CN106236761A - 一种包含稀有人参皂苷c‑k的稀有人参皂苷组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种包含稀有人参皂苷C‑K的稀有人参皂苷组合物。该稀有人参皂苷组合物包含人参皂苷C‑K和可食用的C2‑C6有机二元或三元羧酸;其中,相对于100重量份的所述人参皂苷C‑K,包含0.05~5重量份的所述可食用的C2‑C6有机二元或三元羧酸。该稀有人参皂苷组合物具有显著的抗肿瘤活性,且高效低毒。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及包含稀有人参皂苷C-K的具有抗肿瘤活性的、高效低毒的稀有人参皂苷组合物。
背景技术
癌症是仅次于脑血管疾病的第二大威胁人类的病种。我国癌症的发病人数每年超过300万人,且肺癌、乳腺癌、食管癌的发病率逐年增长,其中肺癌的发病率年增长率26.8%,乳腺癌发病率年增长率6.8%。30年以来,乳腺癌的死亡率上升了96%,肺癌的死亡率猛增465%,我国的癌症防治工作刻不容缓且形势严峻。
另一方面,稀有人参皂苷C-K可由二醇组人参皂苷经微生物酶法转化而来,文献报道该稀有人参皂苷C-K单组分具有抗肿瘤作用。
但是,关于如何以人参皂苷单组分为基础进行组合,增强其抗肿瘤效果,制备高效低毒的抗肿瘤药物,尚未见任何报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以稀有人参皂苷C-K为基础的、高效低毒的、具有抗肿瘤作用的稀有人参皂苷组合物。
此外,本发明的另一目的在于提供上述稀有人参皂苷组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
本发明人经过深入研究发现,通过将稀有人参皂苷C-K与可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸按特定比例进行组合,不仅能够显著提高稀有人参皂苷组合物的抗肿瘤活性,而且能够显著降低其毒性,从而完成了本发明。
即,本发明如下。
1.一种具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷组合物,其包含:
人参皂苷C-K和可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸;
其中,相对于100重量份的所述人参皂苷C-K,包含0.05~5重量份的所述可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸。
2.根据项1所述的稀有人参皂苷组合物,其中,可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸是选自草酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸中的一种或多种。
3.根据项1或2所述的稀有人参皂苷组合物,其中,相对于所述稀有人参皂苷组合物100重量份,所述人参皂苷C-K的含量为5重量份以上。
4.项1~3中任一项所述的稀有人参皂苷组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
5.根据项6所述的用途,其中,所述抗肿瘤药物为口服剂型或注射剂型。
6.根据项4或5中任一项所述的用途,其中,所述肿瘤为肺癌、肝癌或黑色素瘤。
发明效果
本发明的以稀有人参皂苷C-K为基础的稀有人参皂苷组合物具有高效低毒的抗肿瘤作用。
发明的具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。在无冲突的情况下,本说明书中的科学术语具有本领域技术人员通常理解的含义,如有冲突应以本说明书中的定义为准。
首先,在一个方面中,本发明提供一种具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷组合物(本发明的稀有人参皂苷组合物),其包含:
人参皂苷C-K和可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸;
其中,相对于100重量份的所述人参皂苷C-K,包含0.05~5重量份的所述可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸。
在本说明书中,人参皂苷C-K是指下述化学式1所述的化合物。
【化学式1】
上述人参皂苷C-K是已知化合物,可以采用本技术领域已知的方法来制备,例如可以通过果胶酶催化人参皂苷Rb1水解来制备人参皂苷C-K。
在本说明书中,可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸具体可以列举出例如草酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸。
本发明人发现,通过将上述人参皂苷C-K与可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸以特定比例进行组合,不仅能够显著提高稀有人参皂苷组合物的抗肿瘤活性,而且能够显著降低其毒性。
具体而言,本发明的稀有人参皂苷组合物中,相对于100重量份的所述人参皂苷C-K,可以例如包含0.05~5重量份、优选0.1~4重量份、更优选0.2~3重量份、更优选0.5~2重量份的所述可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸。
本发明的稀有人参皂苷组合物中除了包含上述人参皂苷C-K和可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸以外,还可以包含其他成分,只要在不显著损害本发明的效果即可。作为其他成分,可以列举出其他人参皂苷、其他抗肿瘤活性成分、辅料等。优选地,本发明的稀有人参皂苷组合物中,相对于所述稀有人参皂苷组合物100重量份,所述人参皂苷C-K的含量为5重量份以上,优选10重量份以上,更优选20重量份以上,更优选30重量份以上。所述人参皂苷C-K的含量可以例如采用HPLC法测定。
对于本发明的稀有人参皂苷组合物中的辅料,没有特殊限制,例如可以使用本技术领域通常用于药品或保健品的辅料。
其次,在另一个方面中,本发明提供上述本发明的稀有人参皂苷组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
正如前述,本发明的稀有人参皂苷组合物具有高效低毒抗肿瘤作用。在“高效”方面,本发明的稀有人参皂苷组合物的抗肿瘤效果明显优于单独使用人参皂苷C-K;在“低毒”方面,本发明的稀有人参皂苷组合物的生物安全性可媲美甚至高于氯化钠。
这里,“抗肿瘤”包括杀灭肿瘤细胞、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤生长、抑制肿瘤转移、改善肿瘤预后或防止肿瘤复发等。这些肿瘤包括例如:脑肿瘤、头颈部癌、颈癌、腭癌、上腭癌、腭下腺癌、口腔癌、唾液腺癌、舌下腺癌、腮腺癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、喉头癌、食道癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌(包括胰管癌)、胃癌、胆道癌、小肠癌或十二指肠癌、大肠癌、膀胱癌、肾癌(包括肾细胞癌)、肝癌、前列腺癌、子宫癌(包括子宫颈癌、子宫体癌)、卵巢癌、甲状腺癌、咽头癌、肉瘤、恶性淋巴瘤、白血病、淋巴瘤、皮肤癌以及黑色素瘤等。
抗肿瘤效果可通过例如X光照片、CT等的观察结果、及活检的病理组织诊断、或肿瘤标志物的值等确认。
对所述抗肿瘤药物的剂型没有特殊限制,例如可以是口服剂型或注射剂型。所述口服剂型可以是液体剂型,也可以是固体剂型。
制备口服用固体制剂时,可以在向主药中加入赋形剂以及视需要而定的粘合剂、崩解剂、滑润剂、着色剂、矫味剂等后,按照常规方法制成片剂、包衣片剂、颗粒剂、细粒剂、散剂、胶囊剂等。
作为赋形剂,可使用例如乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、山梨糖醇、结晶纤维素、二氧化硅等;作为粘合剂,可使用例如聚乙烯醇、乙基纤维素、甲基纤维素、阿拉伯胶、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素等;作为滑润剂,可使用例如硬脂酸镁、滑石、二氧化硅等;作为着色剂,可使用允许在药品中添加的着色剂;作为矫味剂,可使用可可粉、薄荷脑、芳香酸、薄荷油、龙脑、桂皮粉。当然,也可以在上述片剂、颗粒剂上包覆糖衣、明胶衣、以及其它的必要外衣。
制备注射剂时,可以根据需要向主药中添加pH调节剂、缓冲剂、悬助剂、增溶剂、稳定剂、等渗剂、防腐剂等,再按照常规方法制成静脉、皮下、肌肉内注射剂。此时,也可以根据需要,利用常规方法制成冷冻干燥物。
作为悬助剂,可列举例如甲基纤维素、吐温80、羟基乙基纤维素、阿拉伯胶、透明质酸钠、羧甲基纤维素钠、聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸盐等。
作为增溶剂,可列举例如聚氧化乙烯氢化蓖麻油、吐温80、烟酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸盐、聚乙二醇、蓖麻油脂肪酸乙酯等。
另外,作为稳定剂,可列举例如亚硫酸钠、偏亚硫酸钠等;作为防腐剂,可列举例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚等。
对于所述抗肿瘤药物的作用机理没有特殊限制,可以是抑制肿瘤细胞增殖、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成和/或提高机体的免疫力。
此外,在另一方面中,本发明还提供一种治疗对象中的肿瘤的方法,其包括给所述对象使用本发明的稀有人参皂苷组合物的步骤。
这里,所述对象可以是哺乳动物,例如可以是人、大鼠、兔、羊、猪、牛、猫、狗、猴等,优选为人。
本发明的稀有人参皂苷组合物,可以口服或非口服施用。施用量因症状程度、患者年龄、性别、体重、敏感性差异、施用方法、施用时期、施用间隔、药物制剂的性质、有效成分的种类等而异,无特殊限制,但通常成人(体重60Kg)每日1~3000mg、优选10~1000mg、更优选100~500mg,上述施用量通常可每日分1~3次施用。较好的剂量是每日300mg左右。
实施例
下面给出的实施例,是为了便于理解本发明,并不以任何方式限定本发明的权利要求的范围。
实施例1人参皂苷胶C-K胶囊剂制备
称取10kg人参皂苷C-K,0.2kg柠檬酸,加入淀粉68.5kg,混匀,过筛,用乙醇水溶液作为粘合剂,制成适宜软材,18目筛制粒,60℃烘箱干燥5小时,16目筛整粒,加入500g硬脂酸镁,混匀,制得胶囊剂。
实施例2人参皂苷胶C-K片剂制备
取50kg人参皂苷C-K,己二酸0.5kg,草酸0.5kg,粉碎成细粉,加入微晶纤维素10kg、羧甲基淀粉钠2kg,混合均匀,湿法制粒,干燥,加滑石粉2kg、硬脂酸镁0.3kg,按常规制片剂制备工艺制成片剂。
实施例3人参皂苷胶C-K粉剂制备
取40kg人参皂苷C-K和己二酸0.8kg,粉碎成细粉,加入硬脂酸镁0.3kg,混合均匀,分装成散剂。
实施例4本发明的稀有人参皂苷组合物对肿瘤细胞的抑制作用
参考中国专利公开CN104814972A实施例4设计,稍有改动。
实验动物:昆明小鼠购买西安交通大学医学院实验动物中心。
细胞:B16黑色素瘤细胞(B16melanoma cell)和人肝癌细胞(HepG2)从美国典型细胞库(ATCC,Hanassas,VA,USA)购买获取。
培养基:细胞培养使用DMEM培养液(FBS;HyClone,Logan,UT,USA),培养液添加10%胎牛血清(FBS;HyClone,Logan,UT,USA),0.03%L-谷氨酰胺,100U/L青霉素,100mg/L链霉素,5%Na2CO3调pH至6.8-7.0。实验组1:人参皂苷C-K;
实验组2:人参皂苷C-K:柠檬酸=1:0.005,重量比;
实验组3:人参皂苷C-K:柠檬酸=1:0.02,重量比;
实验组4:柠檬酸。
上述成分用20μL二甲基亚砜(DMSO)溶解,用于配置不同浓度的DMEM细胞培养基;
紫杉醇组:紫杉醇(Paclitaxel)购自Sigma Chemical公司(St.Louis,MO);顺铂组:顺铂(Cisplatin)购自Sigma Chemical公司(St.Louis,MO)。
原代培养的正常昆明鼠肾细胞,B16细胞以及HepG2细胞以细胞密度为1×104/ml接种于96孔板中培养24小时后,把普通DMEM培养基换为含有终浓度为0μg/ml,25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml不同组成分的DMEM培养基,每个浓度设3个复孔,并在24小时之后用MTT法检测细胞的活性。培养基的量是150μL/孔。
MTT法的具体操作是:向吸去上清的细胞孔中加入0.4mg/mL MTT,0.1mL/孔,37℃,5%CO2培养4h,去上清,每孔加入0.1mL二甲基亚砜(DMSO),孵育10min,在酶标仪上测定溶液在570nm下的吸光度值。
细胞抑制活性用抑制浓度IC50表示。抑制浓度(IC50)为细胞活性抑制率为50%时的药物浓度,计算方法为
IC50=(A细胞对照组-A供试样品组)/A细胞对照组-A空白组)×100%。
表1对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50(μg/mL)
实验结果如表1所示,实验组1~3均对B16和HepG2细胞有抑制作用,对两种肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50均在40μg/mL以下。单独的柠檬酸组对肿瘤细胞基本上没有抑制作用,但通过与柠檬酸组合,人参皂苷C-K的肿瘤细胞抑制活性显著增强。而且,所有实验组对正常小鼠肾细胞均没有毒性。
此外,我们将实验组中的柠檬酸替换为其它有机羧酸重复上述实验,发现当将实验组中的柠檬酸替换为草酸、苹果酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸时,均能够取得相似的效果。具体而言,实验组1~3均对B16和HepG2细胞有抑制作用,且对两种肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50均在40μg/mL以下。
实施例5本发明的稀有人参皂苷组合物对小鼠B16-BL6z细胞自发性肺转移的抑制作用
参考中国专利公告CN101695513B实施例9设计,稍有改动。
实验材料:己二酸(纯度99%),购自百灵威科技有限公司;人参皂苷C-K(纯度≥95%),购自成都普瑞法科技开发有限公司。取上述己二酸与人参皂苷C-K,按实施例3方法配制而成,即为与人参皂苷C-K组合物;紫杉醇,购自Sigma Chemical公司。
实验动物和细胞系:C57BL/6小鼠,由中国科学院上海实验动物中心提供。B16-BL6小鼠黑色素瘤细胞高转移株,购自中国科学院上海药物研究所。
方法
荷瘤模型制作方法:将生长状态良好的B16-BL6细胞用0.25%胰蛋白酶消化,离心收集细胞,无菌PBS洗涤,用无菌生理盐水配制成1×107个/mL细胞悬液。
实验观察:105只小鼠,分成正常组;荷瘤对照组;己二酸治疗组;紫杉醇治疗组;己二酸人参皂苷C-K组合物低、中、高剂量组;人参皂苷C-K组,共7组,每组15只。除正常组外,其余每只小鼠后肢爪垫皮下接种50μL(含5×105个瘤细胞)。各组都在荷瘤次日起腹腔注射给药,每周5次,连续5周,每次给药0.1mL/10g。紫杉醇剂量为10mg/kg;己二酸人参皂苷C-K组合物低、中、高剂量分别为250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg;人参皂苷C-K和己二酸组的剂量分别为1000mg/kg,10mg/kg。接种瘤液后3周,当瘤体>10mm3时,将小鼠用乙醚麻醉,无菌条件下切除患肢。2周后处死动物,解剖取肺,称重,计算肺系数。将肺Bouins液固定,于解剖显微镜下计数肺转移结节数。采用Mann Withey U-检验进行统计学处理。
实验结果
结果见表2,可知己二酸人参皂苷C-K组合物高、中、低剂量组对小鼠B16-BL6细胞自发性肺转移具有显著抑制作用。
表2己二酸人参皂苷C-K组合物对小鼠B16-BL6细胞自发性肺转移的抑制作用
实施例6人参皂苷C-K与有机酸组合物的急性毒性实验
动物:昆明小鼠42只,小鼠体重要保证组内差异<20%(20g~24g),雌雄各半,保证雌性未产、无孕。饲养前需要对小鼠的饲养房、笼具、饮水瓶等进行消毒。小鼠饲养在方形透明的鼠笼中,保证充足的饮水和食物。实验前饲养2d~3d,以适应实验环境,并观察其正常生长活动和健康状况。给药前禁食处理--空腹过夜(不禁水)。
样品:
1:C-K与苹果酸1:0.02重量比配成组合物
2:氯化钠
实验过程:将小鼠平均分为7组,1组作为空白对照组,3组为氯化钠给药组,3组为C-K与苹果酸组合物给药组,按照下表一给药剂量进行灌胃给药,统计一周内的动物死亡数,结果如表3所示。
表3人参皂苷C-K与有机酸组合物的急性毒性实验结果
还需要说明的是,在可实施且不明显违背本发明的主旨的前提下,在本说明书中作为某一技术方案的构成部分所描述的任一技术特征或技术特征的组合同样也可以适用于其它技术方案;并且,在可实施且不明显违背本发明的主旨的前提下,作为不同技术方案的构成部分所描述的技术特征之间也可以以任意方式进行组合,来构成其它技术方案。本发明也包含在上述情况下通过组合而得到的技术方案,并且这些技术方案相当于记载在本说明书中。
以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了说明,但本领域技术人员应该理解的是,这些并非意图对本发明的范围进行限定,本发明的范围应由权利要求书确定。
工业实用性
根据本发明,能够提供一种高效低毒的稀有人参皂苷组合物。
Claims (6)
1.一种具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷组合物,其包含:
人参皂苷C-K和可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸;
其中,相对于100重量份的所述人参皂苷C-K,包含0.05~5重量份的所述可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸。
2.根据权利要求1所述的稀有人参皂苷组合物,其中,可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸是选自草酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的稀有人参皂苷组合物,其中,相对于所述稀有人参皂苷组合物100重量份,所述人参皂苷C-K的含量为5重量份以上。
4.权利要求1~3中任一项所述的稀有人参皂苷组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
5.根据权利要求6所述的用途,其中,所述抗肿瘤药物为口服剂型或注射剂型。
6.根据权利要求4或5中任一项所述的用途,其中,所述肿瘤为肺癌、肝癌或黑色素瘤。
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