CN103276054B - 用于辅助检测大豆百粒重的引物和检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于辅助检测大豆百粒重的引物，包括如下一对引物：F：CGCCTTACTCTGTATCTTCT；R：CACCTCTTCCTCACTCCT。本发明还提供了一种检测大豆百粒重的方法，包括以下步骤：以待测大豆基因组DNA 为模板，将上述引物对上述DNA模板进行PCR 扩增；PCR扩增产物进行酶切，检测酶切产物中是否有238bp和181bp两条带，若酶切产物中有238bp和181bp两条带，上述待测大豆为大籽粒，若扩增产物中无238bp和181bp两条带，上述待测大豆为小籽粒。本发明的优点在于，可以通过对育种材料进行筛选，淘汰无238bp和181bp目标条带的亲本或育种中间材料，极大的提高了育种过程中选择高百粒重大豆品种的效率，对于高产大豆品种的培育效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于辅助检测大豆百粒重的引物和检测方法。
背景技术
大豆是我国主要农作物之一，已成为世界上最丰富、物美价廉的蛋白质与油脂资源，是具有高经济与营养性的农作物，在国际市场上的需求日益增多。百粒重是大豆产量构成的重要因素，与产量呈正相关，是大豆育种中重要的育种目标。大豆百粒重既是一个遗传力较高的性状，也是一个对外界环境比较敏感的性状，由多个因素共同作用的结果。大豆在进化过程中籽粒大小发生了显著改变，百粒重从野生豆的3-4g进化到地方品种12-15g再到目前主要育成品种的18-20g，增加约6-7倍，是大豆在进化过程中受到人工驯化的典型性状之一(Liu etal., 2007)。由于控制大豆籽粒大小的基因（QTLs）数目众多，近20年来已经报道了65个大豆百粒重QTLs，(Liu et al., 2007; Xuet al., 2011; Han et al., 2012; Sun et al., 2012)，大豆群体遗传学研究进展缓慢，以及大豆特殊生理特征（严格自花授粉、花期分散等）决定了通过正向遗传学克隆控制大豆籽粒大小功能基因相对困难，单纯利用传统方法遗传改良效率不高，利用分子标记方法进行关键基因型的辅助选择不仅不受环境和育种世代的影响，而且大大提高了育种选择的目的性和针对性，有助于提高大豆百粒重的育种效率。但目前报道的多为与目标性状连锁的SSR标记，受遗传背景影响较大，并且操作复杂，实际利用程度不高，功能基因的缺乏导致难以在育种实践中有效开展分子标记辅助选育。
发明内容
本发明要解决的技术问题之一是提供一种用于辅助检测大豆百粒重的引物。
本发明是通过以下技术方案来实现的。
一种用于辅助检测大豆百粒重的引物，包括如下一对引物：
F：CGCCTTACTCTGTATCTTCT；
R：CACCTCTTCCTCACTCCT。
本发明要解决的技术问题之二是提供一种用于辅助检测大豆百粒重的方法。
一种检测大豆百粒重的方法，包括以下步骤：
（1）以待测大豆基因组DNA 为模板，将上述引物对上述DNA模板进行PCR 扩增；
（2）PCR扩增产物进行酶切，检测酶切产物中是否有238bp和181bp两条带，若酶切产物中有238bp和181bp两条带，上述待测大豆为大籽粒，若扩增产物中无238bp和181bp两条带，上述待测大豆为小籽粒。
进一步地，上述步骤（2）中，PCR扩增产物用Sau3A I 内切酶进行酶切。
本发明的有益效果：
可以通过对育种材料进行筛选，淘汰无238bp和181bp目标条带的亲本或育种中间材料，极大的提高了育种过程中选择高百粒重大豆品种的效率，对于高产大豆品种的培育效果显著。
附图说明
图1为实施案例2琼脂糖凝胶电泳的示意图。
具体实施方式
下面根据实施例对本发明作进一步详细说明。
实施案例1：
本发明，一种用于辅助检测大豆百粒重的引物，包括如下一对引物：
F：CGCCTTACTCTGTATCTTCT；
R：CACCTCTTCCTCACTCCT。
实施案例2：
一种检测大豆百粒重的方法，包括以下步骤：
（1）以待测大豆基因组DNA 为模板，将上述引物对上述DNA模板进行PCR 扩增；
其中，20μL PCR 扩增反应体系的组成为:1×ex-Taq PCR 缓冲液、dNTP 各0.2mM、ex-Taq DNA 聚合酶1U、上下游引物各10pM 、模板DNA 50ng; 反应条件为:首先95℃变性5min; 然后95℃变性45s，退火40s ，72℃延伸50s，共循环30次;最后72℃延伸8min;所述退火的温度，在第一个循环中是62℃，以后每循环降低0.3℃。
（2）PCR扩增产物用Sau3A I 内切酶进行酶切，检测酶切产物中是否有238bp和181bp两条带，是以酶切产物通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，若酶切产物中有238bp和181bp两条带，上述待测大豆为大籽粒，若扩增产物中无238bp和181bp两条带，上述待测大豆为小籽粒。
其中，20ul酶切反应体系的组成为：1×H Buffer，PCR产物800ng，5U Sau3A I 内切酶，37℃酶切3小时。
参照图1，M：marker
1-5：野1、野2、野3、野4、东山69
6-10：早熟18、绥农14号、铁丰18、绥农20、冀豆12
注：野表示野生大豆
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (1)
1.一种检测大豆百粒重的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以待测大豆基因组DNA为模板，将引物F：CGCCTTACTCTGTATCTTCT；R：CACCTCTTCCTCACTCCT对上述DNA模板进行PCR扩增；
(2)PCR扩增产物进行酶切，所述PCR扩增产物用Sau3A I内切酶进行酶切，检测酶切产物中是否有238bp和181bp两条带，若酶切产物中有238bp和181bp两条带，上述待测大豆为大籽粒，若扩增产物中无238bp和181bp两条带，上述待测大豆为小籽粒。
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