CN106520859B - 一种高得率的小麦麸皮活性多糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种高得率的小麦麸皮活性多糖的制备方法。本发明方法中，以小麦麸皮超微粉为原料，经石油醚脱脂后用纤维素酶提取、醇沉、去淀粉和去蛋白以制得小麦麸皮粗多糖。本发明方法反应条件温和，同时还不使用对于多糖结构有破坏性的酸碱，并且整体制备工艺简单，是一种实用、高效以及高产率制备小麦麸皮多糖的方法。同时，由本发明方法所制得的小麦麸皮多糖具有含糖量高、纯度高且生物活性强等优点。

Description

一种高得率的小麦麸皮活性多糖的制备方法

技术领域

本发明涉及植物多糖提取领域，具体而言，涉及一种高得率的小麦麸皮活性多糖的制备方法。

背景技术

小麦是世界上最早栽培的农作物之一，属禾本科单子叶植物纲植物。小麦的颖果是人类食用的主要部分，磨成面粉后可制成馒头、面条等食物。麸皮在《本草纲目》中记载到“麸乃麦皮也，与浮麦同性，而止汗之功仅次于浮麦，盖浮麦无肉也”，麸皮还可用于清热祛痰，软坚散结以及补虚敛汗。在我国，小麦麸皮年产量高达2000多万吨，大约占小麦的20％，但85％以上的麦麸作为酿酒、制醋、酱油、饲料生产的廉价原料，很少用于深加工和再利用，经济效益和社会效益很低。

小麦麸皮中除含有蛋白质、水分、灰分、酚类等化学成分外，其多糖的含量也很高。小麦麸皮中的多糖主要由非淀粉多糖和淀粉多糖组成，非淀粉多糖含量在46％左右，是小麦细胞壁的主要成分。小麦麸皮多糖具有抗衰老、提高免疫力、抗癌、降血脂降血压等功效。

现有技术中对小麦麸皮多糖提取也进行了一些研究，例如现有技术(CN101705268A)中就公开了一种具有抗肿瘤与免疫调节活性的小麦麸皮多糖及其提取方法，该专利采用盐酸和木聚糖酶对小麦麸皮进行处理，并提取得到小麦麸皮多糖。

近年来，提取小麦麸皮多糖常用的技术基本为：水法提取、碱法提取、酸法提取等。这些提取方法本身存在着一些问题，比如：酸碱提取剂在一定程度上会破坏多糖结构，从而影响小麦麸皮多糖的生物活性。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种高得率的小麦麸皮活性多糖的制备方法，所述的方法中，以小麦麸皮超微粉为原料，并经纤维素酶提取、醇沉、去淀粉和去蛋白以制得小麦麸皮粗多糖和小麦活性多糖。本发明方法中不使用对于多糖结构有破坏性的酸碱，因而能够保持所提取得到的小麦麸皮多糖的生物活性；同时，本发明方法反应条件温和，而且整体工艺简单，是一种实用、高效制备小麦麸皮多糖的方法。

本发明的第二目的在于提供一种所述小麦麸皮多糖，其由本发明方法提取制备得到，具有小麦麸皮多糖纯度高且生物活性强等优点。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种小麦麸皮多糖提取方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将小麦麸皮粉碎后除去杂质，并干燥；然后，将干燥后的小麦麸皮再次粉碎，得到小麦麸皮超微粉；

(2)向小麦麸皮超微粉中加入石油醚，然后加热搅拌脱脂，并干燥；

(3)将脱脂干燥后的小麦麸皮超微粉中加入蒸馏水，然后加入纤维素酶，并水浴加热提取；然后，将提取后所得混合溶液加热灭酶，将灭酶后的混合溶液过滤，并将滤液浓缩；将浓缩后的滤液进行醇沉，并低温静置；将低温静置后的滤液过滤离心，并将离心所得固体干燥，即得小麦麸皮粗多糖；

(4)将小麦麸皮粗多糖加水溶解，向所得小麦麸皮粗多糖水溶液中加入α-淀粉酶，并充分振荡；然后，加入Sevage试剂，并在振荡后静置分层；待溶液分层后，除去分层后溶液的中层蛋白质层和下层Sevage试剂层，并收集上层溶液；然后，向所收集的上层溶液中再次加入Sevage试剂，并反复处理，直至分层后的溶液中不出现蛋白质层；然后，收集最后一次处理后所得上层溶液，即为小麦麸皮多糖溶液；

(5)将小麦麸皮多糖溶液进行过膜透析，并将透析后所得溶液冷冻干燥，即得到小麦麸皮活性多糖。

可选的，本发明中，步骤(1)中所述再次粉碎为超微粉碎，并将小麦麸皮粉碎至颗粒为500～2000目。

可选的，本发明中，步骤(2)中所述小麦麸皮超微粉的质量克数与所述石油醚的体积毫升数之比为1：2～6。

可选的，本发明中，步骤(2)中所述加热搅拌脱脂是在30～45℃恒温水浴加热条件下搅拌脱脂3～5h。

可选的，本发明中，根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述纤维素酶的质量为小麦麸皮超微粉质量的0.3～0.75％，所述纤维素酶的活力为1500～3000U/g。

可选的，本发明中，步骤(3)中所述水浴加热提取为在30～50℃水浴中提取1.5～2h。

可选的，本发明中，根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述低温静置为在0～8℃条件下静置5～15h。

可选的，本发明中，步骤(4)中所述α-淀粉酶与小麦麸皮粗多糖水溶液的体积毫升数比为1：(100～150)。

可选的，本发明中，所述Sevage试剂的体积与加入α-淀粉酶的小麦麸皮粗多糖水溶液的体积毫升数比为1：(3～5)。

同时，本发明还提供了一种小麦麸皮粗多糖和小麦麸皮活性多糖，其由本发明方法制备得到。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明方法提取操作步骤简单，而且提取条件温和，同时无需使用对小麦麸皮多糖具有较大破坏性的酸碱等提取试剂；同时，本发明方法小麦麸皮多糖得率高，且所制得的小麦麸皮多糖活性好。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为小麦麸皮提取后残渣的微观形态；

图2为小麦麸皮多糖单糖组分分析图；其中(a)为单糖标准品分析图，(b)为小麦麸皮多糖单糖组分分析图；

图3为不同浓度小麦麸皮活性多糖对小鼠巨噬细胞细胞毒性及分泌NO影响。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

在本发明的一个优选方案中，步骤(1)中所述粉碎为机械粉碎；和/或，步骤(1)中所述干燥为烘干，进一步的，所述烘干是在温度为30～60℃的烘箱中进行的，并将粉碎后的小麦麸皮烘干至所含水分为1～8％。

在本发明的一个优选方案中，步骤(2)中所述干燥为在30～60℃烘箱中进行的烘干。

在本发明的一个优选方案中，步骤(3)中所述脱脂干燥后的小麦麸皮超微粉与蒸馏水的质量克数比为1：(15～25)；和/或，步骤(3)中所述加热灭酶具体为：将提取后所得混合溶液在沸水浴(水浴温度100℃)中加热5～10min进行灭酶；和/或，步骤(3)中所述醇沉为采用质量浓度为80～90％的无水乙醇进行醇沉；和/或，步骤(3)中所述低温静置为在0～8℃条件下静置8～12h；和/或，步骤(3)中所述干燥为在45～50℃条件下烘干。

在本发明的一个优选方案中，步骤(4)中所述小麦麸皮粗多糖加水溶解具体为向小麦麸皮粗多糖中加入其质量8～10倍的水，并将小麦麸皮多糖溶解。

在本发明的一个优选方案中，所述Sevage试剂的体积与加入α-淀粉酶的小麦麸皮粗多糖水溶液的体积毫升数比可以为1：3、1:4或者1:5。

在本发明的一个优选方案中，步骤(4)所述Sevage试剂中，三氯甲烷与正丁醇的体积比为4：1；和/或步骤(4)中所述并振荡后静置分层具体为：将加入Sevage试剂后得混合溶液置于分液漏斗中，并反复振荡10～20min，然后静置分层；和/或步骤(4)中所述反复处理为反复处理4～5次。

在本发明的一个优选方案中，步骤(5)所述过膜透析具体为：将小麦麸皮多糖溶液装入透析袋中进行透析，并透析24～48h。

实施例1：

(1)小麦麸皮预处理：将小麦麸皮经机械粉碎后，除去杂质，并将除杂后的小麦麸皮在30℃烘箱内加热烘干，直至小麦麸皮水分含量为3％以内，然后，将小麦麸皮进一步经超微粉碎机粉碎，至颗粒粒径为500目，得到小麦麸皮超微粉；

(2)小麦麸皮的脱脂处理：按照小麦麸皮超微粉的质量克数与石油醚的体积毫升数之比为1:6的比例，将石油醚加入小麦麸皮超微粉中；然后，将所得混合体系在30℃水浴条件下搅拌4h，进行脱脂，再将脱脂后的小麦麸皮超微粉在40℃烘箱中烘干；

(3)小麦麸皮粗多糖提取：称取脱脂后小麦麸皮超微粉，并按脱脂后的小麦麸皮超微粉与水的质量克数比为1:15的比例，向小麦麸皮超微粉中加水制成悬浮液；然后，向悬浮液中加入质量为脱脂后小麦麸皮超微粉质量0.3％、且活性为2000U/g的纤维素酶，并在35℃的恒温水浴锅中水浴提取1.5h；然后，将所得混合溶液在沸水浴中灭酶3min；然后，将混合溶液在4000rpm离心条件下，离心过滤15min，收集滤液，并将滤液浓缩；向浓缩后的滤液中加入质量浓度为80％乙醇进行醇沉，然后醇沉后的滤液放入4℃冰箱中，并静置放置8h；然后，将静置放置后的滤液在离心机转速为4000rpm条件下，离心处理8min，然后将离心所得固体干燥，即得到实施例1的小麦麸皮粗多糖，经计算，小麦麸皮粗多糖的得率为15.14％；

(4)除淀粉和蛋白：将小麦麸皮粗多糖以10倍质量的蒸馏水溶解，并加入体积为所得小麦麸皮粗多糖水溶液体积1/100的淀粉酶，并充分振荡，以除去淀粉；然后，向已除去淀粉的溶液中，加入体积为加入淀粉酶后的小麦麸粗糖水溶液体积1/4的Sevage试剂，其中，所述Sevage试剂中三氯甲烷与正丁醇的体积比为4:1；然后，将所得混合体系置于分液漏斗中，并反复振荡20min，然后静置；待混合体系分层后，去掉下层的Sevage试剂和中间蛋白质层，并收集上层溶液；然后将上层溶液继续加入Sevage试剂，然后反复处理5次，最后一次分层后的溶液中不再出现蛋白质层，收集上层溶液，即为小麦麸皮多糖溶液；

(5)过膜透析：将所得小麦麸皮多糖溶液装入透析袋进行透析，透析时间为36h，将透析过的多糖溶液进行冷冻干燥即可得到实施例1的小麦麸皮活性多糖。

实验例1实施例1小麦麸皮粗多糖以及小麦麸皮活性多糖样品测试

1)依据苯酚-硫酸法测定小麦麸皮粗多糖中多糖含量：

(1)标准曲线的绘制：准确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10mg，用蒸馏水定容至100mL容量瓶得标准液；将标准液稀释成质量浓度为50、100、150、200、250、300、350mg/mL的溶液，分别吸取稀释液0.2mL，加入质量分数5％苯酚0.4mL，混合后迅速加2mL浓硫酸，混合均匀后，室温放置30min，在490nm波长处测定吸光度，以蒸馏水做空白对照；以多糖浓度为横坐标(X)，吸光度为纵坐标(Y)，制作标准曲线；

(2)样品测定：称取40～50mg实施例1提取的小麦麸皮粗多糖样品，重蒸水定容至100mL，精密吸取0.2mL按标准曲线方法操作测定吸光度；根据标准曲线计算多糖浓度，再计算求得样品中多糖的含量为49.83％；

其中，多糖含量(％)＝(V×C×f/M)×100％

式中：M：称取的粗多糖质量

V：溶解M定容后的体积

C：根据标准曲线得出多糖的浓度(μg/mL)

f：f≈0.9，为多糖的校正系数

2)小麦麸皮粗多糖单糖组分分析：

(1)标准单糖衍生物的制备：精密称取干燥至恒重的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖10mg于具塞玻璃管中，分别加入盐酸羟胺10mg，无水吡啶500μL，涡旋混匀于90℃水浴加热30min；取出后放置冰上迅速冷却至室温，加入500μL醋酸酐，于90℃水浴锅中继续反应30min以进行乙酰化。反应完成后，用吹氮仪吹干，加入1mL三氯甲烷复溶；将各标准单糖衍生物混合，取1μL混合液直接进行色谱条件分析，分析图谱如附图2(a)所示；

(2)小麦麸皮多糖的水解和衍生化：

小麦麸皮多糖的水解：精密称取实施例1提取的小麦麸皮多糖10mg于具塞玻璃试管中，加入4mol/L三氟乙酸溶液4mL，涡旋混匀；放置100℃水浴锅水解12h，取出用吹氮仪吹干；

小麦麸皮多糖的衍生化：水解后的小麦麸皮多糖样品，按照标准单糖衍生化的方法，将小麦麸皮多糖衍生化，取样1μL样品进行气相色谱分析，色谱分析结果如附图2(b)所示。

3)小麦麸皮活性多糖的细胞活性实验

将所得小麦麸皮活性多糖用水配制成一系列的浓度，用MTT法检测细胞毒性；用Griess法检测在小麦麸皮多糖的刺激下，RAW264.7细胞分泌NO的影响；Western Blot方法研究小麦麸皮多糖对RAW264.7细胞的免疫调节信号通路研究，实验结果如图3所示。

实施例2：

(1)小麦麸皮预处理：将小麦麸皮经机械粉碎后，除去杂质，并将除杂后的小麦麸皮在60℃烘箱内加热烘干，直至小麦麸皮水分含量为6％以内，然后，将小麦麸皮进一步经超微粉碎机粉碎，至颗粒粒径为2000目筛，得到小麦麸皮超微粉；

(2)小麦麸皮的脱脂处理：按照小麦麸皮超微粉的质量克数与石油醚的体积毫升数之比为1:4的比例，将石油醚加入小麦麸皮超微粉中；然后，将所得混合体系在30℃水浴条件下搅拌4h进行脱脂，再将脱脂后的小麦麸皮超微粉在40℃烘箱中烘干；

(3)小麦麸皮粗多糖提取：称取脱脂后小麦麸皮超微粉，并按脱脂后的小麦麸皮超微粉与水的质量克数比为1:25的比例，向小麦麸皮超微粉中加水制成悬浮液；然后，向悬浮液中加入质量为脱脂后小麦麸皮超微粉质量0.75％、且活性为2000U/g的纤维素酶，并在48℃的恒温水浴锅中水浴提取2h；然后，将所得混合溶液在100℃沸水浴中灭酶10min；然后，将混合溶液在4500rpm离心条件下，离心过滤15min，收集滤液，并将滤液浓缩；向浓缩后的滤液中加入质量浓度为85％乙醇进行醇沉，然后醇沉后的滤液放入4℃冰箱中，并静置放置12h；然后，将静置放置后的滤液在离心机转速为4000rpm条件下，离心处理15min，然后将离心所得固体干燥，即得到实施例2的小麦麸皮粗多糖，经计算多糖得率为13.78％；

(4)除淀粉和蛋白：将小麦麸皮粗多糖以10倍体积的蒸馏水溶解，并加入体积为所得小麦麸皮粗多糖水溶液体积1/100的淀粉酶，并充分振荡，以除去淀粉；然后，向已除去淀粉的溶液中加入体积为其1/4的Sevage试剂，其中，所述Sevage试剂中三氯甲烷与正丁醇的体积比为4:1；然后，将所得混合体系置于分液漏斗中，并反复振荡20min，然后静置；待混合体系分层后，去掉下层的Sevage试剂和中间蛋白质层，并收集上层溶液；然后将上层溶液继续加入Sevage试剂，然后反复处理5次，最后一次分层溶液中不再出现蛋白质层，收集上层溶液，即为小麦麸皮多糖溶液；

(5)过膜透析：将所得小麦麸皮多糖溶液装入透析袋进行透析，透析时间为36h，将透析过的多糖溶液进行冷冻干燥即可得到实施例2的小麦麸皮活性多糖。

实验例2实施例2小麦麸皮粗多糖以及小麦麸皮活性多糖样品测试

1)依据苯酚-硫酸法测定小麦麸皮粗多糖含量：

(1)标准曲线的绘制：准确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖8mg，用蒸馏水定容至100mL容量瓶得标准液；将标准液稀释成质量浓度为50、100、150、200、250、300、350mg/mL的溶液，分别吸取稀释液0.2mL，加入质量分数5％苯酚0.4mL，混合后迅速加2mL浓硫酸，混合均匀后，室温放30min，在490nm波长处测定吸光度，以蒸馏水做空白对照；以多糖浓度X为横坐标，吸光度Y为纵坐标，制作标准曲线；

(2)样品测定：称取45mg不同提取方法提取的多糖样品,重蒸水定容至100mL，精密吸取0.2mL按标准曲线方法操作测定吸光度；根据标准曲线计算多糖浓度，再计算求得样品中多糖的含量为49.03％；

多糖含量(％)＝(V×C×f/M)×100％

式中，M：称取的粗多糖质量

V：溶解M定容后的体积

C：根据标准曲线得出多糖的浓度(μg/mL)

f：f≈0.9为多糖的校正系数

2)小麦麸皮粗多糖单糖组分分析：

(1)准单糖衍生物的制备：精密称取干燥至恒重的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖10mg于具塞玻璃管中，分别加入盐酸羟胺10mg，无水吡啶500μL，涡旋混匀于90℃水浴加热30min；取出后放置冰上迅速冷却至室温，加入500μL醋酸酐，于90℃水浴锅中继续反应30min进行乙酰化，反应完成后用吹氮仪吹干，加入1mL三氯甲烷复溶；将各标准单糖衍生物混合，取2μL混合液直接进行色谱条件分析，结果如图2(a)所示；

(2)小麦麸皮多糖的水解和衍生化

小麦麸皮多糖的水解：精密称取实施例2提取的小麦麸皮多糖8mg于具塞玻璃试管中，加入4mol/L三氟乙酸溶液4mL，涡旋混匀；放置100℃水浴锅水解12h，用氮气吹干；

小麦麸皮多糖的衍生化：水解后的小麦麸皮多糖样品，按标准单糖衍生化的方法，将小麦麸皮多糖衍生化，取样2μL样品进行气相色谱分析，结果与实施例1相同。

3)小麦麸皮多糖的细胞活性实验

将所得小麦麸皮活性多糖用DMSO配制成一系列的浓度，用MTT法检测细胞毒性；用Griess法检测在小麦麸皮多糖的刺激下，RAW264.7细胞分泌NO的影响；用Western Blot的方法研究小麦麸皮多糖对RAW264.7细胞的免疫调节信号通路研究，结果与实施例1相同。

实施例3：

(1)小麦麸皮预处理：将小麦麸皮经机械粉碎后，除去杂质，并将除杂后的小麦麸皮在55℃烘箱内加热烘干，直至小麦麸皮水分含量为5％以内，然后，将小麦麸皮进一步经超微粉碎机粉碎，至颗粒粒径为1500目，得到小麦麸皮超微粉；

(2)小麦麸皮的脱脂处理：按照小麦麸皮超微粉的质量克数与石油醚的体积毫升数之比为1:4的比例，将石油醚加入小麦麸皮超微粉中；然后，将混合体系在30℃水浴条件下搅拌4h进行脱脂，再将脱脂后的小麦麸皮超微粉在40℃烘箱中烘干；

(3)小麦麸皮粗多糖提取：称取脱脂后小麦麸皮超微粉，并按脱脂后的小麦麸皮超微粉与水的质量克数比1:23的比例，向小麦麸皮超微粉中加水制成悬浮液；然后，向所得悬浮液中加入脱脂后小麦麸皮超微粉质量0.65％的纤维素酶，并在48℃的恒温水浴锅水浴提取2h；然后，将所得混合溶液在100℃沸水浴中灭酶3.5min；然后，将所得溶液在4300rpm离心条件下，离心过滤18min，收集滤液，并将滤液浓缩；向浓缩后的滤液中加入质量浓度为85％乙醇进行醇沉，然后醇沉后的滤液放入4℃冰箱中，并静置放置12h；然后，将静置放置后的滤液在离心机转速为4100rpm条件下，离心处理10min，然后将离心所得固体干燥，即得到实施例3的小麦麸皮粗多糖，经计算粗多糖得率为15.14％；

(4)除淀粉和蛋白：将小麦麸皮粗多糖以10倍体积的蒸馏水溶解，并加入体积为所得小麦麸皮多糖水溶液体积1/100的淀粉酶，并充分振荡，以除去淀粉；然后，向已除去淀粉的溶液中加入体积为其1/4的Sevage试剂，其中，所述Sevage试剂中三氯甲烷与正丁醇的体积比为4:1；然后，将所得混合体系置于分液漏斗中，并反复振荡20min，然后静置；待混合体系分层后，去掉下层的Sevage试剂和中间蛋白质层，并收集上层溶液；然后将上层溶液继续加入Sevage试剂，然后反复处理6次，最后一次分层溶液中不再出现蛋白质层，收集上层溶液，即为小麦麸皮多糖溶液；

(5)过膜透析：将所得小麦麸皮多糖溶液装入透析袋进行透析，透析时间为48h，将透析过的多糖溶液进行冷冻干燥即可得到实施例3的小麦麸皮活性多糖。

实验例3实施例3小麦麸皮粗多糖以及小麦麸皮活性多糖样品测试

1)依据苯酚-硫酸法测定小麦麸皮粗多糖含量：

(1)标准曲线的绘制：准确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖9mg，用蒸馏水定容至100mL容量瓶得标准液；将标准液稀释成质量浓度为50、100、150、200、250、300、350mg/mL的溶液，分别吸取稀释液0.2mL，加入质量分数5％苯酚0.4mL，混合后迅速加2mL浓硫酸，混合均匀后，室温放置30min，在490nm波长处测定吸光度，以蒸馏水做空白对照；以多糖浓度X为横坐标，吸光度Y为纵坐标，制作标准曲线；

(2)样品测定：称取48mg实施例3提取的多糖样品，重蒸水定容至100mL，精密吸取0.2mL按标准曲线方法操作测定吸光度；根据标准曲线计算多糖浓度，再计算求得样品中多糖的含量为49.53％；

多糖含量(％)＝(V×C×f/M)×100％

式中：M：称取的粗多糖质量

V：溶解M定容后的体积

C：根据标准曲线得出多糖的浓度(μg/mL)

f：f≈0.9为多糖的校正系数

2)小麦麸皮粗多糖单糖组分分析：

(1)标准单糖衍生物的制备：精密称取干燥至恒重的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖10mg于具塞玻璃管中，分别加入盐酸羟胺10mg，无水吡啶500μL，涡旋混匀于90℃水浴加热30min；取出后放置冰上迅速冷却至室温，加入500μL醋酸酐，于90℃水浴锅中继续反应30min进行乙酰化，反应完成后用吹氮仪吹干，加入1mL三氯甲烷复溶；将各标准单糖衍生物混合，取1.5μL混合液直接进行色谱条件分析，结果如图2(a)所示。

(2)小麦麸皮多糖的水解和衍生化

小麦麸皮多糖的水解：精密称取不同提取方法提取的小麦麸皮多糖9.5mg于具塞玻璃试管中，加入4mol/L三氟乙酸溶液3.5mL，涡旋混匀；放置100℃水浴锅水解11h，取出用吹氮仪吹干；

小麦麸皮多糖的衍生化：水解后的小麦麸皮多糖样品，按照标准单糖衍生化的方法，将小麦麸皮多糖衍生化，取样1.5μL样品进行气相色谱分析，结果与实验例1相同。

3)小麦麸皮多糖的生理活性实验

将所得小麦麸皮活性多糖用水配制成一系列的浓度，用MTT法检测细胞毒性；用Griess法检测在小麦麸皮多糖的刺激下，小鼠巨噬细胞分泌NO的影响；用Western Blot的方法研究小麦麸皮多糖对小鼠巨噬细胞的免疫调节信号通路研究，结果与实验例1结果相同。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (7)

1.一种高得率的小麦麸皮活性多糖的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将小麦麸皮粉碎后除去杂质，并干燥；然后，将干燥后的小麦麸皮再次粉碎，得到小麦麸皮超微粉；

(2)向小麦麸皮超微粉中加入石油醚，然后加热搅拌脱脂，并干燥；

其中，所述加热搅拌脱脂是在30～45℃恒温水浴加热条件下搅拌脱脂3～5h；

(3)将脱脂干燥后的小麦麸皮超微粉中加入蒸馏水，然后加入纤维素酶，并水浴加热提取；然后，将提取后所得混合溶液加热灭酶，将灭酶后的混合溶液过滤，并将滤液浓缩；将浓缩后的滤液进行醇沉，并低温静置；将低温静置后的滤液过滤离心，并将离心所得固体干燥，即得小麦麸皮粗多糖；

其中，纤维素酶的质量为小麦麸皮超微粉质量的0.3～0.75％，所述纤维素酶的活力为1500～2000U/g；

(4)将小麦麸皮粗多糖加水溶解，向所得小麦麸皮粗多糖水溶液中加入α-淀粉酶，并充分振荡；然后，加入Sevage试剂，并在振荡后静置分层；待溶液分层后，除去分层后溶液的中层蛋白质层和下层Sevage试剂层，并收集上层溶液；然后，向所收集的上层溶液中再次加入Sevage试剂，并反复处理，直至分层后的溶液中不出现蛋白质层；然后，收集最后一次处理后所得上层溶液，即为小麦麸皮多糖溶液；

其中，所述α-淀粉酶与小麦麸皮粗多糖水溶液的体积毫升数比为1：(100～150)；

(5)将小麦麸皮多糖溶液进行过膜透析，并将透析后所得溶液冷冻干燥，即得到小麦麸皮活性多糖。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述再次粉碎为超微粉碎，并将小麦麸皮粉碎至颗粒为500～2000目。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述小麦麸皮超微粉的质量克数与所述石油醚的体积毫升数之比为1：2～6。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述水浴加热提取为在30～50℃水浴中提取1.5～2h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述低温静置为在0～8℃条件下静置5～15h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述Sevage试剂与加入α-淀粉酶后的小麦麸皮粗多糖水溶液的体积毫升数之比为1：(3～5)。

7.根据权利要求1-6中任一项所述方法制得的小麦麸皮粗多糖以及小麦麸皮活性多糖。