CN106236766A - 一种包含稀有人参皂苷Rk3的稀有人参皂苷组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种包含稀有人参皂苷Rk3的稀有人参皂苷组合物。该稀有人参皂苷组合物包含人参皂苷Rk3和可食用的C2‑C6有机二元或三元羧酸;其中,相对于100重量份的所述人参皂苷Rk3,包含0.05~5重量份的所述可食用的C2‑C6有机二元或三元羧酸。该稀有人参皂苷组合物具有显著的抗肿瘤活性,且高效低毒。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及包含稀有人参皂苷Rk3的具有抗肿瘤活性的、高效低毒的稀有人参皂苷组合物。
背景技术
癌症是仅次于脑血管疾病的第二大威胁人类的病种。我国癌症的发病人数每年超过300万人,且肺癌、乳腺癌、食管癌的发病率逐年增长,其中肺癌的发病率年增长率26.8%,乳腺癌发病率年增长率6.8%。30年以来,乳腺癌的死亡率上升了96%,肺癌的死亡率猛增465%,我国的癌症防治工作刻不容缓且形势严峻。
但是,关于如何以人参皂苷单组分为基础进行组合,增强其抗肿瘤效果,制备高效低毒的抗肿瘤药物,尚未见任何报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以稀有人参皂苷Rk3为基础的、高效低毒的、具有抗肿瘤作用的稀有人参皂苷组合物。
此外,本发明的另一目的在于提供上述稀有人参皂苷组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
本发明人经过深入研究发现,通过将稀有人参皂苷Rk3与可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸按特定比例进行组合,不仅能够显著提高稀有人参皂苷组合物的抗肿瘤活性,而且能够显著降低其毒性,从而完成了本发明。
即,本发明如下:
1.一种具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷组合物,其包含:人参皂苷Rk3,和可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸;其中,相对于100重量份的所述人参皂苷Rk3,包含0.05~5重量份的所述可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸。
2.根据项1所述的稀有人参皂苷组合物,其中,可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸是选自草酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸中的一种或多种。
3.根据项1或2所述的稀有人参皂苷组合物,其中,相对于所述稀有人参皂苷组合物100重量份,所述人参皂苷Rk3的含量为5重量份以上。
4.项1~3中任一项所述的稀有人参皂苷组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
5.根据项6所述的用途,其中,所述抗肿瘤药物为口服剂型或注射剂型。
6.根据项4或5中任一项所述的用途,其中,所述肿瘤为肺癌、肝癌和黑色素瘤。
发明效果
本发明的以稀有人参皂苷Rk3为基础的稀有人参皂苷组合物具有高效低毒的抗肿瘤作用。
发明的具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。在无冲突的情况下,本说明书中的科学术语具有本领域技术人员通常理解的含义,如有冲突应以本说明书中的定义为准。
首先,在一个方面中,本发明提供一种具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷组合物(本发明的稀有人参皂苷组合物),其包含:
人参皂苷Rk3,和可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸;其中,相对于100重量份的所述人参皂苷Rk3,包含0.05~5重量份的所述可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸。
在本说明书中,人参皂苷Rk3是指下述化学式1所述的化合物。
【化学式1】
上述人参皂苷Rk3是已知化合物,可以采用本技术领域已知的方法来制备,例如可以通过热裂解Rg1来制备人参皂苷Rk3。
在本说明书中,可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸具体可以列举出例如草酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸。
本发明人发现,通过将上述人参皂苷Rk3与可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸以特定比例进行组合,不仅能够显著提高稀有人参皂苷组合物的抗肿瘤活性,而且能够显著降低其毒性。
具体而言,本发明的稀有人参皂苷组合物中,相对于100重量份的所述人参皂苷Rk3,可以例如包含0.05~5重量份、优选0.1~4重量份、更优选0.2~3重量份、更优选0.5~2重量份的所述可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸。
本发明的稀有人参皂苷组合物中除了包含上述人参皂苷Rk3和可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸以外,还可以包含其他成分,只要在不显著损害本发明的效果即可。作为其他成分,可以列举出其他人参皂苷、其他抗肿瘤活性成分、辅料等。优选地,本发明的稀有人参皂苷组合物中,相对于所述稀有人参皂苷组合物100重量份,所述人参皂苷Rk3的含量为5重量份以上,优选10重量份以上,更优选20重量份以上,更优选30重量份以上。所述人参皂苷Rk3的含量可以例如采用HPLC法测定。
本发明的稀有人参皂苷组合物中还可以包含辅料。对于本发明的稀有人参皂苷组合物中的辅料,没有特殊限制,例如可以使用本技术领域通常用于药品或保健品的辅料。
其次,在另一个方面中,本发明提供上述本发明的稀有人参皂苷组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
正如前述,本发明的稀有人参皂苷组合物具有高效低毒抗肿瘤作用。在“高效”方面,本发明的稀有人参皂苷组合物的抗肿瘤效果明显优于单独使用人参皂苷Rk3;在“低毒”方面,本发明的稀有人参皂苷组合物的生物安全性可媲美甚至高于氯化钠。
这里,“抗肿瘤”包括杀灭肿瘤细胞、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤生长、抑制肿瘤转移、改善肿瘤预后或防止肿瘤复发等。这些肿瘤包括例如:脑肿瘤、头颈部癌、颈癌、腭癌、上腭癌、腭下腺癌、口腔癌、唾液腺癌、舌下腺癌、腮腺癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、喉头癌、食道癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌(包括胰管癌)、胃癌、胆道癌、小肠癌或十二指肠癌、大肠癌、膀胱癌、肾癌(包括肾细胞癌)、肝癌、前列腺癌、子宫癌(包括子宫颈癌、子宫体癌)、卵巢癌、甲状腺癌、咽头癌、肉瘤、恶性淋巴瘤、白血病、淋巴瘤、皮肤癌以及黑色素瘤等。
抗肿瘤效果可通过例如X光照片、CT等的观察结果、及活检的病理组织诊断、或肿瘤标志物的值等确认。
对所述抗肿瘤药物的剂型没有特殊限制,例如可以是口服剂型或注射剂型。所述口服剂型可以是液体剂型,也可以是固体剂型。
制备口服用固体制剂时,可以在向主药中加入赋形剂以及视需要而定的粘合剂、崩解剂、滑润剂、着色剂、矫味剂等后,按照常规方法制成片剂、包衣片剂、颗粒剂、细粒剂、散剂、胶囊剂等。
作为赋形剂,可使用例如乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、山梨糖醇、结晶纤维素、二氧化硅等;作为粘合剂,可使用例如聚乙烯醇、乙基纤维素、甲基纤维素、阿拉伯胶、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素等;作为滑润剂,可使用例如硬脂酸镁、滑石、二氧化硅等;作为着色剂,可使用允许在药品中添加的着色剂;作为矫味剂,可使用可可粉、薄荷脑、芳香酸、薄荷油、龙脑、桂皮粉。当然,也可以在上述片剂、颗粒剂上包覆糖衣、明胶衣、以及其它的必要外衣。
制备注射剂时,可以根据需要向主药中添加pH调节剂、缓冲剂、悬助剂、增溶剂、稳定剂、等渗剂、防腐剂等,再按照常规方法制成静脉、皮下、肌肉内注射剂。此时,也可以根据需要,利用常规方法制成冷冻干燥物。
作为悬助剂,可列举例如甲基纤维素、吐温80、羟基乙基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍树胶粉、羧甲基纤维素钠、聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸盐等。
作为增溶剂,可列举例如聚氧化乙烯氢化蓖麻油、吐温80、烟酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸盐、聚乙二醇、蓖麻油脂肪酸乙酯等。
另外,作为稳定剂,可列举例如亚硫酸钠、偏亚硫酸钠等;作为防腐剂,可列举例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚等。
对于所述抗肿瘤药物的作用机理没有特殊限制,可以是抑制肿瘤细胞增殖、抗肿瘤细胞转移、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤新生血管生成和/或提高机体的免疫力。
此外,在另一方面中,本发明还提供一种治疗对象中的肿瘤的方法,其包括给所述对象使用本发明的稀有人参皂苷组合物的步骤。
这里,所述对象可以是哺乳动物,例如可以是人、大鼠、兔、羊、猪、牛、猫、狗、猴等,优选为人。
本发明的稀有人参皂苷组合物,可以口服或非口服施用。施用量因症状程度、患者年龄、性别、体重、敏感性差异、施用方法、施用时期、施用间隔、药物制剂的性质、有效成分的种类等而异,无特殊限制,但通常成人(体重60Kg)每日1~3000mg、优选10~1000mg、更优选100~500mg,上述施用量通常可每日分1~3次施用。较好的剂量是每日300mg左右。
实施例
下面给出的实施例,是为了便于理解本发明,并不以任何方式限定本发明的权利要求的范围。
实施例1人参皂苷胶Rk3胶囊剂制备
称取人参皂苷Rk3 10kg,0.2kg草酸,加入淀粉68.5kg,混匀,过筛,用乙醇水溶液作为粘合剂,制成适宜软材,18目筛制粒,60℃烘箱干燥5小时,16目筛整粒,加入500g硬脂酸镁,混匀,制得胶囊剂。
实施例2人参皂苷胶Rk3片剂制备
取人参皂苷Rk3 50kg,草酸1kg,粉碎成细粉,加入微晶纤维素10kg、羧甲基淀粉钠2kg,混合均匀,湿法制粒,干燥,加滑石粉2kg、硬脂酸镁0.3kg,按常规制片剂制备工艺制成片剂。
实施例3人参皂苷胶Rk3粉剂制备
取人参皂苷Rk3 40kg和草酸0.8kg,粉碎成细粉,加入硬脂酸镁0.3kg,混合均匀,分装成散剂。
实施例4人参皂苷胶Rk3针剂的制备
取注射用人参皂苷Rk3 1kg和注射用草酸5g,用10L注射用水溶解,过滤,按常规冻干工艺灌装成粉针剂。
实施例5人参皂苷Rk3和有机酸组合物延长S180小鼠生存期实验
材料与方法
材料
药物:草酸(AR,≥99.5%),购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;人参皂苷Rk3(纯度≥95%),实验室水解工艺自制;取上述草酸与人参皂苷Rk3,按实施例4方法配制而成,即为与人参皂苷Rk3组合物;环磷酰胺(CTX),200mg/瓶,江苏恒瑞医药股份有限公司产品。
实验动物和细胞系:昆明种小鼠,雌性,体重18±2g,由中国科学院上海实验动物中心提供。Sarcoma 180腹水型瘤株(S180),购自中国科学院上海药物研究所。
方法
瘤种保存与传代:自腹腔荷瘤小鼠无菌取瘤细胞,经灭菌生理盐水(NS)稀释后无菌操作接种于正常成年小鼠腹腔,每7天传1代。
荷瘤模型制作方法:处死腹腔传代7天的S180荷瘤小鼠,无菌操作取腹水。灭菌NS稀释腹水调整瘤细胞浓度至8×106个/mL,瘤细胞死亡率<5%。按无菌操作要求将瘤细胞悬液接种于小鼠腹腔,0.2mL/只。
腹腔荷瘤细胞生存期实验:70只小鼠,除10只用于正常对照组外,其余均腹腔荷瘤,次日随机分为6组,每组10只。分组包括腹腔荷瘤模型组;CTX治疗组;草酸人参皂苷Rk3组合物低、高剂量组;草酸组;人参皂苷Rk3组。各组都在腹腔荷瘤次日起灌胃给药,每天一次,每次给药0.1mL/10g。CTX位腹腔注射给药,50mg/kg,连用7天;草酸人参皂苷Rk3组合物低、高剂量分别为250mg/kg、1000mg/kg;人参皂苷Rk3组为1000mg/kg、草酸组为50mg/kg,用至死亡前1天。观察生存期和一般情况。
统计学处理:计量资料以均数±标准差(x±s)表示。采用单因素方差分析,组间两两比较采用q检验。
结果
草酸人参皂苷Rk3组合物高剂量组能显著延长S180小鼠生存期,且优于人参皂苷Rk3组。草酸人参皂苷Rk3组合物低剂量组也具有延长S180小鼠生存期的趋势,CTX组和草酸组作用不明显。结果见表1。
表1草酸人参皂苷Rk3组合物对S180小鼠生存期的影响(n=10,x±s)
△与CTX组比较
实施例6人参皂苷Rk3与有机酸组合物对S180皮下荷瘤小鼠抑瘤实验
参考中国专利公开CN104814972A实施例8,稍有改动。
材料与方法
实验材料:草酸(AR,≥99.5%),购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;人参皂苷Rk3(纯度≥95%),实验室自制;取上述草酸与人参皂苷Rk3,按实施例3方法配制而成,即为与人参皂苷Rk3组合物;环磷酰胺(CTX),200mg/瓶,江苏恒瑞医药股份有限公司产品。
实验动物和细胞系:昆明种小鼠,雌性,体重20g-24g,购自西安交通大学医学院实验动物中心。Sarcoma 180腹水型瘤株(S180),购自中国科学院上海药物研究所。
方法
瘤种保存与传代:自腹腔荷瘤小鼠无菌取瘤细胞,经灭菌生理盐水(NS)稀释后无菌操作接种于正常成年小鼠腹腔,每7天传1代。
荷瘤模型制作方法:处死腹腔传代7天的S180荷瘤小鼠,无菌操作取腹水。灭菌NS稀释腹水调整瘤细胞浓度至8×106个/mL,瘤细胞死亡率<5%。按无菌操作要求将瘤细胞悬液接种于小鼠腹腔,0.2mL/只。
对皮下荷瘤鼠的实验观察:80只小鼠,除10只用于正常对照组外,其余均皮下荷瘤,次日随机分为7组,每组10只。分组包括皮下荷瘤模型组;CTX治疗组;组合物组:草酸人参皂苷Rk3组合物低、中、高剂量组,原人参三醇组;草酸组。各组都在腹腔荷瘤次日起灌胃给药,每天一次,每次给药0.1mL/10g。CTX位腹腔注射给药,30mg/kg,连用7天;草酸(人参皂苷Rk3组合物低、中、高剂量分别为250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg;草酸组为4mg/kg,用至死亡前1天,于皮下荷瘤后第12天处理。用药过程观测一般情况。各批次动物处理时,先称体重,处死后取瘤、胸腺、脾脏并称重,进而换算出抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数;另取右后肢股骨做骨髓有核细胞(BMNC)计数。
统计学处理:计量资料以均数±标准差(x±s)表示。采用单因素方差分析,组间两两比较采用q检验。
结果
CTX组、草酸人参皂苷Rk3组合物低、中、高剂量组和人参皂苷Rk3组均能显著延长S180小鼠生长,草酸组作用不明显。其中CTX组抑瘤作用显著;草酸人参皂苷Rk3组合物低剂量组、中、高剂量组和人参皂苷Rk3组的抑瘤作用显著,草酸组作用不明显。草酸人参皂苷Rk3组合物比人参皂苷Rk3组更能促进胸腺指数、脾脏指数的回升。草酸组对荷瘤所致的骨髓有核细胞的减少无明显的促进回升作用。结果见表2和表3。由此可见,人参皂苷Rk3与可食用有机二元酸或三元酸的组合物的活性明显高于单用人参皂苷Rk3或可食用有机二元酸或三元酸。
表2草酸人参皂苷Rk3组合物对皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用(n=10,x±s)
*与对照组比较,△与CTX组比较。
表3草酸人参皂苷Rk3组合物对皮下荷瘤小鼠免疫器官和骨髓有核细胞数的影响(n=10,x±s)
*与对照组比较,△与CTX组比较。
实施例7人参皂苷Rk3与有机酸组合物对小鼠B16-BL6z细胞自发性肺转移的抑瘤实验
参考中国专利公告CN101695513B实施例9设计,稍有改动。
材料与方法
实验材料:草酸(纯度99%),购自百灵威科技有限公司;人参皂苷Rk3(纯度≥95%),实验室水解工艺自制;取上述草酸与人参皂苷Rk3,按实施例4方法配制而成,即为与人参皂苷Rk3组合物;紫杉醇,购自广州爱纯医药科技有限公司。
实验动物和细胞系:C57BL/6小鼠,由中国科学院上海实验动物中心提供。B16-BL6小鼠黑色素瘤细胞高转移株,购自中国科学院上海药物研究所。
方法
荷瘤模型制作方法:将生长状态良好的B16-BL6细胞用0.25%胰蛋白酶消化,离心收集细胞,无菌PBS洗涤,用无菌生理盐水配制成1×107个/mL细胞悬液。
实验观察:120只小鼠,分成正常组;荷瘤对照组;草酸治疗组;紫杉醇治疗组;草酸人参皂苷Rk3组合物低、中、高剂量组;人参皂苷Rk3组,共8组,每组15只。正常组外,其余每只小鼠后肢爪垫皮下接种50μL(含5×105个瘤细胞)。各组都在荷瘤次日起腹腔注射给药,每周5次,连续5周,每次给药0.1mL/10g。紫杉醇剂量为10mg/kg;草酸人参皂苷Rk3组合物低、中、高剂量分别为250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg;人参皂苷Rk3和草酸组的剂量分别为1000mg/kg,10mg/kg。接种瘤液后3周,当瘤体>10mm3时,将小鼠用乙醚麻醉,无菌条件下切除患肢。2周后处死动物,解剖取肺,称重,计算肺系数。将肺Bouins液固定,于解剖显微镜下计数肺转移结节数。采用Mann Withey U-检验进行统计学处理。
实验结果
紫杉醇和草酸人参皂苷Rk3组合物高、中剂量组队小鼠B16-BL6细胞自发性肺转移具有显著抑制作用,草酸人参皂苷Rk3组合物低剂量组、人参皂苷Rk3对小鼠细胞自发性肺转移具有抑制趋势,但无显著性差异,结果见表4。
表4草酸人参皂苷Rk3组合物对小鼠B16-BL6细胞自发性肺转移的抑制作用
实施例8人参皂苷Rk3与有机酸组合物的急性毒性实验
实验动物:昆明小鼠42只,小鼠体重要保证组内差异<20%(20~24g),雌雄各半,保证雌性未产、无孕。饲养前需要对小鼠的饲养房、笼具、饮水瓶等进行消毒。小鼠饲养在方形透明的鼠笼中,保证充足的饮水和食物。实验前饲养2~3天,以适应实验环境,并观察其正常生长活动和健康状况。给药前禁食处理--空腹过夜(不禁水)。
样品:
1:Rk3与苹果酸1:0.02重量比配成组合物
2:氯化钠
实验过程:将小鼠平均分为7组,1组作为空白对照组,3组为氯化钠给药组,3组为Rk3与苹果酸组合物给药组,按照下表一给药剂量进行灌胃给药,统计八天的动物死亡数,结果如表5所示。
表5人参皂苷Rk3与有机酸组合物的急性毒性实验结果
还需要说明的是,在可实施且不明显违背本发明的主旨的前提下,在本说明书中作为某一技术方案的构成部分所描述的任一技术特征或技术特征的组合同样也可以适用于其它技术方案;并且,在可实施且不明显违背本发明的主旨的前提下,作为不同技术方案的构成部分所描述的技术特征之间也可以以任意方式进行组合,来构成其它技术方案。本发明也包含在上述情况下通过组合而得到的技术方案,并且这些技术方案相当于记载在本说明书中。
以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了说明,但本领域技术人员应该理解的是,这些并非意图对本发明的范围进行限定,本发明的范围应由权利要求书确定。
工业实用性
根据本发明,能够提供一种高效低毒的稀有人参皂苷组合物。
Claims (6)
1.一种具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷组合物,其包含:人参皂苷Rk3,和可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸;其中,相对于100重量份的所述人参皂苷Rk3,包含0.05~5重量份的所述可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸。
2.根据权利要求1所述的稀有人参皂苷组合物,其中,可食用的C2-C6有机二元或三元羧酸是选自草酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的稀有人参皂苷组合物,其中,相对于所述稀有人参皂苷组合物100重量份,所述人参皂苷Rk3的含量为5重量份以上。
4.权利要求1~3中任一项所述的稀有人参皂苷组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
5.根据权利要求6所述的用途,其中,所述抗肿瘤药物为口服剂型或注射剂型。
6.根据权利要求4或5中任一项所述的用途,其中,所述肿瘤为肺癌、肝癌和黑色素瘤。
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