CN106319037A - 一种检测玉米品种良玉88号纯度的ssr分子标记试剂盒 - Google Patents

一种检测玉米品种良玉88号纯度的ssr分子标记试剂盒 Download PDF

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Abstract

一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒，涉及一种检测玉米分子标记试剂盒，该标记试剂盒以玉米品种良玉88号及父母本双亲的基因组DNA为模板，通过对覆盖全基因组200对SSR引物进行筛选，获得两对双亲互补特异性高、重复性好、结果稳定的SSR引物，由其两对特异性引物和Taq酶等试剂开发出针对玉米品种良玉88号纯度检测的试剂盒。该试剂盒的开发，不仅可以快速评价玉米纯度质量，为品种管理和市场监管提供技术支撑，还对提高种子产业整体质量水平，保证粮食种植安全具有一定的指导意义。

Description

一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒
技术领域
本发明涉及一种检测玉米分子标记的试剂盒，特别是涉及一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒。
背景技术
玉米是我国的重要作物，在农业生产中占有重要地位。玉米种子质量直接影响产量，玉米种子纯度是评价种子质量的重要指标。实践中，我国玉米种子纯度鉴定仍以籽粒形态鉴定、幼苗鉴定和田间小区种植鉴定为主体，辅以同工酶和蛋白质电泳技术。
利用种子、幼苗或者株型等形态差异鉴定纯度的方法费时费力、受环境和基因显隐性等的影响较大，检测结果易出现偏差。同工酶和蛋白质电泳技术具有简单、快速、成本低等优点，然而，而且随着玉米品种的数量逐年增多，种质资源狭窄，同质化问题愈显突出，难以找到杂交种特征带，难以进行有效的品种纯度检测。
利用SSR分子标记技术对玉米品种纯度鉴定的优越性在于：（1）SSR分子标记数量大，特异性高，可鉴定表型难于鉴别的品种；（2）SSR分子标记不受任何环境因素的影响，可在生长发育的任何阶段取材鉴定；（3）SSR分子标记呈共显性遗传，操作灵活、简便、快速，易于分析；（4）利用SSR分子标记鉴定品种，不仅准确可靠，而且还便于实现标准化。
玉米品种良玉88号是丹东登海良玉种业有限公司于2008年辽宁省审定的品种，编号为辽审玉[2008]387号，是以M54为母本，以S122为父本组配而成的。幼苗叶鞘紫色、苗势强。株型紧凑，株高302厘米，花丝淡紫色，花药绿色。穗轴红色，籽粒黄色。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒，用以检测玉米品种良玉88号的纯度，可以及时准确的检测出纯度结果，能够减少假劣种子坑农害农案件的发生，保证粮食种植安全。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种玉米品种良玉88号纯度检测的SSR分子标记试剂盒，以玉米品种良玉88号及父母本双亲的基因组DNA为模板，通过对覆盖全基因组200对SSR引物进行筛选，获得两对双亲互补特异性高、重复性好、结果稳定的SSR引物，SEQ ID NO：1和2和SEQ ID NO：3和4。
SEQ ID NO：1 序列（5'→3'） CGGAGGTCGTCAGATGGAGTTCGG
SEQ ID NO：2序列（5'→3'） CCACGTACGGCAATGCAGACAAGG
SEQ ID NO：3 序列（5'→3'） GATCCGCATTGTCAAATGACCAC
SEQ ID NO：4 序列（5'→3'） AGGACACGCCATCGTCATCA
所述的一种玉米品种良玉88号纯度检测SSR分子标记试剂盒，以玉米品种良玉88号的基因组DNA为模板，以SEQ ID NO：1和2或SEQ ID NO：3和4为SSR 特异性引物，进行 PCR扩增。
所述的一种玉米品种良玉88号纯度检测SSR分子标记试剂盒，其PCR反应体系总体积20μL，包括14.1μL超纯水、2μL 10倍PCR缓冲液、1.2μL dNTPs（2.5mmol/L）、0.5μL SSR引物（0.25μmol/L）、0.2μL Taq DNA聚合酶（2.5U/μL）、2μL DNA，混匀。
所述的一种玉米品种良玉88号纯度检测SSR分子标记试剂盒，其反应程序为94℃预变性5min；94℃变性40s，60℃退火35s，72℃延伸45s，循环35次；72℃延伸5min；4℃保存。
所述的一种玉米品种良玉88号纯度检测的SSR分子标记试剂盒，其纯度结果通过带型统计，用具有本品种特异带型的种子粒数占检测样品种子粒数的百分率表示。
试剂盒中还可包括抽提样品DNA所需的各种试剂。这些试剂是本领域技术人员周知的。
本发明的优点与效果是：
1.本发明在对覆盖玉米全基因组的200对SSR引物进行筛选，获得两对双亲互补特异性高、重复性好、结果稳定的SSR引物，由其两对特异性引物和Taq酶等试剂开发出针对玉米品种良玉88号纯度检测的试剂盒，可以快速、准确、简便的检测出玉米品种良玉88号的纯度，为品种管理和市场监管提供技术支撑，还对保证粮食种植安全具有一定的指导意义。
2.本发明的试剂盒具有快速、准确、简便等优点，可以及时准确的检测出纯度结果，能够减少假劣种子坑农害农案件的发生，保证粮食种植安全，可为品种管理和市场监管提供技术支撑。
附图说明
图1为本发明的SEQ ID NO：1和2扩增玉米品种良玉88号及父母本结果图；
图2为本发明的SEQ ID NO：3和4扩增玉米品种良玉88号及父母本结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。
本发明的检测方法为：
（1）玉米品种良玉88号基因组DNA提取 随机数取100粒种子，采取CTAB法进行DAN提取。
（2）PCR扩增以SEQ ID NO：1和2或SEQ ID NO：3和4为SSR 特异性引物，配制20ul PCR反应体系。
（3）PCR反应体系总体积20μL，包括14.1μL超纯水、2μL 10倍PCR缓冲液、1.2μL dNTPs（2.5mmol/L）、0.5μL SSR特异性引物（0.25μmol/L）、0.2μL Taq DNA聚合酶（2.5U/μL）、2μL DNA，混匀。
（4）反应程序为94℃预变性5min；94℃变性40s，60℃退火35s，72℃延伸45s，循环35次；72℃延伸5min；4℃保存。
（5）电泳检测对PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
（6）纯度结果通过带型统计，用具有本品种特异带型的种子粒数占检测样品种子粒数的百分率表示。
实施例1
本实施例中用玉米品种良玉88号纯度检测SSR分子标记试剂盒，检测玉米品种良玉88号样品A的纯度。操作流程如下：
1）随机数取玉米品种良玉88号样品A100粒种子，采取CTAB法进行DAN提取。
（2）PCR扩增以SEQ ID NO：1和2为SSR 特异性引物，配制20ul PCR反应体系。
（3）PCR反应体系总体积20μL，包括14.1μL超纯水、2μL 10倍PCR缓冲液、1.2μL dNTPs（2.5mmol/L）、0.5μL SSR特异性引物（0.25μmol/L）、0.2μL Taq DNA聚合酶（2.5U/μL）、2μL DNA，混匀。
（4）反应程序为94℃预变性5min；94℃变性40s，60℃退火35s，72℃延伸45s，循环35次；72℃延伸5min；4℃保存。
（5）电泳检测对PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
（6）纯度结果通过带型统计，用具有本品种特异带型的种子粒数占检测样品种子粒数的百分率表示。
具有本品种特异带型的种子粒数为97，按公式：
玉米品种良玉88号样品A纯度为=97/100=97%。
实施例2
本实施例中用玉米品种良玉88号纯度检测SSR分子标记试剂盒，检测玉米品种良玉88号样品B的纯度。操作流程如下：
1）随机数取玉米品种良玉88号样品B100粒种子，采取CTAB法进行DAN提取。
（2）PCR扩增以SEQ ID NO：3和4为SSR 特异性引物，配制20ul PCR反应体系。
（3）PCR反应体系总体积20μL，包括14.1μL超纯水、2μL 10倍PCR缓冲液、1.2μL dNTPs（2.5mmol/L）、0.5μL SSR特异性引物（0.25μmol/L）、0.2μL Taq DNA聚合酶（2.5U/μL）、2μL DNA，混匀。
（4）反应程序为94℃预变性5min；94℃变性40s，60℃退火35s，72℃延伸45s，循环35次；72℃延伸5min；4℃保存。
（5）电泳检测对PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
（6）纯度结果通过带型统计，用具有本品种特异带型的种子粒数占检测样品种子粒数的百分率表示。
具有本品种特异带型的种子粒数为94，按公式：
玉米品种良玉88号样品A纯度为=94/100=94%。

Claims (5)

1.一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有2对双亲的SSR引物：SEQ ID NO：1和2和SEQ ID NO：3和4；
SEQ ID NO：1 序列（5'→3'） CGGAGGTCGTCAGATGGAGTTCGG；
SEQ ID NO：2序列（5'→3'） CCACGTACGGCAATGCAGACAAGG；
SEQ ID NO：3 序列（5'→3'） GATCCGCATTGTCAAATGACCAC；
SEQ ID NO：4 序列（5'→3'） AGGACACGCCATCGTCATCA。
2.根据权利要求1所述的一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒，其特征在于，所述试剂盒以玉米品种良玉88号的基因组DNA为模板，以SEQ ID NO：1和2或SEQ ID NO：3和4为SSR 特异性引物，进行PCR扩增。
3.根据权利要求1所述的一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒，其特征在于，所述PCR反应体系总体积20μL，包括14.1μL超纯水、2μL 10倍PCR缓冲液、1.2μL dNTPs（2.5mmol/L）、0.5μL SSR引物（0.25μmol/L）、0.2μL Taq DNA聚合酶（2.5U/μL）、2μL DNA，混匀。
4.根据权利要求1所述的一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒，其特征在于，所述反应程序为94℃预变性5min；94℃变性40s，60℃退火35s，72℃延伸45s，循环35次；72℃延伸5min；4℃保存。
5.根据权利要求1所述的一种检测玉米品种良玉88号纯度的SSR分子标记试剂盒，其特征在于，所述纯度结果通过带型统计，用具有本品种特异带型的种子粒数占检测样品种子粒数的百分率表示。
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王凤格: "玉米通用SSR核心引物筛选及高通量多重PCR复合扩增体系建立" *

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