CN110862371B - 多环聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 - Google Patents
多环聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110862371B CN110862371B CN201911137086.1A CN201911137086A CN110862371B CN 110862371 B CN110862371 B CN 110862371B CN 201911137086 A CN201911137086 A CN 201911137086A CN 110862371 B CN110862371 B CN 110862371B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- preparation
- component
- lithocarprinols
- lithocarpiols
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 title claims abstract description 11
- 229920001470 polyketone Polymers 0.000 title claims abstract description 11
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 title abstract description 11
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 20
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 17
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 10
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 9
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 9
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 9
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 9
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 claims description 8
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 8
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims description 8
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 7
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 6
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 241001480007 Phomopsis Species 0.000 claims 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 abstract description 5
- 241001633106 Lithocarpus Species 0.000 abstract 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 22
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 22
- 241000461379 Diaporthe lithocarpus Species 0.000 description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 3
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000001026 1H--1H correlation spectroscopy Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001018064 Homo sapiens Lysosomal-trafficking regulator Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102100033472 Lysosomal-trafficking regulator Human genes 0.000 description 1
- 244000038561 Modiola caroliniana Species 0.000 description 1
- 235000010703 Modiola caroliniana Nutrition 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000003592 biomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000001434 methanylylidene group Chemical group [H]C#[*] 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N pyridine Substances C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 pyridine compound Chemical class 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D319/10—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes
- C07D319/14—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了多环聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。本发明从印度海洋真菌Phomopsis lithocarpus FS508的固体发酵培养物中分离得到2个多环聚酮类新骨架化合物LithocarpinolsC和LithocarpinolsD，本发明通过实验发现，化合物LithocarpinolsC和LithocarpinolsD具有显著的抗菌活性，可以用于制备抗菌药物，具有良好的应用开发前景。因此，本发明为研究与开发新的抗菌药物提供了候选化合物，为开发利用海洋真菌资源提供科学依据。
Description
技术领域：
本发明属于医药生物技术领域，具体涉及化合物多环聚酮类新骨架化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。
背景技术：
海洋约占地球表面积的71％，蕴藏丰富的微生物资源，其中微生物占海洋生物数量的90％，控制着所有保持地球生态系统平衡的重要生物和生化循环，已有的研究数据表明海洋微生物资源库远比陆地微生物资源库大，而且目前还尚未被人类充分发掘和利用，可见海洋微生物是人类丰富的药源生物资源。
海洋拥有特殊的环境，尤其是深海海洋环境，栖息于海洋环境的海洋微生物为了适应这些高盐、弱碱性、低营养、缺氧等特殊环境，因此海洋微生物的次级代谢产物具有独特的结构类型和丰富多样的生物活性。这些新化学实体不仅能揭示新的生物合成途径，而且还能启发人们对这些化学实体进行仿生合成和生物活性研究。因此，海洋微生物次生代谢产物具有重要的科研和应用价值，是药物开发的重要资源。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供一类具有抗菌活性的多环聚酮类新骨架化合物。
本发明的多环聚酮类新骨架化合物，结构如式(I)所示：
其中1为化合物LithocarpinolsC、2为化合物LithocarpinolsD。
本发明的第二个目的是提供化合物LithocarpinolsC和Lithocarpinols D的制备方法，所述的化合物LithocarpinolsC和Lithocarpinols D是从印度洋深海沉积物中分离得到的真菌 Phomopsis lithocarpus FS508的固体发酵培养物中制备得到。
具体步骤如下
a.制备Phomopsis lithocarpus FS508的发酵培养物，将固体发酵培养物经过乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏；
b.将浸膏过硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯作为流动相，用石油醚-乙酸乙酯体积比 100:0-1:2梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积比2:1梯度洗脱得到的组分Fr.3，组分Fr.3经反向硅胶柱层析，以甲醇/水作为流动相，以体积分数50％-100％线性梯度洗脱，收集体积分数80％乙醇的梯度洗脱得到的组分Fr.3-3，组分Fr.3-3经过正相柱层析，以正己烷-乙酸乙酯作为流动相，从正己烷-乙酸乙酯体积比5:1-3:1梯度洗脱，收集正己烷-乙酸乙酯体积比5:1 梯度洗脱得到的组分Fr.3-3-1，再经纯化得到LithocarpinolsC和Lithocarpinols D。
所述的经纯化得到LithocarpinolsC和Lithocarpinols D优选为：组分Fr.3-3-1经过高效液相色谱柱纯化，以80％的乙腈/水作为流动相洗脱，色谱柱为YMC-pack ODS-AQ半制备柱，流速为2mL/min，从Rt值为27min收集得到的组分Fr.3-3-1-15用高效液相色谱柱纯化，以 70％的乙腈/水作为流动相洗脱，高效液相色谱柱为色谱柱YMC-pack ODS-AQ半制备柱，流速为2mL/min，收集Rt值为20.5min的组分Fr.3-3-1-15-2和Rt值为22min的组分，Rt值为 22min的组分即为LithocarpinolsC；
组分Fr.3-3-1-15-2用高效液相色谱柱纯化，以正己烷和异丙醇比例为7:3的混合溶剂作为流动相洗脱，色谱柱S-Chiral半制备柱，流速为2mL/min，收集Rt为19min的组分，得到 Lithocarpinols D。
所述的制备Phomopsis lithocarpus FS508的固体发酵培养物是通过以下方法制备的：将活化的海洋真菌Phomopsis lithocarpus FS508接入种子培养基中，28℃，200rpm，培养84h制得种子液，将按10％的接种量(v/m)接入到固体发酵培养基中，28℃，静置培养30d，制得 Phomopsis lithocarpus FS508的固体发酵培养物；所述的种子培养基每升是通过以下方法配制的：用水煮200g的马铃薯，过滤得马铃薯汁，再加入葡萄糖20g、粗海盐3g、KH2PO4 3g、 MgSO4 1.5g和VitB1 10mg，用水补足至1000mL，121℃，灭菌30min；所述的固体发酵培养基通过以下方法配制的：将250g大米和300mL水装入3L的三角瓶内，121℃，灭菌30min。
本发明的第三个目的是提供Phomopsis lithocarpus FS508在制备所述的化合物LithocarpinolsC或Lithocarpinols D中的应用。
本发明通过抗菌活性测试发现，在选择100μmol/L、50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L、 6.25μmol/L、3.12μmol/L、1.56μmol/L 7个作用浓度下对金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌或白色念珠菌或黑曲霉或黄曲霉进行最低抑制浓度测定，确定LithocarpinolsC对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、黄曲霉的最低抑制浓度(IC50值)分别为25μmol/L、12.5μmol/L、50μmol/L、25μmol/L、50μmol/L，化合物Lithocarpinols D对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、黄曲霉的抑最低抑制浓度(IC50值)分别为50μmol/L、 25μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、50μmol/L。结果表明：本发明的化合物LithocarpinolsC、 Lithocarpinols D具有显著的抗菌活性，能用于制备抗菌药物。
本发明的第四个目的是提供所述的化合物LithocarpinolsC或Lithocarpinols D在制备抗菌药物中的应用。
优选，所述的化合物LithocarpinolsC或Lithocarpinols D在制备抗金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉或黄曲霉药物中的应用。
本发明的第五个目的是提供一种抗菌药物，含有所述的化合物LithocarpinolsC或 Lithocarpinols D作为有效成分。
所述的抗菌药物为抗金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉或黄曲霉的药物。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
本发明通过Phomopsis lithocarpus FS508的发酵培养、发酵产物的分离纯化和结构鉴定，获得了2个具有抗菌活性的多环聚酮类新骨架化合物，命名为LithocarpinolsC、Lithocarpinols D。化合物LithocarpinolsC或Lithocarpinols D对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、黄曲霉具有良好的抑制活性，因此，本发明为抗细菌新药研发提供候选化合物，为开发利用海洋真菌资源提供科学依据。
所述的Phomopsis lithocarpus FS508是从印度洋深海沉积物中分离得到。
本发明的Phomopsis lithocarpus FS508于2018年8月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为：GDMCCNo： 60433。
附图说明：
图1是化合物1(Lithocarpinols C)的HRESIMS谱。
图2是化合物1(Lithocarpinols C)的1H-NMR谱
图3是化合物1(Lithocarpinols C)的13C-NMR谱。
图4是化合物1(Lithocarpinols C)的1H-1H COSY谱。
图5是化合物1(Lithocarpinols C)的HSQC谱。
图6是化合物1(Lithocarpinols C)的HMBC谱。
图7是化合物1(Lithocarpinols C)的UV谱。
图8是化合物1(Lithocarpinols C)的CD谱。
图9是化合物1(Lithocarpinols C)的IR谱。
图10是化合物2(Lithocarpinols D)的HRESIMS谱。
图11是化合物2(Lithocarpinols D)的1H-NMR谱
图12是化合物2(Lithocarpinols D)的13C-NMR谱。
图13是化合物2(Lithocarpinols D)的1H-1H COSY谱。
图14是化合物2(Lithocarpinols D)的HSQC谱。
图15是化合物2(Lithocarpinols D)的HMBC谱。
图16是化合物2(Lithocarpinols D)的UV谱。
图17是化合物2(Lithocarpinols D)的CD谱。
图18是化合物2(Lithocarpinols D)的IR谱。
图19是化合物1和化合物2的1H-1H COSY、HMBC相关图。
具体实施方式：
以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：化合物的制备：
将活化的海洋真菌Phomopsis lithocarpus FS508接入种子培养基中，28℃，200rpm，培养84h制得种子液，将种子液按10％的接种量(v/m ml/g)接入到固体发酵培养基中，28℃，静置培养30d，而制得Phomopsis lithocarpus FS508的固体发酵培养物。
所述的种子培养基每升是通过以下方法配制的：用适量水煮200g的马铃薯，过滤得马铃薯汁，再加入葡萄糖20g、粗海盐3g、KH2PO4 3g、MgSO4 1.5g和VitB1 10mg，用水补足至1000mL，121℃，灭菌30min；
所述的固体发酵培养基通过以下方法配制的：将250g大米和300mL水装入3L的三角瓶内，121℃，灭菌30min。
将固体发酵培养物经过乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏；将浸膏过硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯作为流动相，用石油醚-乙酸乙酯体积比100:0-1:2梯度洗脱得到5个组分Fr.1～Fr.5；从石油醚-乙酸乙酯体积比2:1梯度洗脱得到的组分Fr.3经反向硅胶柱层析，以甲醇/水作为流动相，以体积分数50％-100％线性梯度洗脱，得到4个组分Fr.3-1～ Fr.3-4；从体积分数80％乙醇的梯度洗脱得到的组分Fr.3-3经过正相柱层析，以正己烷-乙酸乙酯作为流动相，从正己烷-乙酸乙酯体积比5:1-3:1梯度洗脱得到2个组分Fr.3-3-1～Fr.3-3-2；从正己烷-乙酸乙酯体积比5:1梯度洗脱得到的组分Fr.3-3-1经过高效液相色谱柱纯化，以80％的乙腈/水作为流动相洗脱，色谱柱YMC-pack ODS-AQ半制备柱(250×10mm,5μm,维美希公司，日本)，流速为2mL/min，收集得到17个组分Fr.3-3-1-1～Fr.3-3-1-17；从Rt值为 27min收集得到的组分Fr.3-3-1-15用高效液相色谱柱纯化，以70％的乙腈/水作为流动相洗脱，高效液相色谱柱为色谱柱YMC-pack ODS-AQ半制备柱(250×10mm,5μm,维美希公司，日本)，流速为2mL/min，收集Rt值为20.5min的组分Fr.3-3-1-15-2和Rt值为22min的组分，Rt值为22min的组分即为化合物1；
组分Fr.3-3-1-15-2用高效液相色谱柱纯化，以正己烷和异丙醇比例为7:3的混合溶剂作为流动相洗脱，色谱柱S-Chiral半制备柱(250×10mm,5μm,华谱科技有限公司，北京)，流速为2mL/min，收集Rt为19min的组分，得到化合物2。
化合物的结构鉴定：
化合物1经质谱和核磁共振波谱分析(如附图1～9所示)，其结构鉴定如下：
化合物1具有以下理化和波谱特性：化合物1为白色粉末；根据HERESIMS(m/z409.2005 [M+H]+，计算值为409.2010)确定化合物的分子式为C25H29O5，不饱和度为12；1H-NMR谱显示一个典型的四取代苯环信号[δH 6.77(1H,d,J＝8.3Hz,H-4)，7.28(1H,d,J＝8.3Hz,H-5)] 以及5个甲基信号[δH 0.97(3H,s),1.12(3H,s),1.31(3H,s),1.50(3H,s),2.28(3H,s)]。13C-NMR 显示有25个碳信号(表1)，包括1个羰基，5个甲基，2个亚甲基，6个次甲基，以及11个季碳。通过进一步分析其COSY、HSQC以及HMBC等二维谱图确定化合物1的平面结构，通过计算ECD确定化合物1的绝对构型。
化合物2经质谱和核磁共振波谱分析(如附图10～附图18所示)，其结构鉴定如下：
化合物2为白色粉末；根据HERESIMS(m/z 409.2005[M+H]+,计算值为409.2010)确定化合物的分子式为C25H29O5，不饱和度为12；通过分析其1D和2D谱图发现化合物2的谱图与化合物1的谱图具有很大的相似性，具有与化合物1相同的母核结构。通过分析化合物 2的相关谱图推测出化合物2与化合物1的区别在于1'位置C位置的空间构型不同。化合物2 的绝对构型是通过分析其NOESY谱及计算ECD进行确定的。
化合物1和化合物2的1H-1H COSY、HMBC相关图见图19；化合物1和化合物2的核磁数据(CD3COOD3,600MHz/150MHz,δinppm,J in Hz)见表1。
表1化合物1和2的核磁数据(CD3COOD3,600MHz/150MHz,δin ppm,J in Hz)
经文献检索，化合物1和化合物2为新骨架化合物，属于多环聚酮类新化合物，分别命名为LithocarpinolsC、Lithocarpinols D。
所述的多环聚酮类新骨架化合物，结构如式(I)所示：
化合物1为化合物LithocarpinolsC、2为化合物LithocarpinolsD。
实施例2：
采用刃天青染色法测试化合物LithocarpinolsC和Lithocarpinols D的抗菌活性将化合物LithocarpinolsC和Lithocarpinols D分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解并稀释至浓度为1000μmol/L、500μmol/L、250μmol/L、125μmol/L、62.5μmol/L、31.2μmol/L、15.6μmol/L。取对数生长期的供试细菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)用新鲜LB培养基，真菌白色念珠菌(Candida albicans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、黄曲霉(Aspergillus flavus)用PDA液体培养基调整菌液浓度为106个/mL，于96孔板中每孔加入180μL的菌液，并设空白对照孔，每孔分别加入上述浓度20μL的所述化合物溶液，阴性对照加20μL DMSO，每个处理做3次重复。细菌置37℃培养箱中培养24h，真菌置26℃培养箱中培养72h后，每孔加入浓度为0.2mg/mL的刃天青染色剂溶液20μL，37℃恒温箱中培养4h后，观察刃天青染色剂的颜色变化，以呈紫红色样品的最低浓度为最低抑制浓度 (MIC值)。
实验结果如表2所示：
表2：化合物LithocarpinolsC和Lithocarpinols D对细菌的最低抑制浓度(MIC值)
从表2实验结果可以看出：化合物LithocarpinolsC和Lithocarpinols D具有显著的抗菌活性，可用于制备抗菌药物，具有良好的应用开发前景。因此，本发明为研究与开发新的抗菌药物提供了候选化合物，为开发利用海洋真菌资源提供科学依据。
Claims (7)
1.多环聚酮类新骨架化合物，结构如式（І）中的任一所示：
式（I）
其中1为化合物LithocarpinolsC、2为化合物LithocarpinolsD。
2.一种权利要求1中的化合物LithocarpinolsC和Lithocarpinols D的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
a. 制备Phomopsis lithocarpus FS508的发酵培养物，将固体发酵培养物经过乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏；
b. 将浸膏过硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯作为流动相，用石油醚-乙酸乙酯体积比100:0-1:2梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积比2:1梯度洗脱得到的组分Fr.3，组分Fr.3经反向硅胶柱层析，以甲醇/水作为流动相，以体积分数50%-100%线性梯度洗脱，收集体积分数80%甲醇的梯度洗脱得到的组分Fr.3-3，组分Fr.3-3经过正相柱层析，以正己烷-乙酸乙酯作为流动相，从正己烷-乙酸乙酯体积比5:1-3:1梯度洗脱，收集正己烷-乙酸乙酯体积比5:1梯度洗脱得到的组分Fr.3-3-1，再经纯化得到LithocarpinolsC和LithocarpinolsD；
所述的经纯化得到LithocarpinolsC和Lithocarpinols D为：组分Fr.3-3-1经过高效液相色谱柱纯化，以80%的乙腈/水作为流动相洗脱，色谱柱为YMC-pack ODS-AQ半制备柱，流速为2 mL/min，从Rt值为27 min收集得到的组分Fr.3-3-1-15用高效液相色谱柱纯化，以70%的乙腈/水作为流动相洗脱，高效液相色谱柱为色谱柱YMC-pack ODS-AQ半制备柱，流速为2 mL/min，收集Rt值为20.5min 的组分Fr.3-3-1-15-2和Rt值为22min的组分，Rt值为22min的组分即为LithocarpinolsC；
组分Fr.3-3-1-15-2用高效液相色谱柱纯化，以正己烷和异丙醇比例为7:3的混合溶剂作为流动相洗脱，色谱柱S-Chiral半制备柱，流速为2 mL/min，收集Rt为19min的组分，得到Lithocarpinols D；
所述的制备Phomopsis lithocarpus FS508的固体发酵培养物是通过以下方法制备的：将活化的海洋真菌Phomopsis lithocarpus FS508接入种子培养基中，28℃，200 rpm，培养84 h制得种子液，将按10%的接种量v/m接入到固体发酵培养基中，28℃，静置培养30d，制得Phomopsis lithocarpus FS508的固体发酵培养物；所述的种子培养基每升是通过以下方法配制的：用水煮200 g的马铃薯，过滤得马铃薯汁，再加入葡萄糖20 g、粗海盐3 g、KH2PO4 3 g、MgSO4 1.5 g和VitB1 10 mg，用水补足至1000 mL，121℃，灭菌30 min；所述的固体发酵培养基通过以下方法配制的：将250 g大米和300 mL水装入3 L的三角瓶内，121℃，灭菌30 min；
所述的Phomopsis lithocarpus FS508的保藏编号为：GDMCC No：60433。
3. Phomopsis lithocarpus FS508在制备权利要求1中所述的化合物LithocarpinolsC或Lithocarpinols D中的应用，所述的Phomopsis lithocarpus FS508的保藏编号为：GDMCC No：60433。
4. 权利要求1中所述的化合物LithocarpinolsC或Lithocarpinols D 在制备抗菌药物中的应用。
5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的化合物LithocarpinolsC或Lithocarpinols D在制备抗金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉或黄曲霉药物中的应用。
6. 一种抗菌药物，其特征在于，含有权利要求1中所述的化合物LithocarpinolsC或Lithocarpinols D作为有效成分。
7.根据权利要求6所述的抗菌药物，其特征在于，所述的抗菌药物为抗金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉或黄曲霉的药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911137086.1A CN110862371B (zh) | 2019-11-19 | 2019-11-19 | 多环聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911137086.1A CN110862371B (zh) | 2019-11-19 | 2019-11-19 | 多环聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110862371A CN110862371A (zh) | 2020-03-06 |
| CN110862371B true CN110862371B (zh) | 2022-10-04 |
Family
ID=69655021
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911137086.1A Active CN110862371B (zh) | 2019-11-19 | 2019-11-19 | 多环聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110862371B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112691124A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-23 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 内生真菌a814提取物在制备抗细菌药物中的应用 |
| CN112852647B (zh) * | 2021-02-23 | 2022-06-07 | 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 一种适用于拟茎点霉fs508的过表达载体及其构建方法和应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108892658A (zh) * | 2018-08-24 | 2018-11-27 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 化合物lithocarpinol B及其制备方法和在制备抗真菌药物中的应用 |
| CN109336873A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-02-15 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 化合物lithocarolsA-F及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 |
-
2019
- 2019-11-19 CN CN201911137086.1A patent/CN110862371B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108892658A (zh) * | 2018-08-24 | 2018-11-27 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 化合物lithocarpinol B及其制备方法和在制备抗真菌药物中的应用 |
| CN109336873A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-02-15 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 化合物lithocarolsA-F及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Lithocarpins A-D: four tenellone-macrolide conjugated [4+2] hetero-adducts from the deep-sea derived fungus Phomopsis lithocarpus FS508;Jianlin Xu, et al;《Org. Chem. Front.》;20181231;第5卷;第1792-1797页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110862371A (zh) | 2020-03-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106518818B (zh) | 一种呋喃酮类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN108892658B (zh) | 化合物lithocarpinol B及其制备方法和在制备抗真菌药物中的应用 | |
| CN103910746B (zh) | 一类海洋真菌来源的Berkeleyones化合物及其制备方法和应用 | |
| CN110862371B (zh) | 多环聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 | |
| CN109232513B (zh) | 化合物lithocarpinols及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN109336873B (zh) | 化合物lithocarolsA-F及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN112592350B (zh) | 聚酮类化合物lithocarpin E-G及其制备方法和应用 | |
| CN106967024B (zh) | 一种α-吡喃酮衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN110003152A (zh) | 一种2(5h)-呋喃酮类衍生物及其制备方法和用途 | |
| CN109503414A (zh) | 一种含氮环橙花烷型倍半萜衍生物及其制备和应用 | |
| CN109020943A (zh) | 一种抗结核聚酮类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN103911407B (zh) | 一种海洋真菌来源的Azaphilone类二聚体化合物的制备方法及应用 | |
| CN106518643B (zh) | 一种环戊烯酮类化合物及其制备方法和用途 | |
| US11851692B2 (en) | Method for preparing an antimycin compound produced by Streptomyces sp.4-7 | |
| CN116354917A (zh) | 一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物dwt001及其制备和应用 | |
| CN113603594B (zh) | 倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN104804020B (zh) | 硫代二酮哌嗪类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN106565639B (zh) | 一种四氢呋喃类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN111808088B (zh) | 化合物tersaphilone B和E及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN111138446B (zh) | 二萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 | |
| CN114469908B (zh) | 一种抗鲍曼不动杆菌化合物stemphol的制备方法和应用 | |
| CN107739740A (zh) | 一种海洋真菌来源的Lasiodiplodins化合物的制备方法及应用 | |
| CN113651677B (zh) | 化合物eutyscoparins G及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 | |
| CN112107602B (zh) | 一对含双氮生物碱对映体及其制备和应用 | |
| CN113480557B (zh) | 聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 510070 No.56 courtyard, No.100 Xianlie Middle Road, Yuexiu District, Guangzhou City, Guangdong Province Patentee after: Institute of Microbiology, Guangdong Academy of Sciences Address before: 510070 No.56 courtyard, No.100 Xianlie Middle Road, Yuexiu District, Guangzhou City, Guangdong Province Patentee before: GUANGDONG INSTITUTE OF MICROBIOLOGY (GUANGDONG DETECTION CENTER OF MICROBIOLOGY) |