CN106596751B - 一种氯代消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的高效液相色谱-电喷雾质谱检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种氯代消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的高效液相色谱‑电喷雾质谱检测方法，包括样品的制备、待测水样的萃取和浓缩、待测水样的测定、空白样品的测定、二氯乙酰胺和三氯乙酰胺标准溶液的测定；最后从待测水样的液相色谱图中排除与无水甲醇色谱峰对应的色谱峰后与标准溶液的液相色谱图进行比对，找出待测水样的色谱峰，对待测水样的色谱峰进行积分得到峰面积，根据步骤五得到的标准曲线确定待测水样中二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的含量。本发明中，加标回收率保持在90‑107％之间，相对标准保持在3.5‑4.9％之间，满足测试方法要求。本发明扩展了二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的液质分析方法，具有操作简单，灵敏度度高，同时测定等优点。
Description
技术领域
本发明属于水中微量污染物的检测技术领域，具体涉及一种氯代消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的高效液相色谱-电喷雾质谱检测方法。
背景技术
含氮消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺广泛存在于经过消毒处理的饮用水中，由于比常规含碳消毒副产物(三卤甲烷、卤乙酸)具有更强的细胞毒性和基因毒性而日益受到人们的关注。但是二氯乙酰胺和三氯乙酰胺在水中的浓度较低，对检测技术要求高，因此寻找一种准确度高、灵敏度高的技术显得尤为重要。
二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的传统检测方法是液液萃取前处理，气相色谱或气相色谱-质谱进行分析测定，该方法存在着样品回收率低、检测限较高等缺点。楚文海等人采用固相萃取前处理，大气压化学电离源(APCI)的液质联用技术实现了13种卤乙酰胺的同时测定，该液质技术大大提高了对乙酰胺的分析能力。但是目前国内外采用液质检测的相关报道非常有限。乙酰胺是一种含有胺基的高极性小分子化合物，在酸性溶液中其伯胺具有结合氢离子形成正离子胺盐的倾向，因此，理论上可以采用电喷雾电离进行离子化，而且电喷雾电离的离子化温度一般比APCI低，可以降低乙酰胺分子的热分解几率，但是目前缺乏相关报道。因此，为了进一步扩展卤乙酰胺的分析方法，非常有必要研究采用电喷雾电离的液质分析测定方法。
发明内容
针对二氯乙酰胺和三氯乙酰胺现有测定技术的不足，本发明提供了一种氯代消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的高效液相色谱-电喷雾质谱检测技术，该方法高效、灵敏度高、重现性好、回收率高。
为了解决上述问题，本发明提出的一种氯代消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的高效液相色谱-电喷雾质谱检测方法，包括以下步骤：
步骤一、样品的制备：将500mL待测水样经0.45μm滤膜过滤后倒入到棕色玻璃瓶中，将待测水样的pH调为5.0±0.5；
步骤二、待测水样的萃取和浓缩：采用固相萃取柱HLB对经过步骤一处理后的待测水样进行固相萃取：首先采用5mL甲醇、5mL超纯水活化固相萃取柱，在上样之前保证固相萃取柱的湿润；用真空泵将水样以1滴/秒的速度通过固相萃取柱；用5mL体积浓度为5％的甲醇水溶液清洗固相萃取柱，抽真空15min，用5mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液在40℃下氮吹浓缩至0.5mL，然后进行液质分析；
步骤三、待测水样的测定：将定容的装有待测水样的色谱进样瓶放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取待测水样，经电喷雾质谱进行检测并记录待测水样的液相色谱图；
步骤四、空白样品的测定：将定容的装有无水甲醇的色谱进样瓶放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取无水甲醇，经电喷雾质谱进行检测并记录无水甲醇的液相色谱图；
步骤五、标准品的测定：将定容的装有不同浓度的二氯乙酰胺和三氯乙酰胺标准溶液的多个色谱进样瓶同时放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取该标准溶液，经电喷雾质谱进行检测并记录液相色谱图，从而确定二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的出峰时间；上述标准溶液中，溶质为二氯乙酰胺和三氯乙酰胺，二氯乙酰胺与三氯乙酰胺的质量比为1：1，溶剂为甲醇；根据不同浓度标准溶液所得的液相色谱图，绘制峰面积与浓度之间的标准曲线，得到峰面积与浓度之间的线性关系；
步骤六、结果表征：根据步骤四得到的无水甲醇的液相色谱图，从步骤三得到的待测水样的液相色谱图中排除与无水甲醇色谱峰对应的色谱峰后，与步骤五得到的标准溶液的液相色谱图进行比对，找出待测水样的色谱峰，对待测水样的色谱峰进行积分得到峰面积，根据步骤五得到的标准曲线确定待测水样中二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的含量。
进一步讲，步骤一中，用稀盐酸或氢氧化钠溶液调节待测水样的pH值。
步骤三、步骤四和步骤五中，液相色谱：安捷伦1200，色谱柱：安捷伦poroshell120 EC C18(100×2.1mm i.d.2.7μm)，柱温：40℃，进样体积：5μL，流速：0.3mL·min-1；流动相组成为A：超纯水，B：甲醇；色谱分离条件为等度洗脱，等度洗脱条件为：A为95％，B为5％；质谱仪：安捷伦6410B三重四极杆质谱，离子源：电喷雾电离源，正离子模式；将卤乙酰胺的单标储备液，用体积浓度为5％的甲醇水溶液稀释到10mg·L-1；质谱参数如下：雾化器压力：35psi，干燥气：氮气，干燥气温度：350℃，干燥气流速：10L·min-1，毛细管电压：4000V，电子倍增器值：200V，扫描模式：多反应监测模式，驻留时间：200ms。
步骤五中，二氯乙酰胺和三氯乙酰胺标准溶液的浓度分别为5、10、20、50、100、200μg/L。
本发明用于实际水样中二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的分析测定，采用固相萃取前处理技术，对水中微量的污染物进行富集浓缩，浓缩后的样品采用高效液相色谱-电喷雾质谱进行测定，该分析方法灵敏度高，检测限低，可测定水中微量有机物含量。
附图说明
图1为二氯乙酰胺(DCAcAm)的液相色谱图；
图2为三氯乙酰胺(TCAcAm)的液相色谱图；
图3为二氯乙酰胺(DCAcAm)的标准曲线图；
图4为三氯乙酰胺(TCAcAm)的标准曲线图。
具体实施方式
以下通过实施例讲述本发明的详细过程，提供实施例是为了理解的方便，绝不是限制本发明。
本发明实施例中所采用的仪器设备主要有安捷伦液相色谱1200，安捷伦质谱6410B，CNW的12位的固相萃取装置和HLB固相萃取柱，二氯乙酰胺和三氯乙酰胺标品购自Chemservice公司，本发明的具体步骤如下：
氯代消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的高效液相色谱-电喷雾质谱检测方法，
步骤一、样品的制备：将500mL待测水样经0.45μm滤膜过滤后倒入到棕色玻璃瓶中，用稀盐酸或是氢氧化钠溶液将待测水样的pH调为5.0±0.5，以保证后续的萃取和浓缩步骤中卤乙酰胺不发生水解。
步骤二、待测水样的萃取和浓缩：采用固相萃取柱HLB对经过步骤一处理后的500mL待测水样进行固相萃取：首先采用5mL甲醇、5mL超纯水活化固相萃取柱，在上样之前保证固相萃取柱的湿润；用真空泵将水样以1滴/秒的速度通过固相萃取柱；用5mL的5％甲醇水溶液清洗固相萃取柱，抽真空15min，用5mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液在40℃下氮吹浓缩至0.5mL，然后进行液质分析。
步骤三、待测水样的测定：将定容的装有上述待测水样的色谱进样瓶放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取待测水样，经电喷雾质谱进行检测并记录待测水样的液相色谱图，检测的工作条件如下：液相色谱：安捷伦1200，色谱柱：安捷伦poroshell120 EC C18(100×2.1mm i.d.2.7μm)，柱温：40℃，进样体积：5μL，流速：0.3mL·min-1.流动相组成为A：超纯水，B：甲醇；色谱分离条件为等度洗脱，等度洗脱条件为：A：95％，B：5％；质谱仪：安捷伦6410B三重四极杆质谱，离子源：电喷雾电离源(ESI)，正离子模式。将卤乙酰胺的单标储备液，用甲醇/水溶液(V/V，5/95)稀释到10mg·L-1，质谱参数如下：雾化器压力：35psi，干燥气：氮气(N2)，干燥气温度：350℃，干燥气流速：10L·min-1，毛细管电压：4000V，电子倍增器值：200V，扫描模式：多反应监测模式(MRM)，驻留时间：200ms。
步骤四、空白样品的测定：将定容的装有无水甲醇的色谱进样瓶放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取无水甲醇，经电喷雾质谱进行检测并记录无水甲醇的液相色谱图；检测的工作条件同步骤三。
步骤五、标准品的测定：将定容的装有5、10、20、50、100、200μg/L不同浓度的二氯乙酰胺和三氯乙酰胺标准溶液的六个色谱进样瓶同时放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取该标准溶液，经电喷雾质谱进行检测并记录液相色谱图，从而确定二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的出峰时间；上述标准溶液中，溶质为二氯乙酰胺和三氯乙酰胺，二氯乙酰胺与三氯乙酰胺的质量比为1：1，溶剂为甲醇；根据不同浓度标准溶液所得的液相色谱图，绘制峰面积与浓度之间的标准曲线，得到峰面积与浓度之间的线性关系；检测的工作条件同步骤三。
步骤六、结果表征：根据步骤四得到的无水甲醇的液相色谱图，从步骤三得到的待测水样的液相色谱图中排除与无水甲醇色谱峰对应的色谱峰后，与步骤五得到的标准溶液的液相色谱图进行比对，找出待测水样的色谱峰，对待测水样的色谱峰进行积分得到峰面积，根据步骤五得到的标准曲线确定待测水样中二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的含量。
检测实例：北方某城市自来水中二氯乙酰胺和三氯乙酰胺含量的分析
称取500mL北方某城市自来水，投加0.5μg/L的标准样品，按照上述本发明的具体步骤进行操作，测定自来水中二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的含量，每个样品重复测定三次，实验结果如表1所示：
表1.北方某城市自来水水样中二氯乙酰和三氯乙酰胺含量
二氯乙酰胺的出峰时间为2.89min(如图1)，三氯乙酰胺的出峰时间为13.50min(如图2)，二氯乙酰胺和三氯乙酰胺在高效液相色谱-电喷雾质谱检测方法中达到完全分离，可实现同时测定的目的，二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的标准曲线如3和图4所示，在5-200μg/L范围内有较好的线性关系，线性关系均在0.99以上。
综上，本发明通过优化色谱和质谱条件，二氯乙酰胺和三氯乙酰胺在5-200μg/L浓度范围内有较好的线性相关性，线性相关系数均在0.99以上，在0.5μg/L加标浓度下，经前处理富集浓缩后，加标回收率保持在90-107％之间，相对标准保持在3.5-4.9％之间，满足测试方法要求。本发明方法进一步扩展了二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的液质分析方法，该方法具有操作简单，灵敏度度高，同时测定等优点。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和等同替换，这些改进和等同替换也应视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种氯代消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的高效液相色谱-电喷雾质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、样品的制备：将500mL待测水样经0.45μm滤膜过滤后倒入到棕色玻璃瓶中，将待测水样的pH调为5.0±0.5；
步骤二、待测水样的萃取和浓缩：采用固相萃取柱HLB对经过步骤一处理后的待测水样进行固相萃取：首先采用5mL甲醇、5mL超纯水活化固相萃取柱，在上样之前保证固相萃取柱的湿润；用真空泵将水样以1滴/秒的速度通过固相萃取柱；用5mL体积浓度为5％的甲醇水溶液清洗固相萃取柱，抽真空15min，用5mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液在40℃下氮吹浓缩至0.5mL，然后进行液质分析；
步骤三、待测水样的测定：将定容的装有待测水样的色谱进样瓶放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取待测水样，经电喷雾质谱进行检测并记录待测水样的液相色谱图；
步骤四、空白样品的测定：将定容的装有无水甲醇的色谱进样瓶放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取无水甲醇，经电喷雾质谱进行检测并记录无水甲醇的液相色谱图；
步骤五、标准品的测定：将定容的装有不同浓度的二氯乙酰胺和三氯乙酰胺标准溶液的多个色谱进样瓶同时放入到液相色谱仪的进样盘中，采用自动进样的方法抽取该标准溶液，经电喷雾质谱进行检测并记录液相色谱图，从而确定二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的出峰时间；上述标准溶液中，溶质为二氯乙酰胺和三氯乙酰胺，二氯乙酰胺与三氯乙酰胺的质量比为1：1，溶剂为甲醇；根据不同浓度标准溶液所得的液相色谱图，绘制峰面积与浓度之间的标准曲线，得到峰面积与浓度之间的线性关系；所述二氯乙酰胺和三氯乙酰胺标准溶液的浓度分别为5、10、20、50、100、200μg/L；
步骤六、结果表征：根据步骤四得到的无水甲醇的液相色谱图，从步骤三得到的待测水样的液相色谱图中排除与无水甲醇色谱峰对应的色谱峰后，与步骤五得到的标准溶液的液相色谱图进行比对，找出待测水样的色谱峰，对待测水样的色谱峰进行积分得到峰面积，根据步骤五得到的标准曲线确定待测水样中二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的含量；
其中，步骤三、步骤四和步骤五中，
液相色谱：安捷伦1200，色谱柱：安捷伦poroshell 120EC C18，100×2.1mm i.d.2.7μm，柱温：40℃，进样体积：5μL，流速：0.3mL·min-1；
流动相组成为A：超纯水，B：甲醇；
等度洗脱，等度洗脱条件为：A为95％，B为5％；
将二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的单标储备液，用体积浓度为5％的甲醇水溶液稀释到10mg·L-1；
质谱仪：安捷伦6410B三重四极杆质谱，离子源：电喷雾电离源，正离子模式；质谱参数如下：雾化器压力：35psi，干燥气：氮气，干燥气温度：350℃，干燥气流速：10L·min-1，毛细管电压：4000V，电子倍增器值：200V，扫描模式：多反应监测模式，驻留时间：200ms。
2.根据权利要求1所述氯代消毒副产物二氯乙酰胺和三氯乙酰胺的高效液相色谱-电喷雾质谱检测方法，其特征在于：步骤一中，用稀盐酸或氢氧化钠溶液调节待测水样的pH值。
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