝酸镧冷却至50℃时，将硝酸镧倒入培养基中，余量加蒸馏水至1000ml。
蛋白眎、胨5.0g，酵母浸粉5.0g，葡萄糖10.0g的加入量由正交试验得来。见表1
培养基各组分的确定：将菌种牛流产布鲁氏菌生物1型制成1.5×106cfu/ L菌悬液，各取菌悬液100ul，以灭菌的△型玻璃棒依次涂布接种到M1~M9培养基上，置37℃培养箱培养72 h，然后取出，观察布鲁氏杆菌的生长情况。结果通过比较布鲁氏菌在M5培养基上生长最好。经查证M5培养基各组分为：猪肝500 g，蛋白眎胨5 g，酵母浸粉5 g，葡萄糖10 g，氯化钠5 g，甘油20 ml，血清（无布鲁氏杆菌凝集素）20 ml, 余量加蒸馏水至1000 ml，此培养基为改良肝浸液培养基。若加琼脂粉17 g，则为改良肝浸液琼脂培养基。
改良肝浸液培养基需碳水化合物量的优化试验：按照培养基中碳水化合物量的不同（培养基中碳水化合物量值表见表3），制备9种培养基，进行试验，这9种培养基暂命名为M1~M9。M1培养基的制作如下：称取猪肝500 g，洗净、绞碎，加水500 ml,加热30 min，冷却后绒布过滤，高压灭菌20磅20 min，然后再用脱脂棉过滤，滤液中加入蛋白眎、胨5 g，酵母浸粉5 g，葡萄糖4 g，赤藓醇4 g，氯化钠5 g，甘油20 ml，血清（无布氏杆菌凝集素）20 ml，琼脂粉17 g，余量加蒸馏水至1000 ml，加热溶化，经115℃20 min，高压灭菌。M2~M9培养基的制作按表2第3行~10行里的组分（猪肝，蛋白眎、胨，酵母浸粉，氯化钠，甘油，血清，琼脂粉的量不变），依次制成。
培养基各组分的确定：将菌种牛流产布氏杆菌生物1型制成1.5×108 cfu/L，稀释至1.5×106 cfu/L，各取菌悬液100 μl，以灭菌的△型玻璃棒依次涂布接种到M1~M9培养基上，置37℃培养箱培养96 h，然后取出观察结果，看以上布氏杆菌在各个配方培养基上的生长情况。结果：通过比较布氏杆菌在M7培养基上生长最好，经查证M7培养基各组分为猪肝500 g，蛋白眎胨5 g，酵母浸粉5 g，葡萄糖8 g，赤藓醇4 g，氯化钠5 g，甘油20 ml，血清（无布氏杆菌凝集素）20 ml，此培养基为改良肝浸液培养基。若加琼脂粉17 g，则为改良肝浸液琼脂培养基。
硝酸稀土加入改良肝浸液培养基的试验：称取猪肝500 g，洗净、绞碎，加水500ml,加热30 min，冷却后绒布过滤，高压灭菌8磅20 min，然后再用脱脂棉过滤，滤液中加入蛋白眎、胨5 g，酵母浸粉5 g，氯化钠5 g，甘油20 ml，血清（无布氏杆菌凝集素）20 ml，另称取硝酸镧2 g，加热溶解到10 ml蒸馏水中，待高压灭菌后的培养基和加热溶解的硝酸镧冷却至50℃时，将硝酸镧倒入培养基中，余量加蒸馏水至1000 ml。将菌种牛流产布氏杆菌生物1型制成1.5×108 cfu/L，稀释至1.5×106 cfu/L，各取菌悬液100 μl，以灭菌的△型玻璃棒依次涂布接种到改良肝浸液琼脂培养基上，置37℃培养箱培养96 h，然后取出观察结果。并与未加硝酸镧相比较。结果：加硝酸镧的比不加硝酸镧的生长好。
改良肝浸液培养基与血琼脂平板的比较研究：将牛布氏杆菌生物1型制成1.5×108 cfu/L，稀释至1.5×106 cfu/L，各取菌悬液100 μl，以灭菌的△型玻璃棒依次涂布接种到改良肝浸液培养基、改良肝浸液琼脂培养基和血琼脂培养基上，置37℃培养96 h，取出观察结果，并做比较。结果：牛流产布氏杆菌在改良肝浸液培养基中37℃培养96 h，呈白色沉淀生长；在改良肝浸液琼脂培养基上，37℃培养96 h，有乳白色，光滑湿润，圆形隆起，大者直径为3 mm~4 mm的菌落；血琼脂上37℃培养120 h，光滑湿润，圆形隆起，大者直径为2 mm~3 mm的灰白色菌落。
该项研究应用菌种羊种布鲁氏菌生物2型进行验证：将羊种布鲁氏菌生物2型制成1.5×108 cfu/L，稀释至1.5×106 cfu/L，各取菌悬液100 μl，（即1.5×108 cfu/L的菌液10ml稀释至1000ml，得到的是1.5×106 cfu/L之菌液）以灭菌的△型玻璃棒依次涂布接种到M1～M9培养基上，翻转平板，置37 oC电热恒温培养箱培养96 h，然后取出观察结果，看以上布氏杆菌在各个配方培养基上的生长情况。结果改良肝浸液培养基验证试验生长情况符合实验结果，即与试验菌株在各培养基上生长情况结果一致。

Claims (3)

1.一种改良肝浸液培养基的制备方法，其特征在于：包括以下组分组成：猪肝400-600g，蛋白眎3-7g，胨3-7g，酵母浸粉3-7g，葡萄糖6-14g，硝酸镧1-3g，赤藓醇3-6g，甘油10-30ml，氯化钠3-7g，血清10-30ml，琼脂12-22g，余量加蒸馏水至800-1100ml。
2.一种改良肝浸液培养基的制备方法，其特征在于：所述质量配比为：猪肝500g，蛋白眎5g，胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，硝酸镧2g,赤藓醇4g,甘油20ml，氯化钠5g，血清20ml，琼脂17g，余量加蒸馏水至1000ml。
3.一种改良肝浸液培养基的制备方法，其特征在于：所述的具体步骤如下：称取猪肝500g，洗净、绞碎，加水500ml,加热30分钟，冷却后绒布过滤，高压灭菌115℃20分钟，然后再用脱脂棉过滤，滤液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，赤藓醇4g,氯化钠5g，甘油20ml，血清20ml，琼脂粉17g，另称取硝酸镧2g,加热溶解到10ml蒸馏水中，待高压灭菌后的培养基和加热溶解的硝酸镧冷却至50℃时，将硝酸镧倒入培养基中，余量加蒸馏水至1000ml。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN107400642A (zh) * 2017-07-24 2017-11-28 内蒙古东达獭兔循环产业研究院 一种细菌营养培养基及其制备方法
CN113122453A (zh) * 2021-04-16 2021-07-16 青海省地方病预防控制所 一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基及其制备方法
CN113150995A (zh) * 2021-04-22 2021-07-23 贵州安康医学检验中心有限公司 一种用于转运过程中的细菌转运保藏培养基及其配制方法

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