CN106525749A - 一种纳他霉素检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种纳他霉素检测方法，将待测样品、乙腈和氯化钠混合，震荡，离心，收集上清液；所述的震荡的时间为3‑10min；将制得的上清液、C18填料和无水硫酸钠混合，涡旋并离心，收集上清液，过滤，即得待测液；C18填料的添加量为待测样品质量的3‑60%；无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的2‑90%；无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的3‑75%；取处理好的待测液，以60‑75%甲醇‑水溶液作为空白，分别测定其在303nm、290nm处的吸光值；计算纳他霉素含量。本发明保证测定纳他霉素速度快，又能有效排除杂质的干扰从而保证测定准确度。本发明提供了一种可靠的便于实施的方法，能够满足研究和生产中的需要。
Description
技术领域
本发明涉及食品检测技术领域，具体是一种纳他霉素检测方法。
背景技术
纳他霉素(Natamycin)是一种由链霉菌发酵产生的天然抗真菌化合物，属于多烯大环内酯类，既可以广泛有效的抑制各种霉菌、酵母菌的生长，又能抑制真菌毒素的产生,可广泛用于食品防腐保鲜以及抗真菌治疗。纳他霉素对细菌没有抑制作用，因此它不影响酸奶、奶酪、生火腿、干香肠的自然成熟过程。我国国标GB2760规定了那他霉素的适用范围和用量：乳酪、肉制品、肉汤、西式火腿、广式月饼、糕点表面等，用200-300mg/kg悬浮液喷雾或浸泡。残留量应小于10mg/kg。
美国药典中纳他霉素成品的含量测定是采用高效液相色谱法，国内也有采用该法测定纳他霉素的报道，但这一方法对于纳他霉素高产菌的大规模选育和发酵过程的在线和快速离线检测具有明显缺点，如测定周期较长，样品处理及仪器要求较高，不适合大批量样品等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种测定速度快、测定准确度高的纳他霉素检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种纳他霉素检测方法，包括以下步骤：
1）将待测样品、乙腈和氯化钠混合，震荡，离心，收集上清液；所述的震荡的时间为3-10min；
2）将步骤1）制得的上清液、C18填料和无水硫酸钠混合，涡旋并离心，收集上清液，过滤，即得待测液；C18填料的添加量为待测样品质量的3-60%；无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的2-90%；无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的3-75%；
3）取处理好的待测液，以60-75%甲醇-水溶液作为空白，分别测定其在303nm、290nm处的吸光值；
4）计算纳他霉素含量：C=(k×ΔA+b)×N
C：待测液中纳他霉素的含量μg/ml；ΔA：待测液在303nm和290nm处吸光值的差值；k：标准曲线的斜率；b：标准曲线的截距；N：待测液的稀释倍数。
作为本发明进一步的方案：所述的待测样品为原料乳。
作为本发明进一步的方案：待测样品、乙腈和氯化钠的质量比为1:1-10:0.2-2。
作为本发明进一步的方案：离心的转速为3000-10000r/min，离心时间为3-30min。
作为本发明进一步的方案：C18填料的添加量为待测样品质量的5-50%。
作为本发明进一步的方案：无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的4-80%。
作为本发明进一步的方案：无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的5-65%。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明保证测定纳他霉素速度快，又能有效排除杂质的干扰从而保证测定准确度。本发明提供了一种可靠的便于实施的方法，能够满足研究和生产中的需要。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明实施例中，一种纳他霉素检测方法，包括以下步骤：
1）将待测样品、乙腈和氯化钠混合，震荡，离心，收集上清液；所述的震荡的时间为3min。所述的待测样品为原料乳。待测样品、乙腈和氯化钠的质量比为1:1:0.2。离心的转速为3000r/min，离心时间为3min；
2）将步骤1）制得的上清液、C18填料和无水硫酸钠混合，涡旋并离心，收集上清液，过滤，即得待测液。离心的转速为3000r/min，离心时间为3min。C18填料的添加量为待测样品质量的3%；无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的2%；无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的3%；
3）取处理好的待测液，以60%甲醇-水溶液作为空白，分别测定其在303nm、290nm处的吸光值；
4）计算纳他霉素含量：C=(k×ΔA+b)×N
C：待测液中纳他霉素的含量μg/ml；ΔA：待测液在303nm和290nm处吸光值的差值；k：标准曲线的斜率；b：标准曲线的截距；N：待测液的稀释倍数。
实施例2
本发明实施例中，一种纳他霉素检测方法，包括以下步骤：
1）将待测样品、乙腈和氯化钠混合，震荡，离心，收集上清液；所述的震荡的时间为10min。所述的待测样品为原料乳。待测样品、乙腈和氯化钠的质量比为1:10:2。离心的转速为10000r/min，离心时间为30min；
2）将步骤1）制得的上清液、C18填料和无水硫酸钠混合，涡旋并离心，收集上清液，过滤，即得待测液。离心的转速为10000r/min，离心时间为30min。C18填料的添加量为待测样品质量的60%；无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的90%；无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的75%；
3）取处理好的待测液，以75%甲醇-水溶液作为空白，分别测定其在303nm、290nm处的吸光值；
4）计算纳他霉素含量：C=(k×ΔA+b)×N
C：待测液中纳他霉素的含量μg/ml；ΔA：待测液在303nm和290nm处吸光值的差值；k：标准曲线的斜率；b：标准曲线的截距；N：待测液的稀释倍数。
实施例3
本发明实施例中，一种纳他霉素检测方法，包括以下步骤：
1）将待测样品、乙腈和氯化钠混合，震荡，离心，收集上清液；所述的震荡的时间为5min。所述的待测样品为原料乳。待测样品、乙腈和氯化钠的质量比为1:3:0.5。离心的转速为4000r/min，离心时间为10min；
2）将步骤1）制得的上清液、C18填料和无水硫酸钠混合，涡旋并离心，收集上清液，过滤，即得待测液。离心的转速为4000r/min，离心时间为10min。C18填料的添加量为待测样品质量的5%。无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的4%。无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的5%；
3）取处理好的待测液，以65%甲醇-水溶液作为空白，分别测定其在303nm、290nm处的吸光值；
4）计算纳他霉素含量：C=(k×ΔA+b)×N
C：待测液中纳他霉素的含量μg/ml；ΔA：待测液在303nm和290nm处吸光值的差值；k：标准曲线的斜率；b：标准曲线的截距；N：待测液的稀释倍数。
实施例4
本发明实施例中，一种纳他霉素检测方法，包括以下步骤：
1）将待测样品、乙腈和氯化钠混合，震荡，离心，收集上清液；所述的震荡的时间为8min。所述的待测样品为原料乳。待测样品、乙腈和氯化钠的质量比为1:5:1。离心的转速为8000r/min，离心时间为20min；
2）将步骤1）制得的上清液、C18填料和无水硫酸钠混合，涡旋并离心，收集上清液，过滤，即得待测液。离心的转速为8000r/min，离心时间为20min。C18填料的添加量为待测样品质量的50%。无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的80%。无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的65%；
3）取处理好的待测液，以70%甲醇-水溶液作为空白，分别测定其在303nm、290nm处的吸光值；
4）计算纳他霉素含量：C=(k×ΔA+b)×N
C：待测液中纳他霉素的含量μg/ml；ΔA：待测液在303nm和290nm处吸光值的差值；k：标准曲线的斜率；b：标准曲线的截距；N：待测液的稀释倍数。
本发明实施例中，以实施例4为实施例测定其标准曲线。
标准溶液：准确称取适量纳他霉素标准品，用甲醇超声溶解，再用70%甲醇-水稀释到适宜浓度备用。
以70%甲醇-水溶液对标准溶液进行稀释，浓度分别为0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、3.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml、6.0μg/ml，以70%甲醇-水溶液作为空白，分别测定它们在303nm、290nm处的吸光值。以标准稀释溶液浓度为纵坐标，波长303nm、290nm处吸光值的差值ΔA做为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=19.33x+0.022，相关系数R2=0.999，在0.5～6.0μg/ml范围内线性良好。
取某品牌原料乳样品按照样品处理方法处理，用分光光度法测定纳他霉素的含量C为5.85g/L。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (7)
1.一种纳他霉素检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将待测样品、乙腈和氯化钠混合，震荡，离心，收集上清液；所述的震荡的时间为3-10min；
2）将步骤1）制得的上清液、C18填料和无水硫酸钠混合，涡旋并离心，收集上清液，过滤，即得待测液；C18填料的添加量为待测样品质量的3-60%；无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的2-90%；无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的3-75%；
3）取处理好的待测液，以60-75%甲醇-水溶液作为空白，分别测定其在303nm、290nm处的吸光值；
4）计算纳他霉素含量：C=(k×ΔA+b)×N
C：待测液中纳他霉素的含量μg/ml；ΔA：待测液在303nm和290nm处吸光值的差值；k：标准曲线的斜率；b：标准曲线的截距；N：待测液的稀释倍数。
2.根据权利要求1所述的纳他霉素检测方法，其特征在于，待测样品为原料乳。
3.根据权利要求1所述的纳他霉素检测方法，其特征在于，待测样品、乙腈和氯化钠的质量比为1:1-10:0.2-2。
4.根据权利要求1所述的纳他霉素检测方法，其特征在于，离心的转速为3000-10000r/min，离心时间为3-30min。
5.根据权利要求1所述的纳他霉素检测方法，其特征在于，C18填料的添加量为待测样品质量的5-50%。
6.根据权利要求1所述的纳他霉素检测方法，其特征在于，无水硫酸钠的添加量为待测样品质量的4-80%。
7.根据权利要求1所述的纳他霉素检测方法，其特征在于，无水硫酸镁的添加量为待测样品质量的5-65%。
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| CN109507137A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-03-22 | 常州工学院 | 亚铁氰化锰钾中亚铁氰根离子含量及锰含量的测定及鉴定方法 |
| CN109507137B (zh) * | 2018-11-20 | 2021-02-09 | 常州工学院 | 亚铁氰化锰钾中亚铁氰根离子及锰含量的测定及鉴定方法 |
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