CN106497797A - 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106497797A CN106497797A CN201610936208.3A CN201610936208A CN106497797A CN 106497797 A CN106497797 A CN 106497797A CN 201610936208 A CN201610936208 A CN 201610936208A CN 106497797 A CN106497797 A CN 106497797A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- preparation
- sea
- cyclic dipeptides
- fungal cultures
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 title claims abstract description 25
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 78
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 55
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 36
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 36
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 36
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 23
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 14
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 14
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 14
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 14
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 13
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 13
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims description 10
- NOTFZGFABLVTIG-UHFFFAOYSA-N Cyclohexylethyl acetate Chemical compound CC(=O)OCCC1CCCCC1 NOTFZGFABLVTIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 8
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 claims description 4
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- UGAPHEBNTGUMBB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethyl acetate Chemical compound CC(O)=O.CCOC(C)=O UGAPHEBNTGUMBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 2
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims description 2
- -1 wherein Chemical compound 0.000 claims description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 claims 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 abstract description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 8
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 4
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 101000998969 Homo sapiens Inositol-3-phosphate synthase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100036881 Inositol-3-phosphate synthase 1 Human genes 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229940124280 l-arginine Drugs 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N nitrous oxide Inorganic materials [O-][N+]#N GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 2
- APLKWZASYUZSBL-PBHICJAKSA-N (-)-cyclopenine Chemical compound C1([C@H]2O[C@@]32C(=O)NC2=CC=CC=C2C(=O)N3C)=CC=CC=C1 APLKWZASYUZSBL-PBHICJAKSA-N 0.000 description 1
- BDDNYDPRCCDQQJ-PBHICJAKSA-N (3s,3'r)-3'-(3-hydroxyphenyl)-4-methylspiro[1h-1,4-benzodiazepine-3,2'-oxirane]-2,5-dione Chemical compound C1([C@H]2O[C@@]32C(=O)NC2=CC=CC=C2C(=O)N3C)=CC=CC(O)=C1 BDDNYDPRCCDQQJ-PBHICJAKSA-N 0.000 description 1
- DELJNDWGTWHHFA-UHFFFAOYSA-N 1-azaniumylpropyl(hydroxy)phosphinate Chemical compound CCC(N)P(O)(O)=O DELJNDWGTWHHFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 101800001718 Amyloid-beta protein Proteins 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 208000004300 Atrophic Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- LIVVOGAMSWUUDK-UHFFFAOYSA-N Cyclopenol Natural products CN1C(=O)c2ccccc2NC(=O)C13OC3c4ccccc4O LIVVOGAMSWUUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 206010048768 Dermatosis Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036495 Gastritis atrophic Diseases 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 206010018634 Gouty Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028116 Mucosal inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008299 Nitric Oxide Synthase Human genes 0.000 description 1
- 108010021487 Nitric Oxide Synthase Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 235000009392 Vitis Nutrition 0.000 description 1
- 241000219095 Vitis Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020670 canker sore Diseases 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000016644 chronic atrophic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 229930185935 cotteslosin Natural products 0.000 description 1
- MLDFAXSXLVAFNZ-UHFFFAOYSA-N cottoquinazoline A Natural products O=C1NC2C3=NC4=CC=CC=C4C(=O)N3C1CC1(O)C3=CC=CC=C3N3C1N2C(C)C3=O MLDFAXSXLVAFNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- BDDNYDPRCCDQQJ-UHFFFAOYSA-N dl-Cyclopenol Natural products CN1C(=O)C2=CC=CC=C2NC(=O)C11OC1C1=CC=CC(O)=C1 BDDNYDPRCCDQQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APLKWZASYUZSBL-UHFFFAOYSA-N dl-cyclopenin Natural products CN1C(=O)C2=CC=CC=C2NC(=O)C11OC1C1=CC=CC=C1 APLKWZASYUZSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N ethyl acetoacetate Chemical compound CCOC(=O)CC(C)=O XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000004836 hexamethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001069 nematicidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000036301 sexual development Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/66—Aspergillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D491/10—Spiro-condensed systems
- C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明适用于生物制药领域，提供了一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用，所述提取物为环二肽类化合物，所述环二肽类化合物可编号为CCTCC M 2015628的深海真菌发酵培养物中分离得到。所述环二肽类化合物具有较强抑制一氧化氮(NO)产生的活性，且对细胞无毒性；可用于治疗阿尔茨海默病的药物的制备。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药领域，尤其涉及一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用。
背景技术
目前困扰人们的日常炎性疾病包括，关节炎症例如骨关节炎、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、痛风关节炎等；炎性皮肤病例如湿疹、牛皮癣、皮炎等；炎性眼疾例如色素层炎、结膜炎等；肺部疾病例如哮喘、支气管炎、急性呼吸窘迫综合症等；菌血症、那毒素血症、口疮溃疡、龈炎、胰腺炎等；胃肠道疾病例如节段性回肠炎、萎缩性胃炎、溃疡性结肠炎、腹腔炎、消化性溃疡、应激性肠道综合症例如由幽门螺旋杆菌感染而引起的粘膜炎症或者由非甾体类抗炎药引起的肠胃病等等。近年来，关于神经退行性疾病的研究表明，神经细胞的损伤也与炎症有密切的关系。
有关各种炎症致病作用的机理，已知体内一氧化氮(NO)是介导细胞免疫和炎症的毒性物质。其前体是左旋精氨酸(L-arg)，L-arg在NO合成酶(NOS)的作用下生成NO。目前已经分离出三种不同类型的NOS，包括内皮NO合成酶(eNOS)，神经元NO合成酶(nNOS)及诱导型NO合成酶(iNOS)。目前已知，巨噬细胞、肝细胞、平滑肌细胞、腺癌细胞、神经胶质细胞以及上皮细胞均能表达iNOS。某些炎性细胞因子和微生物产物如脂多糖(LPS)则可诱导iNOS表达。iNOS一旦被诱导即可表达出高度活性，产生大量NO。NO的过量生成造成炎症的增恶，从而导致各种急慢性疾病。而神经胶质细胞过量产生NO，会造成神经细胞损伤，进而导致神经退行性疾病，包括老年痴呆，老年痴呆特别是阿尔茨海默型痴呆(Alzheimer’s Disease:AD)，也就是通常所说的阿尔茨 海默病，是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状和行为障碍。AD在发病过程中常伴有炎症反应，并在β-淀粉样沉淀中发现了被激活的小胶质细胞和炎症分子；同时抗炎症药物能够减缓AD发病的过程，因此，目前认为激活的小胶质细胞及炎症反应能与老年痴呆症的发病密切相关。
因此，长时间以来，人们致力于寻找诱导型NO合成酶iNOS的抑制剂来治疗与之相关的炎性疾病，尤其是治疗阿尔茨海默病。但这些抑制剂大多局限于化学合成的物质，副作用较大。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用，该提取物对于具有抑制一氧化氮的活性并且对细胞无毒性，尤其对神经胶质细胞(BV2)具有抑制一氧化氮的活性并且对细胞无毒性，旨在提供一种新的能够抑制一氧化氮产生的化合物及其制备方法。
本发明的技术方案如下：
本发明所用的真菌是深海真菌Aspergillus sp.SCSIOW2，该深海真菌已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC中国，武汉，武汉大学)，保藏编号为CCTCC M No.2015628，保藏日期：2015年10月21日。该真菌以下简称深海真菌CCTCC M 2015628。
本发明是这样实现的，一种真菌培养物的提取物，所述提取物是从深海真菌CCTCCM 2015628的发酵培养液的乙酸乙酯萃取液中浓缩、分离得到的环二肽类化合物；所述环二肽类化合物包括以下化合物中的一种或两种，化合物的结构式如下所示：
本发明还提供了上述所述的真菌培养物的提取物的制备方法，包括以下步骤：
将菌种深海真菌CCTCC M 2015628接种到种子培养基中，27～29℃培养47～49小时，得到种子培养液；
将种子培养液接种到液体培养基中，室温静置避光培养15～16天，获得深海真菌CCTCC M 2015628的发酵培养物，其中含有环二肽类化合物；
其中，种子培养基的配方为：葡萄糖1.9～2.1％，蛋白胨0.9～1.1％，酵母提取物0.4～0.6％，海盐2～4％；
液体培养基的成分包括海盐、去离子水、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物，其中，葡萄糖1.9～2.1％，蛋白胨0.9～1.1％，酵母提取物0.4～0.6％，海盐2～4％。
进一步地，所述液体培养基的制备方法为：按比例称取海盐、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物溶于去离子水中，待完全溶解后，调节PH至7.4～7.6。
进一步地，所述的真菌培养物的提取物的制备方法还包括以下步骤：
将所述深海真菌的发酵培养物用乙酸乙酯超声萃取，萃取液在低于50℃下减压浓缩得发酵液浸膏；重复前述萃取步骤2次以上，合并发酵液浸膏；
将发酵液浸膏后经Sephadex LH-20开放柱，用1:1的氯仿-甲醇洗脱剂等浓度洗脱，选取具有抗一氧化氮活性的组分2；
将组分2拌入硅胶后装硅胶柱，以环己烷-乙酸乙酯为洗脱溶剂梯度洗脱，经TLC分析选取组分W2-2-14、W2-2-16用反向HPLC柱进一步分离纯化；
组分W2-2-14用HPLC分离纯化，0-30min内50％的甲醇等浓度洗脱，收集后即可得到纯化的式(I)环二肽类化合物(190mg，td＝8.3min)；
组分W2-2-16用HPLC分离纯化，0-20min内乙腈浓度由20％梯度上升到40％，收集后即可得到纯化的式(Ⅱ)环二肽类化合物(90mg，td＝7.0min)；
所述组分W2-2-14由环己烷-乙酸乙酯体积比7:3的洗脱剂洗脱后得到，所述组分W2-2-16由环己烷-乙酸乙酯体积比6:4的洗脱剂洗脱后得到。
进一步地，所述超声萃取过程中，按照每5mL种子培养液配245～255mL的乙酸乙酯比例添加乙酸乙酯。
进一步地，所述硅胶柱层析分离过程中，所用硅胶为200-300目，洗脱溶剂梯度为环己烷-乙酸乙酯体积比100：0，97：3，95：5，9：1，8：2，7：3，6：4，0：100。
本发明还提供了上述所述的真菌培养物的提取物的应用，将所述环二肽类化合物用于抑制一氧化氮产生的药物的制备。
进一步地，将所述环二肽类化合物用于抗炎活性药物的制备。
进一步地，将所述环二肽类化合物用于治疗阿尔茨海默病的药物的制备。
本发明的有益效果：本发明在深海真菌CCTCC M 2015628的发酵培养物中首次分离出两种环二肽类化合物，对所述环二肽类化合物进行一氧化氮(NO)产生抑制活性测定，实验浓度为10μM/ml时，对LPS诱导BV2细胞释放NO具有明显的抑制活性，抑制率高于50％，且对应的细胞存活率均是100％，表明所述环二肽类化合物在这种浓度下具有一定的NO抑制活性，并且对细胞无毒性，可用于制备抑制一氧化氮产生的药物，尤其可用于治疗阿尔茨海默病的药物的制备。
附图说明
图1为本发明实施例2中亚硝酸盐曲线测定样品的加样顺序及对应的加样浓度。
具体实施方式
本发明提供一种真菌发酵培养物的提取物及其制备方法和应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
海洋真菌是一种能够产生复杂而独特的化学结构以及丰富且多样生物活性物质的资源，分布广泛，但是由于各种原因和条件限制，海洋真菌的代谢产物的相关研究是最近几十年才开始，其次级代谢产物的研究从1988年才开始有文献报道。随着各国科研者对于海洋真菌代谢产物的重视，许多实验者都得出海洋真菌能够产生多种多样的新颖的活性物质基本共识。据统计，到2011年为止已从海洋真菌的发酵产物中发现了1117个新的次生代谢产物，其生物活性主要表现为抗肿瘤、抗菌和抗病毒活性。深入研究和开发海洋真菌次生代谢产物具有重要的理论意义和实际应用价值。
而本发明中就是采用南海海泥的深海真菌，在深海真菌活性次级代谢产物筛选的基础上，用大米培养基对深海来源真菌20株进行了初步发酵，乙酸乙酯萃取得到提取物后，对提取物进行了多种活性测定，包括一氧化氮(NO)产生抑制活性、抗癌细胞毒活性、A-Beta蛋白聚集抑制活性、以及多种细菌的抗菌活性。其中发现深海真菌CCTCC M 2015628表现出一定的一氧化氮(NO)产生抑制活性。
该深海真菌CCTCC M 2015628菌株具有如下分子生物学特征：
ITS rDNA序列信息如下所示(GeneBank登录号：FR822773.1)：
GCTGCCTCCGGGCGCCCACCTCCCACCCGTGACTACCTAACACTGTTGCTTCGGCGGGGAGCCCTCTCGGGGGCGAGCCGCCGGGGACTACTGAACTTCATGCCTGAGAGTGATGCAGTCTGAGTCTGAATATAAAATCAGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAACTGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCCCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGTGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCGATTTAGGGCCGGCCGGGCGCCAGCCGACGTCCAACCATTTCTTCAGGTGACCTCGGATCAG(SEQ ID NO.1)。
经过采用多种分离纯化的手段，在深海真菌CCTCC M 2015628的发酵培养物中分离出2种环二肽类化合物，式(I)和式(Ⅱ)是已知化合物，这2种类化合物结构如下：
对所述环二肽类化合物进行一氧化氮(NO)产生抑制活性测定，实验浓度为100μg/ml时，对LPS诱导BV2细胞释放NO具有明显的抑制活性，抑制率高于50％，且对应的细胞存活率均是100％，表明此环二肽类在这种浓度下具有一定的NO抑制活性，并且对细胞无毒性，将所述环二肽类化合物用于抑制一氧化氮产生的药物的制备，更进一步地，可用于抗炎活性及因炎症导致的其他类型疾病(如神经退行性疾病、癌症等)药物的制备。
具体地，本发明中提供所述真菌培养物的提取物的制备方法，主要分为两个部分：一是利用深海真菌CCTCC M 2015628发酵得到发酵培养物；二是从深海真菌CCTCC M2015628发酵培养物中提取纯化得到环二肽类化合物。
其中，利用深海真菌CCTCC M 2015628发酵获取所述真菌培养物的提取物的方法，具体包括以下步骤：
一、种子培养：
将低温保藏的深海真菌菌种CCTCC M 2015628复苏后，将此菌株接入到上述种子培养基中，于27～29℃、220r/min转速下摇床培养47～49小时得到种子培养液；
其中，种子培养基的配方为：葡萄糖1.9～2.1％，蛋白胨0.9～1.1％，酵母提取物0.4～0.6％，海盐2～4％，经121℃高压灭菌20分钟。
二、发酵培养：
将种子培养液接种到液体培养基中，室温静置避光培养14～16天，获得深海真菌CCTCC M 2015628的发酵培养物；
其中，液体培养基的成分包括海盐、去离子水、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物，其中，葡萄糖1.9～2.1％，蛋白胨0.9～1.1％，酵母提取物0.4～0.6％，海盐2～4％。具体的制备方法为：称取海盐、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物溶于去离子水中，待完全溶解后，调节PH至7.4～7.6，经121℃高压灭菌30分钟。按照每5mL种子培养液配245～255ml液体培养基的比例接种。
按照上述方法发酵后，就可以得到含有所述环二肽类化合物的深海真菌CCTCC M2015628的发酵培养物，为了获取所述环二肽类化合物，还需要进一步提取分离。本发明中还提供利用深海真菌CCTCC M 2015628发酵物提取纯化所述环二肽类化合物的方法，具体包括以下步骤：
超声萃取：将深海真菌CCTCC M 2015628的发酵培养物用乙酸乙酯超声萃取，萃取液在低于50℃下减压浓缩得发酵液浸膏；重复前述萃取步骤数次，合并发酵液浸膏；
分子筛层析：将发酵液浸膏后经Sephadex LH-20开放柱，用3L氯仿-甲醇1:1的洗脱剂洗脱，第1L洗脱剂为组分1，第2L洗脱剂为组分2，第3L洗脱剂为组分3，选取具有抗一氧化氮活性的组分2；
硅胶柱层析分离：将组分2拌入硅胶后装硅胶柱，洗脱溶剂梯度为环己烷-乙酸乙酯体积比100：0，97：3，95：5，9：1，8：2，7：3，6：4，0：100。每个梯度1.5升洗脱剂，经TLC分析共得到21个组分，其中活性组分W2-2-14 (环己烷-乙酸乙酯体积比7:3)、W2-2-16(环己烷-乙酸乙酯体积比6:4)需用反向HPLC柱进一步分离纯化；
反向HPLC分离纯化：组分W2-2-14用HPLC分离纯化，0-30min内50％的甲醇等浓度洗脱，收集后即可得到纯化的式(I)环二肽类化合物(190mg，td＝8.3min)。
组分W2-2-16用HPLC分离纯化，0-20min内乙腈浓度由20％梯度上升到40％，收集后即可得到纯化的式(Ⅱ)环二肽类化合物(90mg，td＝7.0min)。
其中，所述超声萃取过程中，按照每5mL种子培养液配245～255mL的乙酸乙酯比例添加乙酸乙酯。所述硅胶柱层析分离过程中，所用硅胶为200-300目，洗脱溶剂梯度为环己烷-乙酸乙酯体积比100：0，97：3，95：5，9：1，8：2，7：3，6：4，0：100。
以下通过具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1：真菌培养物的提取物的制备和结构鉴定
一、真菌培养物的提取物的制备
1.种子培养：
(1)配制种子培养基：葡萄糖2.1％，蛋白胨1.9％，酵母提取物0.6％，海盐2.5％，经121℃高压灭菌20分钟，获得灭菌的种子培养基；
(2)种子的培养：低温保藏的深海真菌CCTCC M 2015628经复苏后，将此菌株接入到上述种子培养基中，于29℃、220r/min转速下摇床培养49小时得到种子培养液。
2.发酵培养：
(1)配制发酵培养基(液体培养基)：称取海盐、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物溶于去离子水中，待完全溶解后，调节PH至7.6，经121℃高压灭菌30分钟。按照每5mL种子培养液配255ml液体培养基的比例接种，获得灭菌的发酵培养基。
(2)发酵培养：
在超净的工作台中，将5mL种子培养液接入装有255ml液体培养基的1000mL的锥形瓶中，总共160瓶。室温静置避光培养14天，获得深海真菌CCTCC M 2015628的发酵培养物。
3.提取分离：
将上述每瓶固体发酵液用255ml的乙酸乙酯超声萃取，萃取液在低于50℃下减压浓缩得发酵液浸膏，反复萃取3次，合并得到发酵液浸膏16.0克。该发酵液浸膏经SephadexLH-20开放柱，用氯仿-甲醇(1:1)洗脱剂等浓度洗脱得到3个组分。选取组分2拌入200-300的硅胶后装硅胶柱，经硅胶柱层析分离，采用环己烷-乙酸乙酯(体积比100：0，97：3，95：5，9：1，8：2，7：3，6：4，0：100)梯度洗脱，经TLC分析，减压浓缩后，相应的得到21个馏分。组分W2-2-14用HPLC分离纯化，0-30min内50％的甲醇等浓度洗脱，收集后即可得到纯化的式(I)环二肽类化合物(190mg，td＝8.3min)。
组分W2-2-16用HPLC分离纯化，0-20min内乙腈浓度由20％梯度上升到40％，收集后即可得到纯化的式(Ⅱ)环二肽类化合物(90mg，td＝7.0min)。
二、环二肽类化合物的相对结构鉴定
对上述步骤中所得到的环二肽类化合物进行结构分析测试，得到以下数据：
式(I)化合物，Cyclopenin，黄色油状物；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)和13C NMR(100MHz，DMSO-d6)数据见如下表1。
表1：式(I)化合物的NMR数据
(600/125MHz，DMSO-d6，TMS为内标，J in Hz,δin ppm)
式(Ⅱ)化合物，Cyclopenol，无色固体；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)和13C NMR(125MHz，DMSO-d6)数据见如下表2
表2：式(Ⅱ)化合物的NMR数据
(600/125MHz，DMSO-d6，TMS为内标，J in Hz,δin ppm)
实施例2：对实施例1所得到的环二肽类化合物的抗炎活性的实验
本实施例中，抗炎活性检测包括三部分：
(1)亚硝酸盐标准曲线的测量；(2)检测NO的产生量；(3)MTT法检测样品对细胞的毒性。
(1)亚硝酸盐标准曲线的测量：
将0.1M的亚硝酸盐溶液用缓冲液稀释到100μM，取100μM的亚硝盐溶液1ml。在96孔板上选定3排孔，分别向B-H的孔内加入50μl的缓冲液，A排孔 中分别加入50μl的100μM的亚硝酸盐溶液。按照A-H的顺序将亚硝酸盐2倍稀释，即依次从上一排孔中取50μl的溶液加入下一排孔，最终A-H的孔中亚硝酸盐的浓度依次是100,50,25,12.5,6.25,3.13和1.56μM，每一个孔中的溶液体积均为50μl。最后以OD值为纵坐标，亚硝酸盐的浓度为横坐标做出亚硝酸盐的标准曲线。
(2)测定BV2细胞经样品处理NO的产生量：
将BV2细胞传代接种于96孔板含1％的双抗(1％100U/mL盘尼西林和100μg/mL链霉素)，10％血清的DMEM高糖培养基中，细胞数目为1×105个细胞/孔，于37℃、5％的CO2细胞培养箱中贴壁培养4-6h后，弃去上清液，换成无血清培养基并分别加入不同浓度的样品孵育2h，接着每空加入500ng/mL LPS于37℃、5％的CO2细胞培养箱中培养24h。然后，从每孔培养基上清液中取出50μL细胞悬液置于另一块96孔板中。向各孔中加入50μL磺胺(Sulfanilamide，SUL)试剂，避光孵育5min后，再加入50μL萘基乙烯基二(N-1-naphthylethylenediamine dihydrochloride，NED)试剂，然后，用酶标仪在545nm处检测其吸光值。
待测样品在100μM/ml、50μM/ml和10μM/ml梯度浓度下的NO抑制率。实验结果见表3。
(3)MTT法检测样品对细胞的毒性：
在上述培养板每孔中加入MTT溶液(终浓度200μg/mL)，置于5％二氧化碳培养箱中继续培养4h后，弃去上清，吸干残留液体，加入DMSO 150μL，振摇10min使生成的甲瓒结晶充分溶解后，以630nm为参比波长在570nm下测定吸光值。
表3环二肽类化合物对于BV2细胞NO产生抑制率
上述实验结果表明，本发明的真菌培养物的提取物——环二肽类化合物具有抑制一氧化氮(NO)产生的活性，表现出一定的抗炎活性。当环二肽类化合物实验浓度为100μM/ml时，2种化合物的抑制率分别是90.20％，87.90％；实验浓度为50μM/ml时，2种化合物的抑制率分别是69.13％，71.07％，当环二肽类化合物实验浓度为10μM/ml时，2种化合物的抑制率分别是55.73％，58.97％；对应的细胞存活率均是100％，表明此环二肽类化合物在这三种浓度下具有一定的NO抑制活性，并且对细胞无毒性。
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
参考文献：
[1]Noriyasu Ishikawa,Hidenori Tanaka,Fumi Koyama,Hiroshi Noguchi,ClayC.C.Wang,Kinya Hotta,and Kenji Watanabe.Nematicidal Alkaloids and RelatedCompounds Produced by the Fungus Penicilliumcf.Simplicissimum.Angew.Chem.Int.Ed.2014,53,12880–12884
[2]Leith J.Fremlin,Andrew M.Piggott,Ernest Lacey,andRobert.J.Capon.Cottoquinazoline A and Cotteslosins A and B,Metabolites froman Australian Marine-Derived Strain of AspergillusWersicolor.J.Nat.Prod.2009,72,666–670
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳大学
<120> 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用
<130> 15PA01601CN
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 481
<212> DNA
<213> Aspergillus sp. SCSIOW2菌株 ITS rDNA序列
<400> 1
gctgcctccg ggcgcccacc tcccacccgt gactacctaa cactgttgct tcggcgggga 60
gccctctcgg gggcgagccg ccggggacta ctgaacttca tgcctgagag tgatgcagtc 120
tgagtctgaa tataaaatca gtcaaaactt tcaacaatgg atctcttggt tccggcatcg 180
atgaagaacg cagcgaactg cgataagtaa tgtgaattgc agaattcagt gaatcatcga 240
gtctttgaac gcacattgcg ccccctggca ttccgggggg catgcctgtc cgagcgtcat 300
tgctgcccat caagcccggc ttgtgtgttg ggtcgtcgtc cccccccggg ggacgggccc 360
gaaaggcagc ggcggcaccg tgtccggtcc tcgagcgtat ggggctttgt cacccgctcg 420
atttagggcc ggccgggcgc cagccgacgt ccaaccattt cttcaggtga cctcggatca 480
g 481
Claims (10)
1.一种深海真菌Aspergillus sp.SCSIOW2，其保藏编号为：CCTCC M 2015628。
2.一种真菌培养物的提取物，其特征在于，所述提取物是从保藏编号为CCTCC M2015628的深海真菌的发酵培养液的乙酸乙酯萃取液中浓缩、分离得到的环二肽类化合物.
3.如权利要求2所述的真菌培养物的提取物，其特征在于，所述环二肽类化合物包括以下化合物中的一种或两种，化合物的结构式如下所示：
4.如权利要求2～3任意一项所述的真菌培养物的提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将保藏编号为CCTCC M 2015628的深海真菌接种到种子培养基中，27～29℃培养47～49小时，得到种子培养液；
将种子培养液接种到液体培养基中，室温静置避光培养15～16天，获得所述深海真菌的发酵培养物，其中含有环二肽类化合物；
其中，种子培养基的配方为：葡萄糖1.9～2.1％，蛋白胨0.9～1.1％，酵母提取物0.4～0.6％，海盐2～4％；
液体培养基的成分包括海盐、去离子水、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物，其中，葡萄糖1.9～2.1％，蛋白胨0.9～1.1％，酵母提取物0.4～0.6％，海盐2～4％。
5.如权利要求4所述的真菌培养物的提取物的制备方法，其特征在于，所述液体培养基的制备方法为按比例称取海盐、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物溶于去离子水中，待完全溶解后，调节PH至7.4～7.6。
6.如权利要求4所述的真菌培养物的提取物的制备方法，其特征在于，所述的真菌培养物的提取物的制备方法还包括以下步骤：
将所述深海真菌的发酵培养物用乙酸乙酯超声萃取，萃取液在低于50℃下减压浓缩得发酵液浸膏；重复前述萃取步骤2次以上，合并发酵液浸膏；
将发酵液浸膏后经Sephadex LH-20开放柱，用1:1的氯仿-甲醇洗脱剂等浓度洗脱，选取具有抗一氧化氮活性的组分2；
将组分2拌入硅胶后装硅胶柱，以环己烷-乙酸乙酯为洗脱溶剂梯度洗脱，经TLC分析选取组分W2-2-14、W2-2-16用反向HPLC柱进一步分离纯化；
组分W2-2-14用HPLC分离纯化，0-30min内50％的甲醇等浓度洗脱，收集后即可得到纯化的式(I)环二肽类化合物；
组分W2-2-16用HPLC分离纯化，0-20min内乙腈浓度由20％梯度上升到40％，收集后即可得到纯化的式(Ⅱ)环二肽类化合物；
所述组分W2-2-14由环己烷-乙酸乙酯体积比7:3的洗脱剂洗脱后得到，所述组分W2-2-16由环己烷-乙酸乙酯体积比6:4的洗脱剂洗脱后得到。
7.如权利要求6所述的真菌培养物的提取物的制备方法，其特征在于，所述超声萃取过程中，按照每5mL种子培养液配245～255mL的乙酸乙酯比例添加乙酸乙酯。
8.如权利要求2～3任意一项所述的真菌培养物的提取物的应用，其特征在于，所述应用为将所述环二肽类化合物用于抑制一氧化氮产生的药物的制备。
9.如权利要求8所述的真菌培养物的提取物的应用，其特征在于，所述应用为将所述环二肽类化合物用于抗炎活性药物的制备。
10.如权利要求8所述的真菌培养物的提取物的应用，其特征在于，所述应用为将所述环二肽类化合物用于治疗阿尔茨海默病的药物的制备。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610936208.3A CN106497797B (zh) | 2016-11-01 | 2016-11-01 | 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610936208.3A CN106497797B (zh) | 2016-11-01 | 2016-11-01 | 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106497797A true CN106497797A (zh) | 2017-03-15 |
| CN106497797B CN106497797B (zh) | 2020-02-07 |
Family
ID=58319088
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610936208.3A Active CN106497797B (zh) | 2016-11-01 | 2016-11-01 | 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106497797B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108342328A (zh) * | 2018-04-10 | 2018-07-31 | 贵州省烟草公司遵义市公司 | 从海藻中筛选的抑草真菌、其提取物及应用 |
| CN111018802A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-04-17 | 湖北大学 | 具有抗帕金森氏症的化合物、制备方法及其应用 |
| CN112042662A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-08 | 中国科学院南海海洋研究所 | 圆弧菌素化合物在制备海洋污损生物防除剂中的应用 |
| CN112189666A (zh) * | 2020-09-17 | 2021-01-08 | 中国科学院南海海洋研究所 | 圆弧菌醇化合物在制备海洋污损生物防除剂中的应用 |
| CN112707890A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-27 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 吲哚二酮哌嗪衍生物及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用 |
| CN113265337A (zh) * | 2021-06-17 | 2021-08-17 | 华南农业大学 | 一株海洋杂色曲霉及其分离培养方法和应用 |
| CN114410477A (zh) * | 2021-11-29 | 2022-04-29 | 深圳大学 | 一种诱导型no合成酶的抑制剂及其生产菌株和制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105441504A (zh) * | 2015-11-19 | 2016-03-30 | 浙江工业大学 | 一种环二肽类化合物的制备方法 |
| CN105503531A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-04-20 | 深圳大学 | 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 |
-
2016
- 2016-11-01 CN CN201610936208.3A patent/CN106497797B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105441504A (zh) * | 2015-11-19 | 2016-03-30 | 浙江工业大学 | 一种环二肽类化合物的制备方法 |
| CN105503531A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-04-20 | 深圳大学 | 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| XIANG ZHOU ET AL: "A novel cyclic dipeptide from deep marine-derived fungus Aspergillus sp. SCSIOW2", 《NATURAL PRODUCT RESEARCH》 * |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108342328A (zh) * | 2018-04-10 | 2018-07-31 | 贵州省烟草公司遵义市公司 | 从海藻中筛选的抑草真菌、其提取物及应用 |
| CN108342328B (zh) * | 2018-04-10 | 2021-03-12 | 贵州省烟草公司遵义市公司 | 从海藻中筛选的抑草真菌、其提取物及应用 |
| CN111018802A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-04-17 | 湖北大学 | 具有抗帕金森氏症的化合物、制备方法及其应用 |
| CN112042662A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-08 | 中国科学院南海海洋研究所 | 圆弧菌素化合物在制备海洋污损生物防除剂中的应用 |
| CN112189666A (zh) * | 2020-09-17 | 2021-01-08 | 中国科学院南海海洋研究所 | 圆弧菌醇化合物在制备海洋污损生物防除剂中的应用 |
| CN112189666B (zh) * | 2020-09-17 | 2022-03-04 | 中国科学院南海海洋研究所 | 圆弧菌醇化合物在制备海洋污损生物防除剂中的应用 |
| CN112042662B (zh) * | 2020-09-17 | 2022-03-04 | 中国科学院南海海洋研究所 | 圆弧菌素化合物在制备海洋污损生物防除剂中的应用 |
| CN112707890A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-27 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 吲哚二酮哌嗪衍生物及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用 |
| CN112707890B (zh) * | 2020-12-29 | 2022-01-14 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 吲哚二酮哌嗪衍生物及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用 |
| CN113265337A (zh) * | 2021-06-17 | 2021-08-17 | 华南农业大学 | 一株海洋杂色曲霉及其分离培养方法和应用 |
| CN114410477A (zh) * | 2021-11-29 | 2022-04-29 | 深圳大学 | 一种诱导型no合成酶的抑制剂及其生产菌株和制备方法 |
| CN114410477B (zh) * | 2021-11-29 | 2023-10-10 | 深圳大学 | 一种诱导型no合成酶的抑制剂及其生产菌株和制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106497797B (zh) | 2020-02-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106497797A (zh) | 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 | |
| CN107298671B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸h及制备抗人结肠癌药物的应用 | |
| CN105503531B (zh) | 一种真菌培养物的提取物及其制备方法和应用 | |
| CN109970538A (zh) | 一类海洋真菌来源的二倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用 | |
| CN108315264A (zh) | 一种海漆内生真菌来源的聚酮化合物及其在制备抗炎药物中的应用 | |
| CN106967024A (zh) | 一种α‑吡喃酮衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN107686816A (zh) | 一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用 | |
| CN110862371B (zh) | 多环聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 | |
| CN113603594B (zh) | 倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN114213428B (zh) | 一种吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用 | |
| CN111747955B (zh) | 海洋抗胶质瘤活性物质异壁咔啉碱a及制备和用途 | |
| CN111909021B (zh) | Sorbicillinoids化合物及其制备方法与应用 | |
| CN107739362A (zh) | 源于杂色曲霉蒽醌类化合物及制备抗人食管癌药物的应用 | |
| CN107603922A (zh) | 海绵共生链霉菌及其发酵生产星形孢菌素的方法和应用 | |
| CN107739361A (zh) | 源于杂色曲霉蒽醌类化合物及制备抗人结肠癌药物的应用 | |
| CN104804020A (zh) | 硫代二酮哌嗪类化合物及其制备方法和用途 | |
| KR101999273B1 (ko) | 고순도 코디세핀의 제조 방법, 고함량의 코디세핀을 함유하는 동충하초 및 그로부터 얻어지는 고순도 코디세핀 | |
| CN102452916B (zh) | 一类芳香聚酮及其提取方法和应用 | |
| CN108299274B (zh) | 一种天然吲哚，其制备方法及应用 | |
| CN111440200A (zh) | 一种混源萜生物碱及其抗寨卡病毒用途 | |
| CN107973803B (zh) | 一种七元内酯并呋喃衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN114702468B (zh) | 一种二氢苯并呋喃类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN114410477B (zh) | 一种诱导型no合成酶的抑制剂及其生产菌株和制备方法 | |
| CN102517221B (zh) | 化合物的制备方法及其应用 | |
| CN108017528A (zh) | 一种萘类化合物及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20170315 Assignee: Foshan Yitong Intelligent Technology Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2022980024278 Denomination of invention: Extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20221201 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20170315 Assignee: Shenzhen Bangqi Technology Innovation Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2022980026142 Denomination of invention: Extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20221211 Application publication date: 20170315 Assignee: Shenzhen Dongfang Renshou Life Technology Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2022980025926 Denomination of invention: Extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20221211 Application publication date: 20170315 Assignee: SHENZHEN MIGOU NETWORK TECHNOLOGY Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2022980026323 Denomination of invention: Extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20221212 Application publication date: 20170315 Assignee: Shenzhen No.7 Network Technology Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2022980026329 Denomination of invention: Extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20221212 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20170315 Assignee: Shenzhen Haichuang Marine Technology Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2022980026596 Denomination of invention: Extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20221212 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20170315 Assignee: SHENZHEN TAIFENG DONGFANG OCEAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2023980033970 Denomination of invention: An extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20230322 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20170315 Assignee: Shenzhen kangruihua Medical Technology Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2023980045648 Denomination of invention: Extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20231103 Application publication date: 20170315 Assignee: Shenzhen Ruikanghua Medical Technology Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2023980045608 Denomination of invention: Extract of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20231103 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20170315 Assignee: Shenzhen Ruisheng Bioengineering Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2023980047944 Denomination of invention: Extraction of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20231123 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20170315 Assignee: Guangdong Whale Biotechnology Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2023980048812 Denomination of invention: Extraction of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20231129 Application publication date: 20170315 Assignee: Guangdong Bonn Life Sciences Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2023980048412 Denomination of invention: Extraction of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20231127 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20170315 Assignee: Tomorrow Star Pharmaceutical Biotechnology Research and Development (Zhaoqing City) Co.,Ltd. Assignor: SHENZHEN University Contract record no.: X2024980003680 Denomination of invention: Extraction of a fungal culture and its preparation method and application Granted publication date: 20200207 License type: Common License Record date: 20240329 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |