CN106492285A

CN106492285A - 可注射的脱细胞软骨基质微粒及其在植入剂中的应用

Info

Publication number: CN106492285A
Application number: CN201610965059.3A
Authority: CN
Inventors: 杨伟红; 程飚; 王祥林; 陈大鹏; 邓小敏; 刘江辉
Original assignee: Guangzhou Xin Sheng Medical Materials Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Xin Sheng Medical Materials Co Ltd
Priority date: 2016-10-31
Filing date: 2016-10-31
Publication date: 2017-03-15

Abstract

本发明公开了可注射的脱细胞软骨基质微粒及其在植入剂中的应用，所述可注射的脱细胞软骨基质微粒，由软骨经漂洗，消毒，漂洗，反复冻融，切成薄片，浸泡，然后经脱细胞，冷冻干燥，低温研磨所得，其可进一步与植入辅料配合作为可注射的脱细胞软骨植入剂使用。本发明的基质微粒具备生物相容性好，结构成分为细胞自身的细胞外基质，有利于细胞的生长、增殖及分化，对细胞的形态、表型和细胞的运动具备生理作用。本发明的植入剂可作为微创注射整形植入材料，由于保留了软骨的天然三维立体结构以及大量的天然活性成分，即具填充功能又具组织修复功能。

Description

可注射的脱细胞软骨基质微粒及其在植入剂中的应用

技术领域

本发明属于再生医学领域，具体涉及可注射的脱细胞软骨基质微粒及其在植入剂中的应用。

背景技术

注射微整形技术在美容外科的应用迅猛发展，在颌面部软组织缺陷的修复治疗、隆鼻和隆下巴中也逐渐显示出其创伤小、恢复快的独特优势。无无论单独使用还是作为正颌、正畸修复手术的补充，微创注射技术在创伤重建，颌面部软组织缺陷修复、隆鼻和隆下巴中具有广阔的应用前景。

牛胶原蛋白作为注射填充材料相关产品已获FDA 批准。ZydermⅠ含 3.5%牛胶原蛋白，适用于眶周、口周等浅表皱纹的浅层填充；ZydermⅡ含 6.5%牛胶原蛋白，适合眉间皱纹、鼻唇沟、痤疮瘢痕等中度至深度皱纹的凹陷填充，因其胶原含量较高，注射后可能会出现暂时的隆起；Zyplast含 3.5%的牛胶原蛋白，但经过戊二醛交联处理后韧性更强，更适合深度皱纹的填充。在注射后的维持时间上，ZydermⅠ/Ⅱ仅为 2~4 个月，因此注射时矫枉过正的手段是必要的（一般实际用量为需要量的1.5~2.0倍）；而化学交联则使Zyplast的保持时间也才4~6 个月。但由于人体内胶原酶持续的降解作用，需要定期注射以达到良好的治疗效果。另外，首款HA填充材料含5.5 mg/mL的交联透明质酸，于2004年获FDA批准用于治疗皮肤皱纹及凹陷性瘢痕，其Ⅲ期临床试验显示该产品极少出现并发症，包括过敏反应，但维持时间才5个月左右。

中国专利CN200510044005.5公开了一种可注射软组织生物填充材料的制备方法；该方法采用猪皮经脱脂、脱细胞、戊二醛交联等工序，物理加工制的微粒。该专利制备微粒的方法只是将交联后材料通过物理方法切制为边长为300~500 u m的微粒，然而其微粒粒径过大，无法采用直径较小的针头注射；从而限制其在注射整形领域的实用价值。

中国专利CN02156797.2公开了一种注射性胶原蛋白的制备方法及其产品和应用，该方法采用动物组织中的胶原蛋白纤维来制备注射性胶原蛋白，然而在制备过程中会破坏动物组织原有结构及其他成分，也损失了组织中具有生物活性或生物功能的活性成分，只能起到单纯的胶原蛋白填充作用。

如上所述，目前已上市的一些美容整形植入材料及国内同类专利公开的美容整形植入材料制备方法均存在一定的缺点，尤其胶原和透明质酸植入剂产品，并未包含生物活性因子，因此其作用仅仅是填充，该类植入剂产品的美容效果是暂时性，当这些填充材料被机体逐渐分解吸收，美容修复效果就会减弱或消失。目前尚无采用脱细胞软骨为原料制备可注射充填材料的产品，亦无专利及文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可注射的脱细胞软骨基质微粒。

本发明的另一目的在于提供一种可注射的脱细胞软骨基质植入剂。

本发明所采取的技术方案是：

可注射的脱细胞软骨基质微粒，由软骨按以下步骤制备而成：

1）取动物软骨，去除其他肌肉及肌腱组织，漂洗，消毒，漂洗，反复冻融；

2）将软骨切成薄片，然后置于0.5-3mM氯化钾溶液中浸泡3-6h；

3）将所得软骨薄片置于含0.1~1MEDTA的0.001~0.1M氢氧化钠溶液中浸泡12~18h，漂洗，再置于含0.1~1MHCl的0.1~1M氯化钠溶液中浸泡5~10h，漂洗；

4）重复步骤3），再将软骨薄片置于缓冲液中浸泡后，置于除垢剂中振荡萃取20~30h，漂洗；

5）将软骨薄片置于缓冲液中浸泡，冷冻干燥，低温研磨，得可注射的脱细胞软骨基质微粒。

优选的，所述消毒采用体积浓度为50~90%的乙醇水溶液和/或体积浓度为0.2~2%的过氧乙酸水溶液进行消毒。

优选的，所述除垢剂为质量浓度为1~4％的曲拉通溶液。

优选的，步骤2）氯化钾溶液的浓度为0.5-3mM。优选的，于氯化钾溶液中浸泡3-6h。

优选的，所述反复冻融的方法：将软骨置于-80℃冰箱中冷冻0.5~3h，然后取出于37℃下解冻0.1~1h；反复冻融的次数：2~5次。

优选的，优选的，低温研磨后，选粒径为20~200um的微粒，得可注射的脱细胞软骨基质微粒。由于所得脱细胞软骨基质微粒直径为20~200um，可使用25~27g小针头注射。

优选的，所述漂洗采用缓冲液进行漂洗。

优选的，所述缓冲液为PBS溶液。

优选的，所述软骨为哺乳动物的软骨。优选的，所述软骨取自屠宰两小时内哺乳动物的软骨。

优选的，所述步骤2）中将软骨切成厚度不大于2mm的薄片。

优选的，步骤2）水中浸泡时间8~12h。

优选的，步骤5）缓冲液中浸泡时间10~16h。

优选的，步骤3）中每次浸泡时，软骨薄片与溶液的体积比为1：20~1:100。

可注射的脱细胞软骨基质植入剂，含有上述的可注射的脱细胞软骨基质微粒、植入辅料，其中，所述可注射的脱细胞软骨基质微粒、植入辅料的质量体积比(m/v) g：mL为1:1~1:10。

优选的，植入辅料包括磷酸盐缓冲液、生理盐水、自体富血小板血浆、聚电解质溶液中的至少一种。

优选的，所述聚电解质溶液中的聚电解质为氧化纤维素、羧甲基甲壳素、羧甲基壳聚糖、羧甲基纤维素钠、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠、聚谷氨酸中的至少一种，其中，聚电解质溶液的浓度为0.5~40g/L，自体富血小板血浆以制备的浓度为准。

优选的，植入辅料还包括细胞生长因子、利多卡因中的至少一种，其中，细胞生长因子终浓度为0.1~100mg/L，利多卡因终浓度为0.1~10g/L。

可注射的脱细胞软骨基质植入剂可将组分混匀后灭菌灌装，使用时再混匀，也可将可注射的脱细胞软骨基质微粒、植入辅料分别灭菌灌装，使用时再混匀。

本发明的脱细胞软骨基质微粒含有生物及细胞活性的细胞外基质成分，主要成分为脱细胞软骨基质中的二型胶原蛋白，其中还包含透明质酸及氨基多糖等软骨细胞外基质成分。

本发明的有益效果是：

本发明的脱细胞软骨基质微粒含有生物及细胞活性的细胞外基质成分，具备生物相容性好的优点，结构成分为细胞自身的细胞外基质，有利于细胞的生长、增殖及分化，对细胞的形态、表型和细胞的运动具备生理作用。

本发明的脱细胞软骨基质植入剂作为微创注射整形植入材料，一方面，可作为在创伤、疾病或先天性畸形和美容的后续重建的组织替代或填充物，另一方面，保留了软骨的天然三维立体结构以及大量的天然活性成分，降低了美容注射产品在临床使用后因原料来源而引起的免疫排斥反应，适用于注射至皮下真皮层深层至皮下浅层以修复中度至重度皱纹、褶皱，填充，具有良好的美容修复效果。

附图说明

图1是可注射的脱细胞软骨基质微粒的SEM图（200 um）；

图2是可注射的脱细胞软骨基质微粒的SEM图（50 um）；

图3是可注射的脱细胞软骨基质微粒的SEM图（1 um）；

图4是成纤维细胞与植入剂复合培养后的普通光学显微镜下的观察图；

图5是实验组植入剂植入大鼠皮下两周后的组织学切片效果观察的图；

图6是实验组植入剂植入大鼠皮下四周后的组织学切片效果观察的图；

图7是对照组植入剂植入大鼠皮下两周后的组织学切片效果观察的图；

图8是对照组植入剂植入大鼠皮下四周后的组织学切片效果观察的图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。

实施例中所述溶液，如无特别说明，均指水溶液。

实施例1

可注射的脱细胞软骨基质微粒的制备方法，包括以下步骤：

1）取牛的软骨，在PBS溶液中漂洗3次，用体积浓度为75%的乙醇水溶液对软骨进行消毒处理30分钟，在PBS溶液中漂洗3次，然后将软骨置于-80℃冰箱中冷冻2h，在37℃下解冻0.5h，如此反复冻融3次；

2）将所得软骨切成薄片，厚度不大于2mm，软骨薄片在1mM氯化钾溶液中浸泡3h；

3）将所得软骨薄片置于含0.5MEDTA的0.01M氢氧化钠水溶液中浸泡12h，软骨薄片与溶液的体积比为1：50，用PBS溶液漂洗3次；然后将软骨薄片置于含0.5MHCl的1M氯化钠水溶液中浸泡8h，软骨薄片与溶液的体积比为1：50，用PBS溶液漂洗3次；接着将软骨薄片置于含0.8MEDTA的0.01M氢氧化钠溶液中浸泡12h，软骨薄片与溶液的体积比为1:100，用PBS溶液漂洗3次，再将软骨薄片置于含1MHCl的1M氯化钠溶液中浸泡8h，软骨薄片与溶液的体积比为1：60，用PBS溶液漂洗3次；

4）将所得软骨薄片置于PBS溶液浸泡12h，然后室温下在质量浓度为1％的曲拉通溶液中振荡萃取24h，振荡速率为120转/分钟，用PBS溶液漂洗3次；

5）将所得软骨薄片在PBS溶液中浸泡12h，然后冷冻干燥，低温研磨，选粒度为20微米至200微米的基质微粒，得可注射的脱细胞软骨基质微粒。

可注射的脱细胞软骨基质植入剂，包括质量体积比为1:4的组分a和组分b，组分a为上述所得可注射的脱细胞软骨基质微粒，组分b为10g/L透明质酸溶液。

制备过程：将组分a和组分b用医用三通混匀，得软骨微粒悬液，软骨微粒悬液经无菌真空灌装，再经20kGy伽马射线辐照灭菌，最后使用时再用医用三通混匀，即制得可临床使用的脱细胞软骨基质植入剂。

实施例2

可注射的脱细胞软骨基质微粒的制备方法，包括以下步骤：

1）取猪的软骨，在PBS溶液中漂洗4次，用体积浓度为0.5%的过氧乙酸水溶液对软骨进行消毒处理30分钟，在PBS溶液中漂洗3次，将软骨置于-80℃冰箱中冷冻2h，在37℃下解冻0.8h，如此反复冻融3次；

2）将所得软骨切成薄片，厚度不大于2mm，软骨薄片在2mM氯化钾溶液中浸泡4h；

3）将所得软骨薄片置于含1MEDTA的0.01M氢氧化钠溶液中浸泡14h，软骨薄片与溶液的体积比为1：60，用PBS溶液漂洗3次；然后软骨薄片置于含1MHCl的0.6M氯化钠溶液中浸泡8h，软骨薄片与溶液的体积比为1：60，用PBS溶液中漂洗3次；接着将软骨薄片置于含1MEDTA的0.01M氢氧化钠溶液中浸泡12h，软骨薄片与溶液的体积比为1:100，用PBS溶液漂洗3次，将所得软骨薄片置于含1MHCl的0.6M氯化钠溶液中浸泡8h，软骨薄片与溶液比例为按体积比为1：60，用PBS溶液漂洗3次；

4）将所得软骨薄片置于PBS溶液浸泡12h，然后室温下在质量浓度为2％的曲拉通溶液中萃取振荡24h，振荡速率为120转/分钟，用PBS溶液漂洗3次；

可注射的脱细胞软骨植入剂，包括质量体积比为1:5的组分a和组分b，组分a为上述所得可注射的脱细胞软骨基质微粒，组分b为5g/L羧甲基壳聚糖溶液。

制备过程：将组分a和组分b分装到两个无菌真空灌装，再经30kGy伽马射线辐照灭菌，最后使用时用医用三通混匀，即制得可临床使用的软骨基质微粒植入剂。

实施例3

可注射的脱细胞软骨基质微粒的制备方法，包括以下步骤：

1）取牛动物软骨，在PBS溶液中漂洗3次，用体积浓度为75%的乙醇水溶液对软骨进行消毒处理10分钟，再用体积浓度为0.2%的过氧乙酸水溶液对软骨进行消毒处理20分钟，在PBS溶液中漂洗3次，然后将软骨置于-80℃冰箱中冷冻1.5h，在37℃下解冻0.5h，如此反复冻融3次；

2）将所得软骨切成薄片，厚度不大于2mm，软骨薄片在1.5 mM氯化钾溶液中浸泡5h；

3）将所得软骨薄片置于含1MEDTA的0.01M氢氧化钠溶液中浸泡12h，软骨薄片与溶液的体积比为1：50，用PBS溶液漂洗3次；然后软骨薄片置于含1MHCl的1M氯化钠溶液中浸泡6h，软骨薄片与溶液的体积比为1：50，用PBS溶液漂洗3次，接着将软骨薄片置于0.8MEDTA、0.01M氢氧化钠溶液中浸泡12h，软骨薄片与溶液的体积比为1:100，用PBS溶液漂洗3次，再将所得软骨薄片置于含1MHCl的1M氯化钠溶液中浸泡8h，软骨薄片与溶液的体积比为1：60，用PBS溶液漂洗3次；

4）将软骨薄片置于PBS溶液浸泡12h，然后室温下在质量浓度为3％的曲拉通溶液中萃取24h，振荡速率为120转/分钟，用PBS溶液中漂洗3次；

5）将所得软骨薄片在PBS溶液浸泡12h，然后冷冻干燥，低温研磨，选粒度为20微米至200微米的基质微粒，得可注射的脱细胞软骨基质微粒。

可注射的脱细胞软骨植入剂，包括质量体积比为1:5的组分a和组分b，组分a为上述所得可注射的脱细胞软骨基质微粒，组分b为生理盐水。

制备过程：将组分a、组分b先经20kGy伽马射线辐照灭菌，再将组分a和组分b按比例分装到两个无菌真空灌装，最后使用时用医用三通混匀；即制得可临床使用的软骨微粒植入剂。

实施例4

可注射的脱细胞软骨基质微粒的制备方法，包括以下步骤：

3）将所得软骨薄片置于含0.1M EDTA的0.1M氢氧化钠水溶液中浸泡15h，软骨薄片与溶液的体积比为1：50，用PBS溶液漂洗3次；然后将软骨薄片置于含0.1MHCl的0.8M氯化钠水溶液中浸泡5h，软骨薄片与溶液的体积比为1：50，用PBS溶液漂洗3次；接着将软骨薄片置于含0.1M EDTA的0.1M氢氧化钠溶液中浸泡15h，软骨薄片与溶液的体积比为1:100，用PBS溶液漂洗3次，再将软骨薄片置于含0.1MHCl的0.8M氯化钠溶液中浸泡5h，软骨薄片与溶液的体积比为1：60，用PBS溶液漂洗3次；

4）将所得软骨薄片置于PBS溶液浸泡12h，然后室温下在质量浓度为3％的曲拉通溶液中振荡萃取30h，振荡速率为120转/分钟，用PBS溶液漂洗3次；

可注射的脱细胞软骨基质植入剂，包括质量体积比为1:4的组分a和组分b，组分a为上述所得可注射的脱细胞软骨基质微粒，组分b为20g/L硫酸软骨素。

实施例5

可注射的脱细胞软骨基质微粒的制备方法，包括以下步骤：

1）取羊的软骨，在PBS溶液中漂洗3次，用体积浓度为75%的乙醇水溶液对软骨进行消毒处理30分钟，在PBS溶液中漂洗3次，然后将软骨置于-80℃冰箱中冷冻2h，在37℃下解冻0.5h，如此反复冻融3次；

3）将所得软骨薄片置于含0.5M EDTA的0.001M氢氧化钠水溶液中浸泡18h，软骨薄片与溶液的体积比为1：50，用PBS溶液漂洗3次；然后将软骨薄片置于含0.1M HCl的0.1M氯化钠水溶液中浸泡10h，软骨薄片与溶液的体积比为1：50，用PBS溶液漂洗3次；接着将软骨薄片置于含0.5M EDTA的0.001M氢氧化钠溶液中浸泡18h，软骨薄片与溶液的体积比为1:100，用PBS溶液漂洗3次，再将软骨薄片置于含0.1M HCl的0.1M氯化钠溶液中浸泡5h，软骨薄片与溶液的体积比为1：60，用PBS溶液漂洗3次；

4）将所得软骨薄片置于PBS溶液浸泡12h，然后室温下在质量浓度为4％的曲拉通溶液中振荡萃取20h，振荡速率为120转/分钟，用PBS溶液漂洗3次；

可注射的脱细胞软骨基质植入剂，包括质量体积比为1:10的组分a和组分b，组分a为上述所得可注射的脱细胞软骨基质微粒，组分b为10g/L海藻酸钠溶液、利多卡因，其中，利多卡因在植入剂中的终浓度为0.1g/L。

对比例1

可注射的脱细胞软骨基质微粒的制备方法，包括以下步骤：

1）步骤同实施例3步骤1）；

2）步骤同实施例3步骤2）；

3）将所得软骨薄片置于0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA中37℃恒温振荡消化12h,软骨薄片与溶液的体积比为1:10；用PBS溶液中漂洗3次；

4）将所得软骨薄片在PBS溶液浸泡12h，然后冷冻干燥，低温研磨，选粒度为20微米至200微米的基质微粒，得可注射的脱细胞软骨基质微粒。

可注射的脱细胞软骨植入剂，包括质量体积比为1:5的组分a和组分b，组分a为上述所得可注射的脱细胞软骨基质微粒，组分b为生理盐水。制备过程同实施例3。

含量测定：

（1）样品稀释

稀释液的配制：由20× TE Buffer以DEPC水稀释20倍配制而成。

样品由稀释液稀释，回收率实验DNA纯化样品和待检品DNA纯化样品稀释倍数均稀释20倍，测定荧光强度值。

（2）DNA标准曲线组样品

由10μg/ml的DNA标准品配制1μg/ml的DNA,再由配制的1μg/ml的DNA经TE稀释液配成0ng/ml、2.5ng/ml、 5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、200ng/ml、1000ng/ml的标准品溶液。将稀释好的DNA标准品100μl加入96孔黑色酶标板内，每份样品2个复孔。

取回收率实验DNA纯化样品和待检品DNA纯化样品各100μl，加入到96孔黑色酶标板内。

将10mlTE稀释液加入50μl荧光染料，混匀。每孔100μl加入酶标板中，震荡混匀后室温避光反应5min，用荧光酶标仪测定。测定条件：以485nm为激发光波长，以535nm为发射荧光检测波长进行测定，所得数据作图分析并求得回归方程。以1×TE缓冲液测得的荧光强度为本底，测定和记录各测定孔的荧光值。

DNA含量计算：

（1）先求标准品OD平均值，并减去标准曲线空白平均值（只有TE，无DNA）；再求出回收率样品以及待测样品的OD平均值，并减去回收率曲线的空白平均值。

（2）然后利用标准品测定值（OD值）为横坐标（x）,标准品浓度（ng/ml）为纵坐标（y），制定标准曲线，获得回归方程；

（3）将各回收率样品及待测样品所测得平均读数扣回收空白读数的OD值代入回归方程的（x），求得（y），即为DNA浓度的实测值（ng/ml）；

（4）将此实测值（ng/ml）×测试时的稀释倍数×回收溶液体积×（消化液总体积/抽提液体积），获得实测(回收)DNA总量（ng）；

（5）用回收的DNA总量对原始投入的DNA总量作回归曲线，以实测回收的总量为横坐标（x），原始投入的DNA总量为纵坐标（y）；

（6）将待测样品实验回收的DNA总量（ng）代入回收率曲线方程的（x），求得样品的原始DNA总量（y）；

（7）最后用样品的原始DNA总量除以样品干重量，即可得到被测样品单位重量（mg）的DNA含量。

实施例1~3及对比例1的可注射的脱细胞软骨基质微粒经DNA含量检测，检测结果见表1。

由表可得，本发明制备的生物基质材料的料残留的DNA量小，间接的说明了本发明方法脱细胞彻底，对照组的残留的DNA量较大；而生物源性材料残留的DNA本身可以引起人体的免疫反应，可见材料残留的DNA越低引起人体的免疫反应的可能性越小。

实施例1的可注射的脱细胞软骨基质微粒的扫描电子显微镜图见图1～3，可见表面和截面形貌。由图可得，软骨微粒呈较疏松的纤维形态，显示软骨微粒仍保留了一定的软骨细胞外基质良好的三维网络结构。

将实施例1制备得到的可注射的脱细胞软骨基质植入剂，与人成纤维细胞复合培养，将2ml可注射的脱细胞软骨基质植入剂加入到0.5ml人成纤维细胞悬液（密度：10×10⁷个/mL）中，37℃、5%CO₂条件下培养3天后，经DAPI染色后在普通光学显微镜下的观察（×10）。观察结果见图4。图中可见，成纤维细胞与软骨微粒植入剂贴附良好，且成纤维细胞能正常增殖生长，结果表明本发明制备的软骨微粒植入剂具有良好的细胞相容性。

取20只雄性SD大鼠，分两组，实验组与对照组各10只；将实施例3制备的可注射的脱细胞软骨基质植入剂0.5ml经背部左边注射作为实验组，将实施例4制备的软骨基质植入剂0.5ml经背部右边注射作为对照组，植入剂植入到大鼠皮下后，于不同时间点处死大鼠，取植入部位的皮下组织，经HE染色后，进行组织学切片效果观察。图5和图7分别是实验组、对照组植入大鼠皮下两周后的组织切片图，图6和图8分别是实验组、对照组植入大鼠皮下四周后的组织切片图。结果显示，实验组微粒注射移植后从外周向中央细胞化及血管化，有极少量的中性粒细胞和单核细胞，无异物反应；对照组在材料植入两周后，材料周围炎性细胞较多，未出现中央细胞化及血管化迹象，对照组在材料植入四周后，材料周围炎性细胞依然较多，且形成了一层纤维细胞包膜将植入材料与周围组织隔绝；综上所述本发明制备的软骨微粒植入剂具有良好的组织相容性、良好的长期填充效果。

Claims

1.可注射的脱细胞软骨基质微粒，由软骨按以下步骤制备而成：

2）将软骨切成薄片，然后置于氯化钾溶液中浸泡；

2.根据权利要求1所述的脱细胞软骨基质微粒，其特征在于：所述消毒采用体积浓度为50~90%的乙醇水溶液和/或体积浓度为0.2~2%的过氧乙酸水溶液进行消毒。

3.根据权利要求1所述的脱细胞软骨基质微粒，其特征在于：所述除垢剂为质量浓度为1~4％的曲拉通溶液。

4.根据权利要求1所述的脱细胞软骨基质微粒，其特征在于：所述反复冻融的方法：将软骨置于-80℃冰箱中冷冻0.5~3h，然后取出于37℃下解冻0.1~1h；反复冻融的次数：2~5次。

5.根据权利要求1所述的脱细胞软骨基质微粒，其特征在于：低温研磨后微粒粒径为20~200um。

6.根据权利要求1所述的脱细胞软骨基质微粒，其特征在于：所述漂洗采用缓冲液进行漂洗。

7.可注射的脱细胞软骨基质植入剂，含有权利要求1~6任一项所述的可注射的脱细胞软骨基质微粒、植入辅料，其中，所述可注射的脱细胞软骨基质微粒、植入辅料的质量体积比g：mL为1:1~1:10。

8.根据权利要求7所述的植入剂，其特征在于：植入辅料包括磷酸盐缓冲液、生理盐水、自体富血小板血浆、聚电解质溶液中的至少一种。

9.根据权利要求8所述的植入剂，其特征在于：所述聚电解质溶液中聚电解质为氧化纤维素、羧甲基甲壳素、羧甲基壳聚糖、羧甲基纤维素钠、透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸钠、聚谷氨酸中的至少一种，其中，聚电解质的浓度为0.5~40g/L。

10.根据权利要求8所述的植入剂，其特征在于：植入辅料还包括细胞生长因子、利多卡因中的至少一种，其中，细胞生长因子终浓度为0.1~100mg/L，利多卡因终浓度为0.1~10g/L。