CN106556650A

CN106556650A - 一种药物组合物的质量检测方法

Info

Publication number: CN106556650A
Application number: CN201510639011.9A
Authority: CN
Inventors: 柯潇; 叶亮; 白晓春; 周灵利
Original assignee: KANGHONG PHARMACEUTICAL CO Ltd CHENGDU
Current assignee: KANGHONG PHARMACEUTICAL CO Ltd CHENGDU
Priority date: 2015-09-30
Filing date: 2015-09-30
Publication date: 2017-04-05
Anticipated expiration: 2035-09-30
Also published as: CN106556650B

Abstract

本发明提供了一种药物组合物的质量检测方法，该方法仅需约10-15min即可对松龄血脉康中的两种指标性成分进行准确的定性和定量，其操作简便，重复性好，具有快速、准确、灵敏等优点，适合工业上用于松龄血脉胶囊的质量控制。

Description

一种药物组合物的质量检测方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物组合物的质量检测方法。

背景技术

中药葛根是豆科多年生落叶藤本植物野葛的根，有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通径活络，解酒毒之功，用于外感发热头痛，项背强痛，口渴，消渴、麻疹不透、热痢，泄泻，眩晕头痛，中风偏瘫，胸痹心痛等症。葛根中主要有效成分是异黄酮类化合物以及少量的黄酮类物质，包括：大豆苷元、大豆苷、葛根素、芒柄黄花素、芒柄花苷、葛根素木糖苷等[葛根的化学成分研究，食品与机械，2005,21(6)]，其中葛根素是葛根中最主要的活性成分之一，现代研究表明其具有调节血压、血糖、血脂、降低眼压、保护大脑细胞、保护视网膜、抑制血小板聚集、抗氧化、心肌保护、抗心律失常、利尿、抗炎、抑制肿瘤细胞增殖、增加骨密度等药理作用[葛根素的药理作用与临床研究进展，现代医药卫生，2011，27(19)]。

松针是松科松属植物的叶，其药用历史悠久，明《本草纲目》记载“松针，气味苦、温、无毒，久服令人不老，轻身益气，主治风湿疮，生毛发，安五脏，守中，不饥延年。”现代研究表明，松针内含有挥发油、维生素、蛋白质、多酚、木脂素等多种活性成分，具有镇痛、抗炎、镇咳、祛痰、抗突变、降血脂、降血压、抑菌等药理作用[松针化学成分及药理研究进展，中药材，2003,26(9)]。莽草酸(shikimic acid)化学名称3,4,5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸，广泛分布于八角、莽草和松针等植物中，是松针的主要活性成分之一[马尾松松针中莽草酸的提取工艺研究，江苏农业科学，2013,41(11)]。

松龄血脉康胶囊是由鲜松叶、葛根、珍珠层粉经现代制剂工艺制备而成的复方制剂，《中华人民共和国药典》(2015版一部)中记载松龄血脉康胶囊的制备工艺为：鲜松叶、葛根加水煎煮二次，煎液滤过，滤液合并，浓缩至适量，喷雾干燥，加入珍珠层粉和适量淀粉、滑石粉和硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，即得；其功能主治为平肝潜阳、镇心安神，用于肝阳上亢所致的头痛、眩晕、急躁易怒、心悸、失眠，高血压病及原发性高脂血症见上述症候者。在质量控制方面，现行的国家药品标准中仅对松龄血脉康胶囊中葛根药材的指标性成分葛根素进行了含量限定，即每粒松龄血脉康胶囊中葛根素含量不得低于7.5mg，而未制定松叶中指标成分莽草酸的限量标准。吴俊珠等人[RP-HPLC测定松龄血脉康胶囊中莽草酸的含量，中国实验方剂学杂志，2011,17(5)]建立了一种反相高效液相色谱法，可用于检测松龄血脉康胶囊中莽草酸的含量，但该方法并不能适用于同时检测松龄血脉康胶囊中葛根素和莽草酸的含量；并且，目前尚无文献报道可同时用于葛根素和莽草酸的定量检测的分析方法。为了能更全面、更有效的进行松龄血脉康胶囊的质量控制，有必要建立一个快速、简便、准确可靠的分析方法，以用于松龄血脉康胶囊中葛根素和莽草酸含量的定性和定量分析。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速简便、准确可靠的分析方法，用于松龄血脉康胶囊中指标性成分葛根素和莽草酸的含量测定。本发明是通过以下技术方案实现的：

一种药物组合物的质量检测方法，包含以下步骤：

供试品溶液制备：取药物组合物适量，用乙醇-水溶液超声处理，过滤，取续滤液，即得；

样品检测：采用高效液相色谱法，色谱柱为含纳米聚合物混合硅胶基质填料，流动相为乙腈-乙酸铵缓冲盐溶液，用冰醋酸调pH至4.0-4.3；

其中所述药物组合物为松龄血脉康胶囊。

优选地，所述流动相为体积比例为4-6:94-96的乙腈-乙酸铵缓冲盐溶液，进一步优选体积比例为5:95；

所述乙酸铵缓冲盐溶液的浓度为10-20mM，进一步优选为20mM；

所述检测方法中检测波长为224nm，柱温为30℃，流动相流速为0.4-0.6mL/min，优选0.5mL/min；

进一步，上述检测方法中优选用冰醋酸将pH调至4.0，所述色谱柱优选为Acclaim^TMTrinity^TMp1色谱柱。

特别优选地，本发明的药物组合物的质量检测方法包含以下步骤：

供试品溶液制备：取药物组合物适量，用50％乙醇-水溶液超声30min，过滤，取续滤液，即得；

样品检测：采用高效液相色谱法，色谱柱为Acclaim^TMTrinity^TMp1，流动相为体积比例5:95的乙腈-20mM乙酸铵缓冲盐溶液，用冰醋酸调pH至4.0，流速0.5mL/min，柱温30℃，检测波长224nm。

本发明人在长期的生产实践过程中发现，现有的检测松龄血脉康胶囊中葛根素或莽草酸的方法，不能直接用于松龄血脉康胶囊中葛根素和莽草酸成分的同时测定，例如：发明人重复了吴俊珠等人[RP-HPLC测定松龄血脉康胶囊中莽草酸的含量，中国实验方剂学杂志，2011,17(5)]建立的RP-HPLC检测松龄血脉康中莽草酸的方法，将其同时用于葛根素的测定，结果发现在50min内未出现葛根素色谱峰，而更长的检测时间在生产实践中将浪费大量的时间成本，缺乏可操作性，因此该检测方法不适合于松龄血脉康胶囊中莽草酸和葛根素的同时测定(见附图1)；发明人同时重复了叶美娣[高效液相色谱法测定松龄血脉康胶囊中葛根素的含量，中国医院药学杂志，2001,01]建立的高效液相色谱检测松龄血脉康胶囊中葛根素的方法，将其同时用于莽草酸的检测，结果发现在该方法条件下，莽草酸色谱图与其他干扰峰有重叠，无法实现基线分离(见附图2)，可见该方法也不适于松岭血脉康胶囊中两种成分的同时测定。

本发明人经过大量实验考察后发现，只有在流动相为乙腈和10-20mM的乙酸铵缓冲盐溶液，体积比为4-6:94-96，pH为4.0-4.3，柱温为30℃的条件下，才能使待测目标成分完全分离，不受相邻色谱峰干扰，且基线平稳，峰形好，可实现准确的定量。

本发明的药物组合物质量检测方法仅需约10-15min即可对松龄血脉康中的两种指标性成分进行准确的定性和定量，其操作简便，重复性好，具有快速、准确、灵敏等优点，适合工业上用于松龄血脉胶囊的质量控制。

附图说明

图1现有技术检测图谱1(其中1为莽草酸，2为葛根素，a为供试样品，b为混合对照品)

图2现有技术检测图谱2(其中1为莽草酸，b为混合对照品)

图3实施例一中混合对照品及样品检测图谱(其中1为莽草酸，2为葛根素，a为供试样品，b为混合对照品)

图4实施例二中混合对照品及样品检测图谱(其中1为莽草酸，2为葛根素，a为供试样品，b为混合对照品)

图5实施例三中混合对照品及样品检测图谱(其中1为莽草酸，2为葛根素，a为供试样品，b为混合对照品)

图6实施例四中混合对照品及样品检测图谱(其中1为莽草酸，2为葛根素，a为供试样品，b为混合对照品)

具体实施方式

本发明所用实验材料及仪器如下：松龄血脉康胶囊(成都康弘制药有限公司批次：120505)，葛根素对照品(中国食品药品检定研究院批次：110752-200912)，莽草酸对照品(SIGMA批次：090M1932V)，乙腈(色谱纯，Honeywell，批次：MCXA1H)，甲醇(色谱纯，来源：Honeywell批次：NALG2H)，水(超纯水)，乙酸铵(分析纯，来源：成都科龙化学试剂厂，批号：2014031701)，冰乙酸(分析纯，来源：重庆川东化工有限公司，批号：20121001)，乙醇(色谱纯，来源：成都科龙化学试剂厂，批号：2014040302)；高效液相色谱仪(岛津LC-210c)；色谱柱：美国戴安Acclaim^TMTrinity^TMp1(3.0×150mm,3μm)。

混合对照品溶液的制备方法为：取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含90μg的葛根素储备液，另取莽草酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含120μg的莽草酸储备液，再分别取葛根素储备液和莽草酸储备液适量，用50％甲醇制成每1ml含45μg葛根素和60μg莽草酸的混合对照品溶液。

供试品溶液制备方法：取松龄血脉康内含物约0.15g，精密称定，置50ml量瓶中，加入50％乙醇-水溶液适量，超声处理(250w，频率40khz)30分钟，放冷，用50％乙醇-水溶液稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

本发明人经过大量的实验摸索，考察了不同的色谱参数条件，最终建立了可快速、准确测定松龄血脉康胶囊中葛根素和莽草酸的方法。

实验例一流动相缓冲溶液考察

发明人考察了几种不同的缓冲盐溶液对检测结果的影响，结果见下表1：

表1缓冲溶液考察结果

根据表1中结果可知，缓冲溶液的种类对检测结果有明显的影响。当选用磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、枸橼酸二氢铵等常见的缓冲溶液时，检测图谱出现基线不平稳、分离度不达标等现象，导致无法进行准确定量；而使用乙酸铵缓冲溶液时，葛根素和莽草酸分离效果好，无干扰，基线平稳，峰形好。

实验例二缓冲溶液浓度考察

发明人对缓冲溶液的浓度进行了考察，结果见表2：

表2缓冲溶液浓度考察结果

根据表2结果可知，缓冲溶液的浓度对实验结果也有一定影响，在50mM浓度条件下，莽草酸分离度不达标，在100mM浓度条件下莽草酸出现包峰现象，且葛根素分离度不达标，不能满足定量检测的需求；只有在10-20mM浓度条件下，葛根素和莽草酸可实现基线分离，尤其在20mM浓度条件下，目标峰分离好，无干扰，基线平稳，可满足准确定量的要求。

实验例三流动相pH范围考察

发明人进一步考察了流动相pH范围对检测结果的影响，结果见下表3：

表3流动相pH范围考察结果

对于流动相pH值，实验考察发现在其他色谱条件完全一致的情况下，在pH4.0-4.3范围内，可实现良好的分离效果，当pH值大于4.3时(pH4.5-5.4)，目标成分出现不同程度的拖尾、负峰、杂峰干扰、分离度不达标等问题，导致无法定量，可见流动相pH范围的选择对松龄血脉康胶囊中葛根素和莽草酸的含量测定具有显著地影响。

实验例四流动相比例考察

流动相比例是影响液相色谱分离效果的重要因素之一，本发明人考察了不同体积比例的乙腈和乙酸铵对葛根素和莽草酸分离结果的影响，结果如下表4所示：

表4流动相比例考察

由表4中的考察结果可知，在其他色谱参数条件完全一致的情况下，调节流动相比例对检测结果有着明显的影响，当乙腈与乙酸铵体积比例在4-6:94-96的范围内时，葛根素和莽草酸均能实现基线分离，其基线平稳，无明显干扰，且峰形好，可满足定量需求；当流动相体积比例超出上述的比例范围时，葛根素和莽草酸的分离度均不达标，且相邻色谱峰出现重叠干扰等现象，不能满足基线分离的要求。

实验例五流动相流速考察

具体结果见下表5：

表5流动相流速考察结果

根据表5中实验数据可知，流动相流速在0.4-0.6mL/min范围内，均可实现基线分离，保证基线平稳，满足定量检测要求，尤其在0.5mL/min条件下，目标峰分离效果最好，无干扰，基线平稳，且峰形好。

实施例一

色谱条件：色谱柱Acclaim^TMTrinity^TMp1(3.0×150mm,3μm)，流动相为乙腈-20mM乙酸铵缓冲液(冰乙酸调pH4.0)(5:95)，流速0.5mL/min，柱温为30℃，检测波长为224nm。

样品检测：精密吸取混合对照溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测，附图3为混合对照和供试品溶液的检测结果，供试品色谱中，莽草酸(RT4.1)和葛根素(RT9.9)分离度效果良好(其中莽草酸分离度4.5，葛根素分离度1.8)

实施例二

色谱条件：色谱柱AcclaimTM TrinityTMp1(3.0×150mm,3μm)，流动相为乙腈-10mM乙酸铵缓冲液，冰乙酸调pH 4.1，比例：5:95)，流速0.4mL/min，柱温为30℃，检测波长为224nm。

样品检测：精密吸取混合对照溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测，附图4为混合对照和供试品溶液的检测结果，供试品色谱中，莽草酸(RT 8.8)和葛根素(RT14.8)分离度效果良好(其中莽草酸分离度2.2、葛根素分离度1.8)。

实施例三

色谱条件：色谱柱AcclaimTM TrinityTMp1(3.0×150mm,3μm)，流动相为乙腈-20mM乙酸铵缓冲液，冰乙酸调pH 4.3，比例：6:94，流速0.4mL/min，柱温为30℃，检测波长为224nm。

样品检测：精密吸取混合对照溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测，附图5为混合对照和供试品溶液的检测结果，供试品色谱中，莽草酸(RT 5.8)和葛根素(RT 11.7)分离度效果良好(其中莽草酸分离度2.8、葛根素分离度1.5)。

实施例四

色谱条件：色谱柱AcclaimTM TrinityTMp1(3.0×150mm,3μm)，流动相为乙腈-10mM乙酸铵缓冲液，冰乙酸调pH 4.2，比例：5:95，流速0.5mL/min，柱温为30℃，检测波长为224nm。

样品检测：精密吸取混合对照溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测，附图6为混合对照和供试品溶液的检测结果，供试品色谱中，莽草酸(RT 7.5)和葛根素(RT 12.1)分离度效果良好(其中莽草酸分离度3.0、葛根素分离度1.6)。

Claims

1.一种药物组合物的质量检测方法，包含以下步骤：

样品检测：采用高效液相色谱法，色谱柱为含纳米聚合物混合硅胶基质填料，流动相为乙腈-乙酸铵缓冲盐溶液，用冰醋酸调pH至4.0-4.3；其中所述药物组合物为松龄血脉康胶囊。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述流动相为体积比例4-6:94-96的乙腈-乙酸铵缓冲盐溶液。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于所述流动相为体积比例5:95的乙腈-乙酸铵缓冲盐溶液。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述乙酸铵缓冲盐溶液的浓度为10-20mM，优选为20mM。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述检测方法中检测波长为224nm。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述检测方法中柱温为30℃。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述流动相流速为0.4-0.6mL/min，优选为0.5mL/min。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于用冰醋酸调pH至4.0。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述色谱柱为Acclaim^TM Trinity^TMp1色谱柱。

10.一种药物组合物的质量检测方法，其特征在于包含以下步骤：

样品检测：采用高效液相色谱法，色谱柱为Acclaim^TM Trinity^TMp1，流动相为体积比例5:95的乙腈-20mM乙酸铵缓冲盐溶液，用冰醋酸调pH至4.0，流速0.5mL/min，柱温30℃，检测波长224nm。