CN111138446B - 二萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了二萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。该类二萜类化合物(化合物1‑5)的结构式如式1‑5所示。该类化合物1‑5具有明显的抗大肠杆菌活性，其MIC分别为25.0μM(化合物1)、12.5μM(化合物2)、25.0μM(化合物3)、25.0μM(化合物4)及12.5μM(化合物5)。因此，本发明提供的深海真菌来源的二萜类化合物可用于制备抗菌药物。
Figure RE-DDA0002434644860000011

Description

二萜类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用
技术领域
本发明属于天然药物技术领域，具体涉及一类深海真菌来源的二萜类化合物及其制备方法和在制备治疗抗菌药物中的应用。
背景技术
陆生微生物长期以来一直是医药和农药上的重要资源，但近年来随着陆地资源的不断开发，筛选新的微生物资源、寻找新的活性代谢产物难度越来越大，且抗药性问题日益严重，使得新药的开发面临严峻挑战。海洋约占地球表面积的71％，蕴含丰富的微生物资源，特殊的海洋环境(低温、高压、高盐、高寒、寡营养等)及海洋物种间的生态作用，赋予海洋微生物产生不同于陆地微生物的特殊产物，包括抗菌、抗植物病原菌、抗肿瘤、抗病毒等活性物质。海洋真菌是海洋微生物的重要组成部分，这类真菌种类多，分布广，因此，从海洋真菌的次生代谢产物中寻找有别于陆栖微生物的生理活性物质进而开发成药物，对于新的抗菌药物和新型生物农药开发具有十分重要意义。天然产物相比于合成产物具有更显著的结构多样性及复杂性，同时在生物活性方面拥有更高的筛选率，是当前微生物药物研发的一个重要方向。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一类深海真菌来源的二萜类化合物，所述的二萜类化合物的结构式如式1-5中的任一所示。
Figure BDA0002319639620000021
本发明的第二个目的是提供一种上述深海真菌来源的二萜类化合物的制备方法，所述的二萜类化合物是从深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482的发酵培养物中分离获得的。具体的，包括以下步骤：
1)将深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482接入种子培养基，摇床培养，得到种子培养液；
2)将种子培养液接入大米固体培养基中，静置培养；
3)将含有菌体的大米固体培养基用甲醇提取，浓缩提取液得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯粗提物，将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离，用石油醚/乙酸乙酯以体积比10:1→1:2进行梯度洗脱，洗脱流份Fr经TLC薄层层析，合并主斑点相同的流分；具体是将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝20:1v/v展开得Rf＝0.4-0.5的Fr.4；将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1v/v展开得Rf＝0.4-0.5的Fr.7；将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1v/v展开得Rf＝0.3-0.4的Fr.9；将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1v/v展开得Rf＝0.5-0.6的Fr.6；
Fr.4经硅胶柱层析，以甲醇/二氯甲烷体积比为2:98进行洗脱，得到化合物1和2的混合组分，然后进一步利用配备Chiral MD(2)-RH型号手性柱的HPLC分离制备纯化得到化合物1和2；
Fr.7用凝胶Sephdex-20柱层析色谱分离纯化，使用甲醇为流动相洗脱，获得化合物3；
Fr.9利用凝胶Sephdex-20柱层析色谱分离，使用二氯甲烷-甲醇体积比1:1作为洗脱剂洗脱，得到含有化合物4的组分，然后进一步通过配备ACE C18-PFP反向C18柱的HPLC制备纯化得到化合物4；
Fr.6经HPLC分离纯化得到化合物5。
优选，所述的种子培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾3g/L，七水合硫酸镁1.5g/L，维生素B1 10mg/L，海盐15g/L，溶剂为水。
优选，所述步骤1)摇床培养的条件为摇床转速200rpm，28℃培养5天。
优选，所述的大米固体培养基的配方为：每300ml水中加有大米250g。
优选，所述步骤2)静置培养的条件为28℃静置30天。
本发明的第三个目的是提供一种上述的深海真菌来源的二萜类化合物在制备抗大肠杆菌药物中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种抗大肠杆菌药物，所述的抗大肠杆菌药物包含上述式1-5任一所示的二萜类化合物作为活性成分，以及药学上可以接受的载体。
本发明的第五个目的是提供一种深海真菌Paraconiothyrium hawaiienseFS482，其保藏编号为GDMCC No：60929。
本发明的第六个目的是提供上述深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482在制备上述式1-5任一所示的二萜类化合物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供了一类深海真菌来源的二萜类化合物，该类化合物具有明显的抗大肠杆菌活性，其最低抑制浓度MIC分别为25.0μM(化合物1)、12.5μM(化合物2)、25.0μM(化合物3)、25.0μM(化合物4)及12.5μM(化合物5)，能用于制备抗菌药物。
本发明的深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482，于2019年12月11日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为GDMCC No：60929，分类命名为Paraconiothyrium hawaiiense，保藏单位的地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1为化合物1的高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息。
图2为化合物2的高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息。
图3为化合物3的高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息。
图4为化合物4的高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息。
图5为化合物5的高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
一类深海真菌来源的二萜类化合物的制备方法，所述二萜类化合物是从深海来源的Paraconiothyrium hawaiiense FS482的发酵提取物中分离得到。所述的深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482是从印度洋深海沉积物中分离得到。
所述深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482于2019年12月11日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为GDMCC：60929，分类命名为Paraconiothyrium hawaiiense。保藏单位的地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
所述的二萜类化合物的具体制备方法如下：
1)深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482的种子液培养：将深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482接入种子培养基，在摇床转速200rpm，28℃培养5天，得到种子培养液；种子培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾3g/L，七水合硫酸镁1.5g/L，维生素B1 10mg/L，海盐15g/L，余量为水；培养基配制方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂，纱布过滤，收取滤液，再和葡萄糖、磷酸二氢钾、七水合硫酸镁、维生素B1、海盐，混合，溶于水，搅拌溶解，于121℃灭菌30min，冷却后备用。
2)深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482的固体发酵培养：将步骤1)得到的种子培养液接入大米固体培养基中，于室温28℃静置培养30天，得到含菌体的大米培养基(发酵培养物)。所述大米固体培养基配方为：每300mL海水中加大米250g，培养基配制方法为：将大米和海水混合，于121℃灭菌30min，冷却后备用。
3)将步骤2)得到的含菌体的大米培养基用甲醇提取三次，每次浸泡24h，合并提取液，将提取液浓缩得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯粗提物，将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离，用石油醚/乙酸乙酯以体积比10:1→1:2进行梯度洗脱，洗脱流份Fr经TLC薄层层析，合并主斑点相同的流分，共得到10个粗组分Fr.1-Fr.10。
具体是：
将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝20:1(v/v)展开得Rf＝0.4-0.5的Fr.4，进一步经硅胶柱层析，以甲醇/二氯甲烷体积比为2:98进行洗脱，得到化合物1和2的混合组分，然后进一步利用配备Chiral MD(2)-RH型号手性柱的HPLC分离制备，使用85％(v/v)正己烷-异丙醇为流动相，流速2mL/min，收集保留时间12.2min和13.6min的组分，得到单体化合物1和2；
将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1(v/v)展开得Rf＝0.4-0.5的Fr.7，用凝胶Sephdex-20柱层析色谱分离纯化，使用甲醇为流动相洗脱，获得化合物3；
将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1(v/v)展开得Rf＝0.3-0.4的Fr.9，利用凝胶Sephdex-20柱层析色谱分离，使用二氯甲烷-甲醇体积比1:1作为洗脱剂洗脱，得到含有化合物4的组分，然后进一步通过配备ACE C18-PFP反向C18柱的HPLC制备纯化，使用85％(v/v)甲醇-水为流动相，流速2mL/min，收集保留时间11.9min的组分，得到单体化合物4；
将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1(v/v)展开得Rf＝0.5-0.6的Fr.6，通过配备ACE C18-PFP的反相制备柱的HPLC分离，使用75％(v/v)甲醇-水为流动相，流速5mL/min，收集保留时间20.8min的组分，进一步通过使用配备ACE C18-PFP的反相半制备柱的HPLC分离纯化，使用90％(v/v)乙腈-水为流动相，流速2mL/min，收集保留时间17.6min的组分，得到单体化合物5；通过上述过程，可得式1-5所示的二萜类化合物。
对化合物1-5进行结构测试解析，得到以下实验数据：
1、化合物1:C20H28O3，HRESI-MS：337.1770[M+Na]+(理论值337.1774)；其高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息见图1所示。
2、化合物2:C20H28O3，HRESI-MS：315.1945[M+H]+(理论值315.1955)；其高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息见图2所示。
3、化合物3:C20H30O3，HRESI-MS：335.2223[M+H]+(理论值335.2217)；其高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息见图3所示。
4、化合物4:C20H30O5，HRESI-MS：349.2023[M-H]-(理论值349.2020)；其高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息见图4所示。
5、化合物5:C20H30O4，HRESI-MS：357.2036[M+Na]+(理论值357.2036)；其高分辨电喷雾质谱(HRESIMS)及其元素组成信息见图5所示。
化合物1和2的NMR数据见表1，化合物3和4的NMR数据见表2，化合物5的NMR数据见表3。
表1化合物1和2的NMR数据(methanol-d4，600MHz/150MHz,ppm)
Figure BDA0002319639620000071
Figure BDA0002319639620000081
表2化合物3和4的NMR数据(methanol-d4，600MHz/150MHz,ppm)
Figure BDA0002319639620000082
Figure BDA0002319639620000091
表3化合物5的NMR数据(methanol-d4，600MHz/150MHz,ppm)
Figure BDA0002319639620000101
根据上述数据结果，确认化合物1-5的结构式如下：
Figure BDA0002319639620000111
实施例2
化合物1-5抗菌活性测试实验。
将化合物1-5和硫酸卡那霉素分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解并稀释至浓度为1000μmol/L、500μmol/L、250μmol/L、125μmol/L、62.5μmol/L、31.2μmol/L、15.6μmol/L。取对数生长期的大肠杆菌Escherichia coli(CMCC44102)用新鲜LB培养基调整菌液浓度为106cfu/mL，于96孔板中每孔加入180μL的菌液，并设空白对照孔，每孔分别加入上述浓度20μL的所述化合物溶液，阴性对照加20μLDMSO，阳性对照加20μL硫酸卡那霉素溶液，每个处理做3次重复，置37℃培养箱中培养24h，每孔加入浓度为0.2mg/mL的刃天青染色剂溶液20μL，37℃恒温箱中培养4h后，观察刃天青染色剂的颜色变化，以呈紫红色样品的最低浓度为最低抑制浓度(MIC值)。
结果显示：化合物1-5对大肠杆菌Escherichia coli(CMCC44102)有明显的抑制作用，对大肠杆菌的最低抑制浓度(MIC值)分别为25.0μM(化合物1)、12.5μM(化合物2)、25.0μM(化合物3)、25.0μM(化合物4)及12.5μM(化合物5)，阳性对照药物硫酸卡那霉素对大肠杆菌的最低抑制浓度(MIC值)为12.5μM。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.二萜类化合物，其结构式如式1-5中任一所示：
Figure FDA0003466564350000011
2.一种制备权利要求1所述的二萜类化合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)将深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482 GDMCC No：60929接入种子培养基，摇床培养，得到种子培养液；
2)将种子培养液接入大米固体培养基中，静置培养；
3)将含有菌体的大米固体培养基用甲醇提取，浓缩提取液得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯粗提物，将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离，用石油醚/乙酸乙酯以体积比10:1→1:2进行梯度洗脱，洗脱流份Fr经TLC薄层层析，合并主斑点相同的流分；具体是将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝20:1v/v展开得Rf＝0.4-0.5的Fr.4；将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1v/v展开得Rf＝0.4-0.5的Fr.7；将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1v/v展开得Rf＝0.3-0.4的Fr.9；将洗脱流份Fr经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇＝10:1v/v展开得Rf＝0.5-0.6的Fr.6；
Fr.4经硅胶柱层析，以甲醇/二氯甲烷体积比为2:98进行洗脱，得到化合物1和2的混合组分，然后进一步利用配备Chiral MD(2)-RH型号手性柱的HPLC分离制备，使用85％v/v正己烷-异丙醇为流动相，流速2mL/min，收集保留时间12.2min和13.6min的组分，得到化合物1和2；
Fr.7用凝胶Sephdex-20柱层析色谱分离纯化，使用甲醇为流动相洗脱，获得化合物3；
Fr.9利用凝胶Sephdex-20柱层析色谱分离，使用二氯甲烷-甲醇体积比1:1作为洗脱剂洗脱，得到含有化合物4的组分，然后进一步通过配备ACE C18-PFP反向C18柱的HPLC制备纯化，使用85％v/v甲醇-水为流动相，流速2mL/min，收集保留时间11.9min的组分，得到化合物4；
Fr.6通过配备ACE C18-PFP的反相制备柱的HPLC分离，使用75％v/v甲醇-水为流动相，流速5mL/min，收集保留时间20.8min的组分，进一步通过使用配备ACE C18-PFP的反相半制备柱的HPLC分离纯化，使用90％v/v乙腈-水为流动相，流速2mL/min，收集保留时间17.6min的组分，得到化合物5。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的种子培养基配方为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾3g/L，七水合硫酸镁1.5g/L，维生素B110 mg/L，海盐15g/L，溶剂为水。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)摇床培养的条件为摇床转速200rpm，28℃培养5天，所述步骤2)静置培养的条件为28℃静置30天。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的大米固体培养基的配方为：每300mL海水中加大米250g。
6.权利要求1所述的二萜类化合物在制备抗大肠杆菌药物中的应用。
7.一种抗大肠杆菌药物，其特征在于，包含权利要求1式1-5任一所示的二萜类化合物。
8.深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482，保藏编号为GDMCC No：60929。
9.权利要求8所述的深海真菌Paraconiothyrium hawaiiense FS482在制备权利要求1式1-5任一所示的二萜类化合物中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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In vitro bactericidal activity of diterpenoids isolated from Aframomum melegueta K.Schum against strains of Escherichia coli, Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus;Kenneth G.Ngwoke et al.;《Journal of Ethnopharmacology》;20131227;第151卷;第1147-1154页 *
Isolation, synthesis and bioactivity studies of phomactin terpenoids;Yusuke Kuroda et al.;《nature Chemistry》;20180730 *

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