CN104857048A - 苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属医药技术领域，具体涉及一种苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。所述的提取物通过如下方法获得：先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域，具体涉及一种苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。
背景技术
苦荬菜 Ixeris denticulata (Houtt.) Stebb. 为菊科植物苦荬菜的全草。分布于中国东北、华北，华东和华南等省区。苦荬菜别名：苦荬、盘儿草、鸭舌草、苦球菜、土蒲公英、黄花菜、苦丁菜、墓头回。春季采收常，鲜用或阴干。苦荬菜为多年生草，高30-80cm。全株无毛。茎直立，多分枝，紫红色。基生叶丛生，花期枯萎，卵形、长圆形或披针形、长圆形或披针形，长5-10cm，宽2-4cm，先端急尖，基部渐窄成柄，边缘波状齿裂或羽状分裂，裂片边缘具细锯齿；茎生叶互生，舌状卵形，无柄，长4-8cm，宽1-4cm，先端急尖，基部微抱茎，耳状，边缘具不规则锯齿。头状花序排成伞房状，具细梗；总苞长约7mm，外层总苞片小，长约1mm，内层总苞片5，条状披针形；花全为舌状花，黄色，长6-9mm，舌片长4-6mm，先端5齿裂。瘦果黑褐色，纺锤形，稍扁平，长1-2mm，喙长约0.8mm，冠毛白以。花期4-6月，果期7-10月。
苦荬菜味苦，性寒。具有清热解毒、消肿止痛的功效。主痈疖亲毒；乳痈、咽喉肿痛、黄疸、痢疾、淋证、带下、跌打损伤等。现代药理学研究表明，苦荬菜总生物碱皮下注射，可抑制小鼠自发活动，并且对阈下催眠剂量的戊巴比妥钠和水合氯醛有协同催眠作用。
本发明通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药苦荬菜提取物及其部分化学组分，具有显著地乙酰胆碱酯酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种苦荬菜提取物。
本发明还提供了以苦荬菜提取物为主要活性成分的组合物。
本发明同时提供了苦荬菜提取物及其组合物的制备和在制备乙酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。
本发明是通过如下技术方案实现的：
维吾尔药苦荬菜经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2）柱分离，上样后的硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇，比例见表1），各二氯甲烷-甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其乙酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有乙酰胆碱酯酶抑制活性的作用。优为先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱30倍柱体积，洗液干燥后为本发明乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物。乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC）分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。
具体，发现过程如下：
1、苦荬菜经水超声提取物的制备
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0233B，留样0.0456g，上样量0.6344g，拌样硅胶1.0 g，空白硅胶5 g，二氯甲烷-甲醇系统洗脱。
2、二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0233B，上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶1.0 g，空白硅胶5 g，玻璃柱内径1.5 cm，二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积11 mL，每个梯度洗脱100mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，图3，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1），二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。
表1
3、抑制乙酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果
1) 实验条件
a、材料：DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(广东汕头市西陇化工厂)；AchE酶(美国Sigma公司)；PNPG(美国Sigma公司)
b、实验仪器：多功能酶标仪Bio-Rad Model 680型(Bio-Rad Laboratories Inc.)
2) 实验方法和过程
样品处理：将1 mg待测样品溶于20 μL二甲基亚砜(DMSO)作为母液，取1 μL母液加入249 μL蒸馏水配成200 μg·mL-1的溶液。
乙酰胆碱酯酶抑制活性测定方法：
在96孔酶标板上测定样品的AchE 抑制活性。具体操作如下：在96孔酶标板中依次加入20μL PB (100mM，pH 8. 0)，25μL AChE (0. 033 U/mL，pH 8. 0 PB溶解稀释)，25μL样品溶液(40μg·mL－1)。 冰浴5min后， 加15μL ATCI（0.6mM）及15μL DTNB（1.5mM）。37℃孵育60min后，用酶标仪在 412 nm下测定其吸光度值。根据下式计算抑制率:
酶活性抑制率% = [A空白- (A样品- A背景)] / A空白× 100
式中A空白：不加样品反应后的吸收值；
A样品：加入样品反应后的吸收值；
A背景：只加样品的吸收值。
3) 实验结果
表2
结果发现：
本发明的最优方案为：维吾尔药苦荬菜经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。
4、乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研究
1）提取溶剂的种类研究
分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性，实验结果如下：
表3
研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
2）提取溶剂的用量研究
分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性，结果如下：
表4
活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
3）干燥方法的研究
分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
表5
优选地，苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物的制备方法为：
维吾尔药苦荬菜经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。以上条件最优为先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱30倍柱体积。其中，
1) 提取物提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。活性提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
2) 提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
5. 苦荬菜抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物（洗脱液为100：100时干燥所得的提取物）的医药用途研究
按优化的苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物制备方法制备的活性提取物，经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=15.1 μg/mL。
由于乙酰胆碱酯酶抑制剂具有治疗阿尔茨海默病等方面的医药用途。因此，我们发现的苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物具有广泛的医药用途。
6、苦荬菜抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物的组合物及其制备方法研究
1）固体分散体
处方
苦荬菜提取物 20 g
Vc 1 g
聚乙烯吡咯烷酮 79 g
固体分散100g
制备方法：
称取苦荬菜提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP）按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至苦荬菜提取物和载体完全溶解，充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得苦荬菜有效提取物PVP包合物。
2）环糊精包合物
处方：
苦荬菜提取物 20 g
Vc 1 g
β-环糊精 79 g
包合物100g
制备方法：
将β-环糊精与 1-5 倍水研匀,加苦荬菜有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。
3）分散片处方:
苦荬菜提取物 100
十二烷基硫酸钠 1
Vc 1
预胶化淀粉 10
可溶性淀粉 100
交联聚维酮 10
微晶纤维素 9
微分硅胶 0.3
滑石粉 1
100片
制备方法：
1. 苦荬菜有效提取物分散体的制备，精密称取苦荬菜提取物、Vc，加入处方量的十二烷基硫酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70℃的温度下蒸干，粉碎，过100目筛；
2. 将第一步中的苦荬菜有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉，用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min 后， 60℃烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片即得。
7、苦荬菜抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物的检测方法研究
我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物的特征。见图1
具体条件为：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。
附图说明：
图1 苦荬菜乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物的TLC色谱图；
图2 苦荬菜溶剂提取物的TLC色谱图；
图3 苦荬菜溶剂提取物的TLC色谱图。
具体实施方式:
以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
实施例 1：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL水超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.5cm 内径小柱），先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=84.0 μg/mL。
实施例 2：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL乙醇超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=90.0 μg/mL。
实施例 3：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL石油醚超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥法，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=83.0 μg/mL。
实施例 4：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL丙酮超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=81.0 μg/mL。
实施例 5：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL氯仿超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=81.0 μg/mL。
实施例 6：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=66.0 μg/mL。
实施例 7：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1：1）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱）先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=87.0 μg/mL。
实施例 8：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1：1）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=61.0 μg/mL。
实施例 9：
取维吾尔药苦荬菜20 g，经100 mL乙醇-水混合溶剂（乙醇：水=90：10）超声提取15 min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2 cm 内径小柱），先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱30倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。经测试，其乙酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=70.0 μg/mL。
实施例 10：固体分散体
称取苦荬菜提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP）按比例1:2、1:4、1:6的质量比分别放入烧杯中，加入适量的无水乙醇和Vc，用磁力搅拌器搅拌至苦荬菜提取物和载体完全溶解，充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得苦荬菜有效提取物PVP包合物。
实施例 11：环糊精包合物
将β-环糊精与 1-5 倍水研匀,加苦荬菜有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。
实施例 12：分散片
1. 苦荬菜有效提取物分散体的制备，精密称取苦荬菜提取物、Vc，加入处方量的十二烷基硫酸钠，用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70℃的温度下蒸干，粉碎，过100目筛；
将第一步中的苦荬菜有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮，预胶化淀粉，用适量的浓度为70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min 后，60℃烘箱烘干45min，16目筛整粒，加入处方量的滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片即得。
Claims (10)
1.一种苦荬菜提取物，其特征为苦荬菜经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:20的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，用体积比100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥，即为该提取物。
2.如权利要求1所述苦荬菜提取物，其特征为，该提取物的提取用溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇；提取物提取用溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
3.如权利要求1所述苦荬菜提取物，其特征为苦荬菜经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。
4.如权利要求1所述的维吾尔药苦荬菜提取物，其特征为，先用体积比100:20的二氯甲烷-甲醇混合溶剂2-50倍洗脱，继用体积比100:100的二氯甲烷-甲醇混合溶剂2-50倍洗脱，优选先用100:20二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱10倍柱体积，继用100:100二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱30倍柱体积。
5.权利要求1所述提取物的制备方法，其特征为：苦荬菜经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物；以上条件最优为先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:20，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:100，体积比）洗脱30倍柱体积。
6.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的提取物和药学上可接受的载体。
7.一种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的提取物或权利要求6所述的药物组合物。
8.权利要求1-5任何一项所述的苦荬菜提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的药物制剂在制备乙酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。
9.如权利要求8所述维吾尔药苦荬菜提取物，其特征为，所述乙酰胆碱酯酶抑制活性，可用于治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。
10.如权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药苦荬菜提取物，其特征在于，用TLC法检测，其色谱条件为：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=3:1:1， 显色方法：香草醛浓硫酸显色。
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| CN105061281A (zh) * | 2015-09-12 | 2015-11-18 | 顾伟 | 一种超声辅助逆流萃取提取胡萝卜素的方法 |
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Non-Patent Citations (5)
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