CN106613959A - 一种用于杨树扩繁的通用培养基及快速扩繁方法 - Google Patents

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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Abstract

为了解决杨树组织培养中各杨树品种需分别单独制作培养基的复杂过程，本发明提供了一种用于杨树扩繁的通用培养基及快速扩繁方法。将MS培养基中NH4NO3的浓度降低四分之一后作为基础培养基，并向所述基础培养基中添加6‑BA、NAA、TDZ、蔗糖和琼脂，得到所述通用培养基，所述通用培养基中6‑BA的浓度为0.2‑0.4mg/L，NAA的浓度为0.04‑0.07mg/L，TDZ的浓度为0.0005‑0.0015mg/L，蔗糖的浓度为25‑35g/L，琼脂的浓度为5‑6g/L。所述通用培养基能够在不同的杨树品种上使用，使用所述通用培养基的所述快速扩繁方法，操作程序简便，无需分别单独制作培养基，使复杂生产工序简化，工艺成本降低，经济效益增加。

Description

一种用于杨树扩繁的通用培养基及快速扩繁方法
技术领域
本发明属于杨树扩繁技术领域，具体涉及一种用于杨树扩繁的通用培养基及快速扩繁方法。
背景技术
杨树对环境的适应能力强，在我国分布广泛，无论是肥沃的土地还是贫瘠的山地，均能很好的生长。杨树具有很高的经济使用价值和环保价值，其主干通直、材质细密、生长快，是纸浆材原料林的重要树种之一，也是优良水源涵养林和主要防护林带的造林树种之一。但由于许多杨树嫁接成活率低、扦插生根困难，难以采用常规的无性繁殖方法进行增殖，影响了杨树的大面积推广。
为了有效的解决这一难题，我国的学者开始尝试使用组织培养的方法对杨树进行增殖。但到目前为止，人们对各品种杨树的组织培养，多采用各自独立的培养基，用于杨树组织培养的通用培养基很少见。
发明内容
为了解决杨树组织培养中各杨树品种需分别单独制作培养基的复杂过程，本发明提供了一种用于杨树扩繁的通用培养基及快速扩繁方法。所述通用培养基能够在不同的杨树品种上使用，使用所述通用培养基的所述快速扩繁方法，操作程序简便，无需分别单独制作培养基，使复杂生产工序简化，工艺成本降低，经济效益增加。
本发明所采用的技术方案为：一种用于杨树扩繁的通用培养基，将MS培养基中NH4NO3的浓度降低四分之一后作为基础培养基，并向所述基础培养基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和琼脂，得到所述通用培养基，所述通用培养基中6-BA的浓度为0.2-0.4mg/L，NAA的浓度为0.04-0.07mg/L，TDZ的浓度为0.0005-0.0015mg/L，蔗糖的浓度为25-35g/L，琼脂的浓度为5-6g/L。
本发明按照“先进、适用、经济”的原则，巧妙地选用合适的激素及其配比，提供一种杨树组织培养的通用培养基，以满足杨树组织培养的技术性能要求，所述通用培养基采用MS培养基为基础，同时减少了其中NH4NO3的用量；附加成分由激素、蔗糖和固化剂组成。其中激素包括细胞分裂素和生长素两种，采用6-BA(苄氨基腺嘌呤)、TDZ(噻苯隆)作为细胞分裂素，NAA(萘乙酸)和IBA(吲哚乙酸)作为生长素，多种成分综合使用，得到一种适用多种杨树品种(如杨树杂交种、辽杨、毛新杨和新疆杨)的通用培养基。
进一步地，所述通用培养基中6-BA的浓度为0.3mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L，TDZ的浓度为0.001mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为5.5g/L。
为保证杨树扩繁的正常进行，所述通用培养基的pH值为5.8-6.2。
作为一种保持通用培养基pH值的方法，在所述通用培养基中加入pH缓冲剂。
本发明还提供了一种使用所述通用培养基的快速扩繁方法，包括以下步骤：
A、原料准备：取杨树茎段并做灭菌处理，得脱毒茎段；
B、增殖继代培养，在无菌条件下，将步骤A中得到的所述脱毒茎段接种在所述通用培养基上，并置于22-28℃的黑暗条件下培养7-10天后，转入22-28℃的光照条件下培养20-40天，光照强度为1600-2000Lux，每天光照时间为10-16小时；即可得到杨树幼苗。
使用所述通用培养基的快速扩繁方法，操作程序简便，无需分别单独制作培养基，使复杂生产工序简化，工艺成本降低，经济效益增加。
为了促使杨树幼苗更好地生根，优选的技术方案是，增殖继代培养之后还包括C、生根培养：取步骤B得到的杨树幼苗顶端3-5cm的部分，接种在生根培养基上，并置于22-28℃的光照条件下培养30-40天，光照强度为1600-2000Lux，每天光照时间为10-16小时；即可得到带有根的杨树幼苗。
为了使杨树苗迅速适应陆地的环境条件，优选的技术方案是，生根培养之后还包括D、炼苗移栽：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.5mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L。
在步骤A中，取杨树半木质化嫩枝，去除叶片以及顶芽，依次使用洗涤剂溶液、酒精溶液和氯化汞溶液冲洗后，吸干杨树茎段表面水分后得到脱毒茎段。
进一步地，所述酒精溶液的体积分数为75％，所述氯化汞溶液的中氯化汞的质量分数为0.1％；在酒精溶液和0.1％的氯化汞溶液冲洗后，均使用无菌水对所述杨树茎段进行冲洗。
本发明的有益效果为：
1、本发明公开了一种用于杨树扩繁的通用培养基，所述通用培养基能够在不同的杨树品种上使用，扩大了培养基使用的范围，从而减少了杨树扩繁的步骤。
2、本发明还公开了一种快速扩繁方法，操作程序简便，无需分别单独制作培养基，使复杂生产工序简化，工艺成本降低，经济效益增加。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1
一种用于杨树扩繁的通用培养基，将MS培养基中NH4NO3的浓度降低四分之一后作为基础培养基，并向所述基础培养基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和琼脂，得到所述通用培养基，所述通用培养基中6-BA的浓度为0.2mg/L，NAA的浓度为0.07mg/L，TDZ的浓度为0.0005mg/L，蔗糖的浓度为35L，琼脂的浓度为5g/L。
实施例2
一种用于杨树扩繁的通用培养基，将MS培养基中NH4NO3的浓度降低四分之一后作为基础培养基，并向所述基础培养基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和琼脂，得到所述通用培养基，所述通用培养基中6-BA的浓度为0.4mg/L，NAA的浓度为0.04mg/L，TDZ的浓度为0.0015mg/L，蔗糖的浓度为25g/L，琼脂的浓度为6g/L。
实施例3
一种用于杨树扩繁的通用培养基，将MS培养基中NH4NO3的浓度降低四分之一后作为基础培养基，并向所述基础培养基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和琼脂，得到所述通用培养基，所述通用培养基中6-BA的浓度为0.3mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L，TDZ的浓度为0.001mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为5.5g/L。
实施例4
一种使用实施例3中所述通用培养基的快速扩繁方法，包括以下步骤：
A、原料准备：取杨树半木质化嫩枝，去除叶片以及顶芽，放入含有洗涤剂溶液中浸泡1min，再用流水冲洗40min，用75％的酒精对其再进行消毒，消毒时间为40s，消毒后用无菌水冲洗4次，然后用质量分数为0.1％的氯化汞溶液处理3min后，用无菌水冲洗5次，冲洗后，吸干杨树茎段表面水分后得到脱毒茎段；
B、增殖继代培养，在无菌条件下，将步骤A中得到的所述脱毒茎段切成长度为1cm的带单芽茎段，接种在所述通用培养基上，并置于28℃的黑暗条件下培养7天后，转入28℃的光照条件下培养20天，光照强度为2000Lux，每天光照时间为10小时；即可得到杨树幼苗；
C、生根培养：取步骤B得到的杨树幼苗顶端5cm的部分，接种在生根培养基上，并置于22℃的光照条件下培养30天，光照强度为1600Lux，每天光照时间为16小时；即可得到带有根的杨树幼苗；所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.5mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
D、炼苗移栽：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
实施例5
一种使用实施例3中所述通用培养基的快速扩繁方法，包括以下步骤：
A、原料准备：取杨树半木质化嫩枝，去除叶片以及顶芽，放入含有洗涤剂溶液中浸泡2min，再用流水冲洗20min，用75％的酒精对其再进行消毒，消毒时间为50s，消毒后用无菌水冲洗2次，然后用质量分数为0.1％的氯化汞溶液处理7min后，用无菌水冲洗4次，冲洗后，吸干杨树茎段表面水分后得到脱毒茎段；
B、增殖继代培养，在无菌条件下，将步骤A中得到的所述脱毒茎段切成长度为2cm的带单芽茎段，接种在所述通用培养基上，并置于22℃的黑暗条件下培养10天后，转入22℃的光照条件下培养40天，光照强度为1600Lux，每天光照时间为16小时；即可得到杨树幼苗；
C、生根培养：取步骤B得到的杨树幼苗顶端3cm的部分，接种在生根培养基上，并置于28℃的光照条件下培养35天，光照强度为2000Lux，每天光照时间为10小时；即可得到带有根的杨树幼苗；所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.5mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
D、炼苗移栽：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
实施例6
一种使用实施例3中所述通用培养基的快速扩繁方法，包括以下步骤：
A、原料准备：取杨树半木质化嫩枝，去除叶片以及顶芽，放入含有洗涤剂溶液中浸泡1min，再用流水冲洗30min，用75％的酒精对其再进行消毒，消毒时间为30s，消毒后用无菌水冲洗3次，然后用质量分数为0.1％的氯化汞溶液处理5min后，用无菌水冲洗4次，冲洗后，吸干杨树茎段表面水分后得到脱毒茎段；
B、增殖继代培养，在无菌条件下，将步骤A中得到的所述脱毒茎段切成长度为1cm的带单芽茎段，接种在所述通用培养基上，并置于25℃的黑暗条件下培养8天后，转入25℃的光照条件下培养30天，光照强度为1800Lux，每天光照时间为13小时；即可得到杨树幼苗；
C、生根培养：取步骤B得到的杨树幼苗顶端4cm的部分，接种在生根培养基上，并置于25℃的光照条件下培养40天，光照强度为1800Lux，每天光照时间为13小时；即可得到带有根的杨树幼苗；所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.5mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L；
D、炼苗移栽：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种用于杨树扩繁的通用培养基，其特征在于，将MS培养基中NH4NO3的浓度降低四分之一后作为基础培养基，并向所述基础培养基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和琼脂，得到所述通用培养基，所述通用培养基中6-BA的浓度为0.2-0.4mg/L，NAA的浓度为0.04-0.07mg/L，TDZ的浓度为0.0005-0.0015mg/L，蔗糖的浓度为25-35g/L，琼脂的浓度为5-6g/L。
2.根据权利要求1所述的通用培养基，其特征在于，所述通用培养基中6-BA的浓度为0.3mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L，TDZ的浓度为0.001mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为5.5g/L。
3.根据权利要求1所述的通用培养基，其特征在于，所述通用培养基的pH值为5.8-6.2。
4.一种使用权利要求1-3任一所述通用培养基的快速扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、原料准备：取杨树茎段并做灭菌处理，得脱毒茎段；
B、增殖继代培养，在无菌条件下，将步骤A中得到的所述脱毒茎段接种在所述通用培养基上，并置于22-28℃的黑暗条件下培养7-10天后，转入22-28℃的光照条件下培养20-40天，光照强度为1600-2000Lux，每天光照时间为10-16小时；即可得到杨树幼苗。
5.根据权利要求4所述的快速扩繁方法，其特征在于，增殖继代培养之后还包括C、生根培养：取步骤B得到的杨树幼苗顶端3-5cm的部分，接种在生根培养基上，并置于22-28℃的光照条件下培养30-40天，光照强度为1600-2000Lux，每天光照时间为10-16小时；即可得到带有根的杨树幼苗。
6.根据权利要求5所述的快速扩繁方法，其特征在于，生根培养之后还包括D、炼苗移栽：将步骤C得到的根系达2-3cm的杨树苗进行炼苗移栽。
7.根据权利要求5所述的快速扩繁方法，其特征在于，所述生根培养基是使用1/2MS培养基为基础，并添加蔗糖、IBA和琼脂得到，所述生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，IBA的浓度为0.5mg/L，琼脂的浓度为5.5g/L。
8.根据权利要求4所述的快速扩繁方法，其特征在于，在步骤A中，取杨树半木质化嫩枝，去除叶片以及顶芽，依次使用洗涤剂溶液、酒精溶液和氯化汞溶液冲洗后，吸干杨树茎段表面水分后得到脱毒茎段。
9.根据权利要求8所述的快速扩繁方法，其特征在于，所述酒精溶液的体积分数为75％，所述氯化汞溶液的中氯化汞的质量分数为0.1％；在酒精溶液和0.1％的氯化汞冲洗后，均使用无菌水对所述杨树茎段进行冲洗。
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