CN106544374A - 一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法 - Google Patents

一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法。其特点是：应用超声波微波双辅助发酵富集纯化桑黄素，对其吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量90％以上。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的聚酰胺树脂吸附色谱法，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附桑黄素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。

Description

一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种桑黄素的纯化方法，特别是涉及一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法。
背景技术：
桑黄属担子菌亚门(Basidiomyeotina)、层菌纲(Hymenomyeetes)、多孔菌科(polyporaeeae)、木层孔菌属(phellinus)，是一种珍贵的药用真菌，有“森林黄金”之美称。桑黄作为中药材在我国最早记载于《本草纲目》，子实体入药，俗称桑耳、桑臣、胡孙眼。其子味微苦，能利五脏、软坚、排毒；止血、活血；可应用于气滞胃痛、脾虚泄泻等症。桑黄在国内分布于东北、西南、西北地区，范围较广，在国外主要分布于韩国、东南亚、澳大利亚、美洲等地。品种包括桑树桑黄、桦树桑黄、杨树桑黄、松树桑黄等。桑黄，又名鲍氏木层乳菌，是一种滋补强体、扶正固本的名贵药用菌，所含多糖体能激活人体的免疫系统，抑制癌细胞生长，增强抗癌活性，具有明显的抗肿癌功能，是已知高等真菌中抗癌疗效最好的菌类。
桑色素是一种化学分析中常用的显色剂，一般用来检测痕量的铁、锌、钴等。功能：可抑制酶活性、具有抗氧化、抗痛、抗菌、抗炎、抗动脉粥样硬化、降低血糖和抗应激等作用。桑色素属桑黄中吡喃酮及苯并吡喃酮类。
发明内容：
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其步骤如下：
(1)将桦树桑黄粉碎后采用液体深层发酵；
(2)将经(1)培养好的发酵培养物过滤，得发酵液上清和菌体，用70％甲醇浸提，用超声波和微波双辅助。
(3)合并(2)中提取液减压浓缩，得石油醚相和水相；
(4)将(3)中所得水相用乙酸乙酯萃取；
(5)将(4)中所得有机相减压浓缩后用硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱；
(6)把(5)中所得产物用聚酰胺树脂吸附色谱法对其进行分离纯化，用高效液相色谱法检测可得桑黄素92.4％。
所述的步骤(1)中，桦树桑黄粉后过10～80目筛再进行液体深层发酵。
所述的步骤(1)中，培养基组成为：玉米粉6.5％，酵母粉0.6％，CaCl20％，KH2PO40.4％，MgSO40.13％；最适培养条件为：500mL摇瓶量120mL，接种量15％，转速200r/min，温度35℃，初始pH5.3。在此条件下发酵11～13天。
所述的步骤(2)中，70％甲醇浸提料液比1∶30(g/mL)、40℃超声处理30min、微波功率400W、微波时间3min；
所述的步骤(5)中，以氯仿-甲醇(95∶5)梯度洗脱。
所述的步骤(6)中，聚酰胺树脂吸附色谱法动态吸附上样量1∶55g/g、上样浓度2.150mg/mL、吸附流速和解析流速均为1mL/min、吸附时间60min、75％乙醇作为洗脱剂；
本发明应用超声波微波双辅助发酵富集纯化桑黄素，对桑黄素的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量90％以上的桑黄素，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的聚酰胺树脂吸附色谱法，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附桑黄素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施方式：
实施例1：一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其步骤如下：
(1)将100g桦树桑黄粉碎后过50目筛，深层发酵，培养基组成为：玉米粉6.5g，酵母粉0.6g，CaCl20g，KH2PO40.4g，MgSO40.13g；最适培养条件为：500mL摇瓶量120mL，接种量15g，转速200r/min，温度35℃，初始pH5.3。在此条件下发酵11天。
(2)将经(1)培养好的发酵培养物过滤，得发酵液上清和菌体，用70％甲醇浸提料液比1∶30(g/mL)、40℃超声处理30min和微波功率400W、微波时间3min双辅助。
(3)合并(2)中提取液减压浓缩，得石油醚相和水相；
(4)将(3)中所得水相用乙酸乙酯萃取；
(5)将(4)中所得有机相减压浓缩后用硅胶柱层析，氯仿-甲醇(95∶5)梯度洗脱；
(6)把(5)中所得产物用聚酰胺树脂吸附色谱法对其进行分离纯化，动态吸附上样量1∶55g/g、上样浓度2.150mg/mL、吸附流速和解析流速均为1mL/min、吸附时间60min、75％乙醇作为洗脱剂，用高效液相色谱法检测可得桑黄素92.4％。
实施案例2：一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其步骤如下：
(1)将100g桦树桑黄粉碎后过65目筛，深层发酵，培养基组成为：玉米粉6.5g，酵母粉0.6g，CaCl20g，KH2PO40.4g，MgSO40.13g；最适培养条件为：500mL摇瓶量120mL，接种量15g，转速200r/min，温度35℃，初始pH5.3。在此条件下发酵12天。
(2)将经(1)培养好的发酵培养物过滤，得发酵液上清和菌体，用70％甲醇浸提料液比1∶30(g/mL)、45℃超声处理30min和微波功率400W、微波时间2min双辅助。
(3)合并(2)中提取液减压浓缩，得石油醚相和水相；
(4)将(3)中所得水相用乙酸乙酯萃取；
(5)将(4)中所得有机相减压浓缩后用硅胶柱层析，氯仿-甲醇(95∶5)梯度洗脱；
(6)把(5)中所得产物用聚酰胺树脂吸附色谱法对其进行分离纯化，动态吸附上样量1∶55g/g、上样浓度2.150mg/mL、吸附流速和解析流速均为1mL/min、吸附时间60min、75％乙醇作为洗脱剂，用高效液相色谱法检测可得桑黄素91.8％。
实施案例3：一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其步骤如下：
(1)将100g桦树桑黄粉碎后过80目筛，深层发酵，培养基组成为：玉米粉6.5g，酵母粉0.6g，CaCl20g，KH2PO40.4g，MgSO40.13g；最适培养条件为：500mL摇瓶量120mL，接种量10g，转速300r/min，温度35℃，初始pH5.3。在此条件下发酵11～13天。
(2)将经(1)培养好的发酵培养物过滤，得发酵液上清和菌体，用70％甲醇浸提料液比1∶30(g/mL)、40℃超声处理30min和微波功率400W、微波时间3min双辅助。
(3)合并(2)中提取液减压浓缩，得石油醚相和水相；
(4)将(3)中所得水相用乙酸乙酯萃取；
(5)将(4)中所得有机相减压浓缩后用硅胶柱层析，氯仿-甲醇(95∶5)梯度洗脱；
(6)把(5)中所得产物用聚酰胺树脂吸附色谱法对其进行分离纯化，动态吸附上样量1∶55g/g、上样浓度2.150mg/mL、吸附流速和解析流速均为1mL/min、吸附时间60min、75％乙醇作为洗脱剂，用高效液相色谱法检测可得桑黄素92.1％。

Claims (6)

1.一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)将桦树桑黄粉碎后采用液体深层发酵；
(2)将经(1)培养好的发酵培养物过滤，得发酵液上清和菌体，用70％甲醇浸提，用超声波和微波双辅助；
(3)合并(2)中提取液减压浓缩，得石油醚相和水相；
(4)将(3)中所得水相用乙酸乙酯萃取；
(5)将(4)中所得有机相减压浓缩后用硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱；
(6)把(5)中所得产物用聚酰胺树脂吸附色谱法对其进行分离纯化，用高效液相色谱法检测可得桑黄素92.4％。
2.根据权利要求1或2所述的一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其特质是：所述的步骤(1)中，桦树桑黄粉后过10～80目筛再进行液体深层发酵。
3.根据权利要求1或2所述的一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其特征是：在所属的步骤(1)中，培养基组成为：玉米粉6.5％，酵母粉0.6％，CaCl20％，KH2PO40.4％，MgSO40.13％；最适培养条件为：500mL摇瓶量120mL，接种量15％，转速200r/min，温度35℃，初始pH5.3。在此条件下发酵11～13天。
4.根据权利要求3所述的一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其特征是：所述的步骤(2)中，70％甲醇浸提料液比1∶30(g/mL)、40℃超声处理30min、微波功率400W、微波时间3min。
5.根据权利要求3所述的一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其特征是：所述的步骤(5)中，以氯仿-甲醇(95∶5)梯度洗脱。
6.根据权利要求5所述的一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法，其特征是：在所述的步骤(6)中，聚酰胺树脂吸附色谱法动态吸附上样量1∶55g/g、上样浓度2.150mg/mL、吸附流速和解析流速均为1mL/min、吸附时间60min、75％乙醇作为洗脱剂。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110229134A (zh) * 2019-07-17 2019-09-13 福建师范大学 利用大孔树脂从桑黄中动态吸附桑黄素的方法
CN110331091A (zh) * 2019-07-17 2019-10-15 福建师范大学 利用桑黄发酵与树脂分离耦合生产桑黄素的系统和方法
TWI714918B (zh) * 2018-11-09 2021-01-01 財團法人食品工業發展研究所 桑黃屬桑黃株及其產物、萃取物及應用

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