CN106659149A

CN106659149A - 用于器官、组织或细胞移植的组合物、试剂盒和移植方法

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Publication number: CN106659149A
Application number: CN201480080217.6A
Authority: CN
Inventors: 金商在
Original assignee: Jane White Kell Co Ltd
Current assignee: Jane White Kell Co Ltd; Kael-GemVax Co Ltd
Priority date: 2014-04-30
Filing date: 2014-05-28
Publication date: 2017-05-10
Anticipated expiration: 2034-05-28
Also published as: KR20160147818A; EP3138399C0; ES2962532T3; US10662223B2; EP3138399B1; EP3138399A4; US20170058001A1; EP3138399A1; CN106659149B; JP2017520514A; JP6466971B2; WO2015167067A1; KR102232320B1

Abstract

本发明公开了用于器官、组织或细胞移植的组合物，其含有用作活性成分的包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽，或作为其片段的肽；包括所述组合物的试剂盒；或使用所述组合物的方法。通过使用所述组合物、所述试剂盒或所述方法，移植后器官、组织或细胞的存活性和/或功能得以增强，并且由活体分离的器官、组织或细胞能临时储存而无损伤。

Description

用于器官、组织或细胞移植的组合物、试剂盒和移植方法

技术领域

本发明涉及用于器官、组织或细胞移植的组合物；用于器官、组织或细胞移植的试剂盒；或用于器官、组织或细胞移植的方法。

背景技术

器官移植是组织或器官从原始部位转移到另一个部位以替换受损组织或器官。器官移植可能具有各种问题，其中之一是由于缺血再灌注(IR)引起的缺血性组织损伤。在器官移植中由IR引起的缺血性组织损伤导致延迟器官移植后肾功能的恢复，这导致常常作为对长期维持移植器官功能不利的预后因素的炎症组织反应。偶然发生在器官移植中的早期IR损伤可导致随后器官功能恶化和移植失败。

特别地，肺移植被认为是终末期肺疾病的唯一治疗选择，并且据预期患者对肺移植的需求将不断增加。然而，尽管医学稳步发展进步，肺移植的生存能力仍然不高于其他器官。在肺移植后的早期阶段最常出现的问题是移植物功能障碍，其中一个原因是IR损伤。

同时，皮瓣是具有蒂或与其类似的组织的一片皮肤或组织，其从身体的一个部位转移到身体的另一部位，所转移的组织能够在蒂或与其类似的组织中存活。翻瓣术是在整形和重建外科手术中最广泛地用于软组织缺陷或慢性伤口的手术技术，其不能通过皮肤移植来处理，并且可用于重建外观和已丧失的功能，特别地，翻瓣术可以通过移植各种类型的组织例如骨骼、腱、肌肉和神经的组合进行的原位重建来快速恢复缺陷或伤口。在翻瓣术中，皮瓣存活性与IR损伤治疗密切相关。因此，预期通过IR损伤治疗稳定增强皮瓣存活性的方法将是非常有用的。

此外，与器官或组织移植类似，进行细胞移植以治疗疾病，并且可以使用用于改善1型糖尿病的朗格汉斯胰岛中的细胞移植作为代表性实例。在朗格汉斯胰岛移植的第一周内，大多数移植物丢失，这可能是因为它们在移植后在继发性血管生成之前暴露于如缺氧等各种应激因子以及促炎细胞因子和自由基。

现有技术文献

非专利文献

Granger等，Ann.Rev.Physiol.,57,311-332,(1995)

发明内容

本发明的目的是促进器官、组织和个体细胞移植物的存活性和/或功能。

本发明的另一个目的涉及增强移植后器官、组织或细胞移植物的存活性和/或功能。

本发明的另一个目的是提供用于临时储存器官、组织或细胞而无损伤的方法和/或组合物。

技术方案

在一个方面，本发明提供用于器官、组织或细胞移植的组合物，其包括用作活性成分的包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段。在所述组合物中，所述片段可以是由三个或更多个氨基酸组成的片段。

在一个方面，所述组合物可以施用于供体和/或受体。

在一个方面，所述组合物可以在移植之前、期间和之后的至少一个阶段中施用。

在另一方面，所述组合物可以用于储存从供体分离的器官、组织或细胞。

在一个方面，所述组合物可包括作为活性成分的肽，其量足以在移植至受体后增强器官、组织或细胞的存活性或功能。

在一个方面，所述组合物可以包括相对于所述组合物的总体积浓度为10至1000mg/L的作为活性成分的肽。

在一个方面，所述组合物可包含相对于所述组合物的总体积浓度为50至500mg/L的作为活性成分的肽。

在一个方面，本发明提供了用于器官、组织或细胞移植的试剂盒，其包括用于器官、组织或细胞移植的组合物；和包括所述组合物使用方法的方案。

在一个方面，在试剂盒中，所述组合物可以是在移植前施用于供体的组合物；在移植前施用于受体的组合物；在移植期间施用于供体的组合物；在移植期间施用于受体的组合物；用于储存从供体分离的器官、组织或细胞的组合物；移植后施用于供体的组合物；和在移植后施用于受体的组合物中的至少一种。

在另一方面，在试剂盒中，所述方案可以包括各组合物的剂量、施用方法和施用间隔。

在根据另一方面的试剂盒中，所述方案可以包括在器官、组织或细胞存在于供体或受体体内时通过对体内的所述器官、组织或细胞进行灌注而施用所述组合物。

在另一方面，本发明可以提供用于器官、组织或细胞移植的方法，其包括用至少一种上述用于器官、组织或细胞移植的组合物处理分离的器官、组织或细胞，或者将至少一种上述用于器官、组织或细胞移植的组合物施用于进行器官、组织或细胞移植的供体和/或受体。

在另一方面，所述方法可以包括以下中的至少一种：在移植前将所述组合物施用于供体；在移植前将所述组合物施用于受体；在移植期间将所述组合物施用于供体；在移植期间将所述组合物施用于受体；在所述组合物中储存从供体分离的器官、组织或细胞；在移植后将所述组合物施用于受体；和在移植后将所述组合物施用于供体。

在一个方面，所述方法可以包括在器官、组织或细胞存在于供体或受体体内时通过对体内的所述器官、组织或细胞进行灌注而施用所述组合物。

在另一方面，所述组合物可以基于60kg成年人以1mg至10000mg的单剂量进行处理或施用。

在另一方面，所述组合物可以基于60kg成年人以200mg至5000mg的单剂量进行治疗或施用。

在一个方面，本发明可以提供上述组合物中的至少一种组合物在治疗分离的器官、组织或细胞中的用途、或者施用于器官、组织或细胞移植的供体和/或受体的用途。

有益效果

在一个方面，本发明可以促进器官、组织和个体细胞移植物的存活性和/或功能。

在另一方面，本发明可以增强器官、组织或细胞移植后的存活性和/或功能。

在更另一方面，本发明可临时储存器官、组织或细胞而无损伤。

附图说明

图1显示了在24小时IR之后获取的血尿素氮(BUN)和肌酸的水平的图。

图2显示了在24小时IR之后用PAS染色处理的肾组织的图像。

图3是24小时IR之后肾组织的肾组织损伤评分图。

图4显示了在24小时IR之后用TUNEL染色处理的肾组织的图像。

图5显示了通过在24小时IR之后通过TUNEL染色评估肾组织所获得的TUNEL阳性细胞的图。

图6显示了用于肾组织的先天免疫细胞浸润，通过在24小时IR之后用巨噬细胞标志物(F4/80)和嗜中性粒细胞标志物(Gr-1)的免疫组织化学进行评价。

图7是显示24小时IR之后的肾组织的F4/80和Gr-1阳性细胞的图。

图8至图10是显示在24小时IR之后对肾组织中炎症细胞因子分泌的抑制作用的图。

图11示出了说明诱导IR损伤以评估皮瓣存活性的过程的图像。

图12是在IR诱导后7天的PEP1处理组和盐水处理组的皮瓣活力的图，图13示出使用ImageJ程序获得的数字图像。

图14示出了在i)生理盐水、ii)PerfadexTM、iii)PerfadexTM和PEP1 5mg以及iv)PerfadexTM和PEP1 50mg用作大鼠肺移植中使用的肺保存溶液时，用福尔马林固定移植肺的中间部分并用苏木精与曙红(H&E)染色处理之后使用光学显微镜观察的肺泡组织的图像。

图15是显示大鼠的移植的肺的下叶的重量的图，所述移植的肺在肺移植后在实验后切下并称重、在60℃干燥器中干燥24小时然后再称重。

图16显示中性粒细胞含量的图像，其通过在大鼠肺移植后气管内滴注5mL生理盐水并抽取进行分析。

具体实施方式

本发明可以以各种形式进行修改并具有许多实施例，因此将基于以下实施例进行详细描述。然而，这些实施例并非提供用来将本发明限制于具体实施方案，并且应当理解，本发明可以具有如权利要求中所述的各种实施例和应用，并且包括在本发明精神和技术范围内的所有修改、等同和替换。为了解释本发明，如果确定相关技术的详细描述可能模糊本发明的要点，则将省略详细描述。

端粒，其是位于染色体的每个末端的重复遗传材料，已知防止在相应的染色体中的损伤或偶联到不同的染色体。端粒随着细胞分裂而逐渐缩短，在一定数量的细胞分裂之后变得非常短，并且细胞最终停止分裂并死亡。另一方面，已知端粒的延长可延长细胞的寿命。例如，已知在癌细胞中分泌称为端粒酶的酶以防止端粒的缩短，导致癌细胞的稳定增殖，而不死亡。一方面，本发明涉及在器官、组织或细胞提取、储存和移植的任意步骤中用于处理供体、受体、器官、组织、细胞簇和/或每个细胞的组合物或试剂盒。所述器官、组织、细胞簇或每个细胞可以从供体中提取，用本说明书中公开的组合物处理，并移植到受体中。在另一方面，除了上述方法之外，器官、组织、细胞簇或每个细胞可以在存在于体内时在供体体内进行处理。选择性地，在手术之前、期间和/或之后，用本说明书中公开的组合物对器官例如受体的血液进行再灌注。此外，本文所公开的组合物可以在器官、组织、细胞簇或每个细胞的提取之前或期间施用于供体。

在本发明的一个方面，SEQ ID NO：1的肽，SEQ ID NO：1的肽的片段或与所述肽序列具有至少80％序列同源性的肽包括端粒酶，特别是衍生自人类端粒酶的肽。

SEQ ID NO：1所示的肽显示在下表1中。给出下表1中的“名称”以将一种肽区别于另一种。在本发明的一个方面，SEQ ID NO：1所示的肽代表人类端粒酶的全肽。在本发明的另一方面，包含SEQ ID NO：1的序列的肽、包含SEQ ID NO：1的序列的肽的片段或与肽序列具有至少80％序列同源性的肽包括由在端粒酶中包含的肽的相应位置存在的肽合成的“合成肽”。SEQ ID NO：2表示端粒酶的全长氨基酸序列。

表1

本说明书中公开的肽可以包括具有80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高、96％或更高、97％或更高、98％或更多、或99％或更高的序列同源性的肽。此外，本说明书中公开的肽可以包括与SEQ ID NO：1或其片段具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个不同氨基酸的肽。

在本发明的一个方面，氨基酸变化是改变肽的物理化学特性的性质之一。例如，可以改变氨基酸以增强热稳定性、改变底物特异性和改变肽的最佳pH。

本文使用的术语“氨基酸”不仅包括天然整合到肽中的22种标准氨基酸，而且包括D-异构体和转化的氨基酸。因此，在本发明的一个方面，肽可以是包含D-氨基酸的肽。另一方面，在本发明的另一方面，肽可以包括非标准氨基酸，其进行翻译后修饰。翻译后修饰的实例包括磷酸化、糖基化、酰化(包括乙酰化、肉豆蔻酰化和棕榈酰化)、烷基化、羧化、羟基化、糖化、生物素化、泛素化、化学性质的改变(例如β-去除脱亚氨基化、脱酰胺)和结构变化(例如二硫键的形成)。翻译后修饰还包括由于在与交联剂偶联形成肽缀合物期间的化学反应而发生的氨基酸变化，例如氨基酸的变化，诸如氨基、羧基或侧链的变化。

本文公开的肽可以是从天然来源鉴定和分离的野生型肽。同时，本说明书中公开的肽可以是包含与SEQ ID NO：1的肽的片段相比，取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸的氨基酸序列的人工变体。野生型多肽以及人工变体中氨基酸的改变包括保守氨基酸的取代，其对蛋白质的折叠和/或活性没有显着影响。保守取代可以在碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和甲硫氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸和苏氨酸)的范围内进行。通常，不改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的。最常发生的交换发生在Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly，反之亦然。保守取代的其他实例示于下表2中。

表2

原始氨基酸示例性残基取代	优选残基取代
		Ala(A)val；leu；ile	Val
Arg(R)lys；gln；asn	Lys
		Asn(N)gln；his；asp,lys；arg	Gln
Asp(D)glu；asn	Glu
		Cys(C)ser；ala	Ser
Gln(Q)asn；glu	Asn
		Glu(E)asp；gln	Asp
Gly(G)Ala	Ala
		His(H)asn；gln；lys；arg	Arg
Ile(I)leu；val；met；ala；phe；正亮氨酸	Leu
		Leu(L)正亮氨酸；ile；val；met；ala；phe	Ile
Lys(K)arg；gln；asn	Arg
		Met(M)leu；phe；ile	Leu
Phe(F)leu；val；ile；ala；tyr	Tyr
		Pro(P)Ala	Ala
Ser(S)thr	Thr
		Thr(T)Ser	Ser
Trp(W)tyr；phe	Tyr
		Tyr(Y)trp；phe；thr；ser	Phe
Val(V)ile；leu；met；phe；ala；正亮氨酸	Leu

在肽的生物学性质方面，通过选择在以下方面具有显着不同效果的取代部分进行实质性修饰：(a)在取代区域中保持多肽的主链结构，例如片状或螺旋状三维结构，(b)在靶位点保持分子的电荷或疏水性，或(c)保持侧链的体积。基于侧链的一般性质，将天然残基分类为以下组：

(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；

(2)中性亲水性：cys、ser、thr；

(3)酸性：asp、glu；

(4)碱性：asn、gln、his、lys、arg；

(5)影响链构象的残基：gly、pro；和

(6)芳香族：trp、tyr、phe。

非保守取代可以通过将一个基团的成员与另一个基团的成员交换来进行。与维持肽的适当三维结构无关的任何半胱氨酸残基通常可以被取代为丝氨酸，从而增加分子的氧化稳定性并防止不适当的交联，并且相反地，可以通过向肽添加半胱氨酸键实现增强的稳定性。

通过改变抗体的糖基化模式来制备肽的不同类型的氨基酸变体。本文使用的术语“变化”是指在肽上发现的一个或多个糖残基的缺失和/或在肽中不存在的一个或多个糖基化位点的添加。

肽中的糖基化通常是N-或O-连接的糖基化。本文所用的术语“N-连接的糖基化”是指糖残基与天冬酰胺残基的侧链的连接。作为三肽序列，天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是任何氨基酸，不包括脯氨酸)是用于将糖残基酶促连接到天冬酰胺侧链的识别序列。因此，当这些三肽序列之一存在于多肽中时，产生潜在的糖基化位点。本文所用的“O-连接糖基化”是指将一种糖(例如N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖)连接到羟基氨基酸，最典型地连接到丝氨酸或苏氨酸，但是也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。

通过改变氨基酸序列以含有上述三肽序列，方便地将肽糖基化位点添加到肽中(对于N-连接的糖基化位点)。这种改变可以通过向第一抗体序列中添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基或通过用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基对所述第一抗体进行取代来进行(对于O-连接的糖基化位点)。

本文使用的术语“细胞”是指随机类型的动物细胞，例如适于移植的动物细胞。所述细胞通常可以是从动物供体获得的原代细胞，来自已建立的细胞系的次代细胞或其等价细胞。这些细胞在体外通过在某种方法中选择性改变细胞功能的表达载体进行转染。所述细胞非限制性地包括例如朗格汉斯胰岛中的细胞，例如作为朗格汉斯胰岛、肝细胞、成纤维细胞、骨髓细胞、肌细胞和干细胞的一部分的细胞，以及在例如脊髓等中枢神经系统中的细胞(例如，神经细胞)。在整个说明书中，“朗格汉斯胰岛中的细胞”是用于描述存在于胰腺中的称为胰岛的细胞簇的通用术语，例如朗格汉斯胰岛。在胰岛中，包括几种类型的细胞，例如β-细胞(胰岛素产生)、α-细胞(胰高血糖素产生)、ν-细胞(生长抑素产生)、F细胞(胰多肽产生)、嗜铬细胞(5-羟色胺产生)、PP细胞和D1细胞。术语“干细胞”是本领域中已知的术语，是指具有在培养基中无限分裂以成为分化细胞的能力的细胞。干细胞包括例如全能、多能、多潜能和单能干细胞，例如神经元细胞、肝细胞、肌细胞和造血祖细胞。

本文使用的术语“器官”是在整个说明书中用于描述动物中具有特定功能的任何解剖部位或部件的通用术语。此外，所述器官包括例如对应于该器官的部分，例如从器官获得的内聚组织。这样的器官无限制性地包括肾、肝、心脏、胃、肠例如大肠或小肠、胰腺、皮肤和肺。器官还包括骨、骨骼肌、腹肌、四肢、肠系膜和血管如主动脉移植。

本文使用的术语“移植”是用于描述将器官、组织、细胞簇或单个细胞移植到患者体内的过程的通用术语。本文使用的术语“移植”是指将存活的组织或细胞从供体递送到受体以保持移植入受体的组织或细胞的功能完整性的过程。

本文使用的“移植期间施用”是指在移植手术的整个过程中施用。也就是说，移植期间施用包括在从供体提取器官、组织或细胞之后立即施用，将所提取的器官、组织或细胞移植到受体中的手术期间施用，以及在移植后立即进行的施用。

本文中使用的“移植前施用”包括在作为移植手术的准备步骤的手术前数分钟、数小时、数天或数十天向供体和/或受体施用本说明书中公开的组合物。

本文使用的“移植后施用”包括在作为移植手术的维持步骤的手术后数分钟、数小时、数天、数十天、数百天向受体施用本说明书中公开的组合物。

在本发明中，“缺血性损伤”是指作为中断血液循环并因此减少需要血液供应的器官(例如心脏、脑、肾和肺)中氧转移的结果而导致的致命损伤，导致组织功能障碍和凋亡。这种缺血性损伤的原因包括但不限于血管疾病、冠状动脉血栓形成、脑血管血栓形成、动脉瘤破裂、全身性出血、挤压损伤、败血症、严重皮肤烧伤、血管结扎手术(例如，胸腹动脉瘤手术期间的脊椎缺血)、心肺分流术、器官移植、心肺衰竭(心源性猝死)、窒息。

此外，根据本发明的“缺血性损伤”包括除了常规发生的缺血性损伤之外的可由器官移植引起的IR损伤。所述IR损伤包括脑血管缺血再灌注损伤、肾缺血再灌注损伤、肝缺血再灌注损伤、缺血再灌注心肌病、缺血再灌注皮肤损伤、胃肠缺血再灌注损伤、肠缺血再灌注损伤、胃缺血再灌注损伤、缺血再灌注肺损伤、胰脏缺血再灌注损伤、缺血再灌注骨骼肌损伤、缺血再灌注腹部肌肉损伤、缺血再灌注肢体损伤、缺血再灌注结肠炎、肠系膜缺血再灌注损伤和无症状缺血再灌注损伤，但不限于此。

IR损伤可能在器官移植手术期间频繁发生。例如，已知移植肾的逐渐功能丧失和功能障碍与肾移植中的IR损伤相关，并且由IR组织损伤引起的先天免疫系统的激活是重要原因之一。

在一方面，本发明提供了一种移植方法，其包括：将含有肽的组合物施用于移植供体；从所述供体获得器官、组织或细胞；和将获得的器官、组织或细胞移植到受体中。在该方法中，施用到供体中的肽的量是足以在移植到受体中之后增强器官、组织或细胞的存活性或功能的量。这里，对供体的施用可以在手术中或即将手术之前以及手术之前的准备步骤中和/或手术之后的维持步骤中持续进行。供体可以是在存活供体、脑死亡供体或脑死亡之前或之后的供体。

另一方面，本发明提供了一种移植方法，其包括：从供体获得器官、组织或细胞；将所获得的器官、组织或细胞保持在含有所述肽的组合物中；和将所储存的器官、组织或细胞移植到受体中。在该方法中，用于储存器官、组织或细胞的组合物中的肽的量是足以增强移植到受体中的器官、组织或细胞的存活性或功能的量。

另一方面，本发明提供了一种移植方法，其包括：从供体获得器官、组织或细胞；将获得的器官、组织或细胞移植到受体中；和将含有所述肽的组合物施用于受体。在该方法中，施用到受体中的肽的量是足以增强移植入受体后的器官、组织或细胞的存活性或功能的量。这里，向受体施用可以在手术期间或之后，以及手术之后的维持步骤中持续进行。

在一个实施方案中，本说明书中公开的组合物可以在将器官、组织或细胞移植到受体中后的0至20天内，例如1、2、4、6、8、10、12、14、18或20天内施用于受体。在另一个实施方案中，在将器官、组织或细胞移植到受体中后的第21天起，只要为确保移植体的存活所需，即可将本说明书中公开的组合物长期对受体施用至少一次(例如数次)或持续施用。本说明书中公开的组合物可以以确定了是否表现出移植器官、组织或细胞排斥(例如，慢性或急性排斥)的合适形式施用于受体。

在一个方面，包含肽的组合物可以施用于供体和受体二者。在另一方面，包含肽的组合物可以施用于供体和/或受体，并且在移植期间，器官、组织或细胞可以暂时储存在包含肽的组合物中。

在一个实施方案中，本说明书中公开的组合物可以通过在器官、组织或细胞存在于供体或受体体内时对体内的所述器官、组织或细胞进行灌注而施用。

在本说明书中描述的方法中，器官、组织或细胞可以是可以被移植的任何器官、组织或细胞。例如器官可以是肝、肾、心脏、胰腺、肺、小肠和/或皮肤，以及其组织或细胞。

供体可以是与受体异源或同源。供体和受体都可以是除人之外的动物或人。此外，供体可以是不包括人的动物，例如猪，或者受体可以是人。在一个实施方案中，组织或细胞可以是受体的自身组织或细胞。换句话说，供体和受体可以是相同的个体。

说明书中公开的组合物可以包括作为活性成分的肽与另一种活性成分的组合。例如，本说明书中公开的肽可以加入Perfadex^TM，其可作为肺保存溶液商购获得。

在本说明书中公开的组合物中，肽的浓度可以按照本领域中已知地常规确定。例如，根据本发明的一个方面的组合物可以包括包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段，其含量为10mg/L至1000mg/L，具体地为50mg/L至500mg/L，更具体为30mg/L至200mg/L，但如果基于含量的效果有差异，含量可以适当地调整。在另一方面，组合物可以包含1mg/L或更多、5mg/L或更多、10mg/L或更多、20mg/L或更多、30mg/L或更多、40mg/L或更多、50mg/L或更多、60mg/L或更多、70mg/L或更多、80mg/L或更多、或90mg/L或更多的肽。此外，组合物可以包含50000mg/L或更少、40000mg/L或更少、30000mg/L或更少、200000mg/L或更少、10000mg/L或更少、8000mg/L以下的肽，6000mg/L或更少、4000mg/L或更少、2000mg/L或更少、1000mg/L或更少、900mg/L或更少、800mg/L或更少、700mg/L或更少、600mg/L或更少、或500mg/L或更少的肽。当组合物包含在上述范围内或以下的肽时，其适于表现本发明意图的效果，并且能够满足组合物的稳定性和安全性。此外，上述范围在成本效益方面可能是适当的。

在本说明书中，肽的剂量、施用方法和施用周期是本领域广泛已知的，因此可以依据每位患者的情况根据本领域已知的标准施用肽。具体剂量可以由本领域普通技术人员确定，肽的日剂量可以具体为1μg/kg/天至10g/kg/天，更具体地为10μg/kg/天kg/天至100mg/kg/天，更具体地，50μg/kg/天至50mg/kg/天，但不限于此，并且可以根据各种参数进行改变，例如施用对象的年龄、健康状况和并发症。例如，肽可以局部或皮内施用到相应的部位。在移植之前、期间和之后施用的每日剂量可以基于60kg成年人为1mg至10000mg。在另一方面，剂量可以是1mg或更多、5mg或更多、10mg或更多、50mg或更多、100mg或更多、200mg或更多、300mg或更多、400mg或更多、500mg或更多、600mg或更多、700mg或更多、800mg或更多、900mg或更多，或者950mg或更多。在另一方面，剂量可以是10000mg或更少、9000mg或更少、8000mg或更少、7000mg或更少、6000mg或更少、5000mg或更少、4000mg或更少、3000mg或更少、2000mg或更少，或者1500mg或更少。在移植后的维持步骤中，可以每天至少施用一次并持续数天，并且可以增加时间间隔。例如，可以在第1周、第2周、第3周和第4周进行施用，然后在第6周和第10周进行施用。

可以从供体中提取器官、组织、细胞簇和/或分离的细胞，并通过本领域已知的任何方法移植(参考文献的实例：Oxford Textbook of Surgery，Morris和Malt编著，OxfordUniversity Press(1994))。本领域普通技术人员可以知道，提取和移植方法可以根据各种环境(例如器官、组织或细胞的类型和供体的类型)而改变。

在说明书中公开的组合物可以在通过将肽溶解在溶剂中制备的溶液中。溶剂可以是能在体内使用的任何一种溶剂，例如盐水、水溶液或缓冲液，而并没有限制。在一个方面，组合物可以是通过将本说明书中公开的肽加入到本领域已知的任何液体中制备的溶液(参考文献的实例：Oxford Textbook of Surgery，Morris和Malt编著，Oxford UniversityPress，1994)，其为适于施用于患者或适于在体外维持器官、组织或细胞的液体。通常，所述液体可以是水溶液。溶液的实例可以包括磷酸盐缓冲盐水(PBS)、Celsior^TM溶液、Perfadex^TM、Collins溶液、柠檬酸盐溶液和威斯康星大学(UW)溶液(Oxford Textbook ofSurgery，Morris和Malt编著，Oxford University Press，1994)。

一种已知的移植溶液是UW溶液，其可以包含：KH₂PO₅(25mmol/L)、MgSO₄(5mmol/L)、棉子糖(30mmol/L)、羟乙基五叶素淀粉(50g/L)、青霉素(200,000U/L)、胰岛素(40U/L)、地塞米松(16mg/dL)、乳酸钾(100mmol/L)、谷胱甘肽刺激激素(3mmol/L)、腺苷(5mmol/L)、别嘌呤醇(1mmol/L)、Na(25mmol/L)和K(125mmol/L)。

另一种已知的移植溶液是pay-Collins溶液，其可以包含：钠(10mM)、氯化物(15mM)、钾(115mM)、碳酸氢盐(10mM)、磷酸盐(50mM)和葡萄糖(195mM)。

在本发明的一个方面，提供了用于治疗和预防缺血性损伤的组合物，其包括作为活性成分的包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段。

根据本发明的一个方面的组合物是在移植前的准备步骤中施用于供体和/或受体的组合物或在移植后维持步骤中施用于供体和/或受体的组合物，其可包括包含SEQ IDNO：1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段，其含量为0.1μg/mg至1mg/mg，具体地，1μg/mg至0.5mg/mg，更具体地为10μg/mg至0.1mg/mg。在上述范围内，组合物可以适合于表现出本发明的期望效果，可以满足组合物的稳定性和安全性，并且在成本效益方面可能是合适的。

根据本发明的一个方面的组合物可以应用于所有动物，包括人、狗、鸡、猪、牛、绵羊、豚鼠和猴。

根据本发明的一个方面的组合物可以是用于治疗和预防IR损伤的药物组合物，其包括作为活性成分的包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段。根据本发明的一个方面的药物组合物可以是口服、直肠内、经皮、静脉内、肌内、腹膜内、骨髓、鞘内或皮下施用。

用于口服施用的形式可以是但不限于片剂、丸剂、软或硬胶囊、颗粒、粉末、溶液或乳液。非口服施用的形式可以是但不限于注射剂、滴剂、洗剂、软膏、凝胶、霜剂、混悬剂、乳剂、栓剂、贴剂或喷雾剂。

根据需要，本发明的药物组合物可以包含添加剂，例如稀释剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、分散剂、表面活性剂、着色剂、芳香剂或甜味剂。根据本发明的一个方面的药物组合物可以通过本领域的常规方法制备。

根据本发明的一个方面的药物组合物的活性成分可以根据患者的年龄、性别、体重、病理和状态、施用途径或处方者的判断而变化。基于这些因素的剂量可以在本领域普通技术人员的水平内确定，并且在移植之前的制备步骤中施用到供体和/或受体中的组合物的日剂量或者在移植之后的维持步骤中施用到供体和/或受体中的组合物的日剂量可以是例如0.1μg/kg/天至1g/kg/天，具体地，1μg/kg/天至10mg/kg/天，更具体地，10μg/kg/天至1mg/kg/天，更具体地，50μg/kg/天至100μg/kg/天，但本发明不限于此。根据本发明的一个方面的药物组合物可以每天施用一至三次，但是本发明不限于此。

根据本发明的一个方面的组合物可以是用于治疗和预防IR损伤的食物组合物，其包括作为活性成分的包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸具有至少80％序列同源性的肽或其片段。

根据本发明的一个方面的食品组合物可以以例如片剂、颗粒、粉末、液体和固体的形式配制，但是本发明不特别受限于此。各种形式可以根据使用形式或目的而通过混合在相应领域中常规使用的组分以及活性成分而毫无困难地制备，并且可以与其它成分组合产生协同效应。

说明书中使用的术语旨在用于描述具体实施例，而不是限制本发明。没有前置数字的术语并不是限制数量，而是表示至少一篇本文引用的文章的存在。术语“包括”、“具有”、“包含”和“含有”应当解释为开放式(即“包括但不限于”)。

数值范围的提及替代了在该范围内的单个数字的提及，并且除非另有说明，否则每个数字如同在说明书中单独提及而应用于说明书。所有范围的端值都包括在该范围内，并且可以单独组合。

在说明书中提及的所有方法可以以合适的顺序执行，除非另有说明或与上下文明显矛盾。除非包括在权利要求中，否则任何一个实施例和所有实施例或示例性语言(例如，“诸如”，“像”)的使用在于更清楚地描述本发明，而不是限制本发明的范围。在权利要求书之外的任何语言不应被解释为对于本发明是必要的。除非另有定义，本文使用的技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。

本发明的示例性实施例包括发明人已知的用于执行本发明的最佳模式。当阅读上述描述时，示例性实施例中的变化对于本领域技术人员来说可以变得清楚。期望本发明人适当地使用这样的变化，并通过说明书中描述的不同方法体现本发明。因此，如专利法所允许的，本发明包括所附权利要求中提及的本发明的要旨的等同形式和所有修改形式。此外，除非明确地另外说明或与上下文矛盾，否则本发明包括具有上述组件的任何组合的所有可能的变化。尽管通过示例性实施例描述和示出了本发明，但是本领域技术人员将理解，在不脱离由所附权利要求限定的本发明的精神和范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种改变。

在以下实施例中，通过在肾、肺、腹直肌皮瓣中发生的IR损伤中施用具有SEQ IDNO：1所示序列的肽(PEP 1)检验抑制肾损伤和增强皮瓣生存力的效果，从而证实所述肽对缺血性损伤的预防和治疗效果。

实施例

下文中，将参考实施例和实验例更详细地描述本发明的构造和效果。然而，以下实施例和实验例仅用于说明本发明以帮助理解本发明，并且本发明的范围不限于此。

实施例1：肽的合成

SEQ ID NO：1的肽(以下称为“PEP 1”)根据常规已知的固相肽合成制备。具体地，通过使用ASP48S(Peptron，Inc.，Daejeon，韩国)通过Fmoc固相肽合成(SPPS)从C末端逐个偶联氨基酸来合成肽。连接肽C-末端的第一个氨基酸的树脂如下：

NH₂-Lys(Boc)-2-氯-三苯甲基树脂

NH₂-Ala-2-氯-三苯甲基树脂

NH₂-Arg(Pbf)-2-氯-三苯甲基树脂

在用于合成肽的所有氨基酸组分中，N末端被Fmoc保护，并且残基被Trt、Boc、叔丁基酯(t-Bu)或2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基(Pbf)，其从酸中除去。所述氨基酸的实例如下：

Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ahx-OH、Trt-巯基乙酸。

作为偶联试剂，使用2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基铵六氟磷酸盐(HBTU)/N-羟基苯并三唑(HOBt)/4-甲基吗啉(NMM)。对于Fmoc脱保护，使用哌啶的20％DMF溶液。为了从树脂分离合成的肽并除去残基的保护基，使用切割混合物[TFA(三氟乙酸)/TIS(三异丙基硅烷)/EDT(乙二硫醇)/H₂O＝92.5/2.5/2.5/2.5]。

通过使各个相应的氨基酸与由氨基酸保护基保护的起始氨基酸反应，同时结合固相支架，用溶剂洗涤所得产物，并进行脱保护的重复过程合成每个肽。从树脂上分离后，通过HPLC纯化合成的肽，通过质谱(MS)验证偶联，并冻干。

通过高效液相色谱法，本实施方式中使用的所有肽的纯度为95％以上。

用于制备根据本发明的肽PEP1的具体方法将描述如下：

1)偶联

将在DMF中熔融的NH₂-Lys(Boc)-2-氯-三苯甲基树脂保护的氨基酸(8当量)和偶联试剂[HBTU(8当量)/HOBt(8当量)/NMM(16当量)]混合在一起并在室温下温育2小时。将所得产物依次用DMF、MeOH和DMF洗涤。

2)Fmoc脱保护

向所得产物中加入在哌啶的20％DMF溶液，并将混合物在室温下温育2分钟，然后依次用DMF、MeOH和DMF洗涤。

3)重复进行反应1和2以制备肽主链[NH₂-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-氯-三苯甲基树脂]。

4)切割：通过加入切割混合物从树脂中分离肽。

5)向所得混合物中加入冷乙醚后，沉淀通过离心获得的肽。

6)经制备型HPLC纯化后，通过LC/MS分析所得产物以鉴定分子量，并冻干以制备粉末。

实施例2：肾移植

如下诱导可能发生在肾移植中的肾脏IR以观察PEP1的作用。

通过双侧夹紧肾蒂30分钟诱导IR并通过移除夹子恢复血流30分钟来获得肾IR损伤小鼠模型。实验组分为三组：施用组(PEP 1)、对照组(PBS：不施用PEP 1)和Sham组(无双侧夹紧)。在IR诱导前30分钟和IR诱导后12小时以1000nmol/kg的浓度皮下注射PEP 1。

使用C57BL/6小鼠(8周龄；Charles River Laboratories，Wilmington，MA)诱导肾IR损伤。用血管钳夹住肾蒂以阻断血流，在肾IR损伤模型中诱导缺血28小时，然后再灌注。

将肽PEP 1用PBS稀释至1000nmol/kg的浓度，然后在IR前30分钟和IR后12小时腹膜内注射两次。通过将实验组分成施用组(PEP 1)、对照组(PBS)和Sham组(没有肾损伤的组，其中不发生IR损伤的组)进行实验。

实验例1：对IR损伤诱导的肾功能障碍的保护作用

在IR后24小时采集血液，测量作为肾毒性标记物的血液尿素氮(BUN)和肌酸的水平，取肾组织并制备成石蜡块用于免疫组织化学和组织学研究，然后提取蛋白质以测量细胞因子水平。使用自动分析仪(Technicon RA-1000；Bayer，Tarrytown，NY)测量肌酸浓度和BUN。

结果，与PBS对照组相比，PEP 1施用组显示出显著降低的BUN和肌酸水平(参见图1)。

实验例2：对肾组织损伤的预防效果

在IR后24小时，根据制造商(Polysciences，Inc.，Warrington，PA，美国)的方案，用高碘酸-Seiff(PAS)染色。染色后，通过肾组织损伤评分评估肾组织损伤。与PBS对照组相比，PEP 1施用组显示出明显增加的肾组织损伤(参见图2和图3)。

实验例4：对肾细胞凋亡的抑制作用

通过在IR后24小时用TUNEL染色对肾组织进行染色来评估肾脏凋亡。使用TUNEL染色试剂盒(Roche Applied Science，Indianapolis，IN，美国)，用TUNEL染色肾石蜡切片。

结果，与PBS对照组相比，PEP 1施用组显示TUNEL阳性细胞显著减少，表明PEP 1抑制肾组织凋亡(参见图4和图5)。

实验例5：对肾组织中先天免疫细胞浸润的抑制作用

在IR后24小时通过免疫组织化学用巨噬细胞标志物(F4/80)和嗜中性粒细胞标志物(Gr-1)染色肾组织来评估先天免疫细胞的浸润。具体地，通过在含石蜡切片上进行的免疫化学方法，用巨噬细胞特异性抗体(F4/80，abcam.，Cambridge，MA)对浸润的巨噬细胞和嗜中性粒细胞染色。

与PBS对照组相比，PEP 1施用组显示巨噬细胞和嗜中性粒细胞向肾组织的浸润显著减少(参见图6和图7)。

实验例6：对炎症细胞因子分泌的抑制作用

在IR后24小时从肾组织提取蛋白质，并通过细胞计数珠阵列测量IL-6、MCP-1和TNF-α水平。小鼠IL-6、MCP-1、TNF-α和ELISA试剂盒购自R&D Systems，根据制造商的方案进行实验。

结果，与PBS对照组相比，PEP 1施用组显示出显著降低的IL-6和MCP-1水平，但是没有观察到TNF-α水平的显著差异(参见图8至10)。

如上所述，通过肾衰竭(BUN、肌酸)、肾组织损伤(肾小管损伤)、肾凋亡、肾组织中的免疫细胞浸润和肾组织中细胞因子分泌的抑制来评估PEP 1对保护肾IR损伤的作用。

与Sham组相比，IR PBS对照组显示出血清BUN和肌酸水平增加以及肾组织损伤增加。然而，与对照组相比，PEP 1施用组显示出BUN和肌酸水平显著降低、肾组织损伤和肾细胞凋亡减少。此外，与PBS对照相比，PEP 1施用组显示肾脏中由IR引起的炎性细胞(嗜中性粒细胞和巨噬细胞)的浸润受抑制，并且显著抑制炎性细胞因子(白细胞介素-6和单核细胞趋化蛋白-1)的分泌。

实施例3：皮瓣移植

如下进行腹直肌皮瓣的移植。通过从白鼠(Sprague-Dawley大鼠，180g至230g)的腹部皮肤上剥离尺寸为5cm×5cm的皮瓣，向大鼠中加入PEP1或盐水，通过以下方式诱导缺血，获得IR损伤大鼠模型：夹紧并在7小时后通过移除夹具恢复血流(参见图11)。

将实验组分为三组，其为施用组(PEP 1)、对照组(不含PEP 1的PBS)和Sham组(其中未诱导IR损伤的组)。在IR诱导前30分钟和诱导后1天、2天、3天、4天、5天和7天，肌内注射PEP 1(10mg/500μl)或盐水(500μl)。

在IR诱导后7天测量皮瓣存活率。通过使用imageJ程序的数字图像分析测量皮瓣的存活率。

根据IR诱导7天后的测量结果，盐水处理组的皮瓣存活率为34.69％±16.44％，PEP1处理组的皮瓣存活率为58.88％±11.44％，高于盐水处理组(参照图12)。在组之间发现统计学显著性(p<0.05)。

实施例4：肺移植

用于检查PEP1对预防IR损伤的效果的肺移植模型设定如下。

使用具有相同基因的两只大鼠进行实验，通过从供体大鼠分离左肺并将供体肺放置在原左肺已被摘除的受体大鼠左胸腔中以进行肺移植。大鼠具有相同的基因从根本上防止了排异。供体大鼠和受体大鼠都具有300g至350g的重量，并且是Sprague-Dawley种。在从供体大鼠中提取肺后，通过外科手术将肺移植到受体大鼠。

如下进行从供体大鼠提取肺。

②将Rompun:Zoletil(1:2，1ml/kg)的混合物腹膜内注射到白鼠(供体)中。

②气管切开后，插入具有16号静脉内导管的管子并连接到通气机(HarvardRodent Ventilator Model；Harvard Apparatus CO，Holliston，MA)(Vt＝10ml/kg，PEEP＝2cm H₂O，呼吸频率＝80/min)。用100％氧气进行机械通气。

③在剖腹术和胸骨正中切开术后，将300IU肝素注射到下腔静脉中。

将18号血管导管通过右心室外流插入主肺动脉，并且在20cm H₂O压力下通过主肺动脉导管在10℃注射50mL生理盐水，而将下腔静脉在腹腔中分开，左心房分开。在灌注期间，连续进行机械通气以实现均匀的肺灌注。

④灌注后，结扎气管，同时肺在气管内插管下扩张，提取心肺块，然后在冷的皮氏培养皿上除去外周结构如食管。将心肺块称重，并在与肺灌注溶液相同的灌注溶液中冷藏。缺血持续时间设定为3小时。

待移植的肺如下进行准备。

①将提取的肺置于含有冷冲洗溶液的培养皿中，用湿海绵覆盖，然后装备袖套(cuff)。该过程在低温下进行。

②在确保连接袖套的足够距离之后，将袖套用4-0丝线连接到肺动脉用18G导管、肺静脉用16G导管和支气管用16G导管。

移植手术如下进行：

①通过腹膜内注射使受体大鼠镇静，在气管切开后，插入具有16号静脉内导管的管子，并用4-0丝线固定。对于供体，进行机械通气。

②右卧位在胸大肌和背阔肌切口，穿过第四肋床进行后外侧胸廓切开术。

③切开左肺韧带后，将左肺从肋骨架上提起并保持，然后剖开肺门，暴露肺动脉、肺静脉和左主干支气管。

④用微血管夹(Micro-Serrefine，Fine Science Tools，Foster city，CA)夹住所有三种结构。

⑤取出左肺，用袖口技术缝合移植肺的肺动脉、肺静脉和支气管。

对于实验，将肺移植大鼠分成四组。为了确定PEP1的合适浓度，将PEP1的低浓度(5mg)和高浓度(50mg)中的每一种施用到移植前的供体大鼠的肺、从供体中提取的肺和移植后的受体中。

①50mL生理盐水施用组

②Perfadex^TM 50mL施用组

③Perfadex^TM 50mL+PEP1 5mg施用组

④Perfadex^TM 50mL+PEP1 50mg施用组

为了评估移植后的移植肺的功能，进行以下实验。

实验例1.苏木精与曙红染色(H&E染色)

当由于IR损伤而发生肺损伤时，出现出血并且肺泡壁增厚。为了测量当上述四种溶液用作肺保存溶液时，针对肺出血和肺泡壁厚度的IR损伤发生程度，如下进行H&E染色。

移植肺的中间区域用福尔马林固定，进行H&E染色，然后通过光学显微镜在组之间比较肺泡组织样品。

分析显示，出血和肺泡壁的厚度按生理盐水组(①组)、Perfadex^TM组(②组)、Perfadex^TM&PEP1 50mg组(④组)和Perfadex^TM&PEP1 5mg组(③组)的顺序增加。特别地，当使用Perfadex^TM&PEP1 5mg组(③组)作为肺保存溶液时，很少发生出血，并且肺泡壁不变硬。这表明，当将5mg PEP1而不是50mg PEP1加入到Perfadex^TM中时，其在预防出血和维持肺泡壁方面更有效，这表明更高的IR损伤抑制作用(参见图14)。

实验例2.湿/干重量比的测量

切下并称重移植肺的下叶，在60℃的烘箱中干燥24小时，然后再称重。

分析显示再灌注水肿按生理盐水施用组(①组)、Perfadex^TM&PEP1 50mg施用组(④组)、Perfadex施用组(②组)、Perfadex^TM&PEP1 5mg(③组)的顺序增加。

与生理盐水施用组(①组)相比，Perfadex^TM施用组(②组)和Perfadex^TM&PEP15mg(③组)显示显著(p<0.05)降低的再灌注水肿，并且Perfadex^TM&PEP1 5mg(③组)显示出最低水平(参见图15)。

实验例3.支气管肺泡灌洗液(BAL)

将5mL生理盐水注入支气管中，然后提取以用于中性粒细胞含量的分析。

分析显示，BAL中的炎症细胞率按生理盐水施用组(①组)、Perfadex^TM施用组(②组)、Perfadex^TM&PEP1 50mg施用组(④组)、Perfadex^TM&PEP1 5mg施用组(③组)的顺序增加。箭头表示炎症细胞。可以看出，Perfadex^TM&PEP1 5mg施用组(③组)显示最低的炎症细胞表达(参见图16)。

序列表

<110> 珍白斯凯尔有限公司

金商在

<120> 用于器官、组织或细胞移植的组合物、试剂盒和移植方法

<130> OF14P098PCT

<150> 10-2014-0052536

<151> 2014-04-30

<150> PCT/KR2014/004194

<151> 2014-05-09

<160> 2

<170> PatentIn version 3.2

<210> 1

<211> 16

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys

1 5 10 15

<210> 2

<211> 1132

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Met Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg Ser

1 5 10 15

His Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu Gly

20 25 30

Pro Gln Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe Arg

35 40 45

Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro

50 55 60

Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu

65 70 75 80

Val Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Lys Asn Val

85 90 95

Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro

100 105 110

Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val Thr

115 120 125

Asp Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg Val

130 135 140

Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe Val

145 150 155 160

Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu Tyr

165 170 175

Gln Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser Gly

180 185 190

Pro Arg Arg Arg Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn His Ser Val Arg

195 200 205

Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg Arg

210 215 220

Gly Gly Ser Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg Arg

225 230 235 240

Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser Trp

245 250 255

Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys Val

260 265 270

Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly Ala

275 280 285

Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His His

290 295 300

Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr Pro

305 310 315 320

Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser Gly

325 330 335

Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg Pro

340 345 350

Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser

355 360 365

Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Leu Pro Arg Leu Pro Gln

370 375 380

Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His

385 390 395 400

Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Val Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu Arg

405 410 415

Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln

420 425 430

Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg Leu

435 440 445

Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe

450 455 460

Val Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser

465 470 475 480

Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser

485 490 495

Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys Met

500 505 510

Ser Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly Cys

515 520 525

Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe

530 535 540

Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe

545 550 555 560

Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg Leu Phe Phe Tyr

565 570 575

Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His

580 585 590

Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln

595 600 605

His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile

610 615 620

Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val

625 630 635 640

Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser

645 650 655

Arg Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg

660 665 670

Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg

675 680 685

Ala Trp Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro

690 695 700

Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile

705 710 715 720

Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln

725 730 735

Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala His

740 745 750

Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr Leu Thr Asp

755 760 765

Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr Ser

770 775 780

Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu

785 790 795 800

Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Met Cys His His

805 810 815

Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro

820 825 830

Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp

835 840 845

Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu

850 855 860

Arg Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala

865 870 875 880

Lys Thr Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys

885 890 895

Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu

900 905 910

Ala Leu Gly Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe

915 920 925

Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser

930 935 940

Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe

945 950 955 960

Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly

965 970 975

Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn

980 985 990

Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln

995 1000 1005

Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln Gln

1010 1015 1020

Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr Ala

1025 1030 1035 1040

Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Leu

1045 1050 1055

Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu Ala Val Gln Trp

1060 1065 1070

Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr Arg His Arg Val Thr

1075 1080 1085

Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Ser

1090 1095 1100

Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Thr Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn

1105 1110 1115 1120

Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr Ile Leu Asp

1125 1130

Claims

1.用于器官、组织或细胞移植的组合物，其包括：

用作活性成分的包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的肽、与所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述片段由三个或更多个氨基酸组成。

3.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物施用于供体和/或受体。

4.如权利要求3所述的组合物，其中所述组合物在移植之前、期间和之后的任一或多个阶段中施用。

5.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物用于储存从供体分离的器官、组织或细胞。

6.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包括作为活性成分的肽，其量足以增强器官、组织或细胞移植至受体后的存活性或功能。

7.如权利要求6所述的组合物，其中所述组合物包括相对于所述组合物的总体积浓度为10mg/L至1000mg/L的作为活性成分的肽。

8.如权利要求7所述的组合物，其中所述组合物包括相对于所述组合物的总体积浓度为50mg/L至500mg/L的作为活性成分的肽。

9.用于器官、组织或细胞移植的试剂盒，其包括：

权利要求1至8中任一项所述的用于器官、组织或细胞移植的组合物；和

包括所述组合物使用方法的方案。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其中所述组合物是下列组合物中的任意一种：在移植前施用于供体的组合物；在移植前施用于受体的组合物；在移植期间施用于供体的组合物；在移植期间施用于受体的组合物；用于储存从供体分离的器官、组织或细胞的组合物；移植后施用于供体的组合物；和在移植后施用于受体的组合物。

11.如权利要求10所述的试剂盒，其中所述方案包括所述各种组合物的剂量、施用方法和施用间隔。

12.如权利要求11所述的试剂盒，其中所述方案包括在器官、组织或细胞存在于供体或受体体内时通过对体内的所述器官、组织或细胞进行灌注而施用所述组合物。

13.用于器官、组织或细胞移植的方法，其包括：

用权利要求1至8中任一项所述的用于器官、组织或细胞移植的组合物处理分离的器官、组织或细胞，或者将权利要求1至8中任一项所述的用于器官、组织或细胞移植的组合物施用于进行器官、组织或细胞移植的供体和/或受体。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述方法包括以下步骤中的任意一种或多种：在移植前将所述组合物施用于供体；在移植前将所述组合物施用于受体；在移植期间将所述组合物施用于供体；在移植期间将所述组合物施用于受体；在所述组合物中储存从供体分离的器官、组织或细胞；在移植后将所述组合物施用于供体；和在移植后将所述组合物施用于受体。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述方法包括在器官、组织或细胞存在于供体或受体体内时通过对体内的所述器官、组织或细胞进行灌注而施用所述组合物。

16.如权利要求13所述的方法，其中所述组合物基于60kg成年人以1mg至10000mg的单剂量进行处理或施用。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述组合物基于60kg成年人以200mg至5000mg的单剂量进行处理或施用。

18.如权利要求1至8中任一项所述的组合物在治疗分离的器官、组织或细胞中的用途，或者被施用于器官、组织或细胞移植的供体和/或受体的用途。