CN106265875A - 山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 - Google Patents
山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106265875A CN106265875A CN201510244147.XA CN201510244147A CN106265875A CN 106265875 A CN106265875 A CN 106265875A CN 201510244147 A CN201510244147 A CN 201510244147A CN 106265875 A CN106265875 A CN 106265875A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- petroleum ether
- extract
- mixed solvent
- senna
- acetone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 62
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 102100032404 Cholinesterase Human genes 0.000 title abstract description 41
- 101710083761 Cholinesterase Proteins 0.000 title abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 15
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims abstract description 102
- HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCOCC HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 90
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims abstract description 68
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 40
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 40
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 40
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Substances CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 27
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- 235000006693 Cassia laevigata Nutrition 0.000 claims description 35
- 241000522641 Senna Species 0.000 claims description 35
- 229940124513 senna glycoside Drugs 0.000 claims description 35
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 25
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 25
- 108010053652 Butyrylcholinesterase Proteins 0.000 claims description 24
- 239000009701 Senna Extract Substances 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 21
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 8
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 7
- 241000219764 Dolichos Species 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 4
- 102000021944 Butyrylcholinesterase Human genes 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 abstract 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 abstract 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 11
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 11
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 11
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 11
- 239000002329 esterase inhibitor Substances 0.000 description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 8
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 4
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 3
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 3
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000322029 Senna nomame Species 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 3
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 3
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 3
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 3
- 229960000913 crospovidone Drugs 0.000 description 3
- FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxomagnesium;hydrate Chemical compound O.[Mg]=O.[Mg]=O.[Mg]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 235000013809 polyvinylpolypyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 229920000523 polyvinylpolypyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000007919 dispersible tablet Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000007962 solid dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 4-nitrophenyl-α-d-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 0.000 description 1
- 229940123923 Butyrylcholinesterase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 244000302899 Cassia mimosoides Species 0.000 description 1
- 235000014112 Cassia mimosoides Nutrition 0.000 description 1
- 244000201986 Cassia tora Species 0.000 description 1
- 235000014552 Cassia tora Nutrition 0.000 description 1
- 241000220485 Fabaceae Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 240000001140 Mimosa pudica Species 0.000 description 1
- 235000016462 Mimosa pudica Nutrition 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 241000612118 Samolus valerandi Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属医药技术领域,具体涉及一种山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗阿尔茨海默病(AD)等丁酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。维吾尔药山扁豆经水超声提取,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱,先用100:1的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,继用100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱液干燥,即得丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域,具体涉及一种山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法和其制备预防及治疗阿尔茨海默病(AD)等丁酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。
背景技术
山扁豆(Cassia mimosoides L.)是豆科植物含羞草决明的全株。含羞草决明一年生或多年生亚灌木状草本,高30-60cm。多分枝,通常被毛。叶互生,偶数羽状复叶,长4-8cm;在叶柄的上端、最下1对小叶的下方有圆盘状腺体1枚;小叶20-50对;托叶线状锥形,长4-7mm,有明显肋脉,宿存;叶片线状镰形,长3-4mm,宽约1mm,先端急尖,中脉靠近叶的上缘,两侧不对称,干时呈红褐色。花腋生,单朵或数朵排成总状;总花梗顶端有2个苞片,长约3mm;萼长6-8mm,筒短,裂片5,披针形,被黄色疏毛;花黄色,花瓣5片,有等大,具短柄;雄蕊8-10,不等大,5长5短相间而生;子房线形,有毛。荚果镰形,扁平,长2.5-5cm,宽约4mm,被毛,果柄长1.5-2cm。种子10-16颗。花、果期8-10月。
山扁豆具有清热解毒,健脾利湿,通便的功效。在高通量筛选的过程中,本发明意外地发现山扁豆具有很好的抑制丁酰胆碱酯酶的活性,该活性提取物及其组合物有望应用于治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种山扁豆提取物。
本发明还提供了以山扁豆提取物为主要活性成分的组合物。
本发明同时提供了山扁豆提取物及其组合物的制备和在制备丁酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。
本发明是通过如下技术方案实现的:
维吾尔药山扁豆经水超声提取,提取液浓缩后,用硅胶(SiO2)柱分离,上样后的硅胶柱,用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱(石油醚-丙酮,比例见表1),各石油醚-丙酮比例混合溶剂洗脱液,浓缩,干燥后,利用体外筛选体系测试其丁酰胆碱酯酶抑制活性,意外地发现先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱得到的石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱液经回收有机溶剂,干燥,即为丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位,没有丁酰胆碱酯酶抑制活性的作用。优选的,先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱得到的石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱液经回收有机溶剂即得。丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物,可以通过以上方法得到富集,从而与其他杂质类成分分离开。该山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道,其薄层色谱(TLC)分析结果见图1, TLC分析条件:GF254硅胶板,展开系统:二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇(6:1:1)显色方法:香草醛-硫酸显色。
具体,发现过程如下:
1、山扁豆经水超声提取物的制备
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL水超声提取15 min,提取液浓缩后,得提取物SN0049B,样品上柱:1.9991 g,拌样硅胶3g,空白硅胶10g,石油醚-丙酮系统。
2、石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱方法和结果
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL水超声提取15 min,提取液浓缩后,得提取物SN0049B,1.9991 g上柱,甲醇溶解,共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱,拌样硅胶3 g,空白硅胶10g,玻璃柱内径2.0cm,石油醚-丙酮系统梯度洗脱(条件见表1),柱体积22 mL,每个梯度洗脱200mL,得到,各个浓度提取洗脱液的洗脱物,回收溶剂,即得,石油醚:丙酮梯度洗脱提取物,TLC分析结果见图2,图3,TLC分析条件:GF254硅胶板,展开系统:二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇(6:1:1),二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇(1:1:1)显色方法:香草醛-硫酸显色。
表1
3、抑制丁酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果
1)
实验条件
a、材料:DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司);KH2PO4、K2HPO4·3H2O(广东汕头市西陇化工厂);BuChE酶(美国Sigma公司);PNPG(美国Sigma公司)
b、实验仪器:多功能酶标仪Bio-Rad Model 680型(Bio-Rad Laboratories
Inc.)
2)
实验方法和过程
样品处理:将1 mg待测样品溶于20 μL二甲基亚砜(DMSO)作为母液,取1 μL母液加入249 μL蒸馏水配成200 μg·mL-1的溶液。
丁酰胆碱酯酶抑制活性测定方法:
在96孔板上测定样品的BuchE抑制活性。具体操作如下:在96孔板中依次加入25 μL PBS (100 mM, pH 8.0),25 μL BuChE (≥0.04 U/mL, pH 8.0 PBS溶解稀释),25 μL样品溶液(200 μg·mL-1)。加25 μL BuSCH(1.6 mM, pH 8.0 PBS溶解稀释)及25 μL DTNB(4.0 mM, pH 8.0 PBS溶解稀释),37℃孵育60 min后,用酶标仪在412 nm下测定其吸光度值。样品抑制百分率按以下公式计算:
酶活性抑制率% = [A空白- (A样品- A背景)] / A空白× 100
式中A空白:不加样品反应后的吸收值;
A样品:加入样品反应后的吸收值;
A背景:只加样品的吸收值。
3) 实验结果
表2
结果发现:
本发明的优选方案如下:维吾尔药山扁豆经水超声提取,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱,先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,干燥,即为该丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。该丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道,其TLC分析表征如图1。
4、丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研究
1)提取溶剂的种类研究
分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取,并测试提取物的丁酰胆碱酯酶抑制活性,实验结果如下:
表3
研究结果表明:提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
2)提取溶剂的用量研究
分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/体积比)有机溶剂提取,并测试提取物的丁酰胆碱酯酶抑制活性,结果如下:
表4
活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。
3)干燥方法的研究
分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法,对得到的抑制丁酰胆碱酯酶活性提取物进行干燥,以含水量、TLC、活性测试为指标,发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物进行干燥,其中,最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
表5
因此,山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物的制备方法为:
维吾尔药山扁豆经有机溶剂超声提取,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱,先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱2-50倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱2-50倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,干燥,即为该活性提取物。以上条件最优为先用石油醚:丙酮混合溶剂(石油醚:丙酮,100:1,体积比)洗脱20倍柱体积,继用石油醚:丙酮混合溶剂(石油醚:丙酮,100:2,体积比)洗脱15倍柱体积。其中,
1)
提取物提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂,最优条件为甲醇和95%乙醇。活性提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。
2) 提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等,最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
5. 山扁豆抑制丁酰胆碱酯酶活性提取物(先用100:1的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,继用100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱得到的提取物)的医药用途研究
按优化的山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物制备方法制备的活性提取物,经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=22.4 μg/mL。
由于丁酰胆碱酯酶抑制剂具有治疗阿尔茨海默病等方面的医药用途。因此,我们发现的山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物具有广泛的医药用途。
6、山扁豆抑制丁酰胆碱酯酶活性提取物的组合物及其制备方法研究
1)固体分散体
处方
山扁豆提取物
20 g
Vc
1 g
聚乙烯吡咯烷酮
79 g
固体分散100g
制备方法:
称取山扁豆提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮(PVP)按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入烧杯中,加入适量的无水乙醇和Vc,用磁力搅拌器搅拌至山扁豆提取物和载体完全溶解,充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂,干燥,粉碎过80目筛,即得山扁豆有效提取物PVP包合物。
2)环糊精包合物
处方:
山扁豆提取物
20 g
Vc
1 g
β-环糊精
79 g
包合物100g
制备方法:
将β-环糊精与 1~5 倍水研匀,加山扁豆有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。
3)分散片处方:
山扁豆提取物
100
十二烷基硫酸钠
1
Vc
1
预胶化淀粉
10
可溶性淀粉
100
交联聚维酮
10
微晶纤维素
9
微分硅胶
0.3
滑石粉
1
100片
制备方法:
1.
山扁豆有效提取物分散体的制备,精密称取山扁豆提取物、Vc,加入处方量的十二烷基硫酸钠,用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后,在70℃的温度下蒸干,粉碎,过100目筛;
2.
将第一步中的山扁豆有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮,预胶化淀粉,用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂,边加入边搅拌,制成湿颗粒过14目筛,室温下放置15min 后, 60℃烘箱烘干45min,16目筛整粒,加入处方量的滑石粉和微分硅胶,混合均匀后,压片即得。
7、山扁豆抑制丁酰胆碱酯酶活性提取物的检测方法研究
我们发现,可以用薄层色谱的方法,很好地检测和标示山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物的特征。见图1
具体条件为:GF254硅胶板,展开系统:二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇(6:1:1)显色方法:香草醛-硫酸显色。
附图说明:
图1 山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物的TLC色谱图;
图2山扁豆溶剂提取物的TLC色谱图;
图3山扁豆溶剂提取物的TLC色谱图。
具体实施方式
以下实施例表示本发明的实用性,本发明不受此限制。
实施例 1:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL甲醇超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,真空干燥,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=85.0 μg/mL。
实施例2:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL乙醇超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,冷冻干燥,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=88.0 μg/mL。
实施例3:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL石油醚超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,旋蒸干燥法,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=78.0 μg/mL。
实施例4:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL丙酮超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,鼓风干燥,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=83.0 μg/mL。
实施例5:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL氯仿超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,离心干燥,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=80.0 μg/mL。
实施例6:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,冷冻干燥,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=75.0 μg/mL。
实施例7:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL甲醇水混合溶剂(甲醇:水=1:1)超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,冷冻干燥,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=88.0 μg/mL。
实施例8:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL乙醇水混合溶剂(乙醇:水=1:1)超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,冷冻干燥,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=66.0 μg/mL。
实施例9:
取维吾尔药山扁豆20 g,经100 mL乙醇-水混合溶剂(乙醇:水=90:10)超声提取15 min,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱(2.0cm 内径小柱),先用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:1,体积比)洗脱,洗脱15倍柱体积,继用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱,洗脱25倍柱体积,用石油醚-丙酮混合溶剂(石油醚-丙酮,100:2,体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂,冷冻干燥,即为该活性提取物。经测试,其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=73.0 μg/mL。
实施例 10:固体分散体
称取山扁豆提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮(PVP)按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入烧杯中,加入适量的无水乙醇和Vc,用磁力搅拌器搅拌至山扁豆提取物和载体完全溶解,充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂,干燥,粉碎过80目筛,即得山扁豆有效提取物PVP包合物。
实施例 11:环糊精包合物
将β-环糊精与 1~5 倍水研匀,加山扁豆有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。
实施例 12:分散片
1.
山扁豆有效提取物分散体的制备,精密称取山扁豆提取物、Vc,加入处方量的十二烷基硫酸钠,用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后,在70℃的温度下蒸干,粉碎,过100目筛;
2.
将第一步中的山扁豆有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮,预胶化淀粉,用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂,边加入边搅拌,制成湿颗粒过14目筛,室温下放置15min 后, 60℃烘箱烘干45min,16目筛整粒,加入处方量的滑石粉和微分硅胶,混合均匀后,压片即得。
Claims (11)
1. 一种山扁豆提取物,其特征为,山扁豆经水超声提取,提取液浓缩后,用硅胶柱分离,上样后的硅胶柱,先用100:1的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,继用100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱液干燥即得。
2. 权利要求1所述山扁豆提取物,其特征为,先用100:1的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,继用100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱液干燥即得。
3. 如权利要求1或2所述的一种维吾尔药山扁豆提取物,其特征为先用100:1的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,继用100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱,100:2的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱液干燥即得。
4. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药山扁豆提取物,其特征为,提取用有机溶剂为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、或乙醇水混合溶剂。
5. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药山扁豆提取物,其特征为,用于洗脱的石油醚-丙酮的洗脱体积为2-50倍柱体积。
6. 如权利要求1-4任何一项所述的一种维吾尔药山扁豆提取物,其特征为,先用100:1的石油醚:丙酮混合溶剂洗脱20倍柱体积,继用100:2的石油醚:丙酮混合溶剂洗脱15倍柱体积。
7. 一种药物组合物,其特征在于,包含权利要求1-6任何一项所述的山扁豆提取物和药学上可接受的载体。
8. 一种药物制剂,其特征在于,包含权利要求1-6任何一项所述的山扁豆提取物或权利要求7所述的药物组合物。
9. 权利要求1-6任何一项所述的山扁豆提取物或权利要求7所述的组合物或权利要求8所述的药物制剂在制备抑制丁酰胆碱酯酶活性药物中的应用。
10. 权利要求9所述的应用,其特征为,用于治疗阿尔茨海默病(AD)等。
11. 如权利要求1-6任何一项所述的维吾尔药山扁豆提取物,其特征为,用TLC法检,其色谱条件为:GF254硅胶板,展开系统:二氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇(6:1:1)显色方法:香草醛-硫酸显色。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510244147.XA CN106265875A (zh) | 2015-05-13 | 2015-05-13 | 山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510244147.XA CN106265875A (zh) | 2015-05-13 | 2015-05-13 | 山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106265875A true CN106265875A (zh) | 2017-01-04 |
Family
ID=57631474
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510244147.XA Pending CN106265875A (zh) | 2015-05-13 | 2015-05-13 | 山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106265875A (zh) |
-
2015
- 2015-05-13 CN CN201510244147.XA patent/CN106265875A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104906191A (zh) | 宽筋藤乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104906370A (zh) | 白芨丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN106265875A (zh) | 山扁豆丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104666595A (zh) | 泡囊草抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN105982927A (zh) | 铁力木抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药用途 | |
CN105982928A (zh) | 沙棘果抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN106265783A (zh) | 金诃子乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104857048A (zh) | 苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104644763B (zh) | 多刺绿绒蒿α‑糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN106265877A (zh) | 生甘草丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN105878311A (zh) | 广枣乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104873551A (zh) | 毛诃子α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104739899A (zh) | 毛诃子肉乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104825502A (zh) | 诃子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104644721A (zh) | 菟丝子α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN106031734A (zh) | 广枣α-糖苷酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN106265805A (zh) | 地梢瓜α-糖苷酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN105878343A (zh) | 黄芪丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104825547A (zh) | 睡莲花α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN105982955A (zh) | 香青兰抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN104644850A (zh) | 五味子α-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN105878327A (zh) | 小檗果α-糖苷酶抑制活性有效提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN105982929A (zh) | 毛诃子肉抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药用途 | |
CN104906334A (zh) | 贝母丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 | |
CN105982939A (zh) | 恰麻古抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20170104 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |