CN106566781A - 一种牛奶中链球菌的富集方法 - Google Patents
一种牛奶中链球菌的富集方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106566781A CN106566781A CN201510642388.XA CN201510642388A CN106566781A CN 106566781 A CN106566781 A CN 106566781A CN 201510642388 A CN201510642388 A CN 201510642388A CN 106566781 A CN106566781 A CN 106566781A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- streptococcus
- milk
- culture
- medium
- enrichment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种细菌的富集方法，属于生物技术领域，尤其涉及一种牛奶中链球菌的富集方法。一种牛奶中链球菌的富集方法，包括以下步骤：A、生乳样品的采集；B、配制链球菌富集的选择性培养基；C、链球菌的分离培养，将采集的乳样进行划线接种于选择性培养基中D、革兰氏染色镜检，对选择性培养基中的疑似菌落进行提取，提取的链球菌为革兰氏阴性菌E、链球菌的富集培养，将步骤D中提取的革兰氏阴性菌转移至胰蛋白胨大豆肉汤培养基中进行纯培养，对链球菌进行富集，并且获取富集后的链球菌，本发明建立了一种经济、快速、特异的牛奶中链球菌富集的方法，采用此方法可以快速简便地分离牛奶中链球菌，进而为后续对链球菌的鉴定提供可靠的依据。
Description
技术领域
本发明涉及一种细菌的富集方法，属于生物技术领域，尤其涉及一种牛奶中链球菌的富集方法。
背景技术
目前牛奶作为全球的饮品，深受人们喜爱，但由于鲜奶中存在各种各样的菌群，并且有些菌群可能会影响人身体的健康，其不但严重影响奶品质量，甚至严重危害人类的健康，造成奶牛养殖业和乳品业的巨大经济损失。
所以对牛奶中有害菌群的检测成为必要解决的问题，由于各种原因可能会导致牛奶被感染，例如奶牛被病原微生物感染、外伤、环境因素、管理因素等综合作用的结果。当病原微生物的对奶牛奶感染后，牛奶会含有有对人体有害的菌群。病原细菌有金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、牛支原体等等，其中乙型链球菌对人体危害较大，因此需要对对这些病原菌进行富集，并进行快速检测和鉴定，才能够切实有效提高牛奶的奶品质量。目前牛奶等食品常用的检测方法是参照国标GB/T4789.11-2003食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验方法，首先需要对牛奶中链球菌进行富集后，再通过微生物学方法对牛奶中链球菌进行鉴定。
但是牛奶的成分极其复杂，一些成分可干扰试验结果，链球菌生长所需营养较高，在普通培养基上生长不良，传统的方法检测牛奶中链球菌需要将采集的样品悬液接种于葡萄糖浸液肉汤中或直接划线接种于血平板上对链球菌进行富集和增菌，所需增菌培养时间长、一般情况下需要5至7天左右，并且链球菌敏感性较低，不利于对链球菌进行鉴定。
发明内容
为解决上述问题，本发明的主要目的在于，提供一种经济、快速、特异的牛奶中链球菌富集的方法，可以快速简便地分离鉴定牛奶中链球菌，进而为牛奶质量的提升的提供依据。
为了解决上述技术问题，本发提供了一种牛奶中链球菌的富集方法，其包括以下步骤：A、生乳样品的采集；B、配制链球菌富集的选择性培养基；C、链球菌的分离培养，将采集的乳样进行划线接种于选择性培养基中；D、革兰氏染色镜检，对选择性培养基中的疑似菌落进行提取，提取的链球菌为革兰氏阴性菌；E、链球菌的富集培养，将步骤D中提取的革兰氏阴性菌转移至胰蛋白胨大豆肉汤培养基中进行纯培养，对链球菌进行富集，并且获取富集后的链球菌。所述步骤B中的选择性培养基为血琼脂培养基，所述血琼脂培养基的制作方法包括：营养肉汤培养基95mL加入琼脂粉1.5g，高压灭菌后加入5％的绵羊血，然后再进行121℃高压灭菌30min。
于本发明的一实施例中，所述胰蛋白胨大豆肉汤培养基的制作方法包括：称取30g的胰蛋白胨大豆肉汤培养基加入1L的蒸馏水后混合均匀，调节pH值并且高压灭菌。
于本发明的一实施例中，将步骤C中的选择性培养基置入培养箱中培养，培养条件为37℃中恒温培养18～24h。
于本发明的一实施例中，所述营养肉汤培养基的制作方法包括：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、加水至1L后混合均匀，调节pH值并且高压灭菌。
于本发明的一实施例中，所述血琼脂培养基的制作方法还包括冷却步骤，将血琼脂培养基高压灭菌后冷却至50～60℃后再加入绵羊血。
于本发明的一实施例中，所述胰蛋白胨大豆肉汤培养基的pH值为7.2～7.4，并且高压灭菌的温度为121℃。
于本发明的一实施例中，所述营养肉汤培养基的pH值为7.2±0.2，pH值调节剂为氢氧化钠。
于本发明的一实施例中，所述营养肉汤培养基还包括磷酸氢二钾1g，并且加入后再调节所述营养肉汤培养基的pH值。
基于上述构思，本发明提供的牛奶中链球菌的富集方法，还包括F、鉴定步骤，所述步骤F的鉴定方法为生化试验鉴定或者PCR鉴定。
综上所述，本发明提供的对牛奶中链球菌的富集方法，其可以快速、经济、特异的从牛奶中实现对链球菌的富集，采用此方法不仅可以快速简便地分离鉴定牛奶中链球菌，而且分离出的链球菌敏感性较高，可简便有效地对链球菌进行富集及分离培养，以便于进一步的对链球菌的鉴定提供可靠的依据，从而切实有效提高牛奶的奶品质量。
附图说明
图1为本发明提供的牛奶中链球菌的富集方法的流程图。
具体实施方式
体现本发明特征与优点的典型实施例将在以下的说明中详细叙述。应理解的是本发明能够在不同的实施例上具有各种的变化，其皆不脱离本发明的范围，且其中的说明及图示在本质上是当作说明之用，而非用以限制本发明。
下面结合附图，详细描述本发明的具体实施例，图1为本发明提供的牛奶中链球菌的富集方法的流程图。如图1中所示，本发明提供的一种牛奶中链球菌的富集方法，其主要可包括以下几个步骤：A、生乳样品的采集；B、配制链球菌富集的选择性培养基；C、链球菌的分离培养，将采集的乳样进行划线接种于选择性培养基中；D、革兰氏染色镜检，对选择性培养基中的疑似菌落进行提取，提取的链球菌为革兰氏阴性菌；E、链球菌的富集培养，将步骤D中提取的革兰氏阴性菌转移至胰蛋白胨大豆肉汤培养基中进行纯培养，对链球菌进行富集，并且获取富集后的链球菌。
步骤A为生乳样品的采集，具体的操作条件为无菌操作的条件下进行，采集可以采用本领域的普通技术人员所公知的仪器采集，或者其它采集方法，本发明并不限制，但是一般应该先弃掉头三把奶之后，再开始收集样品，以免样品受到污染，样品采集完成后保存备用。另外采集的数量以及方法可以根据具体的要求进行，本发明并不限制其具体的样品数量以及采集方法。
步骤B为配制链球菌富集的选择性培养基，该选择性培养基具体可以为为血琼脂培养基，而血琼脂培养基需要使用营养肉汤培养基，但是本发明并不限制其具体为哪种营养肉汤培养基，一般认为只要适合链球菌生长的营养肉汤培养基即可。于本发明的一实施例中，本发明提供的营养肉汤培养基的制作方法具体为，在无菌条件下，将蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、放置于容器中，并且加水至1L然后充分的混合均匀，并且使用氢氧化钠作为调节剂来调节pH值，将pH值调节至7.2±0.2，然后分装至200mL不同的三角瓶内进行高压灭菌后备用。另外于本发发的一实施例，还可以在高压灭菌之前加磷酸氢二钾1g，充分的混合均匀后，再进行分装并且高压灭菌来完成营养肉汤培养基的制作。当然上述实施例仅为举例用，而并非用以限制本发明。
本发明中血琼脂培养基的具体制作方法为，在无菌条件下，采用上述营养肉汤培养基95mL、琼脂粉1.5g混合均匀后，采用高压灭菌的方式灭菌，然后待上述混合液冷却至50～60℃之后，再加入5％的绵羊血，然后混匀摇匀后倾注于平板上，最后再次进行高压灭菌，高压灭菌的条件为121℃中持续30min后制成固体培养基备用，当然上述实施例仅为举例用，而并非用以限制本发明。
步骤C为对链球菌的分离培养，首先将采集到的生乳样品接种，接种的方式采用划线的方式接种于上述的固体的血琼脂培养基中。具体操作方法为，按照常规微生物检验方法，在无菌的条件下操作，选取采集的生乳样品在上述血琼脂培养基上进行划线接种，当然其也可以采用其它的接种方式，本发明并不限制其具体的接种方式。然后将上述选择性培养基置入培养箱中进行恒温培养，具体的培养条件为在37℃中恒温状态下培养18～24h后，再对菌落形态进行观察，当然其具体的培养的时间，可根据所观察到的结果调整，本发明并不限制具体的培养时间。观察的结果为，在血琼脂培养基上，链球菌菌落为圆形凸起的细小菌落，呈灰色不透明状，有明显界限的无色透明溶血圈。颜色较为明显，更加便于对链球菌分离培养。
步骤D为革兰氏染色镜检，对选择性培养基中的疑似菌落进行提取，提取的链球菌为革兰氏阴性菌，具体的操作方法为挑取血琼脂固体培养基上的疑似菌落进行革兰氏涂片染色镜检，在显微镜下观察链球菌为革兰氏阴性菌，并且呈短链排列。
步骤E为链球菌的富集培养，将步骤D中提取的革兰氏阴性菌转移至胰蛋白胨大豆肉汤培养基中进行划线接种，进行大量的富集纯培养，并且获取富集后的链球菌。于本发明的一实施例中，胰蛋白胨大豆肉汤培养基，其具体的制作方法包括：首先称取30g的胰蛋白胨大豆肉汤培养基，然后加入1L的蒸馏水后混合均匀，并且调节pH值并且高压灭菌。调节完成后的胰蛋白胨大豆肉汤培养基的pH值可以是7.2～7.4，其高压灭菌的温度可以采用121℃进行高压灭菌。当然此培养基可与步骤C同时进行，以减少本发明对牛奶中链球菌富集的时间。然后将革兰氏阴性菌转移至胰蛋白大豆肉汤培养基中进行纯培养，最后进行富集，采用此方法可以简便有效的对牛奶中的链球菌进行富集及分离，大大的节省了链球菌富集的时间。
步骤F为对链球菌鉴定，本发明中可以采用生化试验的方式进行富集后的链球菌进行进一步的检测鉴定，或者可以采用PCR对富集后的链球菌作进一步的检测鉴定，当然本发明并不限制其对富集后的链球菌进行检测鉴定方式。需要说明的是本发并不限制各步骤之间的顺序，本领域普通技术人员可灵活调整各步骤的顺序，上述步骤顺序仅作为举例说明用，并非用以限制本发明。
综上所述，本发明提供的对牛奶中链球菌的富集方法，根据实验表明，本发明对牛奶中链球菌的富集方法，一般可在3天左右即可完成。由此可见其不仅可以快速、经济、特异的从牛奶中实现对链球菌的富集，采用此方法还可以快速简便地分离鉴定牛奶中链球菌，而且分离出的链球菌敏感性较高，可简便有效地对链球菌进行富集及分离培养，以便于进一步的对链球菌的鉴定提供可靠的依据，从而切实有效提高牛奶的奶品质量。另外本发明的方法还可用于对奶牛乳房炎的鉴定提供依据，从而指导奶牛乳房炎的治序。
虽然已参照几个典型实施例描述了本发明，但应当理解，所用的术语是说明和示例性、而非限制性的术语。由于本发明能够以多种形式具体实施而不脱离发明的精神或实质，所以应当理解，上述实施例不限于任何前述的细节，而应在随附权利要求所限定的精神和范围内广泛地解释，因此落入权利要求或其等效范围内的全部变化和改型都应为随附权利要求所涵盖。
Claims (9)
1.一种牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、生乳样品的采集；
B、配制链球菌富集的选择性培养基；
C、链球菌的分离培养，将采集的乳样进行划线接种于选择性培养基中；
D、革兰氏染色镜检，对选择性培养基中的疑似菌落进行提取，提取的链球菌为革兰氏阴性菌；
E、链球菌的富集培养，将步骤D中提取的革兰氏阴性菌转移至胰蛋白胨大豆肉汤培养基中进行纯培养，对链球菌进行富集，并且获取富集后的链球菌。
所述步骤B中的选择性培养基为血琼脂培养基，所述血琼脂培养基的制作方法包括：营养肉汤培养基95mL加入琼脂粉1.5g，高压灭菌后加入5％的绵羊血，然后再进行121℃高压灭菌30min。
2.如权利要求1所述的牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，所述胰蛋白胨大豆肉汤培养基的制作方法包括：称取30g的胰蛋白胨大豆肉汤培养基加入1L的蒸馏水后混合均匀，调节pH值并且高压灭菌。
3.如权利要求1所述的牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，将步骤C中的选择性培养基置入培养箱中培养，培养条件为37℃中恒温培养18～24h。
4.如权利要求1所述的牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，所述营养肉汤培养基的制作方法包括：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、加水至1L后混合均匀，调节pH值并且高压灭菌。
5.如权利要求1所述的牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，所述血琼脂培养基的制作方法还包括冷却步骤，将血琼脂培养基高压灭菌后冷却至50～60℃后再加入绵羊血。
6.如权利要求2所述的牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，所述胰蛋白胨大豆肉汤培养基的pH值为7.2～7.4，并且高压灭菌的温度为121℃。
7.如权利要求4所述的牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，所述营养肉汤培养基的pH值为7.2±0.2，pH值调节剂为氢氧化钠。
8.如权利要求4所述的牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，所述营养肉汤培养基还包括磷酸氢二钾1g，并且加入后再调节所述营养肉汤培养基的pH值。
9.如权利要求1至8的任一所述的牛奶中链球菌的富集方法，其特征在于，还包括F、鉴定步骤，所述步骤F的鉴定方法为生化试验鉴定或者PCR鉴定。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510642388.XA CN106566781A (zh) | 2015-10-08 | 2015-10-08 | 一种牛奶中链球菌的富集方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510642388.XA CN106566781A (zh) | 2015-10-08 | 2015-10-08 | 一种牛奶中链球菌的富集方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106566781A true CN106566781A (zh) | 2017-04-19 |
Family
ID=58507527
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510642388.XA Pending CN106566781A (zh) | 2015-10-08 | 2015-10-08 | 一种牛奶中链球菌的富集方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106566781A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103255090A (zh) * | 2013-05-06 | 2013-08-21 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | 一种无乳链球菌快速分离鉴定试剂盒及其应用 |
-
2015
- 2015-10-08 CN CN201510642388.XA patent/CN106566781A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103255090A (zh) * | 2013-05-06 | 2013-08-21 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | 一种无乳链球菌快速分离鉴定试剂盒及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| R. J. ERSKINE: "Trends in Antibacterial Susceptibility of Mastitis Pathogens During a Seven-Year Period", 《JOURNAL OF DAIRY SCIENCE》 * |
| 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会: "《中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准 GB4789.11-2014》", 1 December 2014 * |
| 马乐好等: "《微生物培养基实用手册》", 31 March 2006, 吉林科学技术出版社 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102154167B (zh) | 一种猪肺炎支原体培养基及其制备方法 | |
| Gordon et al. | Aerobic sporeforming bacteria capable of growth at high temperatures | |
| CN106167782B (zh) | 高效降解豆粕抗原蛋白的芽孢杆菌及其发酵豆粕的方法 | |
| CN108641979A (zh) | 一种屎肠球菌、其高密度发酵培养方法及由其制备的微生态制剂 | |
| CN104745501A (zh) | 一种表皮葡萄球菌及其应用 | |
| CN110004096A (zh) | 一株植物乳杆菌及其应用 | |
| CN101153316B (zh) | 一种益生菌乳制品中干酪乳杆菌的检测方法 | |
| CN108949619A (zh) | 一种鸭疫里默氏杆菌的发酵工艺 | |
| CN101880646A (zh) | Leachii支原体中国分离株及其分离培养基和用途 | |
| CN103525736A (zh) | Vbnc状态啤酒易感乳酸菌的诱导及复苏方法 | |
| CN104560835A (zh) | 一种培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法 | |
| Pangloli et al. | Evaluation of methods for recovery of Salmonella from dairy cattle, poultry, and swine farms | |
| CN101485300B (zh) | 一种拟丽突线虫的培养方法 | |
| CN101838626A (zh) | 巴尔通氏体固液双相斜面培养基及其制备及应用方法 | |
| CN111990330A (zh) | 小鼠金黄色葡萄球菌型乳房炎模型的构建方法 | |
| CN106566781A (zh) | 一种牛奶中链球菌的富集方法 | |
| CN106566780A (zh) | 一种牛奶中金黄色葡萄球菌的富集方法 | |
| CN101851664A (zh) | 一种酸牛奶中双歧杆菌的检测方法 | |
| CN107937577A (zh) | 快速检测原料乳中产耐热脂肪酶的荧光假单胞菌的lamp引物组及方法 | |
| CN107043715A (zh) | 一种活性益生菌冻干粉及其制备方法 | |
| CN114231464A (zh) | 凝结芽孢杆菌及其用途 | |
| CN106511990A (zh) | 一种兽用冻干布氏菌病活疫苗的浓缩工艺及制备工艺 | |
| CN106434480A (zh) | 一种高密度发酵培养副猪嗜血杆菌的方法 | |
| Khusna et al. | Isolation and identification of Acetobacter sp. from pineapple (Ananas comosus L.) as nata starter | |
| CN108004181B (zh) | 一株甲基营养型芽孢杆菌及其培养物和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20170419 |